Informes de Laboratorio Bioqumica IIMedina Michell, Prez
Fernanda Departamento de Ciencias de la Vida, Universidad de las
Fuerzas Armadas-ESPESangolqu, [email protected]
[email protected] Abstract This paper presents a design of
educational activity, which aims to promote and complement the
practices carried out in the laboratory of Biochemistry II. We
begin with a review of blood components, to continue the
description of each method in the analysis of the concentration of
glucose, triglycerides, cholesterol and Urea in the blood. This
article is complemented with the results obtained by performing
these practices in class.
Resumen Este artculo presenta un diseo de actividad didctica,
cuyo objetivo es favorecer y complementar las prcticas realizadas
en el laboratorio de Bioqumica II. Empezamos con una revisin sobre
los componentes sanguneos, para continuar con la descripcin de cada
mtodo en el anlisis de la concentracin de Glucosa, Triglicridos,
Colesterol y Urea presentes en la sangre. Este artculo est
complementado con los resultados obtenidos al realizar estas
prcticas en clase.Introduccin La sangre es un tejido especial
compuesto por clulas (eritrocitos o hemates, leucocitos o glbulos
blancos y trombocitos o plaquetas) y una sustancia intercelular
liquida (plasma sanguneo) en la cual estn suspendidas las clulas.
Cuando se ha extrado fibringeno por coagulacin el plasma se llama
suero. [1]Fig.1. Composicin de la sangre Las funciones principales
de la sangre son el transporte de: Oxigeno desde los pulmones hacia
los tejidos. Dixido de carbono desde los tejidos hacia los
pulmones. Sustancias nutritivas desde el intestino hacia otros
rganos. Productos nitrogenados de metabolismo hacia los riones y el
hgado. Hormonas hacia sus dianas celulares. Adems la sangre cumple
con: Defensa contra agentes patgenos. Amortiguacin de los lquidos
corporales. Termorregulacin. Hemostasia.Clulas Sanguneas Las clulas
sanguneas maduras solo viven durante un tiempo relativamente breve
(das a meses) de modo que tienen que volver a producirse en forma
continua. Se calcula que en los adultos se forman diariamente unos
200.000 millones de eritrocitos y alrededor de 70.000 millones de
neutrfilos. En los mamferos la formacin de las clulas sanguneas y
de las plaquetas ocurre en la medula sea y recibe el nombre de
hematopoyesis. Los precursores de los linfocitos tambin se originan
en la medula sea pero la abandonan muy pronto y maduran en el timo
(linfocitos T) o en los ganglios linfticos y el bazo (Linfocitos
B). [1]Plasma Es el componente mayoritario de la sangre, bsicamente
una solucin acuosa de color amarillento, en la que eventualmente se
encuentra disueltos electrolitos, iones y sustancias ms complejas
como lpidos, vitaminas, cofactores y protenas plasmticas. [1]Fig.2.
Composicin del plasmaCdigo de colores de tubos de ensayo Los tubos
pueden contener sustancias agregadas para preservar el procesado en
el laboratorio clnico. Usar el tubo equivocado puede provocar
reacciones adversas en la muestra de sangre que no puedan ser
utilizadas luego para su procesamiento. [1] Las sustancias pueden
ser anticoagulantes (EDTA, citrato de sodio, heparina) o un gel con
densidades intermedias entre las clulas sanguneas y el plasma
sanguneo. Adems algunos tubos contienen sustancias que preservan
ciertos qumicos o sustancias dentro de la sangre, como por ejemplo
la glucosa. Cuando un tubo se centrifuga, las clulas sanguneas se
depositan en el fondo del tubo, y quedan cubiertas por una capa de
gel, y el plasma sanguneo queda en la capa superior. El gel permite
que el tubo se pueda invertir para el transporte sin correr el
riesgo de que las clulas se vuelvan a mezclar con el plasma. Cuando
un tubo que no ha sido tratado con un agente coagulante se
centrifuga, el lquido claro es plasma y contiene plaquetas.
[1]Fig.3. Cdigo de coloresDesarrollo de ContenidosExtraccin de
sangre En la prctica de rutina, la extraccin de sangre venosa es el
mtodo de eleccin cuando se requieren mayores volmenes de sangre
para diagnstico en el laboratorio o cuando razones excluyen la
extraccin de sangre capilar. La sangre venosa tambin se puede
extraer a travs de un catter ya conectado en vena o mediante
venopuncin. [2] Mediante los anlisis se puede detectar la presencia
de muchas enfermedades habituales y frecuentes como puede ser la
anemia, la diabetes, las infecciones, pero tambin pueden dar a
conocer otras menos frecuentes y ms graves como la leucemia u otros
tipos de cncer. [2]
Anlisis de glucosa en sangreEl nivel de glucosa en la sangre es
la cantidad de azcar que contiene. El nivel de glucosa en sangre
tambin se denomina glucosa en suero y glucemia. [3] La glucosa es
una fuente importante de energa para la mayora de las clulas del
cuerpo, incluidas las del cerebro. Los carbohidratos que se
encuentran en las frutas, los cereales, el pan, la pasta y el arroz
se transforman rpidamente en glucosa en el cuerpo, lo que eleva el
nivel de dicho azcar en la sangre. [3] Los niveles de glucosa en
sangre aumentan despus de haber ingerido alimentos y desencadenan
la produccin de una hormona denominada "insulina" en el pncreas, la
cual se libera en el torrente sanguneo. La insulina acta como una
llave que abre las puertas de las clulas y permite la entrada de la
glucosa. Sin insulina, la glucosa no puede penetrar en las clulas y
permanece en el flujo sanguneo. Como consecuencia, los niveles de
azcar en sangre son mayores de lo normal. [3]
Anlisis de colesterol en sangre Colesterol es una molcula de
carcter lipdico cuya funcin principal es formar parte de la
estructura de las membranas de las clulas que conforman rganos y
tejidos, tambin interviene en la sntesis de otras molculas, como
las hormonas suprarrenales y sexuales. [6] Principalmente, se
produce en el hgado aunque tambin se realiza un aporte importante
de colesterol a travs de la dieta. [6] Niveles de colesterol:Menos
de 200 mg/dL = Deseable (menor riesgo)200 a 239 mg/dL = Lmite
elevado (mayor riesgo)240 mg/dL y superior = Colesterol en la
sangre elevado (Ms del doble de riesgo que el nivel deseable)
[7]
El colesterol es insoluble en medios acuosos por lo que se
transporta en lipoprotenas, constituidas por una parte lipdica y
otra proteica. Existen dos tipos diferentes de lipoprotenas. [8]
Lipoprotenas de baja densidad o LDL Denominada tambin como
colesterol malo debido a que transporta el colesterol a tejidos
para su utilizacin, incluyendo las arterias. [8] Niveles de
colesterol HDL:Menos de 70 mg/dL = Objetivo opcional si tiene un
riesgo muy alto de ataque al corazn o muerte por ataque al
corazn.Menos de 100 mg/dL = ptimo para personas con enfermedades
del corazn o diabetes100 a 129 mg/dL = Cerca o por encima del nivel
ptimo130 a 159 mg/dL = Lmite elevado160 a .189 mg/dL = Elevado190
mg/dL y superior = Muy elevado [7]
Lipoprotenas de alta densidad o HDL Denominada como colesterol
bueno ya que recogen el colesterol de los tejidos y lo llevan al
hgado para ser eliminados del cuerpo a travs de la bilis. [8]
Niveles de colesterol HDL:Menos de 40 mg/dL en hombres = HDL bajo
(mayor riesgo)Menos de 50 mg/dL en mujeres = HDL bajo (mayor
riesgo)40 a 59 mg/dL = Cuanto ms elevado, mejor60 mg/dL y superior
= HDL elevado (menor riesgo) [7]
El aumento de colesterol en sangre y su depsito en las arterias
origina la enfermedad ateroesclertica cardiovascular, esta
enfermedad incluye enfermedad coronaria (angina e infarto de
miocardio), cerebrovascular (infarto cerebral o ictus) y la
enfermedad arterial perifrica (Claudicacin o dolor en piernas).
[8]
Anlisis de triglicridos en sangre Los triglicridos son molculas
que se encuentran en determinados alimentos y en nuestro organismo
se sintetizan en el hgado. [8] Los triglicridos son transportados
mediante lipoprotenas que se producen en el intestino e hgado y son
transportados a los tejidos donde se utilizan como reserva de
energa para cubrir las necesidades metablicas de los msculos y el
cerebro. [8] La elevada concentracin de triglicridos se conoce como
hipertriglicidemia y constituye uno de los factores de riesgo
cardiovascular. [8] Niveles de triglicridosMenos de 150 mg/dL =
Normal150 a 199 mg/dL = Lmite elevado200 a .499 mg/dL = Elevado500
mg/dL y superior = Muy elevado [7]
Anlisis de urea en sangre La urea constituye la fraccin de
nitrgeno no proteico ms importante en la mayora de los lquidos
biolgicos. En el hombre es el principal producto final del
metabolismo proteico. Se produce en el hgado y es excretada por la
orina a travs de los riones. [4] Una elevacin de la concentracin
srica de urea, se interpreta generalmente como una posible
disfuncin renal. Sin embargo, no debe dejarse de lado el hecho de
que los valores sricos de urea se encuentran ntimamente
relacionados con la dieta y el metabolismo proteico, por lo que
cualquier alteracin en estas variables se traducir en un cambio de
la concentracin de urea en suero. [4] La urea es el resultado final
del metabolismo de las protenas. Se forma en el hgado a partir de
la destruccin de las protenas. Durante la digestin las protenas son
separadas en aminocidos, estos contiene nitrgeno que se libera como
ion amonio, y el resto de la molcula se utiliza para generar energa
en las clulas y tejidos. El amonio se une a pequeas molculas para
producir urea, la cual aparece en la sangre y es eliminada por la
orina. Si el rin no funciona bien la urea se acumula en la sangre y
se eleva su concentracin. [4]Materiales y MtodosExtraccin de
sangreMateriales Jeringuilla 5mL Torundas con alcohol Torniquete
Tubo rotulado: nombre y fecha Gradilla Curitas Guantes de ltex
Recipientes de desecho: roja (desechos infecciosos y corto
punzantes) y negra (desechos comunes). Centrfuga.Procedimiento
Preparar los materiales. Localizar en el brazo una vena apropiada
y, en general, se utilizan las venas situadas en la flexura del
codo. Colocar el torniquete (cinta de goma-ltex) en el brazo,
cuatro dedos sobre la vena a punzar. Mediante una palpacin se
localizar la vena apropiada, se limpiar la zona del pinchazo con un
antisptico de adentro hacia afuera. Se realizar la puncin con el
bisel hacia arriba, formando un ngulo de 45. Cuando la sangre fluya
por la aguja, aspire (mediante la jeringa o mediante la aplicacin
de un tubo vaco) hasta conseguir la cantidad deseada. Retire el
torniquete. Extraer la aguja y presionar la zona con una torunda
para favorecer la coagulacin y se le indicar que mantenga el brazo
extendido. Eliminar desechos en sus respectivos recipientes.
Centrifugar durante cinco minutos.Anlisis de glucosa en sangre
Prueba enzimtica colorimtrica La glucosa se determina despus de
la oxidacin enzimtica en presencia de glucosa oxidasa. El perxido
de hidrgeno reacciona bajo la catlisis de peroxidasa con fenol y
4-aminofenazona formando un complejo rojo-violeta usando la
quinoneimina como indicador.
Reaccin
Clculo de la concentracin de glucosa
Valores normales75-115 mg/dl (en ayunas)Materiales y Reactivos
Jeringas de 5ml Cinta de goma-ltex Alcohol antisptico Algodn
Curitas Tubos tapa roja Centrifugadora Micropipetas RGT STD
Espectrofotmetro
Procedimiento Se realiz la extraccin de sangre de dos personas,
una en ayunas y la otra en estado postprandial. Se dej reposar las
muestras por 5 minutos y se centrifug. En el tubo blanco se coloc
1000 ul de RGT. En el tubo estndar se coloc 1000 ul de RGT y 10 ul
de STD. En el tubo con la muestra 1 se coloc 1000 ul de RGT y 10 ul
del suero de la persona en ayunas. En el tubo con la muestra dos se
coloc 1000 ul de RGT y 10 ul del suero de la persona en estado
postprandial. Se realiz bao mara a las muestras por 5 minutos a
37C. Se ajust en espectrofotmetro a 520 nm de longitud de onda. Se
midi la absorbancia de cada muestra. Se realiz los clculos para
medir la concentracin de glucosa.
RXBLANCOSTDM1M2
RGT1000 uL1000 uL1000 uL1000 uL
STD10uL
Suero 110uL
Suero 210uL
Tabla1. Esquema del pipeteoAnlisis de colesterol en sangre
Prueba enzimtica colorimtrica El colesterol se determina despus
de la hidrlisis enzimtica y la oxidacin. El indicador es la
quinoneimina formada por el perxido de hidrgeno y 4-aminoantipirina
en presencia de fenol y peroxidasa.
Reaccin
Clculo de la concentracin de colesterol
Valores normales220-260 mg/dl (en ayunas)Materiales y Reactivos
Jeringas de 5ml Cinta de goma-ltex Alcohol antisptico Algodn
Curitas Tubos tapa roja Centrifugadora Micropipetas RGT STD
Espectrofotmetro
Procedimiento Se realiz la extraccin de sangre de dos personas,
una en ayunas y la otra con ayuno de 6 horas. Se centrifug por 5
minutos. En el tubo blanco se coloc 1000 ul de RGT. En el tubo
estndar se coloc 1000 ul de RGT y 10 ul de STD. En el tubo con la
muestra 1 se coloc 1000 ul de RGT y 10 ul del suero de la persona
en ayunas. En el tubo con la muestra dos se coloc 1000 ul de RGT y
10 ul del suero de la persona con ayuno de 6 horas Se coloc las
muestras a bao mara por 5 minutos a 37C. Se ajust en
espectrofotmetro a 500 nm de longitud de onda. Se midi la
absorbancia de cada muestra. Se realiz los clculos para medir la
concentracin de colesterol.
RXBLANCOSTDM1M2
RGT1000 uL1000 uL1000 uL1000 uL
STD10uL
Suero 110uL
Suero 210uL
Tabla1. Esquema del pipeteo
Anlisis de triglicridos en sangre
Prueba enzimtica colorimtrica Los triglicridos son determinados
despus de hidrlisis enzimtica con lipasas. El indicador es
Quinoneimina formada a partir de perxido de hidrgeno,
4-aminoantipirina y 4-chlorofenol bajo la influencia cataltica de
peroxidasa
Reaccin
Clculo de la concentracin de colesterol
Valores normales150-199 mg/dl (en ayunas)Materiales y Reactivos
Jeringas de 5ml Cinta de goma-ltex Alcohol antisptico Algodn
Curitas Tubos tapa roja Centrifugadora Micropipetas RGT STD
Espectrofotmetro
Procedimiento Se realiz 2 extracciones de sangre de una persona
en ayunas. Se centrifug por 5 minutos. En el tubo blanco se coloc
1000 ul de RGT. En el tubo estndar se coloc 1000 ul de RGT y 10 ul
de STD. En el tubo con la muestra 1 se coloc 1000 ul de RGT y 10 ul
del suero de la primera extraccin. En el tubo con la muestra dos se
coloc 1000 ul de RGT y 10 ul del suero de la segunda extraccin. Se
coloc las muestras a bao mara por 5 minutos a 37C. Se ajust en
espectrofotmetro a 500 nm de longitud de onda. Se midi la
absorbancia de cada muestra. Se realiz los clculos para medir la
concentracin de colesterol.
RXBLANCOSTDM1M2
RGT1000 uL1000 uL1000 uL1000 uL
STD10uL
Suero 110uL
Suero 210uL
Tabla1. Esquema del pipeteo
Anlisis de urea en sangre
Prueba enzimtica colorimtrica La ureasa cataliza la hidrlisis de
la urea, presente en la muestra, en amoniaco y anhdrido carbnico.
Los iones amonio reaccionan con salicilato e hipoclorito en
presencia del catalizador nitroprusiato, para formar un indofenol
verde. [5]
Reaccin
Clculo de la concentracin de urea
Valores normales10-50 mg/dl Materiales y Reactivos Jeringas de
5ml Cinta de goma-ltex Alcohol antisptico Algodn Curitas Tubos tapa
roja Centrifugadora Micropipetas RGT 1 y 2 STD Espectrofotmetro
Procedimiento Se realiz la extraccin de sangre de dos personas.
Se dej reposar las muestras por 5 minutos y se centrifug. En el
tubo blanco se coloc 1000 ul de RGT1 con la enzima. En el tubo
estndar se coloc 1000 ul de RGT1 con la enzima y 10 ul de STD. En
el tubo con la muestra 1 se coloc 1000 ul de RGT1 con la enzima y
10 ul del suero de la persona. Se realiz bao mara a las muestras
por 3 minutos a 37C. Posteriormente se agreg el RGT 2 1000 ul a las
muestras y dejo en bao mara por 5 minutos a 37C. Se ajust en
espectrofotmetro a 520 nm de longitud de onda. Se midi la
absorbancia de cada muestra. Se realiz los clculos para medir la
concentracin de urea.
RXBLANCOSTDM1M2
RGT1+ enzima1000 uL1000 uL1000 uL1000 uL
STD10 uL
Suero 110 uL
Suero 210 uL
Se dej en bao mara a las muestras durante 3 minutos a 37C.
RGT21000 uL1000 uL1000 uL1000 uL
Se dej en bao mara a las muestras durante 5 minutos a 37C.
Tabla4. Esquema del pipeteo
ResultadosExtraccin de sangre Durante la primera extraccin de
sangre se pudo obtener la cantidad necesaria para centrifugar y
separar el plasma. Con mayor prctica el proceso de extraccin ser
sencillo y se podrn obtener mejores resultados para su posterior
anlisis.Anlisis de glucosa en sangre Ab. Estndar:0.264 Ab. Muestra
10.334 Ab. Muestra 20.180
Anlisis de colesterol en sangre Ab. Estndar:0.167 Ab. Muestra
10.082 Ab. Muestra 20.111
Anlisis de triglicridos en sangre Ab. Estndar:0.278 Ab. Muestra
10.034 Ab. Muestra 20.076
Anlisis de urea en sangre Ab. Estndar:0.403 Ab. Muestra 10.092
Ab. Muestra 20.145
DiscusinExtraccin de sangre El torniquete nunca debe aplicarse
durante ms de un minuto antes de la extraccin de la sangre venosa,
ya que se producir hemoconcentracin, con la siguiente alteracin de
los resultados. [2]Anlisis de glucosa en sangre En la muestra 1 se
obtuvo una concentracin (mg/dl) de 126.515, lo cual est por encima
de los rangos normales, esto sucedi debido a que el individuo se
encontraba en estado postprandial, es decir que haba ingerido
alimentos recientemente, lo que hizo aumentar sus niveles de
glucosa en sangre. [3] En la muestra 2 se obtuvo una concentracin
de 68.181 mg/dl debido a que el individuo se encontraba en ayunas,
este nivel est dentro de las concentraciones normales. [3]Anlisis
de colesterol en sangre La muestra 1 obtuvo una concentracin
(mg/dl) de 98.204 el cual se encuentra en un rango deseable de
colesterol en sangre, sin embargo es importante recalcar que los
niveles demasiado bajos de colesterol pueden ser causados por:
Hipertiroidismo, o una glndula tiroidea muy activa, enfermedad del
hgado, mala absorcin, pobre absorcin de nutrientes a nivel
intestinal, mal nutricin, deficiencia de manganeso. [9]Estudios
revelan que niveles de colesterol bajo se asocian a la depresin,
ansiedad y tambin al derrame cerebral. [9] La muestra 2 obtuvo una
concentracin (mg/dl) de 132.934 que se encuentra en el rango
deseable de los lmites de colesterol, el paciente se encontraba en
ayuno de aproximadamente 12 sin embargo en los estudios de
colesterol no se ve afectado el resultado por el ayuno ya que este
no sufre cambios inmediatos [10] Anlisis de triglicridos en sangre
La muestra uno y la muestra dos se obtuvo del paciente nmero 2. En
la muestra nmero uno se obtuvo una concentracin (mg/dl) de 24.46,
este valor se encuentra en el rango normal de triglicridos en
sangre determinados mediante la bibliografa. En la muestra 2 se
obtuvo una concentracin (mg/dl) de 54,67, este valor se encuentra
en el rango normal, la paciente se encontraba en ayuno de 6 horas
aproximadamente lo cual pudo afectar los resultados ya que para el
anlisis de triglicridos es necesario un ayuno de aproximadamente 12
horas sin haber ingerido alimentos ni bebidas. A diferencia de las
pruebas de colesterol si comparamos los resultados de triglicridos
en ayunas y despus de una comida encontraramos una variacin
significativa, en los resultados. [11] Anlisis de urea en sangre
Para la muestra 1 se obtuvo una concentracin (mg/dl) de 18.263 que
comparado con los rangos normales de urea que son entre 10 y 50
(mg/dl), podemos afirmar que el nivel de urea en sangre es normal.
La prueba presenta valores reales ya que la paciente se encontraba
en ayuno. Para la muestra 2 se obtuvo una concentracin (mg/dl) de
28,784 que se encuentra dentro del rango de los niveles de urea en
sangre. Este resultado se obtuvo en ayunas de 3 horas. Tiempo
necesario para calcular una buena medicin de concentracin de urea
[11] ConclusionesExtraccin de sangre La extraccin de sangre se
puede realizar mediante tres procedimientos diferentes dependiendo
de las magnitudes que se requieran: puncin arterial, venosa y de la
piel.Anlisis de glucosa en sangre Es importante el anlisis de
glucosa en sangre para determinar enfermedades o trastornos que
tengan que ver con la absorcin y el metabolismo de la glucosa en el
cuerpo. Tales trastornos pueden ser de dos tipos: hiperglucemia o
hipoglucemia. Las variaciones de datos en los resultados de los
diferentes grupos es debido a la falta de experiencia en este tipo
de ensayos, tambin se debe a que las muestras fueron manipuladas
por diferentes personas y es recomendable que una sola persona sea
la que realice todo el proceso.Anlisis de colesterol en sangre Los
datos obtenidos en la absorbancia del estndar de todos los grupos
de laboratorio presentaban poca variacin lo que significa que los
datos obtenidos son confiables. Tanto la muestra 1 como la muestra
2 se encuentran en los rangos deseables de colesterol por lo que
excluimos afecciones relacionadas a los niveles elevados de
colesterol. Anlisis de triglicridos en sangre Las concentraciones
de las 2 muestras se encuentran muy por debajo del lmite de
triglicridos en sangre esto se puede deber a una dieta baja en
grasas por arte de la paciente o a otras afecciones ya mencionadas.
Al tomar 2 muestras de la misma persona se esperara tener
resultados similares sin embargo podemos notar que hay una variacin
significativa por lo que podemos concluir que existi una errnea
manipulacin de la muestra y los reactivos.Anlisis de urea en sangre
Los resultados de la muestra 1 y 2 estn dentro de los rangos
normales establecidos en la bibliografa por lo que se concluy que
La urea cumple sus funciones fisiolgicas, tales como, inhibir el
cotransporte Na-K2Cl en los eritrocitos humanos, inhibir la xido
ntrico sintasa inducible por macrfagos a nivel postranscripcional y
ser el precursor de algunos de los compuestos guanidinicos [9].
Referencias
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Argentina: Mdica PanamericanaMuguerza, R. (2011). Valores de
referencia. Recuperado el 10 de febrero de 2014, de Servicio
Navarro de Salud: http://www.cfnavarra.es
AnexosExtraccin de sangre
1. Preparacin de materiales
2. Localizacin de la vena3. Mediante el torniquete
4. Preparacin de la jeringuilla
5. Puncin a 45
6. Retirar el torniquete y cubre el pinchazo
7. Colocamos la sangre en el tubo por las paredes
Proceso para anlisis de la extraccin de sangre1. Centrifugar las
muestras
2. Pipetear los reactivo
3. Bao mara y colocacin del RGT2
4. Tubos despus de bao maraGlucosa
Colesterol
Triglicridos
Urea
5. Anlisis en el espectrofotmetro