INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL ESCUELA NACIONAL DE MEDICINA Y HOMEOPATÍA SECCIÓN DE ESTUDIOS DE POSGRADO E INVESTIGACIÓN ESPECIALIDAD EN TERAPÉUTICA HOMEOPÁTICA “Efecto de Mercurius vivus sobre el crecimiento in Vitro de Streptococcus pyogenes ” TESINA QUE PARA OBTENER EL DIPLOMA DE LA ESPECIALIDAD EN TERAPEUTICA HOMEOPATICA Presenta Jaqueline González Cortés Asesora: Dra. María de Lourdes Cruz Juárez Co-asesor: C.D. José M. Delgado Ruiz Agosto 2009
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INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL - Semantic ScholarAntifagocítico: Proceso en el que se evita la fagocitosis (proceso por el cual determinadas células embullen y desechan microorganismos
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INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE MEDICINA Y HOMEOPATÍA
SECCIÓN DE ESTUDIOS DE POSGRADO E INVESTIGACIÓN ESPECIALIDAD EN TERAPÉUTICA HOMEOPÁTICA
“Efecto de Mercurius vivus sobre el crecimiento in
Vitro de Streptococcus pyogenes”
TESINA
QUE PARA OBTENER EL DIPLOMA DE LA ESPECIALIDAD EN TERAPEUTICA HOMEOPATICA
Presenta Jaqueline González Cortés
Asesora: Dra. María de Lourdes Cruz Juárez Co-asesor: C.D. José M. Delgado Ruiz
1.3. MERCURIO ..................................................................................................................................................... 11 1.3.1. Historia del uso de Mercurio en la Medicina....................................................................................... 11 1.3.2 Mercurio............................................................................................................................................... 13 1.3.3. Características fisicoquímicas ............................................................................................................. 14 1.3.4. Estado natural y obtención ................................................................................................................. 15 1.3.5. Usos..................................................................................................................................................... 15 1.3.6. Forma de penetración en el organismo, distribución, metabolismo y eliminación (Toxicocinética)... 17 1.3.7. Intoxicación aguda.............................................................................................................................. 18 1.3.8. Intoxicación subaguda ........................................................................................................................ 18 1.3.9. Intoxicación crónica ............................................................................................................................ 19 1.3.10. Efectos teratógenos, mutágenos y cancerígenos.............................................................................. 20 1.3.11. Exploraciones complementarias de acuerdo con la tóxico cinética para establecer el diagnóstico .20 1.3.12. Datos de laboratorio ......................................................................................................................... 21 1.3.13 .Tratamiento ...................................................................................................................................... 22
1.4. HOMEOPATÍA.................................................................................................................................................. 22 1.5. BACTERIOLOGÍA............................................................................................................................................... 25 1.6. EVIDENCIA CIENTÍFICA DE SUSTANCIAS NATURALES SOBRE STREPTOCOCCUS PYOGENES .................................................. 30
2.1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ........................................................................................................................ 32 2.2. JUSTIFICACIÓN................................................................................................................................................. 32 2.3. HIPÓTESIS ...................................................................................................................................................... 33 2.4. OBJETIVOS...................................................................................................................................................... 33
2.4.1. Objetivo General ................................................................................................................................. 33 2.4.2. Objetivos Particulares ......................................................................................................................... 34
2.5. TIPO DE INVESTIGACIÓN .................................................................................................................................... 34 2.6. DELIMITACIÓN DE LA MUESTRA........................................................................................................................... 34
2.6.1. Criterios de inclusión ........................................................................................................................... 34 2.6.2. Criterios de exclusión .......................................................................................................................... 34 2.6.3. Criterios de eliminación....................................................................................................................... 34 2.6.4. Tamaño de la muestra ........................................................................................................................ 35
2.7. MATERIAL Y MÉTODO ....................................................................................................................................... 35 2.7.1. Recursos humanos .............................................................................................................................. 36 2.7.2. Recursos físicos ................................................................................................................................... 36
2.9. RECOPILACIÓN DE DATOS .................................................................................................................................. 44 2.10. RESULTADOS................................................................................................................................................. 44
Fig. 1 Streptococcus pyogenes 1Fig. 2 Factores de virulencia 3Fig. 3 Enfermedades supurativas y no supurativas 4Fig. 4 Faringoamigdalitis 4Fig. 5 Escarlatina 5Fig. 6 Pioderma 5Fig. 7 Erisipela 5Fig. 8 Fascitis necrotizante 5Fig. 9 Absceso periamigdalino 5Fig. 10 Endocarditis post-estreptococica 5Fig. 11 Faringoamigdalitis en grados diferentes 8Fig. 12 Grafica para medir inhibición de CIM 29Fig. 13 Muller Hinton preparados en placas 36Fig. 14 Caldo de soya Tripticosena 36Fig. 15 Frasco de sangre de carnero 37Fig. 16 Mercurius vivus 37Fig. 17 Inoculación de S. pyogenes ATTC 19615 en Todd Hewitt 38Fig. 18 Esterilización de sensidiscos de papel filtro 38Fig. 19 Ordenamiento de sensidiscos 38Fig. 20 Impregnación de sensidiscos con medicamento homeopático 39Fig. 21 Sensidiscos impregnados 39Fig. 22 Celdas de Espectrofotometría 39Fig. 23 Espectrofotometría 39Fig. 24 Medición de longitud de onda 39Fig. 25 Peso medio de cultivo en polvo 40Fig. 26 Agregación de medio en 250 ml de agua 40Fig. 27 Mezcla de agua con medio 40Fig. 28 Esterilización de preparación 40Fig. 29 Enfriado de mezcla por 20 min 41Fig. 30 Agregar sangre de carnero 41Fig. 31 Mezcla del medio con la sangre de carnero 41Fig. 32 Llenado de placas Petri 41Fig. 33 Medio preparado en cajas Petri 41Fig. 34 Toma de S. pyogenes de Tod Hewitt 42Fig. 35 Inoculo de placas 42Fig. 36 Colocación de sensidicos impregnados 43Fig. 37 Colocación de sensidicos impregnados 43Fig. 38 Crecimiento bacteriano 43Fig. 39 Crecimiento bacteriano sin inhibición 45Fig. 40 Control positivo antibiograma 45 Tabla 1 Factores de virulencia 3Tabla 2 Densidad óptica para espectrofotometría 28Tabla 3 Densidad óptica 39Tabla 4 Rsultados de las 8 muestras usadas en los experimentos 45 Cuadro 1 Clasificación de Streptococcus pyogenes 2
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Glosario y Abreviaturas
1. ADNasas: Enzima que hidroliza el ácido desoxirribonucleico.
2. Aglutinación: Proceso de unión en la curación de una herida. Colección de masas celulares o bacterias distribuidas en un líquido producida por sustancias específicas llamadas aglutinas, cuyas moléculas se unen a las células.
3. Antiflogístico: Adj. Antiinflamatorio.
4. Antifagocítico: Proceso en el que se evita la fagocitosis (proceso por el cual
determinadas células embullen y desechan microorganismos y detritus celulares).
5. Antiséptico: Agente que tiende a inhibir el crecimiento y la reproducción de los
microorganismos.
6. Anuria: Incapacidad para orinar, supresión de la producción de orina o excreción urinaria menor de 100 a 250 ml al día.
7. Argentíferos: que contiene plata, mineral argentífero, plomo argentífero.
8. Ataxia: Trastorno caracterizado por la disminución de la capacidad de coordinar
movimientos. Falta o irregularidad de la coordinación especialmente de los movimientos musculares sin debilidad o espasmos de estos.
9. Auríferos: Adj. Que lleva oro (terreno).
10. β lactamasa (betalactamasa): Enzimas cuyo diversos tipos son producidos o
componentes de la mayoría de las bacterias. Pueden inactivar teóricamente todos los antibióticos del grupo de las penicilinas y de las cefalosporinas.
11. Capnofílicos: Dícese de las bacterias que se desarrollan mejor en presencia de
anhídrico carbónico.
12. Calomelanos: Protocloruro de mercurio usado como purgante.
13. Eritrodermia: Afección cutánea caracterizada principalmente por enrojecimiento o eritema.
14. Estreptolisinas: Hemolisina producida por estreptococos del grupo A. Sustancia
filtrable producida por algunos estreptococos que libera hemoglobina de la sangre.
15. Excoriante, excoriación: Pérdida superficial de sustancia que sólo interesa la
epidermis, como la producida por rascadura.
iii
16. Exotoxinas: Toxina microbiana que ejerce una acción fuera e independiente de la bacteria productora y que es posible aislar sin destruir ésta.
17. Faneras: Término general para las producciones aparentes y persistentes de la
piel como el pelo, uñas, etc.
18. Fuerza Vital: espíritu de vida autocrática, que dinámicamente anima al cuerpo material (organismo), gobierna con poder irrestricto, y subordina todas las partes del organismo en admirable y armoniosa operación vital.
19. Gingivitis: Anomalía caracterizada por enrojecimiento, tumefacción y
hemorragia de las encías.
20. Homogenizar: Volver homogéneo.
21. Mononucleosis: Presencia de gran número de leucocitos mononucleares en la sangre.
22. Neutrófilos: Que se tiñe por los colorantes neutros. Leucocito polinuclear de
granulaciones neutrófilas.
23. Opsonización: Proceso por el cual las opsoninas confieren a las bacterias mayor susceptibilidad a la fagocitosis por los leucocitos.
24. Parestesias: Trastorno de la sensibilidad subjetiva, como hormigueos,
adormecimiento, quemazón, etc.
25. Pirogenicidad: Pirógeno: Dícese de cualquier sustancia o agente que tiende a provocar un aumento de la temperatura corporal, como algunas toxinas bacterianas.
26. Proteinuria: Presencia de cantidades excesivas de proteína en orina,
generalmente albumina.
27. Teratógena, teratogénesis: Desarrollo de defectos físicos en el embrión.
iv
Fórmulas
1. AsF6: Hexafluoruro de arsénico
2. Cl-Hg-Cl: Cloruro mercúrico
3. Cl-Hg-Hg-Cl: Cloruro mercuroso
4. Hg: Mercurio
5. Hg (ClO4)2: Perclorato mercúrico
6. Hg (CN)2: Cianuro mercúrico
7. Hg (NO3)2: Nitrato mercúrico
8. HgS: Sulfuro mercúrico
9. LDH: Deshidrogenasa láctica
10. VIH: Virus de Inmunodeficiencia Humana
11. VSG: Velocidad de Sedimentación Glomerular
v
Resumen
En el estudio del Mercurius vivus, medicamento homeopático importante en el
tratamiento de algunas faringoamigdalitis con cuadro clínico característico, se buscó
una posible actividad inhibitoria sobre el crecimiento de Streptococcus pyogenes. Se
realizó estudio por duplicado utilizando el método de difusión, se impregnaron
sensidiscos con Mercurius vivus en cuatro diferentes dinamo-diluciones o potencias
(6c, 12c, 30c y 200c), además se colocaron sensidiscos impregnados unos con
alcohol homeopático y otros con agua destilada como controles negativos,
previamente a su colocación se dejaron evaporar. Como control positivo se colocó
sensidisco con antibióticos para bacterias Gram positivas. Se preparo medio de
cultivo Agar caldo de Soya Tripticasa y se vertió en cajas de Petri, donde
posteriormente fueron sembrada la cepa de la bacteria Streptococcus pyogenes
ATTC 19615, el inoculo fue tomado del medio de cultivo líquido Todd Hewitt, en el
cual se dejo llegar a una concentración bacteriana estandarizada, siguiendo la
técnica de Kirby-Bauer, con una densidad óptica de DO 550 nm = 0.125. Las cajas
de Petri fueron rotuladas para control negativo, positivo y cada potencia de Mercurius
vivus con la que se valoro su efecto. Se colocaron los sensidiscos sobre las siembras
y se incubaron a 37ºC por 18 horas.
Se recogieron resultados 18 horas después, observando un adecuado
crecimiento bacteriano sin existir evidencia de inhibición del mismo con ninguna de
las dinamo-diluciones de Mercurius vivus teniendo el mismo resultado con los
controles negativos, siendo el control positivo el único en manifestar inhibición. Esto
pudo deberse a que la acción de los medicamentos homeopáticos es dinámica y se
vi
manifiesta en el paciente pero no en estudios in vitro, sin embargo se deja abierta la
posibilidad de realizar cambios en el método, el uso de otras bacterias, así como de
otros medicamentos.
vii
Abstract
In the study of the Mercurius vivus, an important homeopathic medicine for the
treatment of some pharyngitis with certain clinical characteristics , an inhibitory
activity over the growth of the Streptococcus pyogenes was searched. Study was
performed in duplicate using the diffusion method, in four different is permeated with
sensidiscos Mercurius vivus in four different dilutions or dynamo-power (6c, 12c, 30c
y 200c), some sensidiscos were treated with homeopathic alcohol and other with
distilled water as a negative control. They were left to evaporation. As a positive
control, was placed sensidisco with antibiotics for Gram-positive bacteria. An Agar
culture with Tripticasa Soy broth was put into Petri cases. A strains of the
Streptococcus pyogenes ATTC 19615 bacteria was cultivated. The inoculum was
take from the liquid culture means Todd Hewitt, which was left to a bacteria
standardized concentration, following the Kirby-Bauer technique, with an optic density
of DO 550 nm = 0.125. the Petri cases were labeled for negative and positive control,
and every potency of Mercurius vivus as well. Sensidiscos were placed on the
planting and incubated at 37 ° C for 18 hours.
As a result and adequate bacteria growth was observed, without evidence of
inhibition with none of the dynamo-dilutions. The same result was obtained with the
negative controls. Only the positive control showed growth inhibition. This could be
because the action of the homeopathic drugs is dynamic and shows in the patient, but
not in vitro studies. Nonetheless, it is possible to change the method of analysis, the
use of different bacteria, and other medicines.
1
1. Introducción
1.1 Streptococcus pyogenes
El género Streptococcus es un grupo formado por diversos cocos gram
positivos que normalmente se dispone en parejas o en cadenas, son ovales o
esféricos de 0.5 a 1.0 µm de diámetro, se caracterizan por formar cadenas largas
cuando se cultivan en caldo, carecen de enzimas citocromo, son inmóviles. La
mayoría de las especies crecen en una atmósfera enriquecida con dióxido carbono
(crecimiento capnofílico, anaerobios facultativos), con metabolismo fermentativo
(hidratos de carbono) en el que producen ácido láctico o fórmico, etanol y CO2. Sus
requerimientos nutricionales son complejos, necesitando para su aislamiento el uso
de los medios enriquecidos con sangre o suero. Su crecimiento óptimo es a 37 °C. Al
contrario que las especies de Staphylococcus, los estreptococos son catalasa-
negativos (Figura 1).
Figura 1. Streptococcus pyogenes
2
1.1.1. Cepas de Streptococcus β hemolíticos
Los es treptococos se clasifican β-hemolíticos y β-no hemolíticos, α no
hemolíticos. Dentro de los β-hemolíticos están los del grupo A (S. pyogenes, S.
anginosus) y los del grupo B (S. agalactiae). Cuadro 1
Clasificación de los estreptococos más frecuentes
Clasificación bioquímica
Clasificación serológica Patrón de hemólisis
S. pyogenes A Beta
Grupo S. anginosus A,C,F,G, no agrupables Beta no hemolítico, ocasionalmente alfa
S. agalactiae B Beta ocasionalmente no hemolítico
S. dysgalactiae C,G Beta
S. bovis D Alfa ocasionalmente no hemolítico
Estreptococos del grupo viridans No agrupable Alfa no hemolítico
S. pneumoniae No agrupable Alfa
Cuadro 1
La virulencia de los estreptococos del Grupo A está determinada por la
capacidad que tienen las bacterias de adherirse a la superficie de las células del
huésped, invadir las células epiteliales, evitar la opsonización y la fagocitosis, y
producir una variedad de toxinas y de enzimas. En la Tabla 1 se enumeran y en la
(Figura 2) se esquematizan los factores de virulencia de Streptococcus pyogenes
(Murray, 2000).
3
Factores de virulencia
Factores de virulencia Efecto biológico
Cápsula Antifagocítica
Ácido lipoprotéico Se une a las células epiteliales
Proteína M Adhesina, antifagocítica, degrada el componente C3B del complemento
Proteínas del tipo M Se une a las inmunoglobulinas M y G y a la α2 –macroglobulinas (inhibidor de la proteasa)
Proteína F Media en la adherencia a las células epiteliales
Exotoxinas pirógenas
Median la pirogenicidad, el aumento de la hipersensibilidad retardada y la susceptibilidad a la endotoxina, la citotoxicidad, la mitogenicidad, inespecífica de las células T, la inmunosupresión de la función de las células B, y la producción de un exantema escarlatiniforme
Estreptolisina S Lisa leucocitos, plaquetas y eritrocitos; estimula la liberación de enzimas lisosomales; no inmunogénica
Estreptosina O Lisa leucocitos, plaquetas y eritrocitos, estimula la liberación de enzimas losomales, inmunogénica
Estreptocinasa Lisa los coágulos sanguíneos, facilita la diseminación de las bacterias a los tejido
ADNasa Despolimeriza el ADN libre de la célula en el material purulento
C5a peptidasa Degrada el componente C5a del complemento
Tabla 1
Figura 2 Factores de virulencia de S. pyogenes
4
El Streptococcus pyogenes clínicamente es causante de muchas
enfermedades supurativas y no supurativas como son (Figura 3) faringitis,
En las Cajas Petri con los sensidiscos impregnados con el medicamento
Mercurius vivus en sus diferentes potencias homeopáticas (6c, 12c, 30c y 200c) no
se observó inhibición del crecimiento bacteriano.
Las cajas que tenían los sensidiscos (alcohol homeopático y agua que con los
medicamentos homeopáticos, es decir, no registraron inhibición de crecimiento
bacteriano, algo que se esperaba).
Se pudo comprobar una de las hipótesis de este experimento ya que en ella
se esperaba que no hubiese inhibición de crecimiento bacteriano con los
medicamentos homeopáticos debido a su actuar dinámico.
Con los resultados obtenidos se pudo comprobar la hipótesis de este estudio
para hacer hincapié sobre la forma de actuar que tienen los medicamentos
homeopáticos, para apoyar un poco más esta aseveración hago presente de forma
textual el parágrafo 16 (§ 16) del Organon de la Medicina: “Nuestra fuerza vital,
siendo un poder dinámico, no puede ser atacada ni afectada por influencias nocivas
sobre el organismo sano y producidas por fuerzas externas hostiles que perturban el
armonioso funcionamiento de la vida, más que de un modo inmaterial (dinámico); y
de igual manera tales perturbaciones mórbidas (enfermedades), no pueden ser
eliminadas del organismo por el médico si no es recurriendo a los poderes
recíprocos de índole espiritual (virtual y dinámico) de las medicinas que
correspondan ser administradas, cuyos poderes actúan sobre nuestra fuerza vital de
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índole espiritual que los percibe por medio de la facultad senciente de los nervios
distribuidos por todo el organismo; de modo que sólo debido a su acción dinámica
sobre la fuerza vital que los remedios son capaces de restablecer la salud y la
armonía vital y eso por cierto que se logra una vez que los cambios en la salud del
paciente, discernibles por medio de nuestros sentidos (la totalidad de los síntomas),
hayan revelado la enfermedad al médico investigador y cabal observador, tan
íntegramente cuanto sea necesario para que él llegue a ser capaz de curarla.”
4. Conclusiones
Los medicamentos homeopáticos tienen un mecanismo de acción que hasta el
momento es conocido como una acción dinámica o energética, que actúa sobre la
fuerza vital de los seres vivos, es decir, aquella energía que da a la materia
(organismo) la capacidad de sentir y ejecutar todas las funciones vitales y posibilidad
de ser únicos, así como también nos da una forma característica de enfermar.
Por lo anterior no es lógico pensar que sustancias que actúan energéticamente
tenga una función mecánica en este caso bacteriostática o bactericida, motivo por el
cual no es posible observar un efecto físico como la ciencia moderna esperaría, sin
embargo quedan mucho por investigar.
5. Recomendaciones y sugerencias para trabajo futuro
Conforme a los resultados obtenidos en este estudio, sería favorable pensar
en la utilización de otras sustancias (no dinamizadas) como tinturas o sustancias
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madre tratándose de metales, tal vez, buscar si la acción dinámica de los
medicamentos homeopáticos tiene algún efecto sobre componentes membranales de
ésta u otras bacterias así como de otro tipo de células, e incluso la medición de
potencial de acción de membranas, tal vez al ponerlas en contacto con sustancias
homeopáticas dinamizadas.
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6. Bibliografía
1. Duerden,B., “Microbiología de Enfermedades Infecciosas” Limusa Noriega Editores. Primera edición, México, D.F., 1993. p.p. 239-242.
2. LaDou, J., “Medicina Laboral y Ambiental” Editorial Manual Moderno. Segunda edición en español de la segunda edición en inglés. México, D.F., p.p.407-408, 450-453.
3. Lathud. “Materia Médica Homeopática” Editorial Albatros. Primera edición, tercera reimpresión. Buenos Aires, Argentina, 2003 p.p. 551-556.
17. Giono, S. “Capitulo 39. Prueba de Susceptibilidad a los Antimicrobianos. Método de Bauer-Kirby”. Bacteriología Médica Diagnostica. IPN. Ediciones Cuellar, Segunda edición, México 2003. p.p. 311– 321.
21. Diccionario de Medicina. Océano Mosby con CD-ROM.
22. In vitro activity of propolis against Streptococcus pyogenes. K. Bosio 1, C.
Avanzini 1, A. D’Avolio 1, O. Ozino 2 and D. Savoila 1. 1Departamento of Clinical and Biological Sciences and2 di.VA.P.R.A, University of Torino, Italy. 2000 The Society for Microbiology. Recibido 7 March 2000, revisado 16 May 2000 y aceptado 23 Mayo 2000.