HPLC (Өндөр мэдрэмжит шингэний хроматографи)

HPLC (Өндөр мэдрэмжит шингэний хроматографи)

Ц.Цэндхорол Э.Загархорлоо Б.Хулангоо

Агуулга

• Удиртгал • HPLC (Өндөр мэдрэмжит шингэний хроматографи)-н

түүхэн хувьсал• HPLC–ийн үндсэн ойлголт • Шинжилгээ хийх үед гарах алдаануудыг үүсгэгч хүчин

зүйлүүд • 1260 маркийн шингэний хроматографи (1260 Infinity LC)• HPLC-ийн хэрэглээ

HPLC : High Performance Liquid Chromatography

HPLC нь хроматограф салгалтын техник бөгөөд хөдөлгөөнт уусмал болон тогтворт гадаргуу 2 харилцан хамаарлаас бодисын салгалтыг гүйцэтгэдэг.

Энэ техник нь бусад төрлийн шингэний хроматографийн аргаас зөвхөн тогтворт гадаргууны хэмжээгээрээ ялгагдана.

Уг гадаргуугийн хэмжээ маш жижиг нэг янзын тогтмол хэмжээс байдаг бөгөөд энэ нь гүйлгэлтийн үр дүнг сайн гаргах нөлөөтэй ч маш хүчтэй даралтыг шаарддаг.

Иймээс зарим тохиолдолд өндөр даралтын гэж нэрлэгддэг.

HPLC: Удиртгал

HPLC (Өндөр мэдрэмжит шингэний хроматографи)-н түүхэн хувьсал

-Аналог -Нэгтгэгдсэн-Гар ажиллагаатай  

-Аналог -Программ хангамж -Гар ажиллагаатай  

-Тоон систем -Програм хангамж-хяналт-Автомат дээж сорогч  

-Боломжийн загвар -Хүчин чадал сайтай -Бүрэн автомат -PDA боломжтой-Network HPLC  

HPLC –ийн онолҮндсэн ойлголт HPLC –ийн онолҮндсэн ойлголт

Хөдөлгөөнт фаз

Памп (холих хэсэг)

Инжектор Дээж өгөх

хэсэг

Багана

Детектор Угаах

Компьютер

Багажны үндсэн бүдүүвч

Injector

Detector

Column

Solvents

Pumps

Mixer

Chromatogram

Start Injection

mAU

time

HPLC –ийн онолҮндсэн ойлголт

Injector

Detector

Column

Solvents

Pumps

Mixer

Chromatogram

Start Injection

mAU

time

HPLC –ийн онолҮндсэн ойлголт

Injector

Detector

Column

Solvents

Pumps

Mixer

Chromatogram

Start Injection

mAU

time

HPLC –ийн онолҮндсэн ойлголт

Injector

Detector

Column

Solvents

Pumps

Mixer

Chromatogram

Start Injection

mAU

time

HPLC –ийн онолҮндсэн ойлголт

Injector

Detector

Column

Solvents

Pumps

Mixer

Chromatogram

Start Injection

mAU

time

HPLC –ийн онолҮндсэн ойлголт

Injector

Detector

Column

Solvents

Pumps

Mixer

Chromatogram

Start Injection

mAU

time

HPLC –ийн онолҮндсэн ойлголт

Injector

Detector

Column

Solvents

Pumps

Mixer

Chromatogram

Start Injection

mAU

time

HPLC –ийн онолҮндсэн ойлголт

Injector

Detector

Column

Solvents

Pumps

Mixer

Chromatogram

Start Injection

mAU

time

HPLC –ийн онолҮндсэн ойлголт

Injector

Detector

Column

Solvents

Pumps

Mixer

Chromatogram

Start Injection

mAU

time

HPLC –ийн онолҮндсэн ойлголт

Injector

Detector

Column

Solvents

Pumps

Mixer

Chromatogram

Start Injection

mAU

time

HPLC –ийн онолҮндсэн ойлголт

Injector

Detector

Column

Solvents

Pumps

Mixer

Chromatogram

Start Injection

mAU

time

HPLC –ийн онолҮндсэн ойлголт

Шахуурга

• Шахуургын үүрэг нь хөдөлгөөнт шингэнийг хроматографийн баганан дундуур шахах ба түүний урсгалын хурд нь мл/мин илэрхийлэгдэнэ.

• HPLC-ын хэвийн урсгалын хурд нь 1-2мл/мин байдаг.

• Ердийн стандарт LC шахуургууд (400-600 бар) даралттай. Микро HPLC шахуургууд 1300 бар хүртэл даралт гаргах боломжтой.

HPLC –ийн онолҮндсэн ойлголт

Инжектор (Дээж оруулагч)

• Инжекторийн үйлчилгээ нь шингэн дээжийг хөдөлгөөнт фазын урсгалын чиглэл рүү оруулдаг.

• Ердийн дээжний хэмжээ нь 5-20 микролитр

• Инжектор нь мөн шингэн системийн өндөр даралтанд тэсвэртэй байх ёстой.

HPLC –ийн онолҮндсэн ойлголт

БаганаHPLC –ийн онолҮндсэн ойлголт

БаганаHPLC –ийн онолҮндсэн ойлголт

Детектор

• Детектор нь баганаас гарч байгаа (elute) биеэ даасан молекулуудыг тодорхойлдог.

• Детектор нь тэдгээрийн молекулуудын тоо хэмжээг тодорхойлох бөгөөд шинжээч дээжний бүрэлдэхүүн хэсэгт тооны анализыг хийж чадна.

• Детектор нь шингэний дээжийн хроматограмыг дүрсэлж улмаар үр дүнг бүртгэн компьютерийн дэлгэц дээр гаргах нөхцлийг хангана.

HPLC –ийн онолҮндсэн ойлголт

Шинжилгээ хийх үед гарах алдаануудыг үүсгэгч хүчин зүйлүүд

1260 маркийн шингэний хроматографи (1260 Infinity LC)

• Энэ аппарат нь ердийн HPLC-ээс хэмжээгээрээ томгүй бөгөөд харин шинжилгээний үр дүнг хурдан бөгөөд чанартай гаргана.

• 1260 маркын хроматографи бол 600 бар даралт ба спектрийн давтамжаар 80 Гц боловч оптик хийц нь шинэчлэгдэн флоуресценц детектортой болно.

• Мөн өөрийн хэт ягаан туяа (UV)-ны мужийн шугамын өргөнийг 30 дахин ихэсгэсэн.

Agilent 1260 Infinity

HPLC-ийн хэрэглээ

Зураг 1. Чацарганы жимсний зөөлөн эдэд агуулагдах С амин дэмийн хроматограмм. Илрэх хугацаа (Rt)=3.06 мин Хроматограф нөхцөл: багана ZOBRAX SB-С18 хөдөлгөөнт фаз: ACN:Methanol (20:80), UV-400 нм, температур–22С, урсах хурд–1мл/мин, гүйлгэлтийн хугацаа-10мин, тарих хэмжээ – 10 мкл

Стандарт Rt=3.06

Дээж Rt=3.06

Стандарт Rt=4.31

Дээж Rt=4.31

Зураг 2. Чацарганы жимсний зөөлөн эдэд агуулагдах бета-каротин хроматограмм. Илрэх хугацаа (Rt)=4.31 мин Хроматограф нөхцөл: багана ZOBRAX SB-С18 хөдөлгөөнт фаз: Цууны хүчил:Метанол (95:5), UV-278 нм, температур–22С, урсах хурд–1мл/мин, гүйлгэлтийн хугацаа-10мин, тарих хэмжээ – 10 мкл

HPLC-ийн хэрэглээ

W

W1/2H1/2

H

Хроматограммаас дээж уусмалын пикийн талбайг стандарт уусмалын пикийн талбайтай харьцуулж, дээж дахь С амин дэм, бета-каротины хэмжээг дараах томьёогоор тооцож хувиар илэрхийлнэ.

Thank You !!