IDENTIFICACION DE PROTEINAS DE ALTO PESO MOLECULAR HMW EN TRIGO DURO INTRODUCCION Los cereales contribuyen un conjunto de plantas de gran impacto para la humanidad ya que son el alimento que contribuye con numerosos nutrientes, el trigo en particular es una planta gramínea anual, de la familia del césped, con espiga de cuyo granos molidos se obtiene la harina, su nombre científico es del Genus triticum, es uno de los cereales mas utilizados en la elaboración de alimentos, de ahí la necesidad de hacer el análisis de las proteínas especificas que contiene cada variedad. El cultivo de grano en México es importante para el desarrollo socioeconómico del país ya que es una de las fuentes mas importante de nutrientes en la dieta del mexicano sobre todo para las poblaciones rurales y urbanas de escasos recursos y por que tanto su cultivo como su procesamiento y consumo genera una derrama económica y un gran numero de empleos en varios sectores y actividades de la cadena del sistema producto-trigo. (Peña et al.,2008) La electroforesis representa actualmente una de las herramientas mas complejas empleadas en el laboratorio analítico moderno, ya que se ha aplicado a la investigación básica o aplicada e incluso industrialmente, en particular la electroforesis en gel de poliacrilamida. Los geles de poliacrilamida constituyen un excelente medio de soporte para separaciones electroforéticas dado que reúnen una serie de propiedades idóneas: transparencia, elasticidad, porosidad controlable y compatibilidad con una gran variedad de compuestos químicos. La poliacrilamida se forma por copolimerización de dos compuestos, la acrilamida y la bis acrilamida (N,N metilen-bis-acrilamida), en una reacción iniciada por la Tetrametilendiamina (TEMED) y el per sulfato de amonio. Entre las diversas técnicas de electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE por sus siglas en ingles polyacrylamide gel electrophoresis) probablemente la mas utilizada es la modalidad que se lleva a cabo en presencia de detergente duodecilsulfato de sodio (SDS). MATERIALES Y METODOS Material vegetal Muestras de trigo duro proporcionadas por la institución Reactivos 1.1M TRIS, pH 8.5 2.1M TRIS, pH 6.8 3.SDS (dodecilsulfato de sodio) 10% 4.Stock de acrilamida a)Precaución: usar guantes y mascarilla b)Almacenar en frasco obscuro y mantener en refrigeración
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Identificacion de Proteinas de Alto Peso Molecular Hmw en Trigo Duro
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5/9/2018 Identificacion de Proteinas de Alto Peso Molecular Hmw en Trigo Duro - slidepdf.com
IDENTIFICACION DE PROTEINAS DE ALTO PESO MOLECULAR HMW EN TRIGO DURO
INTRODUCCION
Los cereales contribuyen un conjunto de plantas de gran impacto para la humanidad ya que son el
alimento que contribuye con numerosos nutrientes, el trigo en particular es una planta gramínea
anual, de la familia del césped, con espiga de cuyo granos molidos se obtiene la harina, su nombre
científico es del Genus triticum, es uno de los cereales mas utilizados en la elaboración de
alimentos, de ahí la necesidad de hacer el análisis de las proteínas especificas que contiene cada
variedad.
El cultivo de grano en México es importante para el desarrollo socioeconómico del país ya que es
una de las fuentes mas importante de nutrientes en la dieta del mexicano sobre todo para las
poblaciones rurales y urbanas de escasos recursos y por que tanto su cultivo como su
procesamiento y consumo genera una derrama económica y un gran numero de empleos en
varios sectores y actividades de la cadena del sistema producto-trigo. (Peña et al .,2008)
La electroforesis representa actualmente una de las herramientas mas complejas empleadas en el
laboratorio analítico moderno, ya que se ha aplicado a la investigación básica o aplicada e incluso
industrialmente, en particular la electroforesis en gel de poliacrilamida. Los geles de poliacrilamida
constituyen un excelente medio de soporte para separaciones electroforéticas dado que reúnen
una serie de propiedades idóneas: transparencia, elasticidad, porosidad controlable y
compatibilidad con una gran variedad de compuestos químicos. La poliacrilamida se forma por
copolimerización de dos compuestos, la acrilamida y la bis acrilamida (N,N metilen-bis-acrilamida),
en una reacción iniciada por la Tetrametilendiamina (TEMED) y el per sulfato de amonio.
Entre las diversas técnicas de electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE por sus siglas en inglespolyacrylamide gel electrophoresis) probablemente la mas utilizada es la modalidad que se lleva a
cabo en presencia de detergente duodecilsulfato de sodio (SDS).
MATERIALES Y METODOS
Material vegetal
Muestras de trigo duro proporcionadas por la institución
Reactivos
1. 1M TRIS, pH 8.5
2. 1M TRIS, pH 6.8
3. SDS (dodecilsulfato de sodio) 10%
4. Stock de acrilamida
a) Precaución: usar guantes y mascarilla
b) Almacenar en frasco obscuro y mantener en refrigeración
5/9/2018 Identificacion de Proteinas de Alto Peso Molecular Hmw en Trigo Duro - slidepdf.com
La cámara de electroforesis utilizada fue larga de forma vertical Electrophoresis Protean II xi an XL
Cell con capacidad para 6 geles con 20 carriles cada uno, y la separación electroforética se llevo a
cabo con 9-11 mA por gel durante 15 o16 horas, fue necesario utilizar un aparato enfriador que
mantenga la temperatura a 15 ° C.
Después de este tiempo es retirado de los cristales y colocado en una solución para colorear lasbandas por alrededor de 4 horas en agitación suave, el gel es retirado y colocado en agua para
empezar la decoloración.
La fotografía del gel se consigue colocando los geles en un recipiente de cristal o acrílico y
exponerlo a la luz, sin embargo se utilizo un escáner GS-710 Calibrated Imaging Densitometer para
la mejor apreciación de los geles.
RESULTADOS
Las proteínas de alto peso molecular se definen en tres locus Glu-A1, Glu-B1y Glu-D1, en la Figura
1 se observan las áreas donde se localizan cada uno de los alelos correspondientes a cada locus.
Figura 1. Locus Glu-A1, Glu-B1,
Glu-D1 y Gli-B1 de proteína en
geles de poliacrilamida.
Glu-A1
Glu-B1
Glu-D1
Gli-B1
LMW
HMW
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