Identifizierung von Proteinen Genom bekannt, Proteinsequenzen in der Datenbank abgelegt: - Identifizierung von Proteinen mit Hilfe der Massenspektrometrie Methode der Wahl, sehr empfindlich, in der Regel einige Femtomol eines Proteins ausreichend - N-terminale Sequenzierung und/oder Sequenzierung von Peptiden mit Edman-Abbau, nur noch selten durchgeführt in der Regel einige picomol eines Proteins erforderlich Genom nicht sequenziert: Aufklärung der kompletten Primärstrukur erforderlich, häufigste Strategie: Peptidsequenzen Oligonukleotide PCRcDNA-Klon Screenen einer Genbank Sequenzieren von cDNA-Klonen Erstellen von Protein-/Peptidsequenzen Edman-Abbau (erste Wahl) Massenspektrometrische Sequenzierung (de novo Sequenzierung, häufig problematisch)
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Identifizierung von Proteinen - uni-regensburg.de · Isolierung und Identifizierung von Proteinen im Mikromaßstab: 1. Anreicherung (Methode abhängig von dem jeweiligen Protein)
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Identifizierung von Proteinen Genom bekannt, Proteinsequenzen in der Datenbank abgelegt:
- Identifizierung von Proteinen mit Hilfe der Massenspektrometrie
Methode der Wahl, sehr empfindlich, in der Regel einige Femtomol eines Proteins ausreichend
- N-terminale Sequenzierung und/oder Sequenzierung von Peptiden mit Edman-Abbau, nur noch selten durchgeführt in der Regel einige picomol eines Proteins erforderlich
Genom nicht sequenziert:
Aufklärung der kompletten Primärstrukur erforderlich,
häufigste Strategie: Peptidsequenzen Oligonukleotide PCR cDNA-Klon Screenen einer Genbank Sequenzieren von cDNA-Klonen
Erstellen von Protein-/Peptidsequenzen
Edman-Abbau (erste Wahl) Massenspektrometrische Sequenzierung (de novo Sequenzierung, häufig problematisch)
Isolierung und Identifizierung von Proteinen im Mikromaßstab: 1. Anreicherung
(Methode abhängig von dem jeweiligen Protein)
- Subzelluläre Fraktionierung (z.B. Isolierung von Mitochondrien, Zellkerne durch Zentrifugation)