HPLC

HPLC (High Performance Liquid Chromatography)

HPLC (High Performance Liquid Chromatography)Anggia--Ardian--Arinta--Artha--Astrid--Atisa Avrina--Bagus--Patimah Pramudita--Puji--Aini--Rachmadhani--Rahmat--Rista--Sakinah

16 December 20131Bab I.Latar Belakang16 December 2013Tswett1930Kirland et al.1969Martin& Synge1941Izmailov&Schreiber 1938

2Rumusan masalah16 December 20131. Apa prinsip kerja HPLC?2. Apa analisa dari HPLC?3. Bagaimana mekanisme kerja HPLC?4. Bagaimana interpretasi dari output data HPLC?Tujuan1. Mengetahui prinsip kerja dari HPLC.2. Mengetahui analisa dari HPLC.3. Mengetahui mekanisme kerja HPLC.4. Mengetahui interpretasi dari output data HPLC.

3

Bab 2Tinjauan pustaka16 December 2013HPLC dan komponennyaHPLC merupakan teknik pemisahan yang diterima secara luas untuk analisis bahan obat, baik dalam bulk atau dalam sediaan farmasetik. Instrumentasi HPLC pada dasarnya terdiri atas: wadah fase gerak, pompa, alat untuk memasukkan sampel (tempat injeksi), kolom, detektor, reservoir, drain, layar display, dan suatu komputer atau integrator atau perekam.

Gambar Diagram Skematik Sistem HPLC

416 December 2013Jenis HPLCBerdasarkan kepolaran fase diam dibanding fase gerak :HPLC fase normalHPLC fase terbalikBerdasarkan pada mekanisme adsorpsi solut :Kromatografi AdsorbsiKromatografi fase terikatKromatografi penukar ionKromatografi Pasangan IonKromatografi Eksklusi UkuranKromatografi Afinitas

516 December 2013Kelebihan dan kekurangan HPLCKelebihan :HPLC dapat digunakan untuk isolasi zat yang tidak mudah menguap dan zat yang tidak stabil.HPLC memiliki detector dengan kepekaan yang tinggi.Teknik ini memiliki daya memisah yang tinggi.Dapat menganalisis sampel yang kecil kuantitasnya.Dalam HPLC dapat memberikan beberapa ribu lempeng teoritis hanya dalam beberapa cm sehingga memungkinkan analisis kolom yang sangat kecil (sedikit fase gerak yang dikonsumsi).Biaya pelarut jauh lebih rendah dibandingkan LC kuno, sehingga dapat menurunkan biaya karyawan.Teknik HPLC dapat dilakukan pada suhu kamar.Kelemahan :Harga sebuah alat HPLC cukup mahal.Sering ada larutan standar yang tertinggal diinjektor

6Bab 3Aplikasi dari HPLC16 December 2013

716 December 2013

8Bab 4A. Prinsip & Mekanisme kerja 16 December 2013HPLC merupakan teknik pemisahan dengan menggunakan fase gerak cair yang dialirkan melalui kolom yang merupakan fase diam menuju detektor dengan bantuan pompa. Sampel dimasukkan kedalam aliran fase gerak dengan cara penyuntikan. Pemisahan senyawa - senyawa dalam kolom akan keluar atas dasar kepolaran yang berbeda, sehingga akan mempengaruhi kekuatan interaksi antara senyawa terhadap fase diam. Senyawa- senyawa yang kurang kuat interaksinya dengan fase diam akan keluar terlebih dahulu, dan sebaliknya senyawa yang berinteraksi kuat dengan fase diam akan keluar lebih lama.

Skema Mekanisme Kerja HPLCMekanisme kerja HPLC

9B. Analisis16 December 2013

1016 December 2013Analisis secara KualitatifSetiap senyawa memiliki waktu retensi (tR) yang berbeda-beda, dipengaruhi oleh :TekananKondisi fase diamKomposisi pelarutTemperatur kolomAnalisis secara KuantitaifPada analisis HPLC secara kuantitatif, ada beberapa hal yang harus diperhatikan diantaranya :Parameter percobaan antara sampel dan standarPenentuan berdasarkan waktu retensi sampel dan standar yang samaPenentuan kadar dilakukan berdasarkan korelasi dengan menggunakan standar seri pada waktu retensi tertentu.Berdasarkan area kromatogramBerdasarkan tinggi puncak kromatogram

1116 December 2013C. Interpretasi outputData (Output) yang diperoleh dari detektor berupa rangkaian puncak - puncak, dimana masing- masing puncak mewakili satu senyawa dalam campuran.

Area di bawah puncak Y lebih kecil dibanding dengan area dibawah puncak X. Ini mungkin disebabkan karena Y lebih sedikit dari X, tetapi dapat sama karena Y mengabsorbsi sinar UV pada panjang gelombang lebih sedikit dibanding dengan X.

1216 December 2013KesimpulanPrinsip kerja HPLC yaitu metode pemisahan dengan menggunakan fase gerak cair yang dialirkan melalui kolom menuju detektor dengan bantuan pompa dimana sampel dimasukkan ke dalam aliran fase gerak, di dalam kolom terjadi pemisahan senyawa dan akan keluar atas dasar kepolaran yang berbeda.Analisis secara kualitatif dilakukan dengan cara membandingkan waktu retensi antara sampel yang diidentifikasi dengan waktu retensi dari larutan standar. Analisis secara kuantitatif di dapatkan dengan melihat kromatogram di mana pada kromatogram akan terdapat puncak-puncak yang menginterpretasikan banyaknya komponen dari senyawa yang dianalisis sehingga dilakukan pencocokan spectrum 3D dari sinyal kromatogram.

1316 December 2013Mekanisme kerja dari HPLC yaitu eluen yang ditampung dalam reservoir akan masuk ke dalam degasser dan diteruskan ke dalam drain sehingga beberapa eluen yang digunakan akan bercampur. Sampel diinjeksikan dengan syringe melalui injection port sehingga eluen dan sampel dapat tercampur dan masuk ke dalam guard column (kolom penjaga) dan diteruskan ke dalam kolom utama untuk proses pemisahan. Hasil yang diperoleh akan dideteksi oleh detektor yang ditampilkan pada display dalam bentuk kromatogram.Data (Output) yang diperoleh dari detektor berupa rangkaian puncak- puncak dimana masing- masing puncak mewakili satu senyawa dalam campuran. Waktu retensi (tR) dapat digunakan untuk identifikasi zat apabila analisis sampel dan standar dilakukan pada kondisi yang sama.

1416 December 2013Saran

1516 December 2013Sekian16