Isolasi Inokulasi Dan Morfologi

7/26/2019 Isolasi Inokulasi Dan Morfologi

1/32

26

BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Diketahui bahwa mikroba tersebar di alam, terdapat di lingkungan

mana saja dalam populasi campuran. Boleh dikatakan amat jarang mikroba

dijumpai sebagai satu spesies tunggal di alam. Untuk mencirikan dan

mengidentifikasikan suatu spesies mikroorganisme tertentu, pertama-tama

spesies tersebut harus dapat dipisahkan dari organisme lain, lalu

ditumbuhkan menjadi biakan murni.

Dalam mengisolasi suatu mikroorganisme, dilakukan dengan cara

yang aseptis untuk menghindari terjadinya kontaminasi dengan

mikroorganisme lain. Kebanyakan mikroorganisme dapat diisolasi dan

diinokulasi dalam biakan murni dengan memindahkan suatu koloni secara

cermat, mensuspensikan kembali dalam cairan dan menanamnya kembali

pada medium yang selektif.

Untuk mengidentifikasi suatu biakan murni bakteri hasil isolasi

mula-mula diamati morfologi sel secara mikroskopik melalui pengecetan

atau pewarnaan, salah satunya adalah dengan pewarnaan gram. Pewarnaan

gram merupakan salah satu teknik pewarnaan atau pengecatan yang

dikerjakan di laboratorium mikrobiologi untuk kepentingan identifikasi

bakteri. Morfologi mikroskopik mikroorganisme yang diperiksa dan

sifatnya yang khas terhadap pengecatan tertentu (pengecatan gram) dapat

digunakan untuk identifikasi awal. Dengan metode pengecatan gram,

bakteri dapat dikelompokkan menjadi dua, yaitu bakteri Gram positif dan

Gram negatif berdasarkan reaksi atau sifat bakteri terhadap cat tersebut.

Reaksi atau sifat bakteri tersebut ditentukan oleh komposisi dinding

selnya. Oleh karena itu, pengecatan gram tidak bisa dilakukan pada

mikroorganisme yang tidak mempunyai dinding sel. Dalam proses ini,

olesan bakteri yang sudah terfiksasi dikenai larutan-larutan berikut : zat


2/32

27

pewarna kristal violet, larutan iodium, larutan alkohol (bahan pemucat),

dan zat pewarna tandingannya berupa safranin.

B.

Tujuan Praktikum

1. Praktikan memahami dan mampu melakukan proses isolasi dan

inokulasi mikroorganisme pada sampel bagian permukaan tubuh

(sela jari tangan) dengan media PCA (Plate Count Agar) dan

Media EMBA (Eosin Methylene Blue Agar).

2. Praktikan memahami dan mampu melakukan proses pengenceran

bertingkat.

3. Praktikan mengetahui morfologi bakteri secara mikroskopis

melalui metode pewarnaan gram.

C. Manfaat Praktikum

1. Mahasiswa dapat mengetahui cara isolasi dan inokulasi

mikroorganisme pada sampel bagian permukaan tubuh (sela jari

tangan) dengan media PCA (Plate Count Agar) dan Media EMBA

(Eosin Methylene Blue Agar).

2. Mahasiswa dapat melakukan pengenceran bertingkat.

3. Mahasiswa dapat mengetahui langkah-langkah morfologi bakteri

dengan metode pewarnaan gram.

4. Mahasiswa dapat mengetahui perbedaan bakteri gram positif dan

bakteri gram negatif.

5.

Mahasiswa dapat mengetahui penggolongan jenis bakteri.


3/32

28

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

A. Isolasi

Dalam kehidupan sehari hari kita selalu berhubugan dengan berbagai

macam mikroorganisme, baik bakteri, kapang maupun khamir. Untuk

mempermudah dalam mempelajari jenis dan sifat mikroorganisme, maka

mikroorganisme tersebut harus diisolasi dari lingkungan dan dipelihara pada

medium yang sesuai untuk pertumbuhannya1.

Isolasi bakteri merupakan suatu cara untuk memisahkan atau

memindahkan mikroba tertentu dari lingkungan sehingga diperoleh kultur

murni atau biakan murni. Ada beberapa cara yang dapat dilakukan yaitu

dengan cara goresan (streak plate), cara tuang (pour plate), cara sebar (spread

plate), dan mikromanipulator2. Teknik isolasi mikroorganisme adalah suatu

usaha untuk menumbuhkan mikroba diluar dari lingkungan alamiahnya.

Pemisahan mikroorganisme dari lingkungannya ini bertujuan untuk

memperoleh biakan bakteri yang sudah tidak bercampur lagi dengan bakteri

lainya, dan ini disebut dengan biakan murni3.

Di alam, populasi mikroorganisme tidak terpisah sendiri menurut

jenisnya, tetapi terdiri dari campuran berbagai macam sel. Dalam

laboratorium, populasi bakteri ini dapat diisolasi dari ekosistem tanah, air,

maupun udara. Selain itu, isolasi mikroorganisme pun dapat dilakukan dari

berbagai sampel

bahan atau jaringan tubuh menjadi kultur murni yang terdiri

darisatu jenis yang dapat dipelajari morfologi, sifat, dan kemampuan

biokimiawinya4.

Proses mengisolasi harus dilakukan dengan cara yang aseptiskarena

untuk menghindari adanya kontaminasi antara mikroorganismelainnya.

Mikroorganisme dapat diisolasi dan diinokulasi dalam biakanmurni dengan

cara memindahkannya lalu menanamnya kembali pada medium baru5.


4/32

29

B. Inokulasi

Teknik isolasi mikroba yaitu inokulasi yang merupakan suatu teknik

pemindahan suatu biakan tertentu dari medium yang lama ke medium yang

baru dengan tujuan untuk mendapatkan suatu biakan yang murni tanpa adanya

kontaminasi dari mikroba yang lain6.

Inokulasi penanaman bakteri atau biasa disebut juga inokulasi adalah

pekerjaan memindahkan bakteri dari medium yang lama ke medium yang baru

dengan tingkat ketelitian yang sangat tinggi. Untuk melakukan penanaman

bakteri (inokulasi) terlebih dahulu diusakan agar semua alat yang ada dalam

hubungannya dengan medium agar tetap steril, hal ini agar menghindari

terjadinya kontaminasi7. Teknik penanaman (inokulasi), teknik ini merupakan

lanjutan dari pengenceran bertingkat. Pengambilan suspensi dapat diambil dari

pengenceran mana saja tapi biasanya utuk tujuan isolasi (mendapatkan koloni

tunggal) diambil bebrapa pengenceran terakhir.

Ada beberapa metode untuk menginokulasi bakteri sesuai dengan jenis

medium tujuannya. Pada medium agar tegak, dilakukan metode tusuk

menggunakan jarum ose. Pada medium agar miring,dilakukan metode gores

dengan menggunakan loop ose. Pada medium petridisk, dapat digunakan

metode streak plate (metode gores), pour plate (metode tuang) atau spread

plate (metode sebar). Setelah inokulasi, dilakukan proses inkubasi, yaitu

menyimpan medium pada alat atau kontainer pada temperatur tertentu dan

periode tertentu, sehingga tercipta lingkungan yang menyediakan kondisi

cocok untuk pertumbuhan bakteri. Metode gores atau streak plate

menggunakan loop ose dan menggoreskannya ke permukaan medium agar

dengan pola tertentu dengan harapan pada ujung goresan, hanya sel-sel bakteri

tunggal yang terlepas dari ose dan menempel ke

medium. Sel-sel bakteri

tunggal ini akan membentuk koloni tunggal yang kemudian dapat dipindahkan

ke medium selanjutnya agar didapatkan biakan murni8.

C. Media PCA (Plate Count Agar)

Mikroorganisme dapat hidup dimana saja seperti air, udara, darat,

termasuk di makanan. Pada beberapa kondisi, jumlah mikroorganisme harus


5/32

30

dibatasi, seperti mikroorganisme pada saluran pembuangan limbah dan juga

mikroorganisme pada makanan atau produk susu jumlahnya harus mengikuti

standar-standar yang sudah ditetapkan. Untuk menghitung jumlah

mikroorganisme tersebut biasanya sampel dari makanan atau produk susu atau

dari air limbah tersebut di uji menggunakan media Plate Count Agar (PCA)

dengan metode Total Plate Count (TPC)9.

Plate Count Agar(PCA) atau yang juga sering disebut dengan Standard

Methods Agar(SMA) merupakan sebuah media pertumbuhan mikroorganisme

yang umum digunakan untuk menghitung jumlah bakteri total (semua jenis

bakteri) yang terdapat pada setiap sampel seperti makanan, produk susu, air

limbah dan sampel-sampel lainnya yang juga biasanya menggunakan metode

Total Plate Count (TPC). Plate Count Agar (PCA) merupakan media padat,

yaitu media yang mengandung agar sehingga setelah dingin media tersebut

akan menjadi padat. Plate Count Agar (PCA) pertama kali dikembangkan

oleh Buchbinder, Baris, dan Goldstein pada tahun 1953 atas permintaan dari

American Public Health Association(APHA)9.

Komposisi Plate Count Agar (PCA) dapat bervariasi, tetapi biasanya

mengandung: 0,5% trypton, 0,25% ekstrak ragi, 0,1% glukosa, 1,5% agar-

agar. Plate Count Agar (PCA) mengandung glukosa dan ekstrak ragi yang

digunakan untuk menumbuhkan semua jenis bakteri. Plate Count Agar (PCA)

mengandung nutrisi yang disediakan oleh trypton, vitamin dari ekstrak ragi,

dan glukosa yang digunakan sebagai sumber energi bagi mikroorganisme

sehingga mendukung pertumbuhan dari bakteri. Plate Count Agar (PCA)

bukan merupakan media selektif karena media ini tidak hanya ditumbuhi

oleh satu jenis mikroorganisme tertentu9.

D. Media EMBA

EMB Agar adalah media yang digunakan untuk mengetahui ada atau

tidaknya bakteri coliform di dalam suatu sample. Media Eosin Methylene

Blue Agar ini mempunyai keistimewaan mengandung laktosa dan berfungsi

untuk membedakan mikroba yang memfermentasikan laktosa seperti S.

aureus, P. aerugenosa, dan Salmonella. Mikroba yang memfermentasi laktosa


6/32

31

menghasilkan koloni dengan inti berwarna gelap dengan kilap logam.

Sedangkan mikroba lain yang dapat tumbuh koloninya tidak berwarna10.

Fungsi dari eosin dan metilen blue membantu mempertajam perbedaan

warna. Namun demikian, jika media ini digunakan pada tahap awal, kuman

lain bisa juga tumbuh terutama P. Aerugenosa dan Salmonella sp. Hal ini

dapat menimbulkan keraguan. Bagaiamanapun media ini sangat baik untuk

mengkonfirmasi bahwa kontaminan tersebut adalahE.coli10.

Media EMBA adalah medium selektif dan diferensial digunakan

untuk mengisolasi coliform fecal. Eosin Y dan metilen blue adalah

pewarna indikator pH yang bergabung untuk membentuk endapan ungu gelap

pada pH rendah (asam), mereka juga berfungsi untuk menghambat

pertumbuhan organisme yang paling Gram positif. Sukrosa dan

laktosa berfungsi sebagai sumber karbohidrat dapat difermentasi

yang mendorong pertumbuhan coliform. Fermentor yang kuat dari laktosa

atau sukrosa akan menghasilkan jumlah asam yang cukup untuk

membentuk kompleks warna ungu tua. Pertumbuhan organisme ini akan

muncul berwarna ungu tua sampai hitam. Escherichia coli, suatu fermentor

yang kuat, sering menghasilkan warna koloni hijau metalik. Fermentor

lambat atau lemah akan menghasilkan koloni merah muda mukoid atau

berlendir. Biasanya koloni berwarna atau tidak berwarna menunjukkan

bahwa organisme fermentor laktosa atau sukrosa terserbut bukan

merupakan coliform fecal11.

E. Bakteri

Bakteri adalah salah satu golongan organisme prokariotik (tidak memiliki

selubung inti). Bakteri sebagai makhluk hidup tentu memiliki informasi

genetik berupa DNA, tapi tidak terlokalisasi dalam tempat khusus (nukleus)

dan tidak ada membran inti. Bentuk DNA bakteri adalah sirkuler, panjang dan

biasa disebut nukleoi. Pada DNA bakteri tidak mempunyai intron dan hanya

tersusun atas akson saja. Bakteri juga memiliki DNA ekstrakromosomal yang

tergabung menjadi plasmid yang berbentuk kecil dan sirkuler12.


7/32

32

Bakteri merupakan salah satu contoh organisme yang memilikisel tipe

prokariotik. Bakteri memiliki ukuran (panjang) berkisar antara 0,15-15.

Struktur sel bakteri terdiri dari bagian luar sebagai penutup sel dan

sitoplasma13. Bakteri adalah yang paling berkelimpahan dari semua

organisme. Bakteri ada dimana-mana, di tanah, air, bahkan di dalam tubuh

makhluk hidup14.

F. Jenis Bakteri

Untuk memahami beberapa kelompok organisme, diperlukan klasifikasi.

Tes biokimia, pewarnaan gram, merupakan kriteria yang efektif untuk

klasifikasi. Hasil pewarnaan mencerminkan perbedaan dasar dan kompleks

pada sel bakteri (struktur dinding sel), sehingga dapat membagi bakteri

menjadi 2 kelompok, yaitu bakteri Gram-positif dan bakteri Gram-negatif12.

1.

Bakteri Gram Negatif

a. Bakteri Gram Negatif Berbentuk Batang (Enterobacteriacea).

Bakteri gram negatif berbentuk batang habitatnya adalah usus

manusia dan binatang. Enterobacteriaceae meliputi Escherichia,

Shigella, Salmonella, Enterobacter, Klebsiella, Serratia, Proteus).

Beberapa organisme seperti Escherichia coli merupakan flora normal

dan dapat menyebabkan penyakit sedangkan yang lain seperti

salmonella dan shigella merupakan patogen yang umum bagi

manusia.

b.

Pseudomonas, Acinobacter dan Bakteri Gram Negatif Lain.

c. Vibrio Campylobacter, Helicobacter, dan Bakteri lain yang

berhubungan.

Mikroorganisme ini merupakan spesies berbentuk batang Gram-

negatif yang tersebar luas di alam. Vibrio ditemukan didaerah

perairan dan permukaan air. Aeromonas banyak ditemukan di air

segar dan terkadang pada hewan berdarah dingin.

d. Haemophilus , Bordetella, dan Brucella

e. Yersinia, Franscisella dan Pasteurella


8/32

33

Berbentuk batang pendek Gram-negatif yang pleomorfik.

Organisme ini bersifat katalase positif, oksidase positif, dan

merupakan bakteri anaerob fakultatif.

2. Bakteri Gram Positif

a. Bakteri gram positif pembentuk spora : Spesies Bacillus dan

Clostridium

b. Bakteri Gram-positif Tidak Membentuk Spora: Spesies

Corynebacterium, Listeria, Propionibacterium, Actinomycetes.

c.

Staphylococcus: Berbentuk bulat, biasanya tersusun bergerombol

yang tidak teratur seperti anggur.

d.

Streptococcus: Merupakan bakteri gram-positif berbentuk bulat

yang mempunyai pasangan atau rantai pada pertumbuhannya12.

G. Penyakit Kesehatan Akibat Bakteri

1. Tuberkulosis Paru (TBC)

Tuberkulosis Paru atau TBC adalah penyakit yang di sebabkan

bakteri Mycobacterium tuberculosi dan Mycrobacterium bovis. Bakteri

tersebut mempunyai ukuran 0,5-4 Mikron x 0,3-0,6, micron dengan bentuk

tipis, lurus atau agak bengkok, bergranular atau tidak mempunyai

selabung, tetapi mempunyai lapisan luar tebal yang terdiri dari lipoid.

Penyakit ini di tularkan melaului udara (droplet nuclei) saat seorang pasien

TBC batuk dan percikan ludah yang mengandung bakteri tersebut terhirup

oleh orang lain saat bernafas.

2. Difteri

Difteria merupakan infeksi akut yang disebabkan oleh

Corynebacterium diphtheriae. Lesi primer biasanya terdapat pada

tenggorokan atau nasofaring dan dicirikan dengan adanya penyebaran

pertumbuhan pseudomembranosa keabu-abuan. Bakteri berbiak pada

tempat tersebut, dan mengeluarkan eksotoksin yang dibawa oleh darah ke

berbagai jaringan tubuh, menyebabkan hemoragik dan kerusakan nekrotik

pada berbagai organ. Strain C. diphtheriae toxigenik dan nontoxigenik

dapat menyebabkan penyakit, hanya strain yang menghasilkan toksin yang


9/32

34

menyebabkan manifestasi sistemik yang sering berhubungan dengan

penyakit yang berat atau mematikan.

C. diphtheriae merupakan bakteri bentuk batang ramping, gram-

positif, yang tidak tahan-asam dan tidak membentuk spora. Sel

berukuran 0,5-1,0 (m. Pada apusan pewarnaan, terlihat sebagai sel

tunggal, atau palisade (pagar) dan satu dengan yang lainnya

membentuk formasi sudut V atau L. Formasi mirip-huruf Cina ini

disebabkan oleh "snapping" pergerakan yang dilibatkan ketika dua

sel membelah. Bentuk C. diphtheriae secara umum berupa batang

ketika tumbuh pada media nutrisi yang lengkap.

3.

Pertusis

Penyakit infeksi saluran napas akut yang terutama menyerang anak-

anak. Penyakit ini disebabkan oleh bakteri Bordetella pertusis

(Haemophilus pertusis). Bordetella pertusis termasuk kelompok

kokobasilus Gram-negatif, tidak bergerak dan tidak berspora. Bakteri ini

memerlukan media untuk tumbuh seperti media darah-gliserin-kentang

(Bordet-Gengou) yang di tambah penisilin untuk menghambat

pertumbuhan organism lainnya. Bakteri ini berukuran panjang 0,5-1m

dan diameternya 0,2-0,3m. Penularan penyakit ini melalui droplet dan

sebagian besar bayi tertular oleh saudaranya dan kadang-kadang oleh

orangtuanya.

4. Tetanus Neonatoru

Tetanus adalah penyakit kekakuan otot (spasme) yg disebabkan oleh

eksotoksin (tetanospasmin) dari organism penyebab penyakit tetanus dan

bukan oleh organismenya sendiri. Penyakit ini disebabkan oleh bakteri

Clostridium tataniyang merupakan bakteri Gram-positif berbentuk batang

dengan spora pada sisi ujungnya sehingga mirip dengan pemukul

genderang. Bakteri tetanus bersifat obligat anaerob yaitu berbentuk

vegetative pada lingkungan tanpa oksigen dan rentan terhadap panas serta

disinfektan. Penularannya itu dengan cara Tetanus masuk kedalam tubuh

manusia biasanya melalui luka yg dalam dengan suasana anaerob (tanpa


10/32

35

oksigen) sebagai akibat dari kecelakaan, luka tusuk, luka oprasi, karies

gigi, pemotong tali pusat, dll.

5.

Demam Tifoid

Demam Tifoid adalah infeksi akut pada saluran pencernaan yang di

sebabkan oleh bakteri Salmonella typhi. Salmonella adalah bakteri Gram-

negatif, tidak berkapsul, mempunyai flagella dan tidak membentuk spora,

Penularan Penyakit adalah melalui air dan makanan. Bakteri salmonella

dapat bertahan lama dalam makanan. Penggunaan air minum secara masal

yang tercemar bakteri sering menyebabkan terjadinya KLB. Vektor berupa

serasngga juga berperan dalam penularan penyakit.

6.

Kusta

Penyebab penyakit kusta adalah bakteri Mycobacterium leprae yang

berbentuk batang dengan ukuran panjang 1-8 mikron, lebar 0,2-0,5

mikron, biasanya berkelompok dan ada yang tersebar satu-satu, hidup

dalam sel, fan bersifat tahan asam (BTA). Bakteri kusta banyak terdapat

pada kulit tangan, daun telinga dan mukosa hidung.

7.

Leptospirosis

Leptospirosis adalah infeksi akut yang di sebabkan oleh bakteri

leptospira. Penyakit ini di sebut juga Weil disease, Canicola fever,

Hemorrhagic jaundice, Mud fever, atau Swineherd disease. Genus

Lestospira yang termasuk dalam ordo Spirochaete dari family

Trepanometaceae adalah bakteri yang berbentuk seperti benang dengan

panjang 6-12 m. spesies Leptospira interrogans adalah spesies yang

dapat menginfeksi manusia dan hewan. Infeksi pada manusia dapat terjadi

melalui kontak dengan air, tanah, dan lumpur yang tercemar bakteri,

kontak dengan organ, darah,dan urine hewan terinfeksi15.

H. Pencegahan

Tindakan pencegahan dapat dilakukan dengan vaksinasi, sterilisasi, dan

pasteurisasi, dan pengawetan bahan makanan.

1. Vaksinasi


11/32

36

Vaksinasi adalah pencegahan penyakit dengan pemberian vaksin,

bakteri yang sudah dilemahkan, sehingga tubuh menerima dapat terhadap

bakteri penyebab penyakit tertentu. Beberapa contoh vaksin untuk

pencegahan penyakit yang disebabkan oleh bakteri adalah vaksin kolera

untuk mencegah penyakit kolera, vaksin tifus untuk mencegah penyakit

tifus, vaksin BCG (Bacile Calmette-Guerin) untuk mencegah penyakit

TBC, vaksin DTP (Dipteria-Tetanus-Pertusis vaccines) untuk mencegah

penyakit difterie, pertusis (batuk rejan), dan tetanus), dan vaksin TCD

(Typus Chorela Disentry) untuk mencegah penyakit typus, kholera, dan

desentri.

2.

Sterilisasi

Sterilisasi adalah pemusnahan bakteri misalnya dalam pengawetan

makanan. Tujuannya adalah untuk mendapatkan kondisi steril (suci hama),

metodenya disebut aseptis. Sterilisasi dapat dilakukan melalui pemanasan

dengan menggunakan udara panas atau uap air panas bertekanan tinggi.

Sterilisasi dengan udara panas menggunakan oven dengan temperatur 170

180C. Cara ini digunakan untuk mensterilisasikan peralatan di

laboratorium . Sterilisasi dengan uap air panas bertekanan tinggi dilakukan

dengan menggunakan alat yang disebut autoklaf, pada temperatur 115

134C. Autoklaf digunakan untuk sterilisasi bahan dan peralatan.

Sterilisasi pada umumnya digunakan pada industri makanan atau minuman

kaleng, penelitian bidang mikrobiologi, dan untuk memperoleh biakan

murni suatu jenis bakteri.

3. Pasteurisasi

Pasteurisasi adalah pemanasan dengan suhu 63 72 derajat celsius

selama 15 - 30 menit. Pasteurisasi dilakukan pada bahan makanan yang

tidak tahan pemanasan dalam suhu tinggi, misalnya susu. Sehingga untuk

mematikan bakteri patogen (Salmonella dan Mycobacterium) dari susu

dilakukan pasteurisasi. Dengan pasteurisasi, rasa dan aroma khas susu

dapat dipertahankan.

4. Pengawetan Bahan Makanan


12/32

37

BAB III

METODE PRAKTIKUM

A. Waktu Praktikum

Praktikum Isolasi dan Inokulasi Mikroorganisme dilaksanakan

pada Selasa, 19 April 2016 pukul 09.00 sampai selesai dan Praktikum

Morfologi Bakteri dilaksanakan pada Jumat, 22 April 2016 pukul 10.30

sampai selesai.

B. Tempat Praktikum

Praktikum Isolasi dan Inokulasi Mikroorganisme dilaksanakan di

Laboratorium Terpadu Fakultas Kesehatan Masyarakat Universitas

Diponegoro.

C. Alat yang digunakan

1. Alat Isolasi dan Inokulasi Bakteri

a. Tabung reaksi 6 buah

b. Cawan petri 4 buah

c. Jarum ose

d. Inkubator

e. Bunsen

f. Kompor

g. Kertas buram

h.

Bulb 2 buah

i. Label

j. Tissu

k. Vortex

l. Pipet ukur 6 buah

m.

Rak tabung reaksi

2. Alat Morfologi Bakteri


13/32

38

a. Mikroskop

b.

Obyek glass

c. Desk glass

d. Jarum ose

e.

Penjepit

f. Bunsen

g. Pipet tetes

h.

Rak tabung reaksi

i. Tabung reaksi

j.

Spidol

k. Beaker glass

l. Hairdryer

m.

Korek api

n. Kapas

D. Bahan yang digunakan

1. Bahan Isolasi dan Inokulasi Bakteri

a.

PCA media tegak

b. EMBA media tegak

c.

NaCl fisiologis 0,9%

d. Kultur bakteri

e. Alkohol

f.

Kapas

g. Korek api

h.

Suspensi sample

2. Bahan Morfologi Bakteri

a. Biakan bakteri PCA 10-4

b. Pewarna Gram (Gram A = GV, Gram B = Lugol, Gram C =

Alkohol, Gram D = Air Fuchin)

c. NaCl fisiologis

d. Immersion oil

e.

Alkohol


14/32

39

f. Aquadest

E. Teknik sampling

Pada praktikum isolasi dan inokulasi bakteri, sampel yang

digunakan yaitu bagian permukaan tubuh (sela jari tangan) dari salah satu

anggota. Waktu pengambilan sampel yaitu pada hari Selasa, 19 April 2016

pukul 08.30 WIB. Pada praktikum morfologi bakteri, sampel yang

digunakan adalah agar tegak PCA dan EMBA.

F. Metode yang digunakan

Isolasi menggunakan metode agar tuang, sementara inokulasi

menggunakan metode gores menggunakan loop ose dan menggoreskannya

ke permukaan medium agar dengan pola tertentu dengan harapan pada

ujung goresan, hanya sel-sel bakteri tunggal yang terlepas dari ose dan

menempel kemedium. Sel-sel bakteri tunggal ini akan membentuk koloni

tunggal yang kemudian dapat dipindahkan ke medium selanjutnya agar

didapatkan biakan murni. morfologi bakteri menggunakan metode

pewarnaaan gram. Dalam proses ini, olesan bakteri yang sudah terfiksasi

dikenai larutan-larutan berikut : zat pewarna kristal violet, larutan iodium,

larutan alkohol (bahan pemucat), dan zat pewarna tandingannya berupa

safranin.

G. Skema Kerja

1. Pengambilan Sampel Mikroba Permukaan Tubuh (Tangan)

Tangan disemprot dengan alkohol 70 %

Disiapkan cotton bud dalam Na fisiologis steril

Tangan penjamah jangan disemprot dengan alkohol 70 %

Sela sela jari diusap dengan cotton bud steril sebanyak 3 kali

Cotton bud dimasukkan ke Na fisiologis dan ditutup dengan

Larutan sampel siap digunakan pada uji selanjutnya


15/32

40

Gambar 3.1 Skema Kerja Pengambilan Sampel Mikroba (Sela Jari

Tangan)

2. Teknik Pengenceran Bertingkat

5 tabung reaksi berisi 9 ml aquadest dalam keadaaan tertutup kapas

disiapkan dan diberi label pengenceran 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5

5 pipet ukur diberi label masing-masing 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5

dan suspensi

Bunsen dinyalakan dengan korek api

Tabung reaksi suspensi ditutup dan tabung reaksi pengenceran 10-1

dibuka dan mulut tabungnya didekatkan dengan api bunsen

1 ml suspensi diambil dengan pipet ukur dan dimasukkan ke tabung

pengencer 10-1jika sudah, kedua mulut tabung dilewatkan pada api

dan ditutup kembali

Tabung reaksi pengencer 10-1 ditutup dan 10-2dibuka dan

dipanaskan mulut tabungnya

1 ml pengencer 10-1 diambil dengan pipet ukur berlabel 10-1 dan

dipindahkan ke tabung pengencer 10-2 , lewatkan kedua mulut

tabung pada api dan ditutup

Hal yang sama dilakukan hingga pengenceran 10-5 menggunkana

pipet ukur berurutan sesuai tabel

Hasil pengenceran siap digunakan pada uji selanjutnya


16/32

41

Gambar 3.2 Skema Kerja Teknik Pengenceran Bertingkat

3.

Skema Kerja Isolasi Mikroorganisme

Gambar 3.3 Skema Kerja Isolasi Mikroogranisme

4.

Skema Kerja Inokulasi Biakan Murni

Media tegak dipanaskan diatas kompos hingga cair

1 ml suspensi pengenceran 10-3, 10-4, 10-5 dimasukkan ke dalam

masing-masing cawan petri steril (3 buah cawan)

Media cair ditungkan ke masing-masing cawan petri yang berisi

suspensi

Media diratakan dengan menggoyangkan cawan perlahan

membentuk angka 8

Diamkan hingga media padat, semua perlakuan dalam suasana

aseptis

Cawan petri dibungkus kertas dalam posisi terbali dan diinkubasi 2

x 24 jam

Media EMBA disiapkan dan bunsen dinyalakan

Tabung pengenceran 10-3dipegang tangan kiri dan jarum

inokulasi dipegang tangan kanan


17/32

42

Gambar 3.4 Skema Kerja Inokulasi Biakan Murni

5. Skema kerja Morfologi Bakteri

a) Pembuatan Film

Objek glass dibilas alkohol, dikeringkan dan diberi tanda

bulatan dengan spidol

Diberi satu tetes NaCl fisiologis pada objek glass

Jarum inokulasi dipanaskan hingga pijar lalu didinginkan

Jarum inokulasi dimasukkan pada tabung pengenceran 10

-3

hingga membentuk gelembung pada jarum ose

Segera disentuhkan pada permukaan media baru, jangan

menekan media hingga rusak

Jarum inokulasi ditarik ke luar perlahan secara zig zag

Mulut tabung dipanaskan dan tabung disumbat kapas

Jarum inokulasi dibakar hingga pijar dan diletakkan pada

tempatnya

Cawan yang berisi media dibungkus dengan kertas buram dalam

posisi terbalik dan diinkubasi 2 x 24 jam

Diamati perubahannya


18/32

43

Gambar 3.5 Skema Kerja Pembuatan Film pada

Morfologi Bakteri

b)

Pewarnaan Gram

Jarum ose dipanaskan hingga pijar, diangin- anginkan

Jarum ose digesekkan zig zag pada biakan bakteri PCA

10-4

Jarum ose yang sudah ada bakteri, diletakkan pada

tetesan NaCl fisiologis lalu diratakan

Dikeringkan dengan melewatkan di atas api hingga

kering

Film ditetesi 1 tetes gram A (CGV) selama 30 detik

Dibilas dengan air dan dikeringkan dengan hairdryer

Ditetesi dengan 1 tetes gram B (Lugol) selama 30 detik,

dibilas dengan air dan dikeringkan dengan hairdryer

Ditetesi dengan 1 tetes gram C (Alkohol) selama 30

detik, dibilas dengan air dan dikeringkan dengan

Ditetesi dengan 1 tetes gram D (Air Fuchin) selama 30

detik, dibilas dengan air dan dikeringkan dengan

hairdr er


19/32

44

Gambar 3.6 Skema Kerja Pewarnaan Gram pada

Morfologi Bakteri

Preparat ditetesi dengan 1 tetes minyak imersi

Desk glass dipasang dan jangan sampai terdapat

gelembung udara

Preparat siap dilihat menggunakan mikroskop perbesaran

objektif 100x


20/32

45

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Hasil Pengamatan

1. Isolasi dan Inokulasi Bakteri Mikroorganisme

Tabel 4.1 Hasil Pengamatan Praktikum Isolasi dan Inokulasi

Mikroorganisme

No Pengamatan Sampel Metode Hasil

1. Isolasi Bagian

permukaan tubuh

(sela jari tangan)

dengan

pengenceran 10-

3,10-4, 10-5media

PCA

Agar

Tuang

Terdapat koloni

pada media agar

tegak, ada yang

berwarna putih dan

kuning

2. Inokulasi Bagian

permukaan tubuh

(sela jari tangan)

dengan

pengenceran 10-3

Media

tegak

EMBA

Terdapat (sedikit)

koloni bakteri

berwarna putih

berbentuk bulat

Berdasarkan Tabel 4.1pada isolasi bakteri setelah diberi

sampel dan pengenceran 10-3,10-4, 10-5 pada media PCA melalui

metode tuang, terdapat koloni pada media tegak. Pada inokulasi

bakteri setelah diberi sampel dan pengenceran 10-3 pada media


21/32

46

EMBA, terdapat koloni bakteri yang berwarna putih dan berbentuk

bulat.

Gambar 4.1 Pengenceran Gambar 4.2 Hasil Isolasi Pada

10-3,10-4, 10-5 Media PCA 10-4

Gambar 4.1 Menunjukkan pengenceran yang dilakukan secara bertingkat

mulai dari 10-3,10-4, dan 10-5 . Sementara itu, Gambar 4.2 Menunjukkan hasil

isolasi pada salah satu pengenceran yaitu 10-4 terlihat koloni bakteri yang

berwarna putih dan kekuningan.

2. Morfologi Bakteri

Tabel 4.2 Hasil Pengamatan Praktikum Morfologi Bakteri

No Media Warna Bentuk Gambar Gram

1. Agar

tegak

PCA

10-4

merah Batang

koma

Negatif

Berdasarkan Tabel 4.2 Morfologi Bakteri menggunakan

media tegak PCA 10-4 yang kemudian setelah dilihat pada

mikroskop perbesaran 100x didapatkan gambar bakteri yang


22/32

47

berbentuk batang koma dan berwarna merah. Bakteri yang

berbentuk batang koma dan berwarna merah termasuk bakteri gram

negatif.

B. Pembahasan

1. Deskripsi Pengujian

a.

Metode Isolasi dan Inokulasi

Sampel yang digunakan adalah bagian permukaan

tubuh (sela jari tangan). Suspensi sampel dilakukan dengan

pengenceran bertingkat (10-1 sampai 10-5). Proses isolasi

dan inokulasi dilakukan dengan cara aseptis untuk

menghindari kontaminasi silang. Dalam proses isolasi

mikroorganisme digunakan media PCA yang dituangkan ke

cawan petri dan di tuang suspensi pengenceran 10-3, 10-4

dan 10-5 lalu cawan tersebut dibungkus dengan kertas

buram dan diinkubasi 2 x 24 jam ke dalam inkubator.

Metode inokulasi menggunakan media EMBA dan

menggunakan suspensi pengenceran 10-3 . Jarum ose yang

sudah dipanaskan, dimasukkan ke tabung pengenceran dan

disentuhkan pada media EMBA dengan bentuk zig zag.

Lalu diinkubasi 2 x 24 jam ke dalam inkubator.

b.

Metode Morfologi Bakteri

Metode yang digunakan dalam morfologi bakteriyaitu dengan media PCA 10-4 karena dalam media EMBA

tidak ditemukan adanya bakteri. Media PCA 10-4

digunakan karena yang paling banyak ditumbuhi bakteri.

Pertama dilakukan pembuatan film dengan memindahkan

bakteri pada media PCA 10-4 ke objek glass dan ditetesi

dengan NaCl fisiologis lalu dikeringkan di atas api.

Kemudian dilakukan pewarnaan gram berturut turut dari


23/32

48

pewarnaan gram A (Kristal Violet), gram B (Iodium), gram

C (Alkohol) dan gram D (Safranin), selanjutnya ditetesi

dengan minyak imersi lalu preparat diamati dengan

menggunakan mikroskop (perbesaran 100x).

2. Gambaran umum sampel

Dalam praktikum ini, sampel yang digunakan adalah bagian

permukaan tubuh (sela jari tangan) penjamah. Pengambilan sampel

dilakukan dengan mengusap sela-sela jari menggunakan cotton bud

steril sebanyak 3 kali. Setelah itu, cotton bud dimasukkan ke Na

Fisiologis dan ditutup dengan kapas. Kemudian dilakukan

pengenceran dengan teknik pengenceran bertingkat sebanyak 5 kali

pengenceran (10-1 sampai 10-5). Pengenceran 10-3, 10-4 dan 10-5

dimasukkan ke dalam media PCA pada cawan petri yang akan

digunakan untuk isolasi mikrorganisme. Pengenceran 10-3

dimasukkan ke dalam media EMBA pada pada cawan petri yang

akan digunakan untuk inokulasi biakan murni. Mikroogranisme

pada PCA 10-4 diambil dan diletakkan pada preparat yang akan

digunakan untuk morfologi mikroorganisme.

3. Hasil Pengujian

a. Isolasi dan Inokulasi

Hasil praktikum isolasi mikroorganisme biakan

bakteri sampel sela jari tangan penjamah terdapat biakan

mikroorganisme yang berkoloni. Hal ini dapat dilihat pada

cawan dengan pengenceran 10-3, 10-4 dan 10-5 yang sudah

diinkubasi selama 2x 24 jam. Sedangkan hasil inokulasi

biakan murni terdapat sedikit biakan mikroorganisme

sehingga diasumsikan terdapat kesalahan saat praktikum.

b. Morfologi bakteri


24/32

49

Pada morfologi bakteri menggunakan media PCA

10-4 yang paling banyak ditumbuhi bakteri. Berdasarkan

hasil praktikum secara mikroskopis, dengan metode

pewarnaan gram didapatkan bahwa biakan bakteri memiliki

ciri-ciri yaitu bentuk bakteri batang berbentuk koma, warna

bakteri berwarna merah. Dari ciri-ciri tersebut menandakan

bahwa biakan bakteri pada media PCA 10-4 merupakan

jenis bakteri gram negatif.

4.

Faktor - Faktor yang Mempengaruhi Pengujian

a.

Saat pengambilan sampel inokulasi pada media EMBA

jarum ose, diduga gelembung telah menghilang terlebih

dahulu sebelum disentuhkan ke media EMBA, yang

menyebabkan sedikitnya bakteri pada media EMBA.

b. Adanya kontaminan karena kurang aseptik pada saat

praktikum sehingga menyebabkan bakteri kontaminan ikut

tumbuh.

5. Dampak

Bakteri yang hidup pada media PCA 10-4 termasuk ke

dalam bakteri gram negatif. Bakteri ini bersifat patogen, contoh

bakteri gram negatif adalah Escherichia, Shigella, Salmonella,

Enterobacter, Klebsiella, Serratia, Proteus, dll yang dapat

menyebabkan penyakit pada manusia meliputi diare, salmonellosis,

dan sebagainya.


25/32

50

BAB V

PENUTUP

A. Kesimpulan

1. Praktikum isolasi mikroorganisme menggunakan tangan penjamah

(sela jari tangan) sebagai sampel serta metode yang digunakan

adalah metode tuang. Isolasi mikroorganisme menghasilkan biakan

bakteri yang berkoloni ada yang berwarna kuning dan putih.

2.

Praktikum inokulasi mikroorganisme biakan murni menggunakan

tangan penjamah (sela jari tangan) sebagai sampel dan

menggunakan media tegak. Hasil inokulasi biakan murni

menghasilkan biakan bakteri yang kurang sempurna. Hal ini dapat

disebabkan beberapa kemungkinan seperti hilangnya gelembung

pada jarum ose sebelum disentuhkan zig zag pada media baru dan

kemungkinan lain disebabkan kurang terampilnya praktikan dalam

pengujian di laboratorium.

3. Praktikum morfologi bakteri menggunakan media tegak PCA

dengan pengenceran 10-4 . Pengamatan morfologi bakteri secara

mikroskopis melalui metode pewarnaan gram. Hasil dari praktikum

ini yaitu terbentuk biakan bakteri batang koma, warna yang terlihat

merah dan ciri-ciri tersebut menandakan bahwa biakan bakteri

termasuk golongan gram negatif.

B. Saran

1. Praktikan lebih memahami prosedur kerja sebelum melakukan

praktikum agar dapat meminimalkan kesalahan pada

pelaksanaannya.

2.

Dalam praktikum, semua harus aseptis untuk menghindari adanya

kontaminasi silang.


26/32

51

DAFTAR PUSTAKA

1.

Rusli. Penuntun Praktikum Mikrobiologi Dasar. Makassar: Universitas

Muslim Indonesia. 2014

2. Buckel, KA. Ilmu Pangan. Jakarta: Universitas Indonesia. 2007

3.

Dwyana, Zaraswati. Bahan Ajar Mikrobiologi Dasar. Makassar:

Universitas Hasanuddin. 2011

4. Saskia, Sinta; dkk.Praktikum Mikrobiologi Dasar. Makassar. 2006

5. https://www.academia.edu/16740977/LAPORAN_ISOLASI_DAN_INOK

ULASI_MIKROBIOLOGI_DASAR(Diakses tanggal 4 Mei 2016)

6. Ghoni, Achmad.Isolasi dan Inokulasi Bakteri. 2013

7. Dwidjoseputro.Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta: Djambatan. 1998

8. Oetomo, Hadi dan Ratna Sari.Mikrobiologi Dasar dalam Praktek. Jakarta:

PT. Gramedia. 1990

9.

http://repository.usu.ac.id/bitstream/123456789/41660/4/Chapter%20II.pd

f(Diakses tanggal 4 Mei 2016)

10.

EMB Agar. http://www.mediaagar.com/blog/emb-agar/. 2012 (Diakses

tanggal 4 Mei 2016)

11.http://digilib.unila.ac.id/1374/7/BAB%20II.pdf (Diakses tanggal 4 Mei

2016)

12.http://digilib.unila.ac.id/5690/11/13.BAB%20II.pdf (Diakses tanggal 4

Mei 2016)

13.Dwyana, Zaraswati. Buku Ajar Biologi Sel dan Molekular. Makassar:

Universitas Hasanuddin. 2014

14.Gana, D Mahata.Rahasia Bakteri. Jakarta: PT. Gramedia. 2008

15.http://www.necturajuice.com/berbagai-penyakit-yang-disebabkan-oleh-

bakteri/(Diakses tanggal 4 Mei 2016)
https://www.academia.edu/16740977/LAPORAN_ISOLASI_DAN_INOKULASI_MIKROBIOLOGI_DASARhttps://www.academia.edu/16740977/LAPORAN_ISOLASI_DAN_INOKULASI_MIKROBIOLOGI_DASARhttps://www.academia.edu/16740977/LAPORAN_ISOLASI_DAN_INOKULASI_MIKROBIOLOGI_DASARhttps://www.academia.edu/16740977/LAPORAN_ISOLASI_DAN_INOKULASI_MIKROBIOLOGI_DASARhttps://www.academia.edu/16740977/LAPORAN_ISOLASI_DAN_INOKULASI_MIKROBIOLOGI_DASARhttp://repository.usu.ac.id/bitstream/123456789/41660/4/Chapter%20II.pdfhttp://repository.usu.ac.id/bitstream/123456789/41660/4/Chapter%20II.pdfhttp://repository.usu.ac.id/bitstream/123456789/41660/4/Chapter%20II.pdfhttp://repository.usu.ac.id/bitstream/123456789/41660/4/Chapter%20II.pdfhttp://repository.usu.ac.id/bitstream/123456789/41660/4/Chapter%20II.pdfhttp://www.mediaagar.com/blog/emb-agar/http://www.mediaagar.com/blog/emb-agar/http://digilib.unila.ac.id/1374/7/BAB%20II.pdfhttp://digilib.unila.ac.id/1374/7/BAB%20II.pdfhttp://digilib.unila.ac.id/1374/7/BAB%20II.pdfhttp://digilib.unila.ac.id/5690/11/13.BAB%20II.pdfhttp://digilib.unila.ac.id/5690/11/13.BAB%20II.pdfhttp://digilib.unila.ac.id/5690/11/13.BAB%20II.pdfhttp://www.necturajuice.com/berbagai-penyakit-yang-disebabkan-oleh-bakteri/http://www.necturajuice.com/berbagai-penyakit-yang-disebabkan-oleh-bakteri/http://www.necturajuice.com/berbagai-penyakit-yang-disebabkan-oleh-bakteri/http://www.necturajuice.com/berbagai-penyakit-yang-disebabkan-oleh-bakteri/http://www.necturajuice.com/berbagai-penyakit-yang-disebabkan-oleh-bakteri/http://www.necturajuice.com/berbagai-penyakit-yang-disebabkan-oleh-bakteri/http://www.necturajuice.com/berbagai-penyakit-yang-disebabkan-oleh-bakteri/http://digilib.unila.ac.id/5690/11/13.BAB%20II.pdfhttp://digilib.unila.ac.id/1374/7/BAB%20II.pdfhttp://www.mediaagar.com/blog/emb-agar/http://repository.usu.ac.id/bitstream/123456789/41660/4/Chapter%20II.pdfhttp://repository.usu.ac.id/bitstream/123456789/41660/4/Chapter%20II.pdfhttps://www.academia.edu/16740977/LAPORAN_ISOLASI_DAN_INOKULASI_MIKROBIOLOGI_DASARhttps://www.academia.edu/16740977/LAPORAN_ISOLASI_DAN_INOKULASI_MIKROBIOLOGI_DASAR


27/32

52

LAMPIRAN

1. Isolasi dan Inokulasi Mikroorganisme

Persiapan Pengenceran Tahap Pengenceran Larutan di vortex

Media PCA Pemasukkan larutan Pemasukkan media PCA ke

pengencer ke cawan cawan

Penggoyangan cawan media PCA 10-3,10-4, 10-5 Pembungkusan cawan (posisi

didiamkan hingga padat terbalik)


28/32


29/32

54

Objek glass dibilasi air Objek glass dikeringkan Objek glass kering

A sampai Gram D dengan hairdryer

Preparat ditetesi imersi Desk Glass dipasang Pengamatan pada mikroskop


30/32

55


31/32

56


32/32

57

Isolasi Inokulasi Dan Morfologi

Documents