Invloed van eMM software op flagging voor Sysmex XE-5000. Dr. Annemie Vandermeersch Supervisor: Dr. Sc. Willy Goossens 26-04-2011
Invloed van eMM software op flagging
voor Sysmex XE-5000.
Dr. Annemie Vandermeersch
Supervisor: Dr. Sc. Willy Goossens
26-04-2011
Overzicht
• Aanleiding
• Sysmex XE-5000– Algemene meet- en detectieprincipes
– Flagging
• Wat is eMM?
• Vragen
• Retrospectieve analyse UZ Leuven
• Conclusies
• To Do
Overzicht
• Aanleiding
• Sysmex XE-5000– Algemene meet- en detectieprincipes
– Flagging
• Wat is eMM?
• Vragen
• Retrospectieve analyse UZ Leuven
• Conclusies
• To Do
Aanleiding
Sysmex XE-5000:
upgrade softwareversie 00-05 naar 00-06 (=eMM)
Verhoogde efficiëntie voor flagging via nieuwe algoritmes en waarschuwingsregels???
Overzicht
• Aanleiding
• Sysmex XE-5000– Algemene meet- en detectieprincipes
– Flagging
• Wat is eMM?
• Vragen
• Retrospectieve analyse UZ Leuven
• Conclusies
• To Do
Sysmex XE-5000
Algemene specificaties:
• vereist staalvolume:
– 200 µl/130 µl (closed/open mode)
– 40 µl voor capillary mode
• 150 stalen/uur
• gegevensopslag: 10000 stalen
37 parametersWitte bloedcellen WBC Absoluut aantal neutrofielen NEUT#
Rode bloedcellen RBC Absoluut aantal lymfocyten LYMPH#
Hemoglobine HGB Absoluut aantal monocyten MONO#
Hematocriet HCT Absoluut aantal eosinofielen EO#
Gemiddeld RBC volume MCV Absoluut aantal basofielen BASO#
Gemiddeld RBC hemoglobine MCH Percentage immature granulocyten IG%
Gemiddeld RBC HGB-concentratie MCHC Absoluut aantal immature granulocyten IG#
Bloedplaatjes PLT Absoluut aantal hematopoïetischeprogenitorcellen
HPC#
RBC volumespreiding SD RDW-SD Percentage gekernde RBC NRBC%
RBC volumespreiding CV RDW-CV Absoluut aantal gekernde RBC NRBC#
PLT volumespreiding PDW Percentage reticulocyten RET%
Gemiddeld PLT volume MPV Absoluut aantal reticulocyten RET#
Percentage macrobloedplaatjes P-LCR Hoge fluorescentie ratio HFR
Platocriet PCT Medium fluorescentie ratio MFR
Percentage neutrofielen NEUT% Lage fluorescentie ratio LFR
Percentage lymfocyten LYMPH% Immature reticulocytenfractie IRF
Percentage monocyten MONO% Reticulocyten hemoglobine equivalent RET-He
Percentage eosinofielen EO% Immature bloedplaatjesfractie IPF
Percentage basofielen BASO%
Meet- en detectieprincipes
Meetkanalen Technologie
Hemoglobine SLS-methode
PLT, RBC, HCT Elektrische impedantie
WBC DIFF-kanaal Fluorescentie flowcytometrie
WBC/BASO-kanaal Fluorescentie flowcytometrie
IMI-kanaal RF-DC methode
NRBC-kanaal Fluorescentie flowcytometrie
RET-kanaal Fluorescentie flowcytometrie
Meet- en detectieprincipes
Meetkanalen Technologie
Hemoglobine SLS-methode
PLT, RBC, HCT Elektrische impedantie
WBC DIFF-kanaal Fluorescentie flowcytometrie
WBC/BASO-kanaal Fluorescentie flowcytometrie
IMI-kanaal RF-DC methode
NRBC-kanaal Fluorescentie flowcytometrie
RET-kanaal Fluorescentie flowcytometrie
Hemoglobine: SLS-methode
• SLS = natriumlaurylsulfaat (een detergens)
• Lyse RBC door absorptie van SLS aan RBC-membraan
Hemoglobine: SLS-methode
• Hydrofobe groepen van SLS binden aan Hb
oxidatie van ijzer: Fe2+ Fe3+
• Hydrofiele groepen van SLS binden met Fe3+
vorming van SLS-Hb = stabiel methemoglobinederivaat
• Fotometrische meting van SLS-Hb bij 540 nm
Meet- en detectieprincipes
Meetkanalen Technologie
Hemoglobine SLS-methode
PLT, RBC, HCT Elektrische impedantie
WBC DIFF-kanaal Fluorescentie flowcytometrie
WBC/BASO-kanaal Fluorescentie flowcytometrie
IMI-kanaal RF-DC methode
NRBC-kanaal Fluorescentie flowcytometrie
RET-kanaal Fluorescentie flowcytometrie
Elektrische impedantie (DC sheath flow)
• Bepaling RBC/PLT:
– Grootte elektrische puls volume bloedcel
– Aantal signalen aantal cellen
• Integratie van meetsignalen vormt HCT
• Cellen stromen één per één door nauw meetkanaal tussen 2 elektroden via concentrische vloeistofstromen
(‘hydrodynamic focusing’)
• Elke cel veroorzaakt weerstandsstijging
elektrisch signaal
PLT, RBC, HCT: elektrische impedantie
• Histograms:– RBC: Gaussiaanse verdeling
• Spreiding volume RBC: RDW-SD en RDW-CV
– PLT: lognormale verdeling• Gemiddelde volume PLT: MPV• Spreiding volume PLT: PDW
• Berekeningen:– MCV (HCT/RBC)– MCH (HGB/RBC)– MCHC (HGB/HCT)
Meet- en detectieprincipes
Meetkanalen Technologie
Hemoglobine SLS-methode
PLT, RBC, HCT Elektrische impedantie
WBC DIFF-kanaal Fluorescentie flowcytometrie
WBC/BASO-kanaal Fluorescentie flowcytometrie
IMI-kanaal RF-DC methode
NRBC-kanaal Fluorescentie flowcytometrie
RET-kanaal Fluorescentie flowcytometrie
WBC DIFF-kanaal: fluorescentie flowcytometrie
• Surfactant (lyse RBC, ∆WBC)• Fluorochroom (polymethine): DNA/RNA• Hydrodynamic focusing: cellen één
per één belicht– Lichtverstrooiing: onder 2 hoeken– Fluorescentie: zijdelings
4 types celinformatie:
• Telling aantal WBC (lichtverstrooiingspulsen)
• FSC (forward scattered light): grootte cel
• SSC (side scattered light): inwendige structuur (kernvorm, granulen)
• SFL (side fluorescence light): DNA, RNA
WBC DIFF-kanaal: fluorescentie flowcytometrie
SSC/SFL
Meet- en detectieprincipes
Meetkanalen Technologie
Hemoglobine SLS-methode
PLT, RBC, HCT Elektrische impedantie
WBC DIFF-kanaal Fluorescentie flowcytometrie
WBC/BASO-kanaal Fluorescentie flowcytometrie
IMI-kanaal RF-DC methode
NRBC-kanaal Fluorescentie flowcytometrie
RET-kanaal Fluorescentie flowcytometrie
WBC/BASO: fluorescentie flowcytometrie
• Zuur milieu (pH = 2)
Lyse WBC, uitz. baso
• SSC/FSC (IG!)
Meet- en detectieprincipes
Meetkanalen Technologie
Hemoglobine SLS-methode
PLT, RBC, HCT Elektrische impedantie
WBC DIFF-kanaal Fluorescentie flowcytometrie
WBC/BASO-kanaal Fluorescentie flowcytometrie
IMI-kanaal RF-DC methode
NRBC-kanaal Fluorescentie flowcytometrie
RET-kanaal Fluorescentie flowcytometrie
IMI-kanaal: RF-DC methode
• IMI = ‘immature myeloid information’• Lipofiel agens
– Lyse WBC, uitz. IG• Impedantiemeting met gelijkstroom (DC) en wisselstroom (RF)• Wisselstroom energierijker, dringt cel ten dele binnen• Pulsgrootte granulariteit, onregelmatigheid kern• Verspreiding volgens uitrijpingsgraad
Meet- en detectieprincipes
Meetkanalen Technologie
Hemoglobine SLS-methode
PLT, RBC, HCT Elektrische impedantie
WBC DIFF-kanaal Fluorescentie flowcytometrie
WBC/BASO-kanaal Fluorescentie flowcytometrie
IMI-kanaal RF-DC methode
NRBC-kanaal Fluorescentie flowcytometrie
RET-kanaal Fluorescentie flowcytometrie
NRBC: fluorescentie flowcytometrie
• Lyse RBC• Reagens:
– WBC doorlaatbaar– Kernen NRBC
• SFL/FSC• Automatische correctie WBC
Meet- en detectieprincipes
Meetkanalen Technologie
Hemoglobine SLS-methode
PLT, RBC, HCT Elektrische impedantie
WBC DIFF-kanaal Fluorescentie flowcytometrie
WBC/BASO-kanaal Fluorescentie flowcytometrie
IMI-kanaal RF-DC methode
NRBC-kanaal Fluorescentie flowcytometrie
RET-kanaal Fluorescentie flowcytometrie
RET: fluorescentie flowcytometrie
• Fluorochroom (polymethine, RNA)
• Hydrodynamische focussing
• SFL/FSC– fluorescentie-neg: RBC (geen RNA)
– Toenemende SFL: RET
– Kleine FSC/SFL: PLT
• Maturiteit (hoeveelheid RNA):– LFR (low fluorescence rate)
– MFR (medium fluorescence rate)
– HFR (high fluorescence rate)
• IRF (immature reticulocyten fractie):– MFR + HFR / LFR + MFR + HFR
– Ijzertherapie/EPO/BM-transplantatie
RET: fluorescentie flowcytometrie
• Optische meting PLT
• IPF (immature PLT fractie): hogere RNA-inhoud– DD/ trombopenie
– BM-transplantatie
Flagging
• Aflijning celpopulaties: niet voldaan aan criteria
• Gecodeerde waarschuwingen (‘IP-flags’)
• Pathologisch/microscopisch onderzoek
• Aanpassing gevoeligheid (Q-waarde, 0-300)
• ‘IP-flags’: morfologie- en numerieke vlaggen
• ‘rules’ (=validatieregels)
• Bijkomende waarschuwingen
• Studie: IP-vlaggen WBC
Item Limiet (*) Meetkanaal
WBC Abn Scattergram n.v.t. WBC/BASO, DIFF
NRBC Abn Scattergram n.v.t. NRBC
RBC Abn Distribution n.v.t. RBC
Dimorphic Population n.v.t. RBC
RET Abn Scattergram n.v.t. Retic
PLT Abn Scattergram n.v.t. Retic
PLT Abn Distribution n.v.t. PLT
Blasts? 150 DIFF, IMI (scattergram)
Immature Gran? 190 DIFF, IMI (scattergram)
Left Shift? 190 DIFF, IMI (scattergram)
Atypical Lympho? 100 DIFF, IMI (scattergram)
Abn Lympho/L-Blasts? 100 DIFF, IMI (scattergram)
NRBC? 100 DIFF (scattergram) + numerisch
RBC Lyse resistance 100 DIFF, WBC/BASO (scattergram) + numerisch (techn.parameters)
RBC Agglutination? 100 RBC + numerisch (MCHC, MCH, techn.parameters)
Turbidity/HGB Interference ? 100 Numerisch (MCHC)
Iron Deficiency? 100 Numerisch (MCHC, MCV, RDW)
HGB Defect? 100 Numerisch (MCV, RDW)
Fragments? 100 Ret (scattergram) + numerisch (RDW, MCV, MCHC, techn.parameters)
PLT Clumps? 100 DIFF, IMI, NRBC (scattergram)
PLT Clumps (S) ? 100 Numerisch (PLT, PDW, MPV, P-LCR, techn.parameters)
Item Limiet (*) Meetkanaal
WBC Abn Scattergram n.v.t. WBC/BASO, DIFF
NRBC Abn Scattergram n.v.t. NRBC
RBC Abn Distribution n.v.t. RBC
Dimorphic Population n.v.t. RBC
RET Abn Scattergram n.v.t. Retic
PLT Abn Scattergram n.v.t. Retic
PLT Abn Distribution n.v.t. PLT
Blasts? 150 DIFF, IMI (scattergram)
Immature Gran? 190 DIFF, IMI (scattergram)
Left Shift? 190 DIFF, IMI (scattergram)
Atypical Lympho? 100 DIFF, IMI (scattergram)
Abn Lympho/L-Blasts? 100 DIFF, IMI (scattergram)
NRBC? 100 DIFF (scattergram) + numerisch
RBC Lyse resistance 100 DIFF, WBC/BASO (scattergram) + numerisch (techn.parameters)
RBC Agglutination? 100 RBC + numerisch (MCHC, MCH, techn.parameters)
Turbidity/HGB Interference ? 100 Numerisch (MCHC)
Iron Deficiency? 100 Numerisch (MCHC, MCV, RDW)
HGB Defect? 100 Numerisch (MCV, RDW)
Fragments? 100 Ret (scattergram) + numerisch (RDW, MCV, MCHC, techn.parameters)
PLT Clumps? 100 DIFF, IMI, NRBC (scattergram)
PLT Clumps (S) ? 100 Numerisch (PLT, PDW, MPV, P-LCR, techn.parameters)
Overzicht
• Aanleiding
• Sysmex XE-5000– Algemene meet- en detectieprincipes
– Flagging
• Wat is eMM?
• Vragen
• Retrospectieve analyse UZ Leuven
• Conclusies
• To Do
We laten Sysmex even aan het woord…
Uitgangspunt
• IMI-kanaal– Er kan overlap zijn tussen vlaggebieden voor blasten
en immature granulocyten– Geen overlap tussen vlaggebieden voor blasten en
atypische lymfocyten
• DIFF-kanaal– Geen overlap tussen vlaggebieden voor blasten en
immature granulocyten– Er is overlap tussen vlaggebieden voor blasten en
atypische lymfocyten
Wat verandert er met eMM
• eMM = ‘efficient Multichannel Messaging’
• Flagging gebaseerd op combinatie van gegevens uit DIFF- én IMI-kanaal via nieuwe algoritmes
• Nieuwe algoritmes:– ‘Blasts?’: algoritme 1
– ‘Blasts?’: algoritme 2
– ‘Atypical Lymphocytes?’: algoritme 1
– ‘Abnormal Lymphocytes/L-blasts?’: algoritme 1
Sysmex claim:
• Reductie van het aantal gevlagde stalen
- ‘Blasts?’
- ‘Abnormal Lymphocytes/Lymphoblasts?’
- ‘Atypical Lymphocytes’
• Geen toename van aantal vals-negatieven
Is dat zo ???
Overzicht
• Aanleiding
• Sysmex XE-5000– Algemene meet- en detectieprincipes
– Flagging
• Wat is eMM?
• Vragen
• Retrospectieve analyse UZ Leuven
• Conclusies
• To Do
Vragen
• Vraag 1: Hoe correleert de eMM-software met versie 00-05?
• Vraag 2: Hoe correleert de eMM-software met de microscopie?
• Vraag 3: Is de eMM-software specifieker voor de aanwezigheid van blasten, zonder dat de sensitiviteit hierbij in het gedrang komt?
Overzicht
• Aanleiding
• Sysmex XE-5000– Algemene meet- en detectieprincipes
– Flagging
• Wat is eMM?
• Vragen
• Retrospectieve analyse UZ Leuven
• Conclusies
• To Do
Studieontwerp
• Staalselectie: 489 bloedstalen afkomstig van– hemato-oncologie patiënten– pediatrische oncologie– geselecteerde andere patiënten
• Analyses:– Sysmex XE-5000 rev.00-05– Binnen 30 min. Sysmex XE-5000 rev.00-06 (eMM)– Microscopie 400 cel-diff (2 x 200, 2 ≠ uitvoerders)– Dagelijks QC (low level/high level)– Flagging volgens standaardinstellingen (flag = 100)
• Verzameling en verwerking van alle gegevens
Correlatie WBC
eMM vs. 00-05
Correlatiecoëfficiënt r = 1.00
% neutrofielen
eMM vs. 00-05 eMM vs. microscopie
Correlatiecoëfficiënt r = 1.00 Correlatiecoëfficiënt r = 0.97
% eosinofielen
eMM vs. 00-05 eMM vs. microscopie
Correlatiecoëfficiënt r = 0.94 Correlatiecoëfficiënt r = 0.94
% basofielen
eMM vs. 00-05 eMM vs. microscopie
Correlatiecoëfficiënt r = 0.88 Correlatiecoëfficiënt r = 0.46
% lymfocyten
eMM vs. 00-05 eMM vs. microscopie
Correlatiecoëfficiënt r = 0.99 Correlatiecoëfficiënt r = 0.96
% monocyten
eMM vs. 00-05 eMM vs. microscopie
Correlatiecoëfficiënt r = 0.97 Correlatiecoëfficiënt r = 0.80
% immature granulocyten
eMM vs. 00-05 eMM vs. microscopie
Correlatiecoëfficiënt r = 0.91 Correlatiecoëfficiënt r = 0.74
Blasten Qflag Qflag Qflag Qflag Qflag Qflag(%) (Abn Ly/ (Abn Ly/ (Blasts?) or (Blasts?) or
microsc. (Blasts?) (Blasts?) L_Bl?) L_Bl?) (Abn L/L_B?) (Abn L/L_B?)1 86 300 300 300 3002 76,5 300 300 300 3003 68 300 300 300 3004 58 300 140 300 1405 29 300 300 300 3006 21 300 300 300 3007 19 300 300 300 3008 17 300 300 300 3009 17 280 260 280 260
10 13,5 120 12011 13 300 30012 11,5 300 30013 11 120 100 120 10014 9,5 300 300 300 30015 8,5 120 12016 7 300 300 300 30017 4 120 12018 419 3,520 3,5 300 220 300 22021 3 300 300 300 30022 323 2,5 300 30024 2,525 2,526 2 300 30027 228 229 1,5 300 300 300 30030 1,5 300 300 300 30031 1,532 1,5 300 30033 1,5 300 30034 1,535 1,5 300 30036 1,537 138 1 200 20039 140 141 142 1
Q-flag = rev.00-05Q-flag = rev.eMM
Blast-detectievolgens specifieke
flagging
• Microscopisch blasten: 42/489
• 00-05: 26/42 stalen• „Blasts?‟: 25/26
• „Abn Ly/L_Bl?‟: 1/26
• eMM: 17/42 stalen• „Blasts?‟: 8/17
• „Abn Ly/L_Bl?‟: 9/17
•1/9: ALL
Specificiteit blasten
• Microscopisch geen blasten: 447/489 stalen
• 00-05: 130/447 stalen met blastenvlag– 111/130: ‘Blasts?’
– 19/130: ‘Abnormal lymphocytes/Lymphoblasts?’
• eMM: 50/447– 12/50: ‘Blasts?’ (8/12 met Q-waarde 300)
– 38/50: ‘Abnormal lymphocytes/Lymphoblasts?’ (11/38 met Q-waarde 300)
Sensitiviteit/specificiteit blasten
XE-5000 rev.00-05 Microscopisch blasten ≥ 1%
positief negatief
positief 26 (TP) 130 (FP)
negatief 16 (FN) 317 (TN)
XE-5000 eMM Microscopisch blasten ≥ 1%
positief negatief
positief 17 (TP) 50 (FP)
negatief 25 (FN) 397 (TN)
Sensitiviteit: 61.9% PPV: 16.7%Specificiteit: 70.9% NPV: 95.2%
Sensitiviteit: 40.5% PPV: 25.4%Specificiteit: 88.8% NPV: 94.1%
Sensitiviteit/specificiteit blasten
XE-5000 rev.00-05 Microscopisch blasten ≥ 1%
positief negatief
positief 26 (TP) 130 (FP)
negatief 16 (FN) 2317 (TN)
XE-5000 eMM Microscopisch blasten ≥ 1%
positief negatief
positief 17 (TP) 50 (FP)
negatief 25 (FN) 2397 (TN)
Sensitiviteit: 61.9% PPV: 16.7%Specificiteit: 94.7% NPV: 99.3%
Sensitiviteit: 40.5% PPV: 25.4%Specificiteit: 98.0% NPV: 99.0%
Blasten Qflag Qflag Qflag Qflag Qflag WBCflag(%)
microsc. (Blasts?) (Abn Ly/L_Bl?) (Imm Gran?) (Left Shift?) (Atypical Ly?)Abn
Scattergram86 300 300 280 129 30019 300 3009,5 3003 300 300 300 180
1,5 300 300 300 300 11,5 300 300 300 270 117 260
76,5 300 30068 300 300 300 121 300 300 210 300 117 300 300 300 300 17 300 300 300 1
3,5 220 30058 140 1204 120
11 100 1003 300 110
2,5 300 12 300 2201 2901 2402 300
1,5 3001,5 21013 200
11,5 1603,5 140 1108,5 1001 100
1,5 1004 1
2,5 12,5 12 1
13,51,51,51,511
1
Blast-detectieaan de hand
van meerdere
morfologievlaggen
• ‘Imm Gran?’• ‘Left Shift?’• ‘Atypical Ly?’• ‘WBC Abn Scattergram’
• Sensitiviteit ↑ (+ 18)• 7 stalen worden nog gemist
Blast-detectie
aan de hand
van morfologie-
vlaggen
én
numerieke
vlaggen
(%) (Blasts?)(Abn Ly/
L_Bl?) (Imm Gran?)(Left
Shift?)(Atypical
Ly?)
AbnScatter-gram
WBC<0.6WBC>40 IG>2,1% M>20% L>70% B>5% N>95% E>30%
86 300 300 280 1 54,02 51,7 40,5 0,2 7,4
29 300 1,90 47,4 34,2 0,5 16,9
19 300 300 0,82 2,4 25,6 26,8 0,0 44,0
9,5 300 7,12 16,0 27,9 0,4 53,9
3 300 300 300 180 5,70 7,4 17,2 4,2 1,9 68,6
1,5 300 300 300 300 1 14,75 2,3 31,5 20,5 4,9 40,7
1,5 300 300 300 270 1 46,12 4,5 29,1 11,3 3,2 51,7
17 260 2,48 25,0 61,3 1,2 11,3
76,5 300 300 6,94 37,5 61,5 0,1 ----
68 300 300 300 1 14,94 61,0 38,5 0,3 0,0
21 300 300 210 300 1 41,02 49,6 18,5 31,1 0,0
17 300 300 300 300 1 24,60 6,1 40,8 23,0 2,0 27,9
7 300 300 300 1 45,96 20,5 26,6 17,3 2,2 32,5
3,5 220 300 41,22 21,5 36,4 9,7 1,0 30,3
58 140 120 5,34 69,1 29,6 0,2 ----
4 120 2,58 43,4 47,7 1,2 6,9
11 100 100 2,76 10,1 12,3 49,3 0,4 26,8
3 300 110 0,77 61,0 26,0 0,0 11,7
2,5 300 1 8,03 5,1 10,3 32,8 0,6 51,0
2 300 220 0,92 60,9 2,2 4,3 30,4
1 290 1,03 25,2 63,1 3,9 5,8
1 240 0,53 66,0 34,0 0,0 ----
2 300 10,23 9,3 24,0 8,7 0,2 57,8
1,5 300 17,08 20,4 19,3 4,6 1,2 54,5
1,5 210 13,48 11,9 15,7 20,5 1,1 50,8
13 200 8,58 18,5 18,8 14,5 0,3 47,8
11,5 160 6,04 16,7 15,2 15,1 0,2 52,8
3,5 140 110 10,33 10,8 17,5 21,8 4,2 43,7
1 100 2,65 14,0 50,9 17,4 1,1 15,8
8,5 100 2,75 9,1 8,0 50,5 0,4 30,5
1,5 100 4,92 22,0 44,1 0,8 30,5
4 1 0,37 18,9 67,6 2,7 2,7
2,5 1 0,42 4,8 90,5 2,4 2,3
2,5 1 0,36 8,3 86,1 0,0 5,6
2 1 0,29 0,0 72,4 6,9 20,7
1,5 6,03 8,1 6,0 23,1 1,0 61,0
1 5,00 3,6 11,6 19,6 2,2 60,6
1,5 1,96 21,9 48,5 2,0 27,1
1 1,16 20,7 54,3 0,0 23,2
1 1,43 2,8 78,3 0,0 17,5
13,5 1,40 14,3 68,6 0,0 16,4
1,5 3,39 17,1 49,9 1,2 28,5
• WBC < 0.6 x 109/L• WBC > 40 x 109/L• IG > 2.1%• Mono > 20%• Lymfo > 70%• Baso > 5%• Neutro > 95%• Eo > 30%
• + 5• nog 2 stalen over
Sensitiviteit IG
• Microscopisch ≥ 2% IG: 137/489 stalen
• ‘IG-vlaggen’: ‘Immature granulocytes?’ en/of ‘IG>2.1%’
• 00-05: 131/137 stalen met ‘IG’-vlag– 100 stalen: enkel ‘IG>2.1%’– 19 stalen: ‘IG>2.1%’ én ‘Imm Gran?’ – 12 stalen: enkel ‘Imm Gran?’
• eMM: 127/137 stalen met ‘IG’-vlag– 100 stalen: enkel ‘IG>2.1%’– 17 stalen: ‘IG>2.1%’ én ‘Imm Gran?’ – 10 stalen: enkel ‘Imm Gran?’
Specificiteit IG
• Microscopisch < 2% IG: 352/489 stalen
• 00-05: 79/352 stalen met ‘IG’-vlag– 59 stalen: enkel ‘IG>2.1%’– 3 stalen: ‘IG>2.1%’ én ‘Imm Gran?’ – 17 stalen: enkel ‘Imm Gran?’
• eMM: 72/352 stalen met ‘IG’-vlag– 58 stalen: enkel ‘IG>2.1%’– 10 stalen: enkel ‘Imm Gran?’ – 4 stalen: ‘IG>2.1%’ én ‘Imm Gran?’
Sensitiviteit/specificiteit IG
XE-5000 rev.00-05 Microscopisch IG ≥ 2%
positief negatief
positief 131 (TP) 79 (FP)
negatief 6 (FN) 273 (TN)
XE-5000 eMM Microscopisch IG ≥ 2%
positief negatief
positief 127 (TP) 72 (FP)
negatief 10 (FN) 280 (TN)
Sensitiviteit: 95.6% PPV: 63.0%Specificiteit: 77.6% NPV: 97.8%
Sensitiviteit: 92.7% PPV: 63.8%Specificiteit: 79.5% NPV: 96.6%
Sensitiviteit/specificiteit IG
XE-5000 rev.00-05 Microscopisch IG ≥ 2%
positief negatief
positief 131 (TP) 79 (FP)
negatief 6 (FN) 2273 (TN)
XE-5000 eMM Microscopisch IG ≥ 2%
positief negatief
positief 127 (TP) 72 (FP)
negatief 10 (FN) 2280 (TN)
Sensitiviteit: 95.6% PPV: 63.0%Specificiteit: 96.6% NPV: 99.7%
Sensitiviteit: 92.7% PPV: 63.8%Specificiteit: 96.9% NPV: 99.6%
Sensitiviteit IG aan de hand van bijkomende morfologievlaggen en numerieke vlaggen
IG Qflag IG% Qflag Qflag Qflag Qflag Abn WBC<0.6 MONO% LYMPH% BASO% NEUT% EO%
(%)(Imm
Gran?)IG>2,1% (Blasts?)
(Abl Ly/L_Bl?)
(LeftShift?)
(AtypicalLy?)
Scatter-gram
WBC>40 M>20% L>70% B>5% N>95% E>30%
84 4 300 300 190
85 4 120 43,4
98 3,5 21,9
117 3 1
126 2,5
133 2
134 2
135 2 1 0,33
136 2
137 2
• Microscopisch ≥ 2% IG: 137/489 stalen• eMM: 127/137 stalen met ‘IG’-vlag (10 gemiste stalen)• Uitbreiding flagging: 5/10• Nog 5 gemiste stalen
Hoe kunnen we de gevoeligheid van de flagging aanpassen om de
sensitiviteit van de blasten/IG te verhogen?
Gemiste stalen
BL (Abn Ly/ IG (Atypical Scatter WBC<0.6 IG% MONO% LYMPH% BASO% NEUT% EO%
(%) (Blasts?) L_Bl?) (%)(Imm
Gran?)(Left
Shift?)Ly?) -gram WBC>40 IG>2,1% M>20% L>70% B>5% N>95% E>30%
1 13,5 0,5 1,4 0,7 14,3 68,6 0 16,4
2 1,5 0 3,39 0,9 17,1 49,9 1,2 28,5
3 2,5 5,61 2 11,2 43,9 0,4 42
4 2 5,72 1,4 15,4 19,1 3,3 55,7
5 2 14,03 2,1 9,2 9,3 0,6 76,9
6 2 8,55 2,1 13,9 10,8 0,5 71,3
7 2 26,23 1,9 6,4 5,7 0,1 85,8
• Stalen met microscopisch minimum 1% blasten en/of minimum 2% IG zonder vlag• Blasten: 2 stalen• IG: 5 stalen
Gemiste stalen
BL (Abn Ly/ IG (Atypical Scatter WBC<0.6 IG% MONO% LYMPH% BASO% NEUT% EO%
(%) (Blasts?) L_Bl?) (%)(Imm
Gran?)(Left
Shift?)Ly?) -gram WBC>40 IG>2,1% M>20% L>70% B>5% N>95% E>30%
1 13,5 0,5 1,4 0,7 14,3 68,6 0 16,4
2 1,5 0 3,39 0,9 17,1 49,9 1,2 28,5
3 2,5 5,61 2 11,2 43,9 0,4 42
4 2 5,72 1,4 15,4 19,1 3,3 55,7
5 2 14,03 2,1 9,2 9,3 0,6 76,9
6 2 8,55 2,1 13,9 10,8 0,5 71,3
7 2 26,23 1,9 6,4 5,7 0,1 85,8
• Stalen met microscopisch minimum 1% blasten en/of minimum 2% IG zonder vlag• blasten: 2 stalen
• 13.5% blasten, klinische achtergrond • 1.5% blasten, ‘blastaire’ cellen (geactiveerde lymfocyten?), kliniek
Gemiste stalen
BL (Abn Ly/ IG (Atypical Scatter WBC<0.6 IG% MONO% LYMPH% BASO% NEUT% EO%
(%) (Blasts?) L_Bl?) (%)(Imm
Gran?)(Left
Shift?)Ly?) -gram WBC>40 IG>2,1% M>20% L>70% B>5% N>95% E>30%
1 13,5 0,5 1,4 0,7 14,3 68,6 0 16,4
2 1,5 0 3,39 0,9 17,1 49,9 1,2 28,5
3 2,5 5,61 2 11,2 43,9 0,4 42
4 2 5,72 1,4 15,4 19,1 3,3 55,7
5 2 14,03 2,1 9,2 9,3 0,6 76,9
6 2 8,55 2,1 13,9 10,8 0,5 71,3
7 2 26,23 1,9 6,4 5,7 0,1 85,8
• Stalen met microscopisch minimum 1% blasten en/of minimum 2% IG zonder vlag• blasten: 2 stalen
• 13.5% blasten, klinische achtergrond 68.6% lymfocyten aanpassen grens?• 1.5% blasten, ‘blastaire ‘cellen (nog geactiveerde lymfocyten?), kliniek
Lymfocyten: vlag vanaf 68%?
BL Qflag Qflag IG Qflag Qflag Qflag Abn WBC<0.6 IG% MONO% LYMPH% BASO% NEUT% EO%
(%) (Blasts?)(Abn Ly/
L_Bl?)(%)
(ImmGran?)
(LeftShift?)
(AtypicalLy?)
Scatter-gram
WBC>40 IG>2,1% M>20% L>68% B>5% N>95% E>30%
1 100 0 2,33 13,7 69,5 0,4 16
2 120 0 12,72 7,5 69,3 0,3 21
3 190 0,5 17,13 5,3 68,9 0,2 24,7
4 13,5 0,5 1,4 14,3 68,6 0 16,4
Indien grens lymfocyten > 68%: 4 stalen extra
Gemiste stalen
BL (Abn Ly/ IG (Atypical Scatter WBC<0.6 IG% MONO% LYMPH% BASO% NEUT% EO%
(%) (Blasts?) L_Bl?) (%)(Imm
Gran?)(Left
Shift?)Ly?) -gram WBC>40 IG>2,1% M>20% L>70% B>5% N>95% E>30%
1 13,5 0,5 1,4 0,7 14,3 68,6 0 16,4
2 1,5 0 3,39 0,9 17,1 49,9 1,2 28,5
3 2,5 5,61 2 11,2 43,9 0,4 42
4 2 5,72 1,4 15,4 19,1 3,3 55,7
5 2 14,03 2,1 9,2 9,3 0,6 76,9
6 2 8,55 2,1 13,9 10,8 0,5 71,3
7 2 26,23 1,9 6,4 5,7 0,1 85,8
• Stalen met microscopisch minimum 1% blasten en/of minimum 2% IG zonder vlag• IG: 5 stalen
• 4 stalen: 2% IG• 1 staal: 2.5% IG
Hoe kunnen we de gevoeligheid van de flagging aanpassen om de
specificiteit van de blasten/IG te verhogen?
Stalen met microscopisch blasten ≥1% én 1 vlag
Qflag Qflag Qflag Qflag Qflag Abn WBC IG% MONO% LYMPH% BASO% NEUT% EO%
BL (Abn Ly/ IG (Atypical Scatter <0.6
(%) (Blasts?) L_Bl?) (%) (Imm
Gran?) (Left
Shift?) Ly?) -gram >40 IG>2,1% M>20% L>70% B>5% N>95% E>30%
1 9,5 300 0,5 7,12 16 27,9 0,4 53,9
2 1,5 8,5 6,03 8,1 6 23,1 1 61
3 1 0,5 5 3,6 11,6 19,6 2,2 60,6
4 1,5 3,5 1,96 21,9 48,5 2 27,1
5 1 0 1,16 20,7 54,3 0 23,2
6 1 0 1,43 2,8 78,3 0 17,5
• Stalen met microscopisch blasten ≥1% en 1 vlag• 6 stalen: 1 morfologievlag, 5 numerieke vlaggen
Stalen met microscopisch blasten ≥1% én 1 vlag
Qflag Qflag Qflag Qflag Qflag Abn WBC IG% MONO% LYMPH% BASO% NEUT% EO%
BL (Abn Ly/ IG (Atypical Scatter <0.6
(%) (Blasts?) L_Bl?) (%) (Imm
Gran?) (Left
Shift?) Ly?) -gram >40 IG>2,1% M>20% L>70% B>5% N>95% E>30%
1 9,5 300 0,5 7,12 16 27,9 0,4 53,9
2 1,5 8,5 6,03 8,1 6 23,1 1 61
3 1 0,5 5 3,6 11,6 19,6 2,2 60,6
4 1,5 3,5 1,96 21,9 48,5 2 27,1
5 1 0 1,16 20,7 54,3 0 23,2
6 1 0 1,43 2,8 78,3 0 17,5
• Stalen met microscopisch blasten ≥1% en 1 vlag• 6 stalen: 1 morfologievlag, 5 numerieke vlaggen• 2 stalen: monocyten 21.9% en 20.7% limietwaarde 20% behouden
Qflag Qflag Qflag Qflag Qflag Abn WBC IG% MONO% LYMPH% BASO% NEUT% EO%
BL (Abn Ly/ IG (Imm (Left (Atypical Scatter <0.6
(%) (Blasts?) L_Bl?) (%) Gran?) Shift?) Ly?) -gram >40 IG>2,1% M>20% L>70% B>5% N>95% E>30%
1 3 1 3,94 17,3 19,8 0,3 57,8
2 9 12,22 7,5 9,1 7,3 1 74,7
3 8 6,75 9,2 14,5 16,4 2,8 56,2
4 8 5,98 6,4 8,4 11 0,7 72,7
5 6 6,88 5,2 8,3 9 0,4 76,8
6 5,5 6,18 5,8 12,8 7,4 0,3 73,4
7 5 3,12 3,8 15,1 56,7 1,6 21,5
8 5 8,06 5,1 8,7 15,8 0,5 67,2
9 5 7,73 5,3 16,7 6,6 0,5 70,4
10 5 7 7,3 7,9 8,7 0,1 76
11 4,5 5,96 5,5 7 2,2 0,7 84,1
12 4,5 3,88 8,2 2,8 1,8 0,3 86,9
13 4,5 9,9 4,3 4,9 4,5 0,1 86,2
14 4 6,24 7,1 13,5 23,7 0,6 53,3
15 4 12,99 4,5 9,5 16,8 0,5 62,9
16 4 5,97 5,4 9 15,2 0,5 63,5
17 4 6,56 3,8 9,1 9,1 0,2 77,6
18 4 12,14 4,4 3,5 1,6 0,2 89,9
19 4 3,11 6,1 6,8 7,4 0 79,4
20 3,5 8,81 5,3 10,4 18,6 0,6 64,2
21 3,5 10,2 3,4 8,5 12,3 0,6 72,7
22 3,5 8,44 5,2 11,1 14,2 0,5 65,4
23 3,5 9,43 3,9 9,2 10 0,5 76,4
24 3,5 7,81 2,9 8,6 28,7 0,3 58,6
25 3,5 7,49 4,5 10,8 26 0,3 58,3
26 3,5 12,65 2,7 5,5 9,2 0,2 82,2
27 3 10,38 4,5 14,5 29,6 2 46,3
28 3 8,64 3,9 10,5 29,7 1,4 47,9
29 3 3,75 5,1 9,6 10,9 1,3 71,8
30 3 9,17 2,7 10,1 14,8 0,8 70,4
31 3 12,33 5,8 8,2 28,4 0,7 56,7
32 3 12,32 4,3 10,6 16 0,6 65,9
33 3 10,25 4,7 8 12 0,5 73,3
34 3 5,19 4,4 12,7 10,2 0,4 72,1
35 3 9,06 2,6 6,1 14,5 0,3 74,8
36 3 9,55 3 14,8 14 0,2 66,7
37 3 12,35 2,3 10,1 10,3 0,2 76,9
38 2,5 6,61 3,8 11,5 12,6 0,6 68,8
39 2,5 8,43 4,2 8,3 28 0,5 56,5
40 2,5 4,49 5,3 11,6 39,6 0,2 41,7
41 2,5 4,34 5,3 7,4 20,5 0,2 62,9
42 2 11,31 2,2 9,6 26,3 0,6 59,7
43 2 6,49 3,5 10,6 11,1 0,6 72,4
44 2 9,13 5 8,5 6,8 0,5 79,2
45 2 4,47 3,1 11,4 17,7 0,4 66,5
Stalen met microscopisch
IG ≥2% én
1 vlag
45 stalen:• 44: IG>2.1%• 1: WBC Abn Sc
Qflag Qflag Qflag Qflag Qflag Abn WBC IG% MONO% LYMPH% BASO% NEUT% EO%
BL (Abn Ly/ IG (Imm (Left (Atypical Scatter <0.6
(%) (Blasts?) L_Bl?) (%) Gran?) Shift?) Ly?) -gram >40 IG>2,1% M>20% L>70% B>5% N>95% E>30%
1 3 1 3,94 17,3 19,8 0,3 57,8
2 9 12,22 7,5 9,1 7,3 1 74,7
3 8 6,75 9,2 14,5 16,4 2,8 56,2
4 8 5,98 6,4 8,4 11 0,7 72,7
5 6 6,88 5,2 8,3 9 0,4 76,8
6 5,5 6,18 5,8 12,8 7,4 0,3 73,4
7 5 3,12 3,8 15,1 56,7 1,6 21,5
8 5 8,06 5,1 8,7 15,8 0,5 67,2
9 5 7,73 5,3 16,7 6,6 0,5 70,4
10 5 7 7,3 7,9 8,7 0,1 76
11 4,5 5,96 5,5 7 2,2 0,7 84,1
12 4,5 3,88 8,2 2,8 1,8 0,3 86,9
13 4,5 9,9 4,3 4,9 4,5 0,1 86,2
14 4 6,24 7,1 13,5 23,7 0,6 53,3
15 4 12,99 4,5 9,5 16,8 0,5 62,9
16 4 5,97 5,4 9 15,2 0,5 63,5
17 4 6,56 3,8 9,1 9,1 0,2 77,6
18 4 12,14 4,4 3,5 1,6 0,2 89,9
19 4 3,11 6,1 6,8 7,4 0 79,4
20 3,5 8,81 5,3 10,4 18,6 0,6 64,2
21 3,5 10,2 3,4 8,5 12,3 0,6 72,7
22 3,5 8,44 5,2 11,1 14,2 0,5 65,4
23 3,5 9,43 3,9 9,2 10 0,5 76,4
24 3,5 7,81 2,9 8,6 28,7 0,3 58,6
25 3,5 7,49 4,5 10,8 26 0,3 58,3
26 3,5 12,65 2,7 5,5 9,2 0,2 82,2
27 3 10,38 4,5 14,5 29,6 2 46,3
28 3 8,64 3,9 10,5 29,7 1,4 47,9
29 3 3,75 5,1 9,6 10,9 1,3 71,8
30 3 9,17 2,7 10,1 14,8 0,8 70,4
31 3 12,33 5,8 8,2 28,4 0,7 56,7
32 3 12,32 4,3 10,6 16 0,6 65,9
33 3 10,25 4,7 8 12 0,5 73,3
34 3 5,19 4,4 12,7 10,2 0,4 72,1
35 3 9,06 2,6 6,1 14,5 0,3 74,8
36 3 9,55 3 14,8 14 0,2 66,7
37 3 12,35 2,3 10,1 10,3 0,2 76,9
38 2,5 6,61 3,8 11,5 12,6 0,6 68,8
39 2,5 8,43 4,2 8,3 28 0,5 56,5
40 2,5 4,49 5,3 11,6 39,6 0,2 41,7
41 2,5 4,34 5,3 7,4 20,5 0,2 62,9
42 2 11,31 2,2 9,6 26,3 0,6 59,7
43 2 6,49 3,5 10,6 11,1 0,6 72,4
44 2 9,13 5 8,5 6,8 0,5 79,2
45 2 4,47 3,1 11,4 17,7 0,4 66,5
Stalen met microscopisch
IG ≥2% én
1 vlag
45 stalen:• 44: IG>2.1%(laagste waarde 2.2%)
• 1: WBC Abn Sc
IG: limietwaarde >2.1% behouden
‘Blasts?’Qflag Qflag Qflag Qflag Qflag Abn WBC IG% MONO% LYMPH% BASO% NEUT% EO%
BL (Abn Ly/ IG (Atypical Scatter <0.6
(%) (Blasts?) L_Bl?) (%)(Imm
Gran?) (Left
Shift?) Ly?) -gram >40 IG>2,1% M>20% L>70% B>5% N>95% E>30%
1 86 300 4,0 300 280 1 54,02 51,7 40,5 0,2 7,4
2 29 300 0,0 1,9 47,4 34,2 0,5 16,9
3 19 300 1,5 300 0,82 2,4 25,6 26,8 0 44
4 9,5 300 0,5 7,12 16 27,9 0,4 53,9
5 3 300 15,0 300 300 180 5,7 7,4 17,2 4,2 1,9 68,6
6 1,5 300 23,0 300 300 300 1 14,75 2,3 31,5 20,5 4,9 40,7
7 1,5 300 16,5 300 300 270 1 46,12 4,5 29,1 11,3 3,2 51,7
8 300 23,0 300 300 1 32,28 26,7 6,5 20,9 3,7 41,2
9 300 21,0 210 9,64 17,5 7,8 9,3 1,3 63,1
10 300 16,5 300 29,49 16,8 15,9 4,6 2,3 59,7
11 300 15,5 300 300 180 1 46,67 3,9 25,4 8,8 2,2 59,7
12 300 12,5 110 12,42 10,8 14,3 11,8 1,2 61,1
13 300 10,0 170 300 18,02 9,9 9,9 18,4 4,1 56,5
14 300 6,0 4,7 4,9 8,7 13,6 0,2 62,4
15 300 4,0 300 190 8,55 6,3 13,6 0,6 76,2
16 17 260 0,0 2,48 25 61,3 1,2 11,3
17 200 18,0 290 210 7,6 11,8 24,2 10,8 2 49,6
18 180 11,0 110 2,91 10 8,9 22 1,4 55,6
19 150 10,5 300 300 300 1 8,4 6,3 25,5 8,8 2,1 57,2
20 130 6,5 300 270 18,32 7,6 7,4 18,1 3 59,8
• 20/489 stalen: 8/20: blasten, overige 12/20: IG geen stalen onterecht uitgestreken
‘Blasts?’Qflag Qflag Qflag Qflag Qflag Abn WBC IG% MONO% LYMPH% BASO% NEUT% EO%
BL (Abn Ly/ IG (Atypical Scatter <0.6
(%) (Blasts?) L_Bl?) (%)(Imm
Gran?) (Left
Shift?) Ly?) -gram >40 IG>2,1% M>20% L>70% B>5% N>95% E>30%
1 86 300 4,0 300 280 1 54,02 51,7 40,5 0,2 7,4
2 29 300 0,0 1,9 47,4 34,2 0,5 16,9
3 19 300 1,5 300 0,82 2,4 25,6 26,8 0 44
4 9,5 300 0,5 7,12 16 27,9 0,4 53,9
5 3 300 15,0 300 300 180 5,7 7,4 17,2 4,2 1,9 68,6
6 1,5 300 23,0 300 300 300 1 14,75 2,3 31,5 20,5 4,9 40,7
7 1,5 300 16,5 300 300 270 1 46,12 4,5 29,1 11,3 3,2 51,7
8 300 23,0 300 300 1 32,28 26,7 6,5 20,9 3,7 41,2
9 300 21,0 210 9,64 17,5 7,8 9,3 1,3 63,1
10 300 16,5 300 29,49 16,8 15,9 4,6 2,3 59,7
11 300 15,5 300 300 180 1 46,67 3,9 25,4 8,8 2,2 59,7
12 300 12,5 110 12,42 10,8 14,3 11,8 1,2 61,1
13 300 10,0 170 300 18,02 9,9 9,9 18,4 4,1 56,5
14 300 6,0 4,7 4,9 8,7 13,6 0,2 62,4
15 300 4,0 300 190 8,55 6,3 13,6 0,6 76,2
16 17 260 0,0 2,48 25 61,3 1,2 11,3
17 200 18,0 290 210 7,6 11,8 24,2 10,8 2 49,6
18 180 11,0 110 2,91 10 8,9 22 1,4 55,6
19 150 10,5 300 300 300 1 8,4 6,3 25,5 8,8 2,1 57,2
20 130 6,5 300 270 18,32 7,6 7,4 18,1 3 59,8
• laagste Q-waarde in staal met blasten 260, hoogste Q-waarde in staal zonder blasten 200.• grens verhogen naar 200? Geen winst, te weinig gegevens grenswaarde 100 behouden
Qflag Qflag Qflag Qflag Qflag Abn WBC IG% MONO% LYMPH% BASO% NEUT% EO%
BL (Abn Ly/ IM (Atypical Scatter <0.6
(%) (Blasts?) L_Bl?) (%) (Imm Gran?) (Left Shift?) Ly?) -gram >40 IG>2,1% M>20% L>70% B>5% N>95% E>30%
1 76,5 300 0,0 300 6,94 37,5 61,5 0,1 ----
2 68 300 3,0 300 300 1 14,94 61 38,5 0,3 0
3 21 300 0,5 300 210 300 1 41,02 49,6 18,5 31,1 0
4 17 300 2,0 300 300 300 1 24,6 6,1 40,8 23 2 27,9
5 7 300 14,5 300 300 1 45,96 20,5 26,6 17,3 2,2 32,5
6 300 0,0 48,19 4 62 0,6 32,5
7 300 0,0 36,49 5,4 56,4 0,6 37,1
8 300 0,0 122,97 1,8 95,1 0,4 2,5
9 300 0,0 30,71 2,3 87,1 0,3 9,8
10 300 0,0 58,59 1,4 88,6 0,2 9,4
11 300 0,0 39,41 2,6 86 0,2 10,4
12 300 0,0 25,36 3,3 78,7 0,2 16,4
13 300 0,0 1 22,88 10,3 63,7 0,2 23,9
14 300 0,0 300 180 1 53,58 43,3 53,9 0,2 2,3
15 300 0,0 41,95 1,4 94 0,1 4,3
16 300 0,0 27,52 3,1 67,6 0,1 28,4
17 290 0,0 16,37 18,1 52,3 3,8 25,4
18 280 0,5 24,99 4,3 60,8 0,1 33,8
19 280 0,0 26,45 0,8 58 0,2 40,5
20 270 0,0 25,76 0,5 58,9 0,1 40,2
21 3,5 220 11,0 300 41,22 21,5 36,4 9,7 1 30,3
22 190 0,5 17,13 5,3 68,9 0,2 24,7
23 180 0,0 28,9 1,2 38,9 0,1 59,3
24 160 0,0 13,32 4,6 79,7 0,2 14,8
25 150 0,5 16,19 7,6 62,8 0,2 28,3
26 150 0,0 15,67 5,6 63,9 0,3 28,9
27 150 0,0 16,03 30,3 12,4 0,2 55
28 58 140 2,5 120 5,34 69,1 29,6 0,2 ----
29 140 0,0 280 1,76 0,6 97,7 1,1 0,6
30 140 0,0 3,27 1,2 94,8 0 3,7
31 130 3,5 300 5,91 3 27,1 40,3 7,8 19,3
32 130 0,0 12,02 12,2 44,8 3,6 38,4
33 130 0,0 3,13 40,6 33,9 1 23,2
34 130 0,0 16,15 5,3 57,4 0,2 34
35 4 120 4,0 2,58 43,4 47,7 1,2 6,9
36 120 0,0 3,4 28,8 61,5 0,6 8,8
37 120 0,0 2,63 12,9 75,7 0,4 7,2
38 120 0,0 12,72 7,5 69,3 0,3 21
39 110 1,0 110 1,65 29,7 55,8 0,6 12,7
40 110 0,0 3,59 12 74,4 1,1 5,8
41 110 0,0 12,24 5,9 71,7 0,2 20,9
42 110 0,0 9,05 20,3 26 0,2 51,1
43 11 100 9,5 100 2,76 10,1 12,3 49,3 0,4 26,8
44 100 1,5 4,03 21,3 59,1 0,7 15,7
45 100 0,5 120 3,25 30,2 50,2 2,5 15,3
46 100 0,5 12,75 5,2 65,6 0,2 27,6
47 100 0,0 2,33 13,7 69,5 0,4 16
‘AbnLy/L_Bl?’
• 47/489• 9/47 BL
Qflag Qflag Qflag Qflag Qflag Abn WBC IG% MONO% LYMPH% BASO% NEUT% EO%
BL (Abn Ly/ IM (Atypical Scatter <0.6
(%) (Blasts?) L_Bl?) (%) (Imm Gran?) (Left Shift?) Ly?) -gram >40 IG>2,1% M>20% L>70% B>5% N>95% E>30%
1 76,5 300 0,0 300 6,94 37,5 61,5 0,1 ----
2 68 300 3,0 300 300 1 14,94 61 38,5 0,3 0
3 21 300 0,5 300 210 300 1 41,02 49,6 18,5 31,1 0
4 17 300 2,0 300 300 300 1 24,6 6,1 40,8 23 2 27,9
5 7 300 14,5 300 300 1 45,96 20,5 26,6 17,3 2,2 32,5
6 300 0,0 48,19 4 62 0,6 32,5
7 300 0,0 36,49 5,4 56,4 0,6 37,1
8 300 0,0 122,97 1,8 95,1 0,4 2,5
9 300 0,0 30,71 2,3 87,1 0,3 9,8
10 300 0,0 58,59 1,4 88,6 0,2 9,4
11 300 0,0 39,41 2,6 86 0,2 10,4
12 300 0,0 25,36 3,3 78,7 0,2 16,4
13 300 0,0 1 22,88 10,3 63,7 0,2 23,9
14 300 0,0 300 180 1 53,58 43,3 53,9 0,2 2,3
15 300 0,0 41,95 1,4 94 0,1 4,3
16 300 0,0 27,52 3,1 67,6 0,1 28,4
17 290 0,0 16,37 18,1 52,3 3,8 25,4
18 280 0,5 24,99 4,3 60,8 0,1 33,8
19 280 0,0 26,45 0,8 58 0,2 40,5
20 270 0,0 25,76 0,5 58,9 0,1 40,2
21 3,5 220 11,0 300 41,22 21,5 36,4 9,7 1 30,3
22 190 0,5 17,13 5,3 68,9 0,2 24,7
23 180 0,0 28,9 1,2 38,9 0,1 59,3
24 160 0,0 13,32 4,6 79,7 0,2 14,8
25 150 0,5 16,19 7,6 62,8 0,2 28,3
26 150 0,0 15,67 5,6 63,9 0,3 28,9
27 150 0,0 16,03 30,3 12,4 0,2 55
28 58 140 2,5 120 5,34 69,1 29,6 0,2 ----
29 140 0,0 280 1,76 0,6 97,7 1,1 0,6
30 140 0,0 3,27 1,2 94,8 0 3,7
31 130 3,5 300 5,91 3 27,1 40,3 7,8 19,3
32 130 0,0 12,02 12,2 44,8 3,6 38,4
33 130 0,0 3,13 40,6 33,9 1 23,2
34 130 0,0 16,15 5,3 57,4 0,2 34
35 4 120 4,0 2,58 43,4 47,7 1,2 6,9
36 120 0,0 3,4 28,8 61,5 0,6 8,8
37 120 0,0 2,63 12,9 75,7 0,4 7,2
38 120 0,0 12,72 7,5 69,3 0,3 21
39 110 1,0 110 1,65 29,7 55,8 0,6 12,7
40 110 0,0 3,59 12 74,4 1,1 5,8
41 110 0,0 12,24 5,9 71,7 0,2 20,9
42 110 0,0 9,05 20,3 26 0,2 51,1
43 11 100 9,5 100 2,76 10,1 12,3 49,3 0,4 26,8
44 100 1,5 4,03 21,3 59,1 0,7 15,7
45 100 0,5 120 3,25 30,2 50,2 2,5 15,3
46 100 0,5 12,75 5,2 65,6 0,2 27,6
47 100 0,0 2,33 13,7 69,5 0,4 16
‘AbnLy/L_Bl?’
• 47/489• 9/47 BL• 1 staal
met 58%,Q-w=140
Qflag Qflag Qflag Qflag Qflag Abn WBC IG% MONO% LYMPH% BASO% NEUT% EO%
BL (Abn Ly/ IM (Atypical Scatter <0.6
(%) (Blasts?) L_Bl?) (%) (Imm Gran?) (Left Shift?) Ly?) -gram >40 IG>2,1% M>20% L>70% B>5% N>95% E>30%
1 76,5 300 0,0 300 6,94 37,5 61,5 0,1 ----
2 68 300 3,0 300 300 1 14,94 61 38,5 0,3 0
3 21 300 0,5 300 210 300 1 41,02 49,6 18,5 31,1 0
4 17 300 2,0 300 300 300 1 24,6 6,1 40,8 23 2 27,9
5 7 300 14,5 300 300 1 45,96 20,5 26,6 17,3 2,2 32,5
6 300 0,0 48,19 4 62 0,6 32,5
7 300 0,0 36,49 5,4 56,4 0,6 37,1
8 300 0,0 122,97 1,8 95,1 0,4 2,5
9 300 0,0 30,71 2,3 87,1 0,3 9,8
10 300 0,0 58,59 1,4 88,6 0,2 9,4
11 300 0,0 39,41 2,6 86 0,2 10,4
12 300 0,0 25,36 3,3 78,7 0,2 16,4
13 300 0,0 1 22,88 10,3 63,7 0,2 23,9
14 300 0,0 300 180 1 53,58 43,3 53,9 0,2 2,3
15 300 0,0 41,95 1,4 94 0,1 4,3
16 300 0,0 27,52 3,1 67,6 0,1 28,4
17 290 0,0 16,37 18,1 52,3 3,8 25,4
18 280 0,5 24,99 4,3 60,8 0,1 33,8
19 280 0,0 26,45 0,8 58 0,2 40,5
20 270 0,0 25,76 0,5 58,9 0,1 40,2
21 3,5 220 11,0 300 41,22 21,5 36,4 9,7 1 30,3
22 190 0,5 17,13 5,3 68,9 0,2 24,7
23 180 0,0 28,9 1,2 38,9 0,1 59,3
24 160 0,0 13,32 4,6 79,7 0,2 14,8
25 150 0,5 16,19 7,6 62,8 0,2 28,3
26 150 0,0 15,67 5,6 63,9 0,3 28,9
27 150 0,0 16,03 30,3 12,4 0,2 55
28 58 140 2,5 120 5,34 69,1 29,6 0,2 ----
29 140 0,0 280 1,76 0,6 97,7 1,1 0,6
30 140 0,0 3,27 1,2 94,8 0 3,7
31 130 3,5 300 5,91 3 27,1 40,3 7,8 19,3
32 130 0,0 12,02 12,2 44,8 3,6 38,4
33 130 0,0 3,13 40,6 33,9 1 23,2
34 130 0,0 16,15 5,3 57,4 0,2 34
35 4 120 4,0 2,58 43,4 47,7 1,2 6,9
36 120 0,0 3,4 28,8 61,5 0,6 8,8
37 120 0,0 2,63 12,9 75,7 0,4 7,2
38 120 0,0 12,72 7,5 69,3 0,3 21
39 110 1,0 110 1,65 29,7 55,8 0,6 12,7
40 110 0,0 3,59 12 74,4 1,1 5,8
41 110 0,0 12,24 5,9 71,7 0,2 20,9
42 110 0,0 9,05 20,3 26 0,2 51,1
43 11 100 9,5 100 2,76 10,1 12,3 49,3 0,4 26,8
44 100 1,5 4,03 21,3 59,1 0,7 15,7
45 100 0,5 120 3,25 30,2 50,2 2,5 15,3
46 100 0,5 12,75 5,2 65,6 0,2 27,6
47 100 0,0 2,33 13,7 69,5 0,4 16
‘AbnLy/L_Bl?’
• grens 140• 2 BL, via
andere vlaggen
• 5 minder uit te strijken
Grens 140
Qflag Qflag Qflag Qflag Qflag Abn WBC IG% MONO% LYMPH% BASO% NEUT% EO%
BL (Abn Ly/ IG (Atypical Scatter <0.6
(%) (Blasts?) L_Bl?) (%) (Imm Gran?) (Left Shift?) Ly?) -gram >40 IG>2,1% M>20% L>70% B>5% N>95% E>30%
1 76,5 300 0 300 6,94 37,5 61,5 0,1 ----
2 68 300 3 300 300 1 14,94 61 38,5 0,3 0
3 21 300 0,5 300 210 300 1 41,02 49,6 18,5 31,1 0
4 17 300 2 300 300 300 1 24,6 6,1 40,8 23 2 27,9
5 7 300 14,5 300 300 1 45,96 20,5 26,6 17,3 2,2 32,5
6 300 0 300 180 1 53,58 43,3 53,9 0,2 2,3
7 86 300 4 300 280 1 54,02 51,7 40,5 0,2 7,4
8 19 300 1,5 300 0,82 2,4 25,6 26,8 0 44
9 3 300 15 300 300 180 5,7 7,4 17,2 4,2 1,9 68,6
10 1,5 300 23 300 300 300 1 14,75 2,3 31,5 20,5 4,9 40,7
11 1,5 300 16,5 300 300 270 1 46,12 4,5 29,1 11,3 3,2 51,7
12 300 23 300 300 1 32,28 26,7 6,5 20,9 3,7 41,2
13 300 15,5 300 300 180 1 46,67 3,9 25,4 8,8 2,2 59,7
14 150 10,5 300 300 300 1 8,4 6,3 25,5 8,8 2,1 57,2
15 3 3 300 110 0,77 61 26 0 11,7
16 2 24,5 300 220 0,92 60,9 2,2 4,3 30,4
17 2,5 0,5 300 1 8,03 5,1 10,3 32,8 0,6 51
18 11,5 300 300 100 1 32,4 11,9 13,1 7,7 2 64,7
19 11,5 300 300 2,48 12,9 18,1 8,9 0,4 59,7
20 11 300 300 1 14,48 13 11,9 2,2 1,1 71,7
21 8,5 300 300 2,52 7,5 17,5 8,7 2,8 62,3
22 8 300 100 1 14,06 7 7,6 1,7 1,6 81,2
23 8 300 300 300 3,56 9,6 21,9 7,9 1,1 59,5
24 7,5 300 300 300 1 11,4 12,3 9,9 14,6 5,2 57,6
25 7,5 300 300 280 2,73 11,7 17,9 7,7 1,1 61,2
26 6 300 300 1 22,68 4,7 3,6 2,2 88,4
27 6 300 300 6,06 5,3 12,4 0,2 81,6
28 2,5 300 1,27 38,6 31,5 0,8 26
29 2,5 300 1 9,31 14,5 18,3 0,4 63,4
30 1 300 300 3,59 13,9 9,5 0,3 74,9
31 1 300 300 18,83 0,3 5,3 0,2 91,2
32 0,5 300 300 1,13 2,7 3,5 22,1 0 71,7
33 0 300 200 2,66 24,4 22,9 0,4 48,5
34 0 300 300 4,97 9,1 24,5 0,2 65,6
35 1 2 290 1,03 25,2 63,1 3,9 5,8
36 1 1 240 0,53 66 34 0 ----
37 3 130 1 2,39 2,9 53,6 24,7 2,5 16,3
38 1,5 130 0,78 2,6 25,6 28,2 1,3 34,6
39 58 140 2,5 120 5,34 69,1 29,6 0,2 ----
40 1 120 1 12,15 12,3 7,2 0,3 76,2
41 0 120 1 20,01 14,4 8,8 0,8 72,3
‘ImmGran?’
• 41/489• 32/41:
BL en/of IG(groen)
• 9/41 (oranje)• 6/9: Q-flag=300
Qflag Qflag Qflag Qflag Qflag Abn WBC IG% MONO% LYMPH% BASO% NEUT% EO%
BL (Abn Ly/ IG (Atypical Scatter <0.6
(%) (Blasts?) L_Bl?) (%) (Imm Gran?) (Left Shift?) Ly?) -gram >40 IG>2,1% M>20% L>70% B>5% N>95% E>30%
1 76,5 300 0 300 6,94 37,5 61,5 0,1 ----
2 68 300 3 300 300 1 14,94 61 38,5 0,3 0
3 21 300 0,5 300 210 300 1 41,02 49,6 18,5 31,1 0
4 17 300 2 300 300 300 1 24,6 6,1 40,8 23 2 27,9
5 7 300 14,5 300 300 1 45,96 20,5 26,6 17,3 2,2 32,5
6 300 0 300 180 1 53,58 43,3 53,9 0,2 2,3
7 86 300 4 300 280 1 54,02 51,7 40,5 0,2 7,4
8 19 300 1,5 300 0,82 2,4 25,6 26,8 0 44
9 3 300 15 300 300 180 5,7 7,4 17,2 4,2 1,9 68,6
10 1,5 300 23 300 300 300 1 14,75 2,3 31,5 20,5 4,9 40,7
11 1,5 300 16,5 300 300 270 1 46,12 4,5 29,1 11,3 3,2 51,7
12 300 23 300 300 1 32,28 26,7 6,5 20,9 3,7 41,2
13 300 15,5 300 300 180 1 46,67 3,9 25,4 8,8 2,2 59,7
14 150 10,5 300 300 300 1 8,4 6,3 25,5 8,8 2,1 57,2
15 3 3 300 110 0,77 61 26 0 11,7
16 2 24,5 300 220 0,92 60,9 2,2 4,3 30,4
17 2,5 0,5 300 1 8,03 5,1 10,3 32,8 0,6 51
18 11,5 300 300 100 1 32,4 11,9 13,1 7,7 2 64,7
19 11,5 300 300 2,48 12,9 18,1 8,9 0,4 59,7
20 11 300 300 1 14,48 13 11,9 2,2 1,1 71,7
21 8,5 300 300 2,52 7,5 17,5 8,7 2,8 62,3
22 8 300 100 1 14,06 7 7,6 1,7 1,6 81,2
23 8 300 300 300 3,56 9,6 21,9 7,9 1,1 59,5
24 7,5 300 300 300 1 11,4 12,3 9,9 14,6 5,2 57,6
25 7,5 300 300 280 2,73 11,7 17,9 7,7 1,1 61,2
26 6 300 300 1 22,68 4,7 3,6 2,2 88,4
27 6 300 300 6,06 5,3 12,4 0,2 81,6
28 2,5 300 1,27 38,6 31,5 0,8 26
29 2,5 300 1 9,31 14,5 18,3 0,4 63,4
30 1 300 300 3,59 13,9 9,5 0,3 74,9
31 1 300 300 18,83 0,3 5,3 0,2 91,2
32 0,5 300 300 1,13 2,7 3,5 22,1 0 71,7
33 0 300 200 2,66 24,4 22,9 0,4 48,5
34 0 300 300 4,97 9,1 24,5 0,2 65,6
35 1 2 290 1,03 25,2 63,1 3,9 5,8
36 1 1 240 0,53 66 34 0 ----
37 3 130 1 2,39 2,9 53,6 24,7 2,5 16,3
38 1,5 130 0,78 2,6 25,6 28,2 1,3 34,6
39 58 140 2,5 120 5,34 69,1 29,6 0,2 ----
40 1 120 1 12,15 12,3 7,2 0,3 76,2
41 0 120 1 20,01 14,4 8,8 0,8 72,3
‘ImmGran?’
• 41/489• 32/41:
BL en/of IG(groen)
• 9/41 (oranje)• 6/9: Q-w=300
• grens 130-240• geen winst
Standaardinst.(flag=100)
Meer gegevensnodig
‘Left shift?’
• 86/489 stalen ‘gevlagd’
• 66/86 stalen: microscopisch blasten ≥ 1% en/of IG ≥ 2%
• 20 ‘vals positieven’
‘Left shift?’Qflag Qflag Qflag Qflag Qflag Abn WBC IG% MONO% LYMPH% BASO% NEUT% EO%
BL (Abn Ly/ IG (Atypical Scatter <0.6
(%) (Blasts?) L_Bl?) (%) (Imm
Gran?) (Left
Shift?) Ly?) -gram >40 IG>2,1% M>20% L>70% B>5% N>95% E>30%
1 1 300 300 3,59 13,9 9,5 0,3 74,9
2 1 300 300 18,83 0,3 5,3 0,2 91,2
3 0,5 300 300 1,13 2,7 3,5 22,1 0 71,7
4 0 300 300 4,97 9,1 24,5 0,2 65,6
5 1,5 300 37,24 8,8 11,5 11,5 0,3 65,8
6 1 300 34,58 8,8 5,3 0,3 82,3
7 0,5 300 12,33 1,7 5,3 0,3 90,4
8 0 300 17,96 0,1 3,9 0,1 94,3
9 0 280 1,73 16,2 0,6 6,4 4 55,5
10 0 300 200 2,66 24,4 22,9 0,4 48,5
11 0,5 200 300 8,67 5,5 33,1 0,5 59,3
12 300 0 300 180 1 53,58 43,3 53,9 0,2 2,3
13 0 180 3,32 15,1 11,1 13,3 0,3 58,1
14 0 180 3,26 8,9 4,3 9,5 0,3 75,8
15 0 170 31,25 4,7 4,4 0,3 88,4
16 0 140 9,93 5,2 7,2 5,9 0,2 81,3
17 0,5 120 230 1,82 9,3 26,9 1,6 61,7
18 110 1 110 1,65 29,7 55,8 0,6 12,7
19 1 110 8,56 3,7 18,2 34,2 0,7 42,8
20 1,5 100 9,13 1,8 3,2 0,2 88,1
5/20 stalen: ‘Left Shift’ enige vlag (Q-waarde: 3x300, 170, 100) grens 180 Slechts 2 stalen minder uit te strijken
Efficiëntie eMM-software≤1% BL en/of ≤2% IG (334 stalen) rev.00-05 rev.00-06 (eMM)
Criteria gevoeligheid flagging Blasts?' = 150 Abn Lymph/Lymphoblasts?' = 140
Immature granulocytes?' = 190 Left Shift' = 180
Left Shift' = 190 Lymfocyten > 68%
Aantal uitgestreken stalen (op 334) 182 stalen 201 stalen
Totaal aantal voorkomende vlaggen
‘Blasts?' 30 0
‘Abnormal Lymph/Lymphoblasts?' 19 23
‘Immature granulocytes?' 10 9
‘Left Shift?' 15 14
‘Atypical Lymphocytes?' 14 26
‘Abnormal Scattergram' 18 14
WBC < 0,6/µl 8 8
WBC > 40/µl 5 5
IG > 2,1% 59 59
monocyten > 20% 64 73
lymfocyten > 70% 22 22
neutrofielen > 95% 5 6
basofielen >5% 0 0
eosinofielen >30% 1 1
Efficiëntie eMM-software≤1% BL en/of ≤2% IG (334 stalen) rev.00-05 rev.00-06 (eMM)
Criteria gevoeligheid flagging Blasts?' = 150 Abn Lymph/Lymphoblasts?' = 140
Immature granulocytes?' = 190 Left Shift' = 180
Left Shift' = 190 Lymfocyten > 68%
Aantal uitgestreken stalen (op 334) 182 stalen 201 stalen
Totaal aantal voorkomende vlaggen
‘Blasts?' 30 0
‘Abnormal Lymph/Lymphoblasts?' 19 23
‘Immature granulocytes?' 10 9
‘Left Shift?' 15 14
‘Atypical Lymphocytes?' 14 26
‘Abnormal Scattergram' 18 14
WBC < 0,6/µl 8 8
WBC > 40/µl 5 5
IG > 2,1% 59 59
monocyten > 20% 64 73
lymfocyten > 70% 22 22
neutrofielen > 95% 5 6
basofielen >5% 0 0
eosinofielen >30% 1 1
Overzicht
• Aanleiding
• Sysmex XE-5000– Algemene meet- en detectieprincipes
– Flagging
• Wat is eMM?
• Vragen
• Retrospectieve analyse UZ Leuven
• Conclusies
• To Do
Conclusies
1. Flagging met software rev.00-06 (eMM): specifieker dan rev.00-05 voor de blast-flag.
2. Zowel software rev.00-05 als rev.00-06 eMM: te weinig sensitief voor detecteren van alle blasten.
3. Aanvullende criteria (morfologieflags en/of numerieke flags) nodig voor voldoende betrouwbare detectie van blasten; dit heeft een prijs onder vorm van vals-positieveflagging.
4. Reduceren vals-positieve flagging door optimalisatie Q-flagcriteria.
5. De flagging van „Atypische Lymfocyten‟ werd niet verder geëvalueerd bij gebrek aan eenduidig referentiekader.
Ter overweging
1. Specificiteit is sterk afhankelijk van de samenstelling
van de onderzochte populatie.
2. Vals-positiviteit voor detectie van blasten (onterechte
blast-flag en/of aanvullende criteria) betekent niet vals-
positiviteit voor eventuele andere abnormaliteiten.
3. Morfologische controles kunnen eventueel gereduceerd
worden door microscopische screening (“smearscan”).
Quid?
Overzicht
• Aanleiding
• Sysmex XE-5000– Algemene meet- en detectieprincipes
– Flagging
• Wat is eMM?
• Vragen
• Retrospectieve analyse UZ Leuven
• Conclusies
• To Do
To Do
1. Aanpassen van de gevoeligheidsinstellingen van de Q-flags:
• ‘Abnormal lymphocytes/Lymphoblasts’: 140
• ‘Left Shift’: 180
2. Aanpassen gevoeligheid numerieke vlag voor het lymfocytenpercentage (68%).
3. Verdere expertise nodig voor verfijnen van de gevoeligheidsinstellingen van de Q-flags ‘Blasts’ en ‘Immature granulocytes’.