Top Banner
ILR2, a novel gene regulating IAA conjugate sensitivity and metal transport in Arabidopsis thaliana Mo  nica Magidin 1,y , Jon K. Pittman 2 , Kendal D. Hirschi 2 and Bonnie Bartel 1, 1 Department of Biochemistry and Cell Biology, Rice University, Houston, TX 77005, USA, and 2 U.S. Department of Agriculture/Agricultural Research Service, Baylor College of Medicine, Houston, TX 77030, USA Received 20 February 2003; revised 20 May 2003; accepted 30 May 2003. For correspondence (fax 1 713 348 5154; e-mail [email protected]). y Present address: Department of Botany, University of Toronto, Toronto, Ont., Canada M5S 3B2. Summary Plants can regulate levels of the auxin indole-3-acetic acid (IAA) by conjugation to amino acids or sugars, and subsequent hydrolysis of these conjugates to release active IAA. These less active auxin conjugates constitute the majority of IAA in plants. We isolated the Arabidopsis ilr2-1 mutant as a recessive IAA- leucine resistant mutant that retains wild-type sensitivity to free IAA. ilr2-1 is also defective in lateral root formation and primary root elongation. In addition, ilr2-1 is resistant to manganese- and cobalt-mediated inhibition of root elongation, and microsomal preparations from the ilr2-1 mutant exhibit enhanced ATP-dependent manganese transport. We used a map-based positional approach to clone the ILR2 gene, which encodes a novel protein with no predicted membrane-spanning domains that is polymorphic among Arabidopsis accessions. Our results demonstrate that ILR2 modulates a metal transporter, providing a novel link between auxin conjugate metabolism and metal homeostasis. Keywords: indole-3-acetic acid, IAA-Leu, auxin, auxin conjugates, cobalt, manganese. Introduction Indole-3-acetic acid (IAA) is a naturally occurring auxin that is implicated in embryo development, lateral root forma- tion, tropisms, apical dominance, vascularization, and other developmental events (Davies, 1995). To properly in¯uence these processes, IAA levels must be temporally and spatially regulated by the plant. One mechanism con- tributing to auxin homeostasis is the formation and hydro- lysis of auxin conjugates (Bartel et al., 2001). The majority of IAA found in plants is conjugated to other moieties; in Arabidopsis, most IAA is in a form that can be released by conditions that hydrolyze amide bonds (Ljung et al., 2002; Normanly et al., 1993). Conjugated IAA is generally regarded as inactive; it is used for storage, transport, or as catabolic intermediates (Bartel, 1997; Bartel et al., 2001; Ljung et al., 2002), and the moiety to which the IAA is conjugated may dictate its fate (Cohen and Bandurski, 1982). For instance, IAA conjugates are differentially loca- lized in Arabidopsis; IAA-Leu is more abundant in roots, whereas IAA-Ala is more abundant in shoots (Kowalczyk and Sandberg, 2001). In addition to oxidizing exogenous IAA, Arabidopsis seedlings conjugate IAA to Asp and Glu, and IAA-Asp can then be oxidized as well (O È stin et al., 1998). Mutants with defective IAA homeostasis exhibit abnormal conjugate accumulation. For example, the sur2 mutant, defective in a P450 mono-oxygenase at the branch- point of IAA and indole glucosinolates production (Bak et al., 2001), accumulates free IAA as well as IAA-Asp and IAA-Glu (Barlier et al., 2000), which are not hydrolyzed in Arabidopsis (O È stin et al., 1998). Furthermore, sur2 synthesizes less of the hydrolyzable conjugate IAA-Leu (Barlier et al., 2000). Auxins can inhibit root elongation and certain IAA con- jugates, including IAA-Leu, IAA-Ala, and IAA-Phe, can mimic free IAA when applied to Arabidopsis seedlings (Bartel and Fink, 1995; Davies et al., 1999; Lasswell et al., 2000; LeClere et al., 2002). This bioassay has facilitated a genetic approach to understanding IAA conjugate home- ostasis. Mutants that are resistant to IAA conjugates but retain wild-type sensitivity to free IAA led to the isolation of the founding members of a family of Arabidopsis amido- hydrolases that cleave IAA-amino acid conjugates. ILR1 hydrolyzes IAA-Leu, and ilr1 mutants are IAA-Leu resistant (Bartel and Fink, 1995). Similarly, IAR3 hydrolyzes IAA-Ala, and iar3 mutants are less sensitive than the wild type to IAA-Ala (Davies et al., 1999). Mutations in the other ®ve members of the ILR1/IAR3 gene family have not been The Plant Journal (2003) 35, 523±534 ß 2003 Blackwell Publishing Ltd 523 doi: 10.1046/j.1365-313X.2003.01826.x
12

ILR2, a novel gene regulating IAA conjugate sensitivity and metal transport in Arabidopsis thaliana

Apr 25, 2023

Download

Documents

Craig Carroll
Welcome message from author
This document is posted to help you gain knowledge. Please leave a comment to let me know what you think about it! Share it to your friends and learn new things together.
Transcript
Page 1: ILR2, a novel gene regulating IAA conjugate sensitivity and metal transport in Arabidopsis thaliana

����� � ����� ���� �������� �� �������� �������������� ����� ������� �� ������ �������

������� ����������� ��� �� ��������� ������ �� ���� �� ��� !����� !����������������� � � ���� ���� �� ���� � ���� � �� � ���� ��� ����� �� ���� � �!"� ��#�$!$ ��������� � "�� �������%"�� �������� �������� !��� ��� ����� ������ � &�� � �� ����� �� ���'�� �!"

�������� �� ��� �� ����� ������� �� � � ����� ������� �� � � �������� �������������� �� � �� ��� ��� ����� � ! �" ���"#��������$��%������ ������& '�� ��!��� �� (�� ��) *��������� �� +������) +������) ,���) - � � ��. �(��

"����

������ ��� ������ ������ �# � � �$�� ������%&%������ ���� ' ��( )� ���������� �� ����� ����� � �����

��� �)��*��� �������� �# � ��� ��������� �� ������ ������ ��� + ��� ���� ������ �$�� ���������

��������� � � ������� �# �� �� ������� ,� �������� � � ������ ���������� �� � �������� ��%������

�������� ����� � �� ������ -���%���� ����������� �� #�� ��� ����� �� ���� ��#������ �� ������ ��� #�������

��� ����� ��� ����������� � ��������� ����� �� �������� �� ���������% ��� ��)���%�������� �� �)����� �#

��� ����������� ��� ��������� ���������� #�� � � ����� ����� �$ �)�� �� ����� �+�%���������

��������� �������� ,� ��� � ���%)���� ���������� ������ �� ����� � � ���� ����� - �� �������

� ����� ������ -�� �� �������� ���)���%�������� ������� � �� �� ������� �� ����� ������

����������� . ����� ���������� � �� /0� �������� � ����� ��������� �������� � ����� ���1

)��-��� �$�� �������� ����)����� ��� ����� �����������

���-���2 ������%&%������ ����� ��%/�� �$��� �$�� ���������� ��)���� ����������

���������

/���"� � ����� ��� �/00$ �� � ��� ""� ��������1 ���� �2 �

�� �!�"�� ��� �� �!��� ����"��!���) " ��� " ���� ���!

����) ������!�) ��� " ��!�� ���) � ���" ��3 ����) ��

��2�� ����"��!��� " ������ �' ����) �44�$� +� ������"�

��5����� �2��� ���������) /00 "���"� !��� � ��!��� ""�

�� �� �� ""� ��1�" ��� � �2� �" ��� ,�� !��2 ���! ���

�������1 �� ���� 2�!���� ��� �� �2� ���! ���� �� 2����

"���� �� ���� ���6�1 ��� �( ���" �� ���) ����$� +2� ! 6�����

�� /00 ����� �� �" ��� �� ���6�1 ��� �� ��2�� !�������� ��

"��( ��� �) !��� /00 �� �� ���! �2 � � � � ��"� ��� �

���������� �2 � 2����"�3� !��� ���� �76��1 �� ���) �����

8��! �"� �� ���) �44�$� -��6�1 ��� /00 �� 1���� ""�

��1 ���� � �� ������ �� �� ���� ��� ���� 1�) �� ������) ��

� � � �"�� �����!��� ��� �( ���") �44�� ( ���" �� ���) �����

76��1 �� ���) ����$) �� �2� !����� �� 92��2 �2� /00 ��

���6�1 ��� ! � ���� �� ��� � �� �-�2�� �� ( �����:�)

�4��$� �� ���� ���) /00 ���6�1 ��� �� ���������� ""� "��

"�3�� �� "��( ��� �� /00 7�� �� !��� ��� �� �� �����)

92��� � /00 0" �� !��� ��� �� �� �2���� �;�9 "�3�:

�� . ����1) ����$� /� ������� �� �����3��1 ���1�����

/00) "��( ��� � ����"��1� ���6�1 �� /00 �� 0�� �� <"�)

�� /00 0�� � � �2�� � �����3�� � 9�"" �,= ���� �� ���)

�44�$� ��� ��� 9��2 ��������� /00 2�!���� ��� ��2���

���! " ���6�1 �� ���!�" ����� �� �� !�"�) �2� ���#

!�� ��) ��������� �� %��� !��� ���1�� �� � �2� � ��2

����� �� /00 �� ����"� 1"�������" ��� ���������� �( :

�� ���) ����$) ���!�" ��� ���� /00 � 9�"" � /00 0��

�� /00 <"� �( �"��� �� ���) ����$) 92��2 �� ��� 2����"�3��

�� "��( ��� � �,= ���� �� ���) �44�$� ���2��!���) ���#

����2���3�� "��� �� �2� 2����"�3 "� ���6�1 �� /00 7��

�( �"��� �� ���) ����$�

0����� � � ��2��� ���� �"��1 ���� �� ���� �� /00 ���

6�1 ���) ���"����1 /00 7��) /00 0" ) �� /00 %2�) � �

!�!�� ���� /00 92�� ��"��� �� "��( ��� � ����"��1�

�( ���" �� ��:) �44�� ' ���� �� ���) �444� 7 ��9�"" �� ���)

����� 7�-"��� �� ���) ����$� +2�� �� �� � 2 � � ��"�� ���

1������ ���� �2 �� ������� ����1 /00 ���6�1 �� 2�!�

��� ���� ��� ��� �2 � �� ������ �� �� /00 ���6�1 ��� ��

��� �� 9�"� ���� ����������� �� ���� /00 "�� �� �2� ���" ���� ��

�2� �������1 !�!��� �� � !�"� �� "��( ��� � !���

2����" ��� �2 � �"� �� /00 !��� ��� ���6�1 ���� /7��

2����"�3�� /00 7��) �� ��� !�� ��� �� /00 7�� ������ ��

�( ���" �� ��:) �44�$� .�!�" �"�) /0�� 2����"�3�� /00 0" )

�� ��' !�� ��� �� "��� ��������� �2 � �2� 9�"� ���� ��

/00 0" �' ���� �� ���) �444$� ��� ����� �� �2� ��2�� >��

!�!��� �� �2� )*��%)"�' 1��� � !�"� 2 �� ��� ���

��� +��� ,���� �����$ &3) ���?���

� ���� (" �:9�"" %�"��2��1 7�� ���

���& ������@A6���@� ���B����������@��

Page 2: ILR2, a novel gene regulating IAA conjugate sensitivity and metal transport in Arabidopsis thaliana

��������) �� /77� �� /77� "�� 2����"�3� /00 !��� ���

���6�1 ��� � �� �7�-"��� �� ���) ����$�

��� �� �2��� /00 !��� ��� ���6�1 �� ������ �� !�� ���

)"�� ������� ������� 9��2 ����� �� ���� �� ��!�!

� �� ��! ��� �2 � �� 9� :"� ��!�" � �� �2� C/% � !�"� ��

!�� " �� ���������) �!�"���1 ��"� ��� ���� �� ��1�" ���1

/00 ���6�1 �� �"� � 1� �� ������� �7 ��9�"" �� ���) ����$�

<���� " ����� ������ ��9��� � ����� �� ���� ���������

2 �� ��� ����� ��������"�� �� �� !�"�) ��2 �� "� ��

! �1 ���� � � ����� �� ���� ������� �"��1 ���� �� ���

��� ��1!��� �"��1 ���� ���� �� �� �� �+2�! ��) �4���

+2�! �� �� + : 2 �2�) �4@�$� /� ����� �� "��:� ��9���

���� �� !�� " ����) �� �������� �� "����� !�� " �� ��

���� �� ����������� 2 � ��� �������� ��� �� !�� ��� 9��2

"����� /00 ���6�1 �� ������������

D��� 9� ������ �2� ���" ���� �� �2 � �����3 ���� �� ��#-�)

� "��( ��� � !�� �� 9��2 9�"� ���� ����������� �� ���� /00

�2 � �� ������ �� �� /00 7��) /00 %2�) �� �2� ��� "��� !�� "�

�� "� �� ! �1 ����� E� "�� ��!����� �� �2 �1�� ��

!�� " �� ������ �� ��#-�!�!� �� �����"��� E� �"���� )*�#

����1 �������� " ���� �2 �� ����� �� �� ������ �! ""

����" ������� �2 � �� ��"�!���2�� !��1 "��( ��� �

���������� +2��� ����"�� ��!����� �� "��: ��9��� ����

���6�1 �� !�� �"��! �� !�� " 2�!���� ����

0�����

��� �"�� � ����� � ��� ���� � )""-*�� �� )""-+��

,�� ������� �2 � � � ��1�" �� ���� ������� �� �2� ���! ����

�� 2����"���� �� /00 ���6�1 ��� �� !��� ���� �� ��1 ��

�( ���" �� ���) ����� 8��! �"� �� ( ���") �444$� +� ��������

�2� !�"���" � ��!������� ������""��1 �2�� 2�!���� ���)

9� 2 �� �������� ��� !�� ��� 9��2 ������� ����������� ��

/00 ���6�1 ��� �2 � ��� �� ���! " ����������� �� ���� /00

�( ���" �� ��:) �44�� ' ���� �� ���) �444� 7 ��9�"" �� ���)

����$� ��#-� �� ��� ���2 !�� ��� �� 2 � ������� ����������� ��

/00 7�� �� /00 %2�) �� ���! " ����������� �� �2� ���� ���!

�� �2� 2��!��� ��1��� �$� 7�:� �2� ��������"� �2 � �����3��

��� !�� �� �( ���" �� ��:) �44�$) ��#-� �������� �� /00

0" �� ! ���� ��!�" � �� �2� 9�"� ���� ��1��� �$) �������

���1 �2� ��� �2 � ��� "" /00 ���6�1 ��� �� �2���12 �2�

� !� � �29 ��

+2� ��#-� !�� ���� �� ��������� �� �2� !�� �� ����" ��

9�"� ���� ���� �"��1 ���� ��2������ �� ��2�� 2��!����)

���"����1��2�"���)� �������������) ����:����) ������ ���)

6 �!���� ���) �� 6 �!�� �� ���6�1 ��� �� � ��� �2�9�$�

�� ������� ��� �"�� � �����

*�"�:� ��������"� �2 � �����3�� ���6�1 �� �������� !��

���) ��#-� ��2���� 1��9�2 ������� ���� 9��2��� 2��!����

�� �2� 1��9�2 !����!� +2� ���! �� ���� �� � � � �"� ��#-�

����"��1� �� ����������"� �2����� �2 � �2 � �� �2� 9�"� ����

��1��� �$� +� �����!��� 92��2�� �2�� �2��� ���� ��5����

1��!�� ���� ��" � �� ������� �"��1 ���� � ��) 9� !��

������ ���� 1��9�2 �� 9�"� ���� �� ��#-� ����"��1� �� �2�

����� �� �������� �� /00 7�� ���� �� � ��� 0� �2�9� ��

�1��� �� $) ��#-� !�� �� ����� 1��9 �"�9�� �2 � �2� 9�"�

���� �� �2� ����� �� 2��!���� /� �2� �������� �� /00 7��)

2�9����) �2� 1��9�2 �� ��2 !�� �� �� 9�"� ���� ����� ��

��2�����) �� ��#-� �� "��� ��������� �� �2�� ��2������ �2 �

�2� 9�"� ���� �� ��1��� � $� 7�:� �2� 9�"� ����) ��#-� ����

1��9�2 �� ��2 ���� � ���-) ��������� �2 � ���!����

4��� �� ��#-� ���� ������ ��� �� �����>� /00 ���6�1 ����� $ ��#-� !�� �� �� E� 9�"� ���� ����"��1� 1��9� �� !����! ���� ����1�� 2��!���) ��� �� /00) �� �� �� /00 7�� ��� � � �� 9��� ��!���� ���!�2� !����! �� �2���1� �2����$ %��! �� ���� "��1�2� �� � � � �"� 9�"� ���� E� �� ��#-� !�� �� ���� "��1� 1��9� �� �2� ����� ��� �������� ����� �� ����� 9��� !� ������ F���� �� ��������� �� �� �� ������ �� �2� !� �� � � ��$�

��� &. �� &�� � �� "�

� (" �:9�"" %�"��2��1 7��) ��� +��� ,����) �����$) &3) ���?���

Page 3: ILR2, a novel gene regulating IAA conjugate sensitivity and metal transport in Arabidopsis thaliana

/00 ���!�" ����) 2�������" �"��1 ���� �<� � �� ���) �44�$)

���� �"��1 ����) �� " ��� " ���� ���! ���� ���11 �� ���)

����$� D�9����) �2� !�� �� ���� ��! ��� �2����� �2 �

�2� 9�"� ���� � ���- ��1��� �$) ����� ���1 �2 � �2�

����� ��� /00 �2 � ���!�" ��� ����� �2��� ����������

� ���� ������ �2� !�� �� �"��1 ���� �������

+2� ��#-� !�� �� "�� �� ��������� �� " ��� " ���� ���!

����� ��#-� !�� �� ����"��1� ���! ��9�� " ��� " ����� �2 �

�2� 9�"� ���� ��) � ��2 �� �� ���- ��1��� ��$� 0����

���!���� " ��� " ���� ���! ����) �� ��# �������� ��

1��9�2 � ���- �� ��� �!��� 9��2 �2� � ��� ""� ��������1

���� ����"� � ������ ��� � ��������1 !��� " ��� " �����)

"�2��12 �2��� ��� �!���� �� ��� ������� 9�"� ���� ��!

��� �� " ��� " ����� �� �2� !�� �� ��1��� ��� � � ���

�2�9�$� ,�2�� /00 ���6�1 �� ������ �� !�� ���) ���) ���)

�� ��') ������� ���! " ��!��� �� " ��� " �����) �� �2�

��#-� " ��� " ���� ������ �� ��� ��2 ���� �� ���"� !�� ���

��9��� ��#-� �� ��' �� ��� ��1��� ��$) ��!����� ���1

�2 � " ��� " ���� ������� �� ��� ������ �� �����G����� ��

/00 ���6�1 �� ������ ����

0���� ���! �2��� ���� �������) �2� ��#-� !�� �� ��� ��

!���2�"�1�� ""� ���! " 92�� 1��9� �� �2� ����� ��

2��!����) ����" �� ���! " 2�������" �"��1 ���� � ���-)

�� �������� "�:� 9�"� ���� �� �2� 2�������" �"��1 ���1

������� �� 1��9�2 � ���- �� � ��� �2�9�$�

��� �"�� ����� � ��� ���� � �(��� �� �������

+2� /7�� �� /0�� /00 !��� ��� 2����" ��� ��G���� �2�

��� "��� � ���� �� � ����� ! �1 ���� �� �� "� � ��

�( ���" �� ��:) �44�� ' ���� �� ���) �444� 7�-"��� �� ���)

����$� E� �2������� ��!� ��� �2� ��#-� !�� �� ���� 1��9�2

9��2 �2� 9�"� ���� �� ! �1 ����) �� "�) 3���) ������) � �

!��!) �� ���:�"� +2� ��#-�!�� �� ���� �� ������ �� �� �� "�

��1��� � $ �� ! �1 ���� ��1��� �$) �� ! � � �"�12�"�

������ �� �� � �!��! ��1��� ��$) �� �������� ���! ""� ��

������ ��1��� ��$) 3��� ��1��� ��$) �� ���:�" �� � ���

�2�9�$� /� ����� ��) ��� �� �2� ��� ��' ���"� !���

2����" �� !�� ��) 92��2 �� "�� /00 !��� ��� ���6�1 ��

������ �� �' ���� �� ���) �444� 7 ��9�"" �� ���) ����$) �������

���! ""� �� �2� ��2��������������� �� "� ��! �1 ������

���� �"��1 ���� ��1��� ��$� +2��� ����"�� ����� �� �2 �

�2 �1� �� !�� " ��� ����������� �� ��� ������ �� �����G�

���� �� �2 �1�� �� /00 ���6�1 �� ����������� �� ����� ��

�����>� ��"� ��� /7�� �� !�� " ��� 2�!���� ��� �� ���������

&������ ������� � ������� �"��

� ������ ��� ����

+� �����!��� 92��2�� �2� !�� " ������ ��� �� �2� ��#-�

!�� �� �" ��� �����" ��� 9��2 �� ������ �2 �1��) 9� ���

� ��� !������! " !�!� �� �����"�� ���! 9�"� ���� ��

��#-� �" ���� E� ������ �����"� ����1���� � !� �����1 �2�

�� ������ �� ��- -"� �� �2� �������� �� 0+%� E� �������

4��� �� ��#-� ���� ��������� ) $ ��#-� !�� �� �� E� 9�"� ���� ����� 9��� ��9� �� !����! ���� �� ��1 �� 2��!��� �� �� �� /00 7��) �� 1��9� � ���- � $ �� � ���- �$ �������� ""� �������� �" ���� F���� �� ��������� �� �� �� ������ �� �2� !� ����� "��1�2� � � �$���$ E�"� ���� �E�$ �� �2� ����� ��� !�� �� ����"��1� 9��� 1��9� ��� � � �� � �� �� ���-) ��!���� ���! �2� 1 �) �� �2� ��!�� �� " ��� " ������������� F���� �� ��������� �� �� �� ������ �� �2� !� �� � � ��$�

� (" �:9�"" %�"��2��1 7��) ��� +��� ,����) �����$) &3) ���?���

"�/ �0������ �� ����� ������� � ���

Page 4: ILR2, a novel gene regulating IAA conjugate sensitivity and metal transport in Arabidopsis thaliana

������� " 0+% ��������� � "���! �� ������ ���� !������! "

�����"�� �� �2� 9�"� ���� �� ��#-� ��1��� � $� E� �2��

!� ����� �2� ��!� ��������� �� ������ �� ��� ������-"��

/� ��� ����1�3�� ����������) 9� ������� ���� "���"� ! �1

���� ��� :� ���� ���2�� 9�"� ���� �� ��#-� �����"��� D�9����)

�� �2� �������� �� � !� �1��0+%) ! �1 ���� ��� :� ����

��#-� �����"�� ����� ��� "!��� �2�����"� ��1��� ��$)

92��� � "�!���� 0+% ���!�" ���� �������� 9��2 �2� 9�"� ����

�����"�� ��1��� �$� +2� 0+% ��������� ! �1 ���� �� ��

���� ���� �2� ��#-�!������! " �����"��9 ��� �������� �2�

��������2��� � ����" �� ���� � ����5����!��2���$�2���"

2��� 3��� �--%$ �� � ��� �2�9�$) �� 9 � ��1��>� ��"�

��2����� � �2� 0+% �� ��2����� � � � �� ��1��� ��$�

���2��!���) �2� �������� �� �2� !�!� �� ��"��"�3��1

�����1��� +����� B ��� �� ���� ���� �� ��� �����1 �2� �� ��

���� �� � �"��2�� 0+% ��������� ! �1 ���� �� ������

���� ��#-� �����"�� �� � ��� �2�9�$�

+� �����!��� 92��2�� �2� ����������� ��9��� ��#-� ��

9�"� ���� �" ��� �� !�� " ��"�� ��� �� ! �1 ���� ��� :�

�����" ��� 9��2 ����������� �� !�� " ������� �� 92�"� �" ���)

9� �� !���� ��� "���"� ����1 ��!�� �������� ���� �2�

������� ����� F�����!��� " ����������$� E� ����� �2 �

!�� " ������� �� ��#-� 9 � ��!�" � �� �2 � �� �2� 9�"�

���� ��� �2� �� ���� �2 � 9� ���"� ���������"� G� �����)

4��� &� ��#-� ���� ������ ��� �� ! �1 ���� �� �� "��� ?�$ E�"� ���� �E�$ �� ��#-� ����"��1� 9���1��9� �� !����! ����"�!����� 9��2 �2� ���� � ��� �������� ����� �� � $ -�-"�) �$ ��-"�) ��$-�.,�) ��$ C�.,�) �� ��$ -�-"�� 0���� � � ��) �2�"��1�2 �� �2� ���! �� ���� 9 � !� ������ F���� �� ��������� �2� �� �� �� ������ �� �2� !� ��� � 4$���$ E�"� ���� �E�$) ��#-�) ���-�) �� ���-� ��'-#����"��1� 9��� 1��9� �� !����! ����"�!�� ��� 9��2 �2� ����� ��� ��� �������� ������ 0����� � ��) �2� "��1�2 �� �2� ���! �� ���� 9 � !� ������ F���� �� ��������� �� �� �� ������ ���2� !� �� � � �$�

� (" �:9�"" %�"��2��1 7��) ��� +��� ,����) �����$) &3) ���?���

��@ &. �� &�� � �� "�

Page 5: ILR2, a novel gene regulating IAA conjugate sensitivity and metal transport in Arabidopsis thaliana

��1 ��"��� �� 92��2�� �" ��� 9��� 1��9� �� ���") �� 1 �

��� !����! �9��2 �� 9��2��� ���1����� �� "�$) �� ��

"�G��� ��1��� ��� � � ��� �2�9�$�

/7�� ����� � ��� ����

+� �����!��� �2� !�"���" � � ���� �� �2� ��#-� !�� ����)

9� ������>�� �2� 1��� ��������� �� �2� !�� �� ����1

! � ��� �������� " ���� �2� E� ! ���� )*�# �� �2��

!���!� �) ��9��� �2� ! �:��� �1 �@� �� 1*�) ����1

%-� ��� ��"�!���2�� ! �:��� �(�"" �� F�:��) �44��

;�����3�� �� 0����") �44�$ �� � "�3� '80 ���! /00

7�� ������ �� � ����������� �� ! ����1 �������� E�

����"���� ������� " ! �:��� ���� �2� ������� �����

F�����!��� " ����������$ �2 � ""�9�� �� �� � ���9 �2�

! ����1 ������ " �� ��� : ��1��� ���� ���� ��9��� �2�

! �:��� �/F�� �� �.D� ��1��� � $�

+2� )*�# ������ " 9 � ���� ���� �� %� �"���� ��G������

� � �� �� +2� 0� ������� <���!� /���� ���� �����$� E�

������>�� �� ��� ���� 1���� �� �2�� ������ " ����1 <F8F

.-08 ����9 �� �(��1� �� ; �"��) �44�$� �� �� �2��� 9���

���� ���� �� �2� +���� (0-) 92��2 9� ���� �� ���������

��!�"�!��� ���� "�� ��� -"���� ���! �2� ��!�"�!���

���� "�� �� 9��� �� �����!�� ���� ��#-� ���� �2� �������

����� F�����!��� " ����������$) �� �� �����!�� +� ����

"��1� 9��� ������ ��� �2�������� ������ ����� -���������

�(+�� ��� �� �(+�� � ������� �2� ��#-� !�� �� �2���

����� ��1��� �)�$� +2� ��"� �� ���� 1��� �2 ��� � �2���

�9� ���������� 9 � " ��� ���� ��� � 0��1������ E�

��G������ �2�� 1��� ���! �2� ��#-� !�� �� �� ������>��

- �� + !�� ���� ��������� �� �2 �1� ���"��� �� "������

�������� +2�� 1��� �2������� ���������� )*�#� +2� ���������

/7�� ������� " �:� ��1��>� �� ��!�" ���� �� ��������"� ����

��>�� ��������) �� ���� ��� ���� �� ��������� �� ��!�!

� �� ��! ��� �� :��9� ������� ������1 ��1� "�)

��11�����1 �2 � �� ��� �� �2� �����" �!�

E� 9��� �� "� �� ���" �� � )*�# �'80 ���! �9� ���

������ �'80 "�� ���� �7�-"��� �� ( ���") ����� ����� �� ���)

�44�$) �� �� )*�# �"���� 2 �� ��� ������>�� �� � �����

F.+ ��G������1 ���6����� +2�������) 9� ������!�� �+ %-�

�� �0-F �� ��� !�"�>� ���� �� �'80 ����$ %-� �� -�" �

�� E ���"�9�:�6 �E�$ �80 �� ��>�� �2� �����1 ��1��� ��

)*�#� E� 9��� �� "� �� ���2�� �������� �� )*�# �+ %-�

�������� ���! -�" � �80 �� � ��� �2�9�$ �� ������ )*�#

!��� 1� �� �2� -�" � �������� ����1 �80 1�" "�� � "����

��1��� @$� /� ����� ��) 9� �������� )*�# �� �������� �

4��� 5� 0+% ��������� �� � � � �� ��������� ! �1 ���� �� ������ ����!������! " !�!� �� �����"�� �� ��2 ���� �� ��#-��� $ +� ������ �� �� ��

��- -"� ���� !������! " !�!� �� �����"�� ���" ������! � 9��: �"� 9�"� ���� �E�$ �� ��#-� �" ��� 9 � !� ����� �� �2��������� �� � !� �1��0+% "��� �� �� �2� �������� �� ��� !� � � � ��� � �� --% �� � !� �1��0+%� +2� � "���! �����2��� 0����� �� ��$9 � ���� � �2� �� !�� ��!� ������ F���� �� ��������� �2� �� �� �� �������� �2� !� �� � � @$ ���! �2��� ����������� !�!� �� ���� � �������) �$ +� ������ �� ��� ��

����-"� ���� !������! " !�!� �� �����"�����" ��� ���! � 9��: �"� E� �$ �� ��#-� ��$ �" ��� 9 � !� ����� �� �2� ����� �� �������� �� � !� �1��0+%� 0+% ���!�" ��� ! �1 ���� �� �� ���� ���� ��#-� �����"�� 9 � "�� !� ����� �� �2� �������� �� ��� !�

� � � �� ��$� F���� �� ��������� �2� �� �� �� ������ �� �2� !� ��� � �$ ���! �2��� ����������� !�!� �� ���� � ������ +2��� ������ !���� 9��� ���� ��� ���! � �� �� ��!�� 9��2 ��!�" � ����"�����$ /�� �������� ����� �� � 9��: �"� E� �� ��#-� �" ��� 9��� !� ���������1 ��!�� �������� ��������2���!����� F���� �� ��������� �2� �� � � �� ���� ����� �� �2� !� �� � � �$�

� (" �:9�"" %�"��2��1 7��) ��� +��� ,����) �����$) &3) ���?���

"�/ �0������ �� ����� ������� � ���

Page 6: ILR2, a novel gene regulating IAA conjugate sensitivity and metal transport in Arabidopsis thaliana

�+ %-� �� � ��� �2�9�$ �� �80 1�" "�� � "���� ����1

�2� E� ��������) �� �2��� "���"� ��! �� ���2 �1�� ��

�������� �� /00 7�� ��� �!��� �� �� �2� ��#-� !�� ��

��1��� @$�

/7�� � ������� � � ������ 0� ������� ������ �

.�G������1 �2� )*�# 1��� ���! �2� E� ��������) ���!

92��2 �2� ��#-� !�� �� 9 � ���" ���) ���� "�� �2 � �2�

9�"� ���� E� ������� �� )*�# ���� ��� 4�� � ��"����� ��

�2� �� ��� �� �2� -�" � 1���� +2�� ��"����� ��!���� �4� �

������ ! �� �2� ��������� -�" � ����� ��� �����) �2� ���

������ >��� ����) �� �2� ��������� ������ ��1��� � $� E�

������!�� .���2��� "�� �� -�" �) E�) �� ��#-� 1���

!�� '80) ���>�!��1 �2 � �2� 4�� � ��"����� �� ������� ��

��2 E� �� �2� ��#-� !�� �� �� � ��� �2�9�$� �+ %-�

� "���� �� �2� �� ��� �� �2� E� )*�# !��� 1� ���>�!��

�2� ��������� �����1 ��1��� �����"���� �� �1��� ���$ ����

�2� ������� ����� F�����!��� " ����������$� +2��) �2���

�� �9� ���!� �� )*�#) �2��� ���! ��2��� )*�#) ���! E�$

�� "��1 ���! �"��1 )*�#) ���! -�" �$� D�9����) � 9�

9��� �� "� �� ������ �2� -�" � �� �������) 9� � ����

���>�! �2 � �2� �9� '80 ��G������ ����"� �� ���������

�� �������� �� ��������� (��2 )*�# ���!� �� �������� ") �

!�� ���� �� �2� �2��� ���! � ���� �2� ��#-� !�� ��

�2������� �� �2� E� �:1�����) �� �2�� �2�������

� � � �������� � -�" � "��1 )*�#) ���� ���� �� �2�

�������1 ����������

4��� 3� %������� " �"����1 �� /7���� $ +2� ��#-� !�� ���� 9 � "�� "�3�� �� �2��!� ��!� � ����1 �2� %-� ��� ! �:��� �1 �@��(�"" �� F�:��) �44�$ �� 1*� �;�����3�� ��0����") �44�$� +� ��>�� �2�� ��������) ��� ���� " %-� ��� ! �:��� 9��� ����"�������� �2� ������� ����� F�����!��� " ����� �����$) �� )*�# 9 � ! ���� ��9��� �2� ! � :��� �/F�� �� �.D�) 92��2 �� ���� ���� ���2� (0-� ��F�� �� +����� 0 ��!�"�!��� ���� "�� �� 9 � ����������� ���! �2� (0-+����) �� �2� ���"���� 9��� ������ ��� ��#-� /00 7�� ������ ��� �2�������� �������+2� �"���� �2 � ��� ��� ������ �2� !�� �� �2� ������ �� ����� ��� � 1� � ����� -"���� � �� ���) ����� ��� � " �: ����) ������� �2� ��#-� !�� �� �2�������� ,� �2� �� ���������1���� ��2�� ���9�$ ���� ���� �� �2� �/F�� �.D� ������ ") ��"� ��� 9 � ���� ���� �� ��2�"���� � �� ���� 0 - �� + !�� ���� � ������:$����"���1 �� %�� �� 7�� �2 �1� 9 � ������>�� ���2�� 1��� �)*�#$ �� �2� ��#-� !�� ����) �$ D�!�3�1��� "���� �� �2� ��#-� !�� ���� �����!�� 9��2 �2� 1���!�� �"���� �(+�� ��) �$ �� �(+�� ��� �$ 9��� 1��9� ��� � � ���� ������"�!����� !����! �� �� !����!����"�!����� 9��2 /00 7�� �$ �� -�-"� ��$ ������� ���� "��1�2 !� ����!���� F���� �� ����� ���� �� �� �� ������ �� �2� !� �� � � �$�

4��� 6� )*�# !�80 �����������+�� " �80 ��� �1$ ���" ��� ���! �� � � �"� -�") E�) �� ��#-� ����"��1�1��9� �� �2� ����� �� 2��!��� �� �� � �� �� �� /00 7�� 9 � ��� � ����� ��� �����1 1�") �� �������� �� ��"�� !�!� ��) �� 2�����3�� 9��2 � )*�# '80 ����� ��2�� 2�����3 ���� �� �2�9� � "� ���1 ������") ���2� ��������� �� �2� ��80� �� ����� ����

� (" �:9�"" %�"��2��1 7��) ��� +��� ,����) �����$) &3) ���?���

��� &. �� &�� � �� "�

Page 7: ILR2, a novel gene regulating IAA conjugate sensitivity and metal transport in Arabidopsis thaliana

+� �����!��� 92��2 )*�# ���! �� !��� ���� "��� �� "��-

( ��� � ���� ��) 9� � "�3�� �2� )*�# "���� �� �� ���

���� " ��������� �2 � ��������� ��������� "��( ��� �

�" ��� ���� �2�� �� ���) �444$� E� ���� %-� �� !�"���

� )*�# �� 1!��� �2 � �� ���4 � �� �2� "��1 )*�# �-�" �$

�� ��@ � �� �2� �2��� )*�# �E�$� 0"" �� �2� ���������

�� !���� ������ ��� E� �� 7 �����1 ������ �7��$ ���� ��

�2� "��1 )*�# ���! ��1��� �$) ��11�����1 �2 � "��1 )*�#

! � � �2� ������ " ���! �� �2� 1���� E� "�� � "�3��

���� �"��1 ���� ��2������ � /00 7�� �� �� "� �� �2��� ��

���������) �� 9� ��� ��� ������ �����" ���� ��9���

/00 7�� �� �� "� ����������� �� �2� )*�# ���! �� � ���

�2�9�$) ���������� 9��2 �2� ������"��� �2 � ��2 ���!� ��

�������� "�

���������

/7�� � � ��� ��� ����� ������� � �����

)"" �0������

+2� ��#-� !�� �� �� ������ �� �� /00 7�� �� /00 %2�)

�� �� ��� ��1��>� ��"� ������ �� �� /00 0" ) ��2�� /00

���6�1 ��� ��1��� �$) �� ��2�� �2���2��!����) ��11���

��1 �2 � /7�� �������� �� �����>� ��� /00 7�� �� /00 %2��

+2� ��#-� !�� ���� "�� ������� ����������� �� ���1�����

�� "� �� ! �1 ���� ��1��� �$) �� ��#-� !������!��

��2��� ����� ��� ! �1 ���� ��� :� ��1��� �$) ��11�

����1 �2 � ��� ������ ��� ! � � !��� ��� � ����� ���

�� ������� +2��) )*�# �� ������ �� ��� ���! " �����������

�� ����� �� ��� "��� � ����� �� /00 !��� ���

���6�1 ����

.���� " !���2����" ��� �� �� /00 !��� ��� ���6�

1 ��� �� ��"� �� ���� /00) �� ��������� !�!��� ��

�2�� � !�"� 2 �� �������� ����� �� �����>������ �2 � ��

��5����� �� �2� ������������1 !�� �� �2��������� ���

!�� ��� �� ������ �� �� /00 7�� �� /00 %2�) �� �2�

/7�� 2����" �� ������� �2��� ���6�1 ��� � �� �( ���"

�� ��:) �44�� 7�-"��� �� ���) ����$� /� ����� ��) ��'

!�� ��� �� ������ �� �� /00 0" ) �� �2� /0�� ��3�!�

������� /00 0" � �� �' ���� �� ���) �444� 7�-"��� �� ���)

����$� *�"�:� ��� �� ��') ��� !�� ��� �� "��� ���������

�2 � �2� 9�"� ���� �� "" ���6�1 ��� ������) ���"����1

/00 7��) /00 0" ) �� /00 %2� �7 ��9�"" �� ���) ����$� +2�

)"�� 1��� ������� �� ��!�!� �� ������� �"�12�"� ��!�

" � �� �2� C/% � !�"� �� !�� " �� ��������� �7 ��9�"" �� ���)

����$�

E� ���� �������� " ���� �2 �� �"��� �2� 1��� �����

���� �� ��#-� �� ����� �2 � �� �� ����" 1��� ��1���� �

�� �$� /7�� " �:� 2�!�"�1� �� !���2����" ��� �� �� ��

������� �� ���� ��� �� ��������� !�!� �� �� ����1

��! ��� �� "�� "�3 ���� ��G������) ��11�����1 �2 � �� ��

�����" �!��� /7�� ! � ���!��� ���6�1 �� 2����"���� �

� ��"�� ���1 �2� "�� "�3 ���� �� �2� 2����" ���) /00 ���6�

1 ���) �� �� � ����� ������ �� ��� 2����"���� �� �2� ����

��� �� ����""�" � ��!� ��!���� +2� ����� ���� �2 � �2�

���6�1 �� ������ ��� ���>"� �� ��#-� ����!"�� �2 � �� ���

!��� �"���"� �2 � �2 � �� ��' �� ��� ��11���� �2 � /7�� ��

� �����" �"� �!���� �� ��� /7�� ��������� )*�� �� �������

"���"� �� ���2 �1�� �� �2� ��#-� !�� �� �� � ���

�2�9�$) ��11�����1 �2 � �� /7�� � ��"�� ��� /7�� �������)

�2�� ����� �� ���� �� ���������� "�

*�"�:� ��2�� �������� ���� ���6�1 �� ������ �� !��

���) ��#-� ����" �� ������� �� ���� �"��1 ���� �� " ��� "

���� ���! ���� �� �2� ����� �� ���6�1 ��� ��1��� �$�

<���� �2 � ��#-� ������ �2� ���� 92�"� 2 ���1 �� �� ����

������ �� �2� 2�������") �� �� ����������1 �� ���� �2 �

/00 7�� ���!�" ��� �� "��( ��� � �����) 92��� �

/00 0" ���!�" ��� �� �2���� �;�9 "�3�: �� . ����1)

����$�

4��� 7� )*�# �� ��"�!���2�� !��1 "��( ��� � ����������� $ .�2�! ��� �� �2� �9� ���!� �� /7�� ����� �� ��������� ����������%�������� )*�# ����� �� ����� ��� � �2��: ���9�) �� �2� ���!��� ������� %-� !�"�>� ���� �� � ��" �$ ��H�� @� �� �H�� ��$ �� ����� ��� ��! "" ���9�� +2� ��1��� ����� ��� � �2� 1� � ���� �1"� �� ��"���� �� �2� E� �� 7�� ���������) �� �2� �������� �� �2� ��#-� !�� ���� �� ����� ��� 9��2 � ������:��$ %-� � "���� �� �2� )*�# "���� �� �� "��( ��� � ���������� <���!��'80 9 � %-� !�"�>�� 9��2 ���!��� �2�9� �� � ��" � $) �� �������� 9����"������2������ �� �I 1 ���� 1�" �� �2���1� �2�����$ +2� ��������� -�" � "��1 /7�� ������� ���"���� �2� ��������� E��2��� /7�� ������� ������"����$� +2� %�� !�� ��� �� 7�� �� ��#-� �������

� (" �:9�"" %�"��2��1 7��) ��� +��� ,����) �����$) &3) ���?���

"�/ �0������ �� ����� ������� � ��4

Page 8: ILR2, a novel gene regulating IAA conjugate sensitivity and metal transport in Arabidopsis thaliana

+������ �� ��� /7�� ��3����

+2� )*�# 1��� �� ��"�!���2�� !��1 "��( ��� � ����

�����) �� ! � ������ ��������� �� �������� �� ��������

�� ��������� ��������� +9� �� �2� �� ��������� �� !����)

E� �� 7��) ���� �� � )*�# ������! ��������� �� ������

��� !��� ��� �������) �� 9� ���� �+ %-� �� �����

!��� �2 � !�80 �������1 �2�� ������� �� ������� �� E��

/� ����� ��) �� ��2�� ��������� ���� �� � )*�# 1���

��������� �� ������ ��@ !��� ��� ������� ��1��� �$�

D�9����) � 9� ��� ��� ������ -�" � )*�# �� �������) ��

��! ��� �����"� �2 � ��2 ���!� ������ �2� � !� �������

�� �2� ����������� �� �� �2� ���!���� ��1����� /� ���2��

� ��) ��� ����� ���� �2 � !�� ���� �� �2� �2��� )*�# � �

� ������� � �2� "��1 )*�# ����� ��� �2 � ��2 ���!� ��

�������� "� +2� -�" � �������� '80 2 � ��� ��G������

�+2� 0� ������� <���!� /���� ����) ����$) ��������1

��9����" ���" ��� "��( ��� � �� �" �� ���� ��2� '�����

����� !��1 "��( ��� � ��������� ! � 2�"� �� ��������

�!���� �� ��! ��� �� ����" ��������� ��G������1 ���

���� " ��������� 9��"� �� �� �2� ������>� ���� �� �2���

������������

"������ ����� ������� ��� �"�� �����

�������! " �� ������ �� ��#-� �2�9 ��2 ���� ! �1 ����

��� :� ��1��� �$� ���2��!���) �2� ! �1 ���� �� ������

���� ��#-� �����"�� �� 0+% ���������) � � � �� ���������)

�� "��:�� � ���� ���� �� ���) ����� ���1 �2 � �2�

����� ��� !�� " �� ������ �� �2� ��#-� !�� �� �� � �����

�������) � �2�� �2 � ��!�"� ����� ��� �����1� /�������

��1"�) ����2�� /7�� ���! ���� ��� ������� " !�!� ��

�� �� �� :��9� !�� " �����1 ��! ���) ��11�����1 �2 �

/7�� ���� ��� ������"� �� ������ !�� "��

0 � ����� �� ������� " !�� " �� ��������� 2 �� ��� !�"�

��" �"� �������� �� �" ��� �-"�!���) ����� � =��� �� ���)

����� E�""� !� �� ���) ����$) �� ���� ���! � "���! �� ��

���� �%���! � �� ���) ����� .3� �� ���) ����$) "���"� �� :��9�

��� ���� �� ��" ���� " ��1�" ���� �� �" �� !�� " �� �����

����� +2� % ���� 0+% �� �� 0+% �����1 � ������ �0(-$

�� �������� � !�"��� �� ������� " � ���� ��� ��� �2� ! �

1 ���� �� �������� ��2 ���� �� �2� ��#-� !�� ��) � �2��

�� 0+% ��������� �� � � � �� ��������� �0��"��� ��

% "!1���) ����� �� �� ���) �44�$� /� "��( ��� �) ��2

� !�"��� ���� �� ���2 � �����3�� !�!��� �2 � ! � �� ��

���� !�� "�� 7���"� �� :��9� ��� �2� !�� " �� ������

� � �"����� �� �" �� 0(- �� ���������) � �� ���! ��1"�

� �2���� �� �2����2�" ��� ���6�1 ��� � �!��! �� ������

�. "� �� � ����) �44�� +�!! ���� �� ���) �44�$� .�!�" �"�)

92��� � 2� �� !�� " % ���� 0+% �� �� ��������� �� 9�""

�2 � �����3�� �� ��2�� ��1 ���!�) �2�� �� ��"� 6��� ���1

������>�� �� �" ��� �0��"��� �� % "!1���) ����� E�""� !�

�� ���) ����$� +2�"��( ��� � % ���� 0+% �� F-0� �F� - ��

0+% ���$ �� � �����" �!�� ������"�! �� �������� �� � "

���!) ! �1 ����) �� �����"� ��2�� ��� "��� � �����

�7� �1 �� ���) �44�� E� �� ���) ����$� 0� �2��� �� �� ����������

�� � "���! �� ������ ��9��� E� �� ��#-� !������!��

��1��� � $) F-0� �� � ��"�:�"� � ���� �� ��� �2� /7�� � �1��

�� ���������

E� 2 �� ��� �����!���� �2� !�!� �� "�� "�3 ���� ��

�2� ��2 ���� ! �1 ���� �� ������ �� �2� ��# !�� ���

� �1 ���� ���!�" ��� �����!�� ��"� �� � ���"�� ��

�2"����" ��� �� �2���� �� ���2���) �44�� ��- �� ��

� �:"��) �4�4$� <���� �2� � ���� �� !������! " ���� �

�����) 9� � ���� ������1���2 ��9��� �" �! !�!� ��

��5�� �� ��� :� �� ��G����� ���� ���� � ����!�!� ���

D�9����) ����� ��� �" �! !�!� �� !�� " ��5�� ����

�2� �����" �! 9��"� � �������� �� ������ !�� " �����

����������� �� ����� ��� ��� �� �� �� !�� " "���"�) � �2��

�2 � �2� !�� " ������ ��� �� 9�"� ���� !�� " "���"� �2 � 9�

������ �� �2� ��# !�� ��� ��������) 92�� � ���" �

�����2�� !�!� �� �����"�� 9��� ���" ��� ���! E� ��

��#-� �" ���) !� ��� "� ����AD� ������� 9 � ������� ��

��2 � !�"��� 2�9����) �� 0+% ��������� ! �1 ����

�� ������ 9 � ������� �� � ��� �2�9�$) ��11�����1 �2 �

�2� �� �������� ������� � �2� ��#-� !�� ���� ! � �

"�� "�3�� �� ��� � ���" � !�!� ��� +2��) �2� ����� ���

0+% ��������� ! �1 ���� �� ������ ������� �� ��#-�

!�!� �� ���� � ����� !��� "�:�"� ��5���� ����� ���

������� �� �" �! !�!� �� ��5�� � ����� �� �� ������

���� ��� � ���" � ����!�!� �� ��!� ��!����

%��������� ��� !�� " ��� �� ������ ��1�" ���� �� ����� ��

��2 �" ��� �� �� ��� /�+� �� � "��( ��� � 2�12 �>����

���� �� �������� ��������"� ��� !��� ���� ��� :� ���! ���"�

��.-)��� �� ��1���� �" ��� ������������"� ���!�" �� )���

!�80) �� /�+� ������� ���!�" ��� ��"� �� ����� �� ��"�

92�� ���� �� "�!����1 �-����""� �� ���) ����$) ����� ���1 �2 �

/�+� ������� ���!�" ���� �� ��1�" ���� /� �� ��) �2� (����

������� ��1 ����"� ��1�" ��� ������ �� � �!��! �� ������

� �2� �" �! !�!� �� 8� !� �� ��������� .!��� ��

.!��� �7�� �� -�"��� ) �444$� +2� �������� �� �2��� �� ��

�� ��������� 9 � �" ��>�� � �2� � "���� �� �2� (��#�

!�� ��) 92��2 2���� ���!�" ��� ���� �� !�� "� �7�� �� ���)

�44�$� ���2�� ����� �� ��#-� ! � �"���� �� ��1�" ����

!��2 ���!� ������""��1 !�� " �� ��������� �!���� �� ���

"��( ��� � �� "� �� ! �1 ���� 2�!���� ����

&���� �� )*�# ����

+2� /00 ���6�1 �� !���2����" ��� ��G���� !�� " �� � �

���� �( ���" �� ��:) �44�� 7�-"��� �� ���) ����$) ��

������� � �" �"��� �� �2��� �� � ����� ! � "�!�� ���6�1 ��

2����"����� 0"�2��12 ��#-� !�� �� !������!�� �� ������

!��� ���� �2 � �2� 9�"� ���� ��) �2� ���� ! � � �� ��

������ 92��� �2�� �� �� ������"� �� �2� !���2����" ���)

92��2 ! � ������ �� �2� �����" �!�� ������"�! �F�$ "�!��)

����"���1 �� ����� ��� /00 ���6�1 �� 2����"���� ��1��� �$�

��������) �� �� ����������1 �2 � ��#-� �� ������ �� �� /00 7��

� (" �:9�"" %�"��2��1 7��) ��� +��� ,����) �����$) &3) ���?���

��� &. �� &�� � �� "�

Page 9: ILR2, a novel gene regulating IAA conjugate sensitivity and metal transport in Arabidopsis thaliana

�� �������� "�:� �2� 9�"� ���� �� /00 0" ) ���� �2��12 ""

�2� !���2����" ��� ��� !�� " �� � ������ /� �� �����"� �2 �

�� "� �� ! �1 ���� �� �2� ����1����� �� � ���� ��� /7��)

92��2 ��>�����"� 2����"�3�� /00 7��) �� ��� ��� �2� ��2��

!���2����" ���) 92��2 ������ /00 0" �7�-"��� �� ���)

����$� 0 ������ ������"��� �� �2 � �2� �� � ���� ! � �

!��� "����"� ���� � /7��) ! :��1 �� ���G��"� ��������� ��

�������� ���� ������ ������ 0"���� ����"�) �2� ����""�" �

"�� "�3 ���� �� /7�� ! � � ��������� ���! �2� ��2�� !�

��2����" ���) �� �2� ��!� ��!��� �� 92��2 !�� " �������

�� "����� �� ��#-� ! � ����� ��"� /7���

,�� ����"�� ��11��� �2 � ���� 2�!���� ��� ! � �

��5������ � �2� ����""�" � ��!� ��!���� �� 92��2

���6�1 ��� �� 2����"�3�� �� � �2� � �" �"��� �� ��

� ����� �!���� �� ��� �2�� 2����"����� 0���� 2�!���� ��� ��

��� "� ��1�" ��� ��� ��"� ����"��!��� ""� �� � �2�

92�"� �" �� "���") �� "�� � �2� ���� ��""�" � "���"� <����

�2� � ����� �� ��3�! ��� �� ������ �2 � ��G���� !�� " ��

� �����) �2�� ���� �� !�� " ��5������ ��1�" ���� �� "�:�"�

�� ����� ��� � ����� �� ��!������ �!���� �� ��� �" ��

����"��!����

/� ������� �� �2��� "��: �� ���� ���6�1 �� 2�!���� ���)

! �1 ���� �� �� "� �" � ��2�� �!���� �� ��"�� �� �" ����

+2��� �� ������� !�� "� �� ������� " ��3�!� �� � ����� ��

� � "�� � ������ � �1 ���� �� ������� " ��� �" �� 1��9�2�

�� �� ��G����� ��� �2�������2���� 9 ��� ���� ���� �8�1���

�� ���) ����$) ����� ������>� ����) �� � ����� �� ��3�!��

�7 ���� �� %���� ��) �44�$� -� "� 2 � 1����"��� " �!���

� ��� � 9�""� �� "� ��>������ �� ���"� ���� ��� ��!�� ��

������1 ����"�� �� ��� !�� ( �� ��>������ �� �2��� ��! "�)

��G�����1 �2� ��� �� �� "� ���� ����1 �����"�3��� �D !�"���)

�44�$� ��#-� �� �2� ��"� �������� �" �� !�� �� 9��2 "�����

�� "� �����������) �� ! � � � �����" �"� �����" �� �����

�� �� !��2 ���!� ���� � �" ��� �� ����� �� ������� ��

�� "��

8$��������� �������

+��� ��4�� �� � �

�� �2�������� �� ��) ����� 9��� ���� �� �����"�3�� 9��2 ��I"� �2 �� ����I +����� B ��� ��� �� !��) ��""�9�� � �9� 9 �2��9��2 9 ���) �� "��� �� ���I 1 � � ��- ��� ��?�� 2) ����� �" ���1�� �" �� �������� �%8$ !����! �D �12� �� .�!����""�) �4�@$����"�!����� 9��2 ���I ������� �%8.$ �� ��@I 1 �� /00 ��/00 ���6�1 ��� 9��� ���! 0"����2 ���"9 �:��) E/) *.0$� %" ���9��� �� "�� 9��2 1 � ���!� "� ���1�� " � �� �(��������� /���)8��9 ":) -+) *.0$ �� 1��9� � �� �� ���- ����� �����������""�!�� ���� ���?�� �F !�� �����$ ����� ��""�9 "��1 � �� >"������ �"�9 �� :��9� �� ����"�� ��!������ �.� �������"�� ��D �1 ����) �44�$� �� 1��9�2 �� ���") �" ��� 9��� ���2�� �� �����������! %8. �� �" ���� ������"� �� ���" ������!�� ���) .������ � ��� ��""�) ,D) *.0$) �� 1��9� � ��?���- ����� ���������� �""�!�� ���� 9��2 ���" 92��� 5��������� �"� ����� �F !�� ������.�"� �� ) J��� �""��) ;H) *.0$�

&���� ���� �� ��������� 5��

+2� ��#-� !�� �� 9 � ���" ��� �� � /00 7�� ������ ��� �������( ���" �� ��:) �44�$ ���! �2� �� ���1��� �� E� ���� !�� 1�� �3�� 9��2 ��2�" !��2 ����"��� �� �F�.$ � ��������"� ��������� 8��! �"� �� ��� ��44�$� �� ����� 9��� ���� � �� %8. ���� �� ��1 �� �� /00 7��� 0���� �� � ��) ��� ���� !�� ��� 9��2 �����"��1�� �2 � �2��� �� �2� 9�"� ���� 9��� �� �������� �� ���" �� ""�9�� �� ��� ����� ����"� �� �� ����"��1� 9��� �������� ��� /00 7�� ������ ��� �� 9�"� ���� ����������� �� /00� +2� ��#-� !�� ��9 � �:������� �� �2� � ���� " E� "��� �2��� ��!�� ����� �2� ������� � "�����

���� �"��1 ���� �� �2� �������� �� 2��!���� �� !�� "� 9 � �� ��� � ��9��1 ����� �� %8. ���� 2��!����$ �� �� %8 ����!�� "�$) ����"�!����� 9��2 �2� ����� ��� ��!�����) �� ""�9 ��1 ����"��1� �� 1��9 ��� � � ��� 7 ��� " ����� 9��� ������� ����1 ���������1 !���������) �������1 �� ���!���� �2 � 2 ��!��1�� ���! �2� ���! �� �����

�� �2� ���� 1��9�2 � �� ������!���) ����� 9��� ��9� �� %8.9��2 �� 9��2��� �� �� /00 7�� ���� �!������ � ��- ��� � � ���%" ��� 9��� �" ��� ������ ""� �� ""�9 ����� �� 1��9 ��9� �2����� �� �� �2� 1 �� 0� �2� ����� ��� ��!��) �2� ���� ��� ��������9 � ! �:��) �� �2� ���� ��� ��9��� �2� ! �:� 9 � !� ���������G����"��

1��� � ���� � � �"��

��# 9 � ! ���� ����1 ��1��1 ���1 � ����" ����� ���! ���������9��� ��#-� �E� �:1�����$ �� 9�"� ���� -�"�!� �-�" �$ ��7�� ��6 �" ���� 0������! ��"� ���� � ����� 9��� �" ��� �� %8.����"�!����� 9��2 �� �� /00 7��) �� 1���!�� '80 9 � ��� � ��� �-�"��3 �� ���) �44�$ ���! ������! ��"� ��� /00 7�� ����� � �� �" ���� '80 9 � ������ ����1 %-� ��� ��"�!���2��! �:��� �(�"" �� F�:��) �44�� ;�����3�� �� 0����") �44�$�8�9 ! �:��� 9��� ����"���� � %-� !�"�����1 1���!�� '80�� 1!���� ���! E� �� 7�� �� ��!� ���1 �2��� ��G������ 9��2�2� ��G������ -�" � '80 �+2� 0� ������� <���!� /���� ����)����$� +2��� ���"���� �.7� �%-� 9��2 ���!��� �� -+-<<+<0< ++-+-0<<+<+-++-0 �� �� �� <+-+<<++-+<00-0<+-0+-- ++- �� ���"��� � ��� � ������� 9��2 ��� �-�" �$ �� �� �7�� ��E�$ � �// �����$) ;��0�� �%-� 9��2 ���!��� �� <-+-<+<<0-++ <0+++<+-+-++ �� �� �� -+-<0+++-00<<0<0000--0-+ ��

���"��� ��� � ������� �� -�" � �� 4� � ������� �� 7��

4��� 9� %����"� !���" ��� /7�� ���������/7�� �� � /00 ���6�1 �� 2����" �� �2 � ���� !�� " �� � ���� �� ����������� �� ������ �� �2� F� "�!�� �( ���" �� ��:) �44�$� +2� ��#-�!�� ���� ������ �� �� ! �1 ���� �� �� "�) �� ��#-� !������!�� 2 �� ��2 ����0+% ��������� ! �1 ���� �� ������� +2��) /7�� ! � ��1 ����"� ��1�" ����������� � "��� ������ ���9�$ !�� " ��5�� �2���12 �2� �" �! !�! � �� �� !�� " ��G����� ���� ���� � �������""�" � ��!� ��!��� ������������! �2� F�) ���2 � �2� � ���"� �� �2� <�"1�� +2� /00 7�� ������ ��� �� �2� ��#-� !�� �� ! � ����"� ���! �����G���� ������� �� � ���� � �" �"��� ���2� ��!� ��!��� ���� ����1 �2� /7�� 2����" ��) ����"���1 �� ������� /00 7�� 2����"���� �� ��"� �� /00�

� (" �:9�"" %�"��2��1 7��) ��� +��� ,����) �����$) &3) ���?���

"�/ �0������ �� ����� ������� � ���

Page 10: ILR2, a novel gene regulating IAA conjugate sensitivity and metal transport in Arabidopsis thaliana

�� E�$) �F(� �%-� 9��2 ���!��� �� <0+<-+000-+00<-0< <00<--+0 �� �� �� -0-+<-+--00<+-++-0<000-0< �� ���" ��� ��� � ������� 9��2 ��� �E�$ �� �� �-�" � �� 7��$ �� / �����$)�JF�� �%-� 9��2 ���!��� �� 0-0<-<-00<+--+0+<++<<0+-- �� �� �� -+-+<+<0-0+-<0+<+-+<-<+-0 �� ���"��� ��� �������� 9��2 ��� �E�$ �� �� �-�" � �� 7��$ �����4/ �����$) ���B7� �%-� 9��2 ���!��� �� 0<-<<++0<-++-+++<-+-0<<++ ��

�� �� --00+--<0+--0<+<<0+--0<00 �� ���"��� �@� �������� 9��2 ��� �E�$ �� �� �-�" � �� 7��$ ���/ �����$�

���������� �� � � /7��

0������! ��"� �� �1 �� '80 ���! �2� ����� " ���>�� " �2��!� ��!� +���� ����! �2� 0� ������� (��"�1�� " �������� -������,2�� .� �� *���������$$ 9 � � ��� ""� ��1����� 9��2 !���0/ ����� !�� �� ������� ! ��"� ��?�� : �� 1!����� +2��� �� 1!����9��� �"������2������ �2���12 ���I 1 ���� ����"�!����� 9��2� !� 1� ������ �<��= ���! �� �� .�2�=!�1) �44@$) �� �2� ��?�� : �� 1!���� 9��� ����>�� ����1 K����� ����� �<���!��)<��! ��$) ��""�9��1 �2� ! ��� ������L� ����!!��� ������ � 1 !���� 9��� "�1 ��� ���� �2� ���D/ ���� �� �2� �� �� ������ �(/8�4�(�� �) �4��$) �� �� �����!�� ���� 7����� �� � �� 'D��� +2��"���� 9��� ������� ����1 �2� ��G������ ���! �2� %� �"�����H�� �� �/F��) 92��2 �� ���� ���� �� �2� +���� (0- �. " ��� � �� ���) ����$� +2� 1���!�� ��G����� 9 � � "�3�� ����1<F8.-08 �-� (��1�) 2���&AA1�����!������A<F8.-08�2�!"$ ���������� ��� ���� ���� �� ���1 �� !�� �,��$) 92��2 ""�9�� ��! �"��� ����� 1� �� ,�� � �2� "�� ��� ,�� ��������� �� �/F�� �2 �9��� ��� ���� ���� �� �2� +���� (0- 9��� ��G������ ���! �2� ��#-� !�� �� ���� %-� !�"�����1 �2� 1���!�� '80� %-� ��� ����� 9��� ����>�� � ��G����� " ��2 ��") ��"���2�"��� 1"���") �� ��2 ��" �������� ����� �0����" �� ���) �444$) �� ��G������������"� ����1 �2� � !� ���!��� ���� ��� !�"�>� ���� �7��� .� �7 �� ������ /���) D������) +B) *.0$�

,���" ����1 �"���� ���! +���� 9��� �� �����!�� ���� "��-(����� �� ������� �� <J���� �;���3 �� .�2�"") �4�@$ � �"�� ������ ���� �0����" �� ���) �444$� ��# !�� �� �" ��� 9����� �����!�� 9��2 �2��� ���������� ����1 �2� 5�� " ��� !��2���-"��12 �� (���) �44�$� .���� ���! �2��� �" ��� 9��� 1��!�� ����� %8 ����"�!����� 9��2 �� �1 !"�� : � !���� �� �������� �� �� ���!�� �+�$ �" ���� +2� +� ���1��� �� �2��� �" ��� 9��� ������ ��������� ���� �� 9�"� ���� ����������� �� /00 7���

+2� )*�# 1��� 9 � ��G������ ���! �2� ��#-� !�� �� 1��� !�� '80) ��""�9��1 %-� !�"�>� ����� +2� ���!��� ���� 9����H�� @� ��� +--+-<++++00+<0<00<++<00<-<<+< ��$ 9��2�H�� �� ��� <-0<+-0<-00<<<+<--<<0+--++-000 ��$)92��2 ���"�� ���4 � -�" � ������� �� ��@ � ������� �� E� �� ��#-�) �� �H�� @� ��� -<0000<0+-+-++--+++-+--0 -0+ ��$ 9��2 �H�� @� ��� <+--++<+-++-0-++<+-+-+0--<+ ��$) 92��2 ���"�� 44� � ������� �� ��2 -�" � �� E��

�"�7-+�� �� ��%8� ������� �� ����� �

�80 9 � ���� ���� ���! -�" � �� E� ����"��1� ����1 +��3�"�<��� (�7) <� �� /�" ��) 8H) *.0$� �+ %-� �� �� �0-F %-�9��� � ����� ��� ����1 0!��� �0�����) +B) *.0$ �F+�,.����� ���7� �0-F :���) ����1 �2� 1��� �����>� ����� ���!�� �H�� �4 ��� -0<-00+0-00+++<<+<0++-+<<00<0 ��$ �� �2� 1��� ��� ��>� ����� ���!�� �H�� ���

9����� ����� �

+�� " �80 9 � ���� ��� � �������� � 8 1� �� ��� ��4��$ ���!92�"� ����"��1� 1��9� ��� �� � �� �� ��E 1�" "�� � ���

����9��� .������>�$ ����" �� �� %8. "��� �� ����"�!�����9��2 � �� �� �� /00 7�� �� 1��9� ����� ���������� ��""�9 >"����� "�12�� 0������! ��"� �� �1 �� ��� " �80 ��� " �� 9 ���� � ��� �� �I 1 ���� 1�" ���� ����1 ���� � ���! "��2��� �� �� �������� �� (��12� .� � %"�� ��"�� !�!� �� �0!���)0�����) +B) *.0$�

�� �2� )*�# ����) 9� ����������� �" �!��) �;./7��-) ��� � ����1 �2� 4�� : 7��/ 1���!�� �� 1!��� ���! (0- +�������"���� ���� 7��/ ��� �("��������;.��$� +2� )*�# ����) @�� � ���// �� 1!��� ���! �;./7��-) 9 � ��% " �"�� ����1 � � ��! �� !�� �"�1����"������ ���!��� �0����" �� ���) �444$� +2���2�� ������" ���� 9 � �� ���� � ��������"� �������� ���11 �� ��� �����$ �� ��!�" �"� " �"��� 0���� ��� 2�����3��1 ��*7+�02� D�����3 ���� (����� �0!���) 0�����) +B) *.0$) �2����� 9 � 2�����3�� ������12� � @��- �� 9 �2��) �������1 ���2� ! ��� ������L� �������������

+������� � ���(��� ��� ���� �� ����� ����:�

�������! " !�!� �� �����"�� 9��� ���� ��� ���! 92�"� �" �������� �� ���� ���! � 9��: �"� E� �� ��#-� !�� �� �" ���)��"����� �� "�G��� < !��1L� (� !����! �/������1��) - �"� �)-0) *.0$) 9��2 9��:"� !����! �2 �1��� 0"" !�!� �� ���" ��������� 9��� ��������� � ��-� +����� 9 � 2�!�1���3�� �� !��� � �� ����"� �� � !" 1�� E 2�!�1���3 ���� ����� ���� ����1 ��� �

������") �� !� �,%.?;,D ��D ��@$) � !� F'+0) � !� F<+0)���I �9A�$ ��"�����"�����"����� �� ���) ���I �9A�$ ����� ����! "�!��) � !� �2���"!��2�" ��"����" 5������ �%�.$) �� � !�

���2���2�����" �'++$� +2� 2�!�1�� �� 9 � >"����� �2���12 ����" ���� �� �2�����"��2) �2�� ��������1�� � �� ��� � ��� �� !��� +2������� � �� 9 � ��"���� �� ��� � ������") ��I ��A�$ 1"�����") � !�

+��� ��� ��D ��@$) � !� %�.) �� � !� '++) �2�� ��������1�� ���� ��� � ��� �� !��� +2� !������! " ��""�� 9 � �� ��������� ����� � ������") � !� +��� ��� ��D ��@$) � !� %�.) �� � !�

'++) �� ������ �� "�G��� �����1�� ����" ����+�!� ��������� ��- �� �� ������ ��� :� ���� !������! "

�����"�� 9 � !� ����� ����1 �2� >"�� ���� !��2�� �%���! � ��D����2�) ����$� ��!� �� �����"�� 9��� ���� ��� �� �� �����!������ ���� ����1 ��� � ������") � !� +��� ��� ��D ��@$) ���� !� ;-"� *�� :� 9 � ����� ��� � ����1 ���2�� �� ��

��- -"��@ !-� !"��� 0!���� � � ���" �"�� -2�!�� "�) .� 7����) �,)*.0$ �� ��� ��

����-"� �@�� !-� !"��� %��:��F"!��) (�����)�0) *.0$� 0� �2� ��!�� ����� ���) �� �" "�G���� �� �2� �� �����!������ 9��� >"����� �2���12 ��� !�������� ���� �! ���� ��3���""�"��� ��� �� >"���� ���""�����) (������) �0) *.0$) ��9 �2�� 9��2 � !" �� ��� ��"� 9 �2 ����� ���� ����1 ��� � ��� ���") � !� +��� ��� ��D ��@$) �� !� ;-") �� � !� - -"� ����-"� � ������� ��� �"���� 9��� �� �����) �� � ��� ������� 9 ������!���� � "�G��� ������"" ���� �������1� �� ��!� ������ !����) ! �1 ���� ��� :� 9 � !� ����� �� �2� �������� ��� !� �1��0+%) ��� !� �����! ���2�� � � ��) ����I ��A�$+����� B ���) �� � �� --%�

"�� � �(����

%" ��� 9��� 1��9� �� "�G��� !����! � �������� ��� ��� �2�!�� " ��� :� ������!����� ��� 9��: �"� �" ��� 9��� ������ 9��2�����""�� 9 ���) ������ "�G��� 9 � ��!���� � "�����1 9��2 >"���� ���) �� ������ 9 � �" ��� � ���- ����" ��!�"���"� ���� '���������� 9 � 1����� �� >�� ��9��� ����1 !��� � �� ����"�) ������ �� �2� '�� ��!��� �� ���� �� J�1�� "� .������� � -����""*��������� ��� ��!�� �������� � "���� �� ��� ������� ����1 �2���� �2 !��2���

� (" �:9�"" %�"��2��1 7��) ��� +��� ,����) �����$) &3) ���?���

��� &. �� &�� � �� "�

Page 11: ILR2, a novel gene regulating IAA conjugate sensitivity and metal transport in Arabidopsis thaliana

��1��-����������

E� �2 �: �2�"��( ��� � (��"�1�� " �������� -����� � ,2�� .� ��*��������� ��� ����� �� (0- �"����) ��:� <��� : �( �"�� -�""�1��� ��������$ ��� ����-"�) �� .2���� 7�-"���) ��" ��� ������ 0�1�����) ���: 2 � !���) 0����9 E���9 ��) �� (��2 ��C�"! � ��� ������ " ��!!���� �� �2� ! ��������� +2�� ���� ��29 � ��������� � �2� 8 ���� " /��������� �� D� "�2 ���4 <�����4�� (�(� �� ��� <������ �� ;�'�D�$) �2� *. '�� ��!��� �� 01�� ��"���� ����� ����� �44�� �� (�(�$ �� �2� ����� 0� E�"�2 ��� � ���� �- ���4 �� (�(�$�

0�#������

��)��� 4�� !���� 0�� ��������� 0�8�� ����� ����� "������� ��:��"��� � ���� ��� "� �� �� ��444$ ������ +����� &�������� ���$ 8�9 H��:& <����� %�"��2��1 0����� ���) E�"�� /���� ��������

�$������ ��!� ��� �������� ��:� �����$ /�������� �� �2� ����� � !�"� �� % ���� ��� ��!�� �� "��( ��� �� +��� +��� �$ ��6)@4@?��@�

!�1� "�� +�$� 4�8�� 4�������� ����� :��)��� � ��,� ��� 4���������0� �����$ -H%��(�) �����2��!� %��� � �2� !�� �"�� � ��2����� �� ���� �� ����"� 1"�������" �� ������2���� �� "��( -��� �� +��� ����) �&) ���?����

!����� �� ��-���;�1� ��� ��� ���� ��� /���� ��� ! ������ 0��!������� ��� "���)��� :� ��� !������� <� �����$ +2� !��# 1����� "��( ��� � ���� �� ������� �2� �����2��!� %��� -H%��(�) !���" ��� �� ���� 2�!���� ���� +��$ 9���$ "���$ !� $ �!")=7) ����4?������

!����� !� ��44�$ 0���� ������2����� "�$ ���$ +��� +��� �$+��� &�$ � �$ 59) ��?@@�

!����� !� ��� 4��1� :�0� ��44�$ /7��) � !���2����" �� �2 ���"� ��� ����� ����"� � ����� ��� ���! ���6�1 ���� !� ���)�69) ����?�����

!����� !�� /�<���� "�� �������� �� ��� >������ !��� �����$ /������� �2� ����� ����"� � ����� ��� ���"& �� � ����2����) ��� 6�1 �� 2����"����) �� ����"� � ������ ��� � ���� ����� ,$ +���1�4�� �����$ �?) �4�?��@�

!���� <��� ��� 8�1�� ��0� ��44�$ 0���1�!��� �� �� !����� ��""��� "����� �2� "��: 1� ! � �� "��( ��� �� 1�� ��) �=) ���?����

!����� �� ��4��$ (�� �� "��(����� �� ������� ��� �" �� �� ����� ! ����� 9���$ "� �� ���$ ��) ����?�����

!��� <� ��� ������ "� ��44�$ %��������� �� ��!�"��� 1��� ����� ����� �� 2�! � 1���!�� '80� ,$ &�$ � �$ �69) ��?4��

<����;�� ��/��:���@� ��/� ��� 4��1� :�0� ��44�$ 0 � �29 � ��� " ��� "���� ���! ���� ��"��( ��� � ���� ��� 1��� ���$ =) ����?�����

<������� "� �����$ ��"���" � !��2 ���!� �� �" �� !�� " ��"�� ��� �� 2�!���� ���� +����) ���) ���?��@�

<��� � "��� ��� !���� ��4� ��44�$ "�� " ���& ��!�"�>�� !��2����� "��(����� �� !��� ��� �� �����! ���� �� "��( ��� ����� ��� +��� ,$ �6) ���?����

<� ��� ���� ��� !����1�� 0�"� ��4��$ -2�!����� �� �2����"�1��� �2� ���� ������ "�$ ���$ +��� +��� �$ &&) ���?����

<�������� 8�/�� 4���� ���� ��� :������ ��/� �����$ F��������� ���2� /�+� !�� " �� �������� �� ������""�� � !�� "� � �2� "���"� ���� ������� �� ������� ���!�" ����� +��� ����) �5) ����?�����

������� ���� ��44�$ /������������ /� +��� ����� �' ����) %�K�)���$� '������2�& ;"�9�� 0� ��!�� %�"��2���) ��� �?���

������� 0�+�� :���;� ����� /���-���� ��� �������� ��A� ��� !�����!� ��444$ /0�� ����� � ��/ �0����� �������� ���0� �������� +��� ����) ��) �@�?��@�

:��� ,���� .B ����� ��� "���)��� :�� 0������ <��� ��� 8������� ����44�$ D�12 ��!��� ���� ���!���� ���� !��� ��� 2�������"

�"��1 ���� �� "��( ��� �� +��$ 9���$ "���$ !� $ �!") =3)��4�?�����

:B �������� �� ��� "� �B���� 8� ��44@$ %��������� �� '80 �����1���� � ���� 1 ���� 1�" �"������2������ 1 ���� � ! 1�������� � �"�� ���"�� "�12�� � ���� 3���) ��) �4�?4���

��������� 8� � ��44�$ +2� 1�����2�!����� �� �� "�� !� $ ����7� �$ �3?) �?�4�

��� �� :�,� ��� "��������� <� ��4�@$ .�"����"��� ������ ��!�� ��� �� "��( ��� � ���� ��� &�$ 1�$ 1���$ �?5) ���?����

����;� <� ��� "� ���� �� ��4�@$ +2� ���!���� �� �2� +7 '80 1��� �������"� �2� ������ �����>� ���������� �� �2�! ���� 1���� � � ���� � ����" ���� �� "��(����� �� �� �� ������� &�$ 1�$1���$ �?5) ���?�4@�

������;��� �� ��� ��)��� 4��� ��44�$ 0 ��������� ��� ! ����1"��( ��� � !�� ����� ����1 �� ��!�� �� ������� �����>�%-� ��� ! �:���� +��� ,$ 5) ���?����

��-���;�1� �� ��� "���)��� :� �����$ M� ���� ���� � "���� ������"� � ����� ��� !�� �"���� �� "��( ��� � ���� ��� +���+��� �$ ��7) ����?�����

/����� 8��� ��� ������� C�/� ��44�$ /����������� �� ! �1 ������3�!��� /� &������ ���/ 75���� �%���� ��) J�7�) ���$�8�9 H��:& J-D %�"��2���) ��� �?���

/���-���� ��� 0���� /�8�� A������ ��<�� 0������ <� ��� !����� !������$ -"����1 �� �2 � �����3 ���� �� )"��) 1��� ��G�������� /00 ���6�1 �� ����������� �� "��( ��� �� +��� ����) ��)��4�?�����

/�<���� "� ��� !����� !� �����$ 0 "�� �� �� "��( ��� � ��. �'80"���� ��� ����������1 ����" !�� ���� +��� &�$ � �$ 56) @4�?����

/�<���� "�� +����;� 0�� 0������ 0���� ������� "���+� ��� !����� !������$ -2 � �����3 ���� �� � !�"� �� /00 !��� ��� ���6�1 ��2����" ��� ���! "��( ��� �� ,$ � �$ ����$ �77) ����@?������

/����� 4�� <����� ��� ��,�� ����� ��4� ��� ";�� �� ��44�$ F-0���!�"�!���� �� �� !�� ��� ��������� �� - �� ��!�� ��������� � �����" �!�� ������"�! ���� - �� 0+% �� �� "��( -��� � ���� ��� +��$ 9���$ "���$ !� $ �!") =5) ���4?�����

/�� D�4� ��� <������ C�<� ��444$ %��� �� ��" ���� ������" �� 8� !�!�� " �� ������ �� �� ��� ��"� �� !�� " ���� �� �2� �!�# 1����,$ � �$ ����$ �75) ��@�?��@��

/�� D�4�� "��1� 4�� A������ A� ��� <������ C�<� ��44�$ 8�1 ����������" �� 2� �� !�� " ��� :� � �2� !����������� ����� � ���!�# 1���� ,$ � �$ ����$ �7�) ���@�?���@4�

/���� ��� ���� ����� ��-���;�1� ��� ��� ���� ��� <����;�� ���<� ��� ���� ��� "���)��� :� �����$ (������2����) ���6�1 ����)� � �"��! �� 2�!���� ��� �� ����"� � ����� ��� �� "��( ��-� � ���� ��� +��� &�$ � �$ 3?) ��4?����

���� ��� �� ��44�$& ���� 9��� � � � ���� +����$ . � '��1�&0� ��!�� %�����

��B��� ��� + ������ "�� "� ����� �� � �� ��� �����$ %2�"�1��������" �����2��� 9��2�� � ���� �� �������� � !�"��� �� "��( ��� ����� ��� +��� +��� �$ ��6) �@�@?�@@��

��<���� ��<� ��� ��1���� ��/� ��4�4$ ���� ! �1 ���� ���!� " ��� �� ! �"� ��� "� ��� �2 � �� �2 �� "� ���� +��� +��� �$ =?)����?�����

������ ��� �#�� ��%8� ��� /������ 4� ��44�$ -�!�"�!��� ������ !����������� ����� � �� �������2�� !�� ��� � "��( ��-� � ���� �� �'80�� +��� ,$ �) ���?����

����� ���� A�+�� ��-�)�� �� ��� ����� �� ��444$ '80 � �� ������ �2� 9�"� ���� �" �� "��( ��� � ���� �� ���� "�� � !�"� >�� �� 1!��� "��1�2 ��"�!���2��! � "����� 1��� ��) �3�)����?�����

A���� 4�� ���� "��� ��� < �� A�%�� ��4��$ 0� "���� �� 1��� ������ ���� �� �� ��1���� �" ���� /� +��� &������� � ��� &�����<�"���) .�(� �� .�2�"�������) ��0�) ���$� '������2�& ;"�9��0� ��!�� %�"��2���) ��� (�&�?�4�

� (" �:9�"" %�"��2��1 7��) ��� +��� ,����) �����$) &3) ���?���

"�/ �0������ �� ����� ������� � ���

Page 12: ILR2, a novel gene regulating IAA conjugate sensitivity and metal transport in Arabidopsis thaliana

A������� �� ��� !����� !� ��444$ ������ ��� � 9 � �� "��� ?/00 !�� �"��!� ����$ ;� $ +��� � �$ �) ���?����

A������� ��� <� ��� ���� ��� 4��1� :�0� ��44�$ "��( ��� � ���� -�� �������2� ���� " �������2 � ����������� ������2����� �29 � ��� ����"� � ����� ���� +��$ 9���$ "���$ !� $ �!") =?)�����?����4�

A������� ��� :���@� ��� 4��1� :�0� ��� !����� !� ��44�$ "��( -��� � !�� ��� ������ �� �� �2� ���� ������� �� ����"� � ��� ������"� �� ��������� �� �2� �����" �� ������� � �2� 9)�� 1����+��� ����) =) ����?��4��

A����� ������� 0�� � ���� ��� 8����� ��<�,� �����$ %2������ �2���� 9 ��� ���� ����& ��9 ��� !��2 ���!� � �� �$ � ����$"���) �3?&) ���?��@�

.B ����� ��� ��-����;1� ��� ! ������ 0� ��� "���)��� :� ��44�$��� �"��! �� ����"� � ����� ��� ��"��( ��� �� +��� +��� �$��9) ���?�4@�

�������� ���� ��� ���� �� ���� �����$ ��1�" ���� �� -0B�) �"��( ��� � - ��AD� ���������� /�����>� ���� �� � 8 ���!�� " �����2������ ��! ��� +��� +��� �$ ��7) ����?���4�

�������� ����� " ���1�� +�� < ���� A��� ��� ���� �� ���� �����$���2 ���! �� 8 ���!�� " �����2������ �� �2� "��( ��� �- ��AD� ��������� -0B�� ,$ � �$ ����$ �77) �@���?�@��4�

0��� ����� /�� >�"�� /� E���� ��;��-��;� E��� ��� ��������� 8���44�$ ��! � ���" � <. B ��!�� �� !�"�������>� 0(- �� �� �������� "�$ ���$ +��� +��� �$ +��� &�$ � �$ 5=) ���?�@��

0���� /�8�� /���-���� �� ��� !����� !� �����$ 0 1 �� �� ��������!�� ���� �� )""#< ���������� " ��� " ���� ����"��!���� +�������) �&) �@�?����

"�����)��� ��� /���1�� ��� 0����� �� �� ��� �����$ .�G����� �� � "���� �� �2��!���!� � �� �2� �" �� "��( ��� � ���� ���9�����) 5?9) ���?����

"���� ��8� ��� 0���� ,�8� ��44�$ �10+% ��������� �� ������ ���2����2�" ���� ����� �2� �����" �� �� � � ������ +��� +��� �$�?7) ��4�?�����

"������������ +�<� ��� �������� 0��� ��44�$ %��������1 �2��� �2�!����� �� ��"���� !��� � "��1 � �� "�12� >"���� "����1��9�2 �� ��"����� �������� +��� +��� �$ =&) ��@�?��@4�

";�� ��� /����� 4�� �-���� �� <��� ��<� ��� ����� ��4� �����$'�������� �� ��1�" ���� �� �" �� - �� ��!��& ����12�� ���!�� ��� "�$ ���$ +��� +��� �$ +��� &�$ � �$ 3�) ���?�@��

+ � ��)������� :����� ��������� �����$ 0� "���� �� �2� 1���!���G����� �� �2� 5�9����1 �" �� "��( ��� � ���� ��� 9�����)5?9) �4@?����

+ ������ ��C� ��4��$ ���� "�� ��� 8��� * �� � +����$0!2����& +2� *��������� �� � �� �2������ %�����

+ ������ ��C� ��� +�1� �� �� A� ��4@�$ /������" �����2��� ��9���!�� ""�� ���� �� ���� �����) �� �2� 1��9�2 ���!����1 ������� �2�" ���1 1����� /� +��� 1�4�� ������� $ =���� )���-�� �� ������� +��� 1�4�� ������� �;"���) ����)���$� 0!��) /�9 & +2� /�9 .� �� *��������� %����) ��� �@�?����

+��������� 0�� C���� 8�� 4�������� ��� ��B ���������� "��������� ��� �� ���� A� ��� ��������� 8� ��44�$ 0� 0(- �� �� ������ �� "��( ��� � ���� �� 2 � ��2 1"�� �2���� ���6�1 �� �� �2"����2�"" � � �"��� �� ������ �������� +��� ,$ �&)���?����

,�������� /�8�� �������� ���� ��� ����� ��/� �����$ F!��1��1!��2 ���! ��� 2� �� !�� " �� ������ �� �" ���� � �� �$� ����$ "���) �563) ���?��@�

,� >�� /����� 4�� ����� !�� E���� ��<�� "��������0�� ����� ��4���� ";�� �� �����$ 0� �����" �!�� ������"�! ���� - ��A����

��!�) F-0�) �������� �" �� 1��9�2 �� ������� ��"�� ��� ������ ������� +��� +��� �$ �&?) ��4?����

+2� <��( �: �������� ��!�� ��� �2� E� )*�# 1��� �� 0H���@�4�

� (" �:9�"" %�"��2��1 7��) ��� +��� ,����) �����$) &3) ���?���

��� &. �� &�� � �� "�