HEMOGLOBIN HEMATOKRIT ERITROCITNE ... - fir.vef.unizg.hrfir.vef.unizg.hr/wp-uploads/2012/10/HbHtkE-konstante-Teichman.pdf · Ciljevi: Odrediti koncentraciju hemoglobina u punoj krvi

ERITROCITNE KONSTANTETEICHMANOVI KRISTALI

HEMOGLOBINHEMATOKRIT

Ciljevi:

� Odrediti koncentraciju hemoglobina u punoj krvi

� Definirati pojam hematorkita

� Opisati postupke i pribor za određivanje

hematokrita pomoću mikrohematokritske metode

� Utvrditi hematokrit u uzorcima krvi

� Definirati pojmove hemodilucije i

hemokoncentracije

Ciljevi:

� Definirati pojam eritrocitne konstante

� Definirati pojmove MCV, MCH i MCHC

� Izračunati samostalno MCV, MCH i MCHC

HEMOGLOBIN ?

HEMOGLOBIN

- sinteza hemoglobina počinje u eritroblastima i nastavlja se u normoblastima i retikulocitima

- građen je od:

GLOBINA: 2 αααα i 2 ββββ polipeptidna lanca; 140-150 AK (adult)HEM-a – (na svaki globinski lanac vezan je 1 hem)

� svaki hem veže na sebe 1 molekulu O2

= ukupno 4 molekula O2

- LABAVO i REVERZIBILNO vezanje O2

http://www.evolutionnews.org/2012/10/gene_duplicatio064971.html

ODREĐIVANJE KONCENTRACIJE HEMOGLOBINA U PUNOJ KRVI

KOLORIMETRIJSKA METODA

Princip reakcije:

Hemoglobin se oksidira kalij-fericijanidom u methemoglobin ��nastali methemoglobin s kalij-cijanidom stvara

stabilan obojeni kompleks = cijanmethemoglobin

Kemikalije: cijanid reagens (otrovan - pipetirati samo automatskom pipetom!)

Radna otopina: reagens otopiti u odgovarajućoj količini dH2O

Uzorak za analizu: krv

Dobro se promiješa. Nakon 5 minuta izmjeri se apsorbancija probe (Ap) i standarda (As) prema slijepoj probi.

RAČUN:

Proba Standard

Radni reagens 2,5 ml -

Uzorak 0,01 ml -

Standard - 2,5 ml

150xA

A

s

pHemoglobin g/L=

Uvjeti određivanja:

Valna duljina: 540 nmStaklena kiveta: 1 cmTemperatura: 20-25 oCSlijepa proba: radni reagens ili destilirana voda

HEMATOKRIT ?

Plazma = 55 -70%

Leukociti i trombociti

Eritrociti Hematokrit = 30-45%

Plastični kit

HEMATOKRIT

= volumni udio ERITROCITA u 1 litri krvi (jedinici pune krvi)

Pribor:

1. heparinizirana kapilara

2. kit za zatvaranje kapilara (plastična smola)

3. mikrohematokritska centrifuga (10 000 okr./min.)

4. čitač za mikrohematokrit

Materijal: kapilarna ili venska krv

ODREĐIVANJE HEMATOKRITA MIKROHEMATOKRITSKOM METODOM

Postupak:

� kapilara se uroni u uzorak krvi, zbog kapilariteta krv ulazi u kapilaru (3/4)

� kraj praznog dijela kapilare se zatali na plameniku ili začepi plastičnim kitom

� začepljena kapilara stavi se u centrifugu s zatvorenim krajem okrenutim prema periferiji(tariranje centrifuge!)

� centrifugira se 5 min. pri 10 000 okretaja/min

� kapilara se stavlja u pomično ležište čitača

� donji rub eritrocita namjesti se na donju crtu (0%)

� ležište s kapilarom pomiče se sve dok se gornja granica

plazme ne namjesti na gornju crtu čitača (100%)

OČITAVANJE MIKROHEMATOKRITA

�crta na pokretnom dijelu čitača namjesti se točno na gornji rub eritrocita i na ljestvici sa strane čitača očita se vrijednost hematokrita u L/L prema novim SI jedinicama (stare vrijednosti u %)

OČITAVANJE MIKROHEMATOKRITA

Fiziološke vrijednostihematokrita 0,3 – 0,4 L/L; (30-45%)

HEMODILUCIJA < 0,3 L/L

HEMOKONCENTRACIJA > 0,4 L/L

� Relativna – smanjen volumen plazme

� dehidracija

� Apsolutna – policitemija

� sva kronična plućna oboljenja (hipoksija)

� obitavanje na višim nadmorskim visinama

� tumori

� profesionalni športaši∗∗∗∗– doping test (eritropoetin)

• Hemokoncentracija = zgušnjavanje krvi

� Hemodilucija = razrijeđenje krvi

� gubitak (krvarenje) ili razaranje eritrocita koje koštana srž

ne može nadoknaditi

� smanjena proizvodnja eritrocita

� kronično zatajenje bubrega (nema sinteze eritropoetina)

ODREĐIVANJE ERITROCITNIH KONSTANTI= MCV, MCH i MCHC

- izračunavaju se kod svakog uzorka krvi nakon određivanja vrijednosti hemoglobina, broja eritrocita i vrijednosti hematokrita

MCV (mean corpuscular volume)

= prosječan volumen (zapremina) eritrocita

u krvi

�izračunava se tako da se volumen eritrocita (hematokrit) kojega čine eritrociti u litri krvi, podijeli s brojem eritrocita u litri krvi

LE

hematokritfLMCV

/10

10)(

12×

×=

http://web2.airmail.net/uthman/blood_cells.html

L/L

MCH (mean corpuscular hemoglobin)

= prosječna količina hemoglobina

po eritrocitu

�izračunava se tako da se količina hemoglobina iskazana u

g/L podijeli s brojem eritrocita u litri krvi

LE

LghemoglobinpgMCH

/10)(

12×=

MCHC

(mean corpuscular hemoglobin concentration)

= prosječna koncentracija hemoglobina u eritrocitima

� izračunava se tako da se hemoglobin iskazan u gramima na litru, podijeli s hematokritom u litri krvi

)/(

)()/(

LLhematokrit

LghemoglobinLgMCHC =

Predmeci za decimalne jedinice

� Deci d (10-1)

� Centi c (10-2)

� Mili m (10-3)

� Mikro µ (10-6)

� Nano n (10-9)

� Piko p (10-12)

� Femto f (10-15)

� Ato a (10-18)

� Eksa E (1018)

� Peta P (1015)

� Tera T (1012)

� Giga G (109)

� Mega M (106)

� Kilo k (103)

� Hekto h (102)

� Deka da (101)

MCV - mean corpuscular volume

� 1 femtolitar (fL) = 10-15L

� 1 pikogram (pg) = 10-12g

MCH - mean corpuscular hemoglobin

REFERENTNE VRIJEDNOSTI KONCENTRACIJE HEMOGLOBINA (Hb),

HEMATOKRITA (Htk) I ERITROCITNIH KONSTANTI

VRSTA ŽIVOTINJE

Hb(g/L)

Htk(%)

MCV(fL)

MCH(pg)

MCHC(%)

GOVEDO 80-150 24-46 40-60 11-17 30-36

OVCA 90-150 27-45 28-40 8-12 31-34

KOZA 80-120 22-38 16-25 5,2-8,0 30-36

SVINJA 100-160 32-50 50-68 17,0-21 30,0-34,0

KONJ 110-190 32-53 37,0-58,5 12,3-19,9 31,0-38,6

PAS 120-180 37-55 60-77 22-26,2 32-36

MAČKA 80-150 24-45 39-55 13-17 31,0-35,0

KOKOŠ 70-130 22-35 90-140 33-47 26-35

TEICHMANOVI KRISTALI

- mikroskopski dokaz krvi na nekom predmetu

- dokaz kristala klor-hemina (spojevi porfirina sa Fe3+, klor je

vezan na treću valenciju željaza)

Pribor: predmetno i pokrovno staklo, plamenik, stakleni štapić, skalpel

Materijal: osušena mrlja krvi

Kemikalije: NaCl u kristalu, ledena octena kiselina

TEICHMANOVI KRISTALI

� Postupak:

� na predmetnicu se sastruže malo osušene krvi doda se kristala NaCl, usitni,

pomiješa staklenim štapićem i stavi pokrovnicu

� uz rub pokrovnice kapne se ledenu octenu kiselinu (zbog kapilariteta se

podvuče pod pokrovnicu)

� preparat se zagrije na plameniku pazeći da

octena kiselina ne provrije

� pod srednjim povećanjem objektiva mikroskopa

uočavaju se sitni smeđecrni kristali

klorhemina

Literatura

� Feldman, B. V., J. G. Zinkl, N. C. Jain (eds.) (2000): Schalm’s Veterinary Hematology, 5th ed. Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, Baltimore, New York, London, Buenos Aires, Hong Kong, Sydney, Tokyo; USA, UK, Argentina, China, Australia, Japan.

� Harvey, J. W. (2001): Atlas of veterinary hematology: blood and bone marrow of domestic animals. W.B. Saunders Company, Philadelphia, Pennsylvania, USA.

� Kaneko, J. J., J. W. Harvey, M. L. Bruss (eds.) (1997): Clinical biochemistry of domestic animals, 5th ed. Academic Press, San Diego, CA, USA.

� Rebar, A. H. (1998): Hemogram Interpretation of Dogs and Cats. Ralston Purina Company, Saint Louis, Missouri, USA.