Virus de Inmunodeficiencia Humana Por alumno de Servicio social pQFB Hernández Jaimes Esteban HIV Laboratorio de Inmunología Aplicada
Jun 13, 2015
Virus de Inmunodeficiencia Humana
Por alumno de Servicio social pQFB Hernández Jaimes Esteban
HIVHIVLaboratorio de Inmunología Aplicada
Infección
• El HIV es el virus que causa el Síndrome de la Inmunodeficiencia Adquirida
• El SIDA es el estadío final de la infección• Ingresa al torrente sanguíneo
– por contacto fluidos-mucosas – por contacto sangre-sangre
Virus• Pertenece a una subclasificación de
retrovirus: Lentivirus*• Deterioro gradual del sistema inmune
(linfoadenopatía), conlleva a SIDA• Largos periodos de incubación• Virus esférico de 100 nm de diámetro• Los retrovirus, RNA→DNAviral,
– Transcriptasa reversa– Integrasa– Proteasa
• Hay dos tipos: HIV-1 y HIV-2• Infecta los linfocitos TCD4+ y
macrófagos– Cepas R5, Macrófagos, Receptor CCR5– Cepas X4, Linfocitos TCD4+, Recepto
CXCR4
*Retroviridae:Orthoretrovirinae:Lentivirus
HIV, Estructura y proteínas• Proteínas de superficie
– HIV-1• gp120 (SU)• gp41 (TM)
– HIV-2• gp105 (SU)• gp36 (TM)
• Bicapa lipídica• Matriz
– p17 (MA)• Cápside (CA)
– p24• RNA
– 2 copias• Nucleocápside (NC)
– p9• Enzimas
– Proteasa (PR)– Transcriptasa Reversa (RT)– Integrasa (IN)
HIV• 9 Genes • Los más importantes:
– gag• Proteínas del core
– pol• RT, PR, IN
– env• Glicoproteínas de
superficie• Reproducción e
infectividad viral– rev (regulación viral)– nef (negative factor)– vif (viral infectivity)– vpu (viral protein
unknown) (solo en hiv-1)– vpr (viral protein
regulatory)• HIV-2
– vpx (viral protein “x”)
HIV-1
• Es más común, predominancia mundial• Es muy patogénico• Tiene muchos subtipos
Subtipos HIV-1• Tiene muchos subtipos
– Subtype A: Central Africa, sub-Saharan Africa– Subtype B: South America, Brazil, U.S.A., Thailand, Europe, Carribean, India,
Japan– Subtype C: Brazil, India, South Africa– Subtype D: Central Africa, sub-Saharan Africa– Subtype E: Thailand, Central African Republic, Southeast Asia– Subtype F: Brazil, Romania, Democratic Republic of Congo (Zaire)– Subtype G: Democratic Republic of Congo (Zaire), Gabon, Thailand, Russia,
Central Africa– Subtype H: Democratic Republic of Congo (Zaire), Gabon, Russia, Central
Africa– Subtype I: Cyprus– Subtype O: Cameroon, Gabon– CFR’s ("circulating recombinant forms") p.e.: A/B, o subtipos A1, A2, A3, F1 y
F2
HIV-2
• No se conocen subtipos• Infecciones oportunistas: atacan por igual a personas con
HIV-1 y HIV-2• Monitoreo de CD4+, se hace la misma prueba • Se trata con los mismos fármacos que HIV-1, algunas clases
de fármacos actúan con mayor efectividad en infectados con HIV-1
• Daña al sistema inmune más lentamente• Son menos infecciosos en el curso temprano de la
enfermedad• Dispersión geográfica limitada
– (Oeste Africano: Senegal, Nigeria, Ghana, Ivory Coast, otros:Francia, Portugal, y Angola)
• No hay prueba de carga viral con licencia de FDA
Ciclo de vida del HIV• La vida de las células infectadas del hospedero se acorta• Se producen de 10 millones a 10 billones de viriones
diariamente• HIV es capturado por las células dendríticas • CD4+ migran a los ganglios linfáticos, al activarse
proliferan• Dentro de los primeros 5 días se localiza en ganglios
linfáticos, de ahí al torrente sanguíneo, la replicación se acelera
• Eventos que aumentan la susceptibilidad de las CD4+• Causa de la linfoadenopatía generalizada, síndrome
retroviral agudo (2-4 semanas después de la infección).
Progreso del virus• Fases
I. Inicial (Ventana, aguda, precoz) 3-6 mesesI. Síndrome retroviral agudo
I. (2-4 semanas después de la infección). )
II. Latencia clínica (Crónica, intermedia) 6 meses-10 añosIII. Final (SIDA) 20 meses promedio
Inmunidad humoral específica
• Durante la evolución de la infección por VIH-1 – Se induce la producción de anticuerpos
neutralizantes, – Se unen a las proteínas virales.Previene la entrada del
VIH-1 a las células blanco• En un individuo en particular,
– los Ac’s neutralizantes más importantes son• Los que se unen a las cepas propias de VIH-1• entre mayor sea el repertorio de Ac’s neutralizantes, mejor
es el pronóstico de la infección.
Diagnóstico de la infección(Búsqueda de anticuerpos)
– Screening (P presuntivas)– Pruebas confirmatorias
• Pruebas complementarias para el seguimiento de paciente con la infección– Recuento de de Linfocitos CD4/CD8– Carga Viral
• Pruebas de Rutina– Hemograma
• Leucopenia• Linfopenia• Trombocitopenia• VSG elevada
– Orina– Baciloscopia– Parasitológico– Otros
Métodos
• MÉTODOS DIRECTOS
- PCR : Detección de fracciones antigénicas del virus ó genoma viral (RNA o DNA)
• MÉTODOS INDIRECTOS - Detectan la presencia de anticuerpos
específicos contra el VIH por medio de diferentes técnicas serológicas.(Pruebas rápidas, ELISA )
• Ensayo inmunoenzimático (ELISA)• Western Blot (INNO-LIA)
La técnica mas utilizada actualmente para el screening serológico es el test de ELISA y en menor proporción los Test Rápidos (OMS)
EIA/ELISA• Objetivo
– Detectar anticuerpos anti-HIV • Fundamento
– Directo, Método enzimático.• Desventaja
– No es específico de esta infección, por ello, debe ser confirmada con otra prueba denominada Western Blot
Antígenos VIH1/2
Anticuerpos Suero o Plasma
ConjugadoAntígenos
HIV1/2 marcado con
Enzima
ConjugadoAntígenos
HIV1/2 marcado con
Enzima
Sustrato(Sustrato
Enzimático + Cromógeno)
H2SO4
Western Blot
•Se separan las proteínas del virus por electroforesis, se distribuyen por tamaño en gel
•Se trasnfieren las proteínas (antígenos) del virus a una membrana de nitrocelulosa
•Se adiciona anticuerpos primarios (suero del paciente)
•Se adiciona a-IgGhumana marcada para detectar IgG
•Se revela, observación del color o luminiscencia donde hay unión específica.
Western Blot: Interpretación
• POSITIVO– Si dos bandas presentan intensidad >1+ en
relación al control • Una banda de envoltura y la p24 • Presencia de bandas gp120, gp41, p31, p24 y p17 para
HIV1 • Proteínas gp105 y gp36 para HIV2
gp120 gp41 p31 p24 p17
3+ 1+ +/-
Control
gp105 gp36
Western Blot: Interpretación
• INDETERMINADO– Si dos o mas bandas presentan intensidad +/-– Si una banda presente intensidad <1+ y el resto
son negativos en relación al control
3+ 1+ +/-
Control Gp120 p24
Western Blot: Interpretación
• NEGATIVO– Si todas las bandas presentan valoración <+/-– Ausencia de proteínas
3+ 1+ +/-
Control
INNO-LIA*
• Line Inmunoblot Assay• Prueba Confirmatoria
(Especifica contra cuales proteínas hay anticuerpos)
• Antígenos obtenidos por ingeniería genética
• Seguro, rápido, accesible
* Protocolo modificado con fines de enseñanza
08
Estreptavidina
Nivel 3+Nivel 1+Nivel +/-
Sgp120 (SU)gp41 (TM)p31 (IN)p24 (CA)p17 (MA)Sgp105 (SU)gp36 (TM)
Identificación
Fundamento LIA
BCIP: Bromo-cloro-indol-fosfatoNBT: Nitroazul de tetrazolio
INNO-LIA*
* Protocolo modificado con fines de enseñanza
C+ C- M