Gk 14 12-15

ü GenelBilgiler

ü ÇalışmaKapsamında

Yapılacaklar

ü İleriHedefler

ÇalışmanınTemelHedefi

•  Oositmaturasyonarres@görülenIVFolgularında;

ü Kisspep@nü Kisspep@nReseptörü(GPR54)ü Siklooksijenaz2ekspressyonseviyelerinintespi@veetkinliğiningösterilmesi

OositMaturastonArre@

•  Fetalhayat

6.-7.haZa10.000

8.haZa600.000

16.–20.haZa6milyon

28.HaZamitozdurur

HızlıMitoz

PartumÖncesi2–3Milyon

Puberte300.000

² Primordialgermhücreleri5-6haZagenitalkabarbyagöçeder.

“Oogonia“

GENELBİLGİLER

OositMaturasyonu(Puberteyekadar)

ü  MayozIarrest–Germinalvezikül-primeroosit

ü  MuralGranülozahücrelerinde

sentezlenen,Natriure;cpep;tprecursor;pC(NPPC)ilecGMPüre;mi

ü  Gapjunc@onaracılıoositegeçiş

ü  cGMP–fosfodiesteraz3AenziminincAMPhidroliziinhibisyonu

ü  Mayo;karres;nkorunması

OositMaturasyonu(Puberte)

v  OvulasyonöncesindekiLHarbşıyadahCGuygulanması

ü  FolikülercGMPseviyelerindedüşme

ü  Oosit–kumulusgapjun@onkapanması

ü  OositcAMPhidroliziü  “GVBD“ü  Mayozdevamıü  OvulasyonileMayozIIarrest–

sekonderoositablımı

OositMaturasyonuSinyalYolakları

cGMPPDE3cAMPPKACDC25B+WEE1BCDK1+SiklinB1(MPF)MATURASYONARREST

IVFolgularında%8.6-%15.2enazbirmayo@kmaturasyonuyetersizoositeldesi

GVarrest

MIarrest

MIIarrest

ü  Oositmaturasyonyetmezliği@pI:GVarrestMPFak@vasyonundansorumluuyarıkaskadındadefektler

ü  Oositmaturasyonyetmezliği@p2:MIarrestKromozomlardakondensasyon,metafaziğciklerioluşumu,kromozomlarıngruplaşmasıvesonrasındahomologkromozomlarınseperasyonvesegregasyondefektleri

ü  Oositmaturasyonyetmezliği@p3:MIIarrestMorfolojikmaturitevekapasitearasındakibuuyuşmazlık

ü  Oositmaturasyonyetmezliği@p4:Mixarrest

OositDonasyonu&İnVitroMaturasyon

ü  Kisspep@n,malingmelanomahücrelerindemetastaz-baskılayıcıgenolarakkeşfedilenKISS1genininürünüolanpep@t

ü KISSPEPTIN(KISS-1)

Kisspep@nmul@-fonksiyonelbirpep@t

KISS1R(GPR54)reseptörününfonksiyonkaybınayolaçanmutasyonların:

ü  Pubertalgelişmeeksikliğiü  Üremeak@vitelerindekayıpü  Hipogonadotropikhipogonadizm

ü Kpsistemikşekildeüreme

aksisininanadüzenleyicisi

ü  Kp,GnRH-gonadotrophinsalgılayıcıenpotansiyelaraç

ü  Gonadalgelişim,ü  Pubertebaşlangıçıü  Fer@liteninkorunmasıiçin

KP–GPR54sinyalsistemişart!

proestrus(P)estrus(E)metestrus(M)diestrus(D)

ELISAKpseviyesiFolikülersıvıda.335±22.5pgmL-1Serum25±,.2pgmL-1,P<0.05).

ü SİKLOOKSİJENAZ(COX-2)ü  Prostaglandinendoperoksitsentaz–2(PTGS2)

PTGS2;ü  Preovulatuarprostaglandinsenteziü  Kumulusekspansiyonuü  FolikülerRüptür

LH–bağımlıPTGS-2

OVULASYON

ÇalışmaHipotezi

ü FolikülermikroçevredeekspressyonusaptananKisspep@nsinyalsisteminin,oositmasturasyonbasamaklarınabağımlısiklooksijenaz-2enzimiilenega@fkorelasyongöstermektedir.

ÇALIŞMANINAMACI

Matürasyonunutamamlayamamışoositlerde;ü  Buoositlerinmetabolikvehücreseletkileşimiçerisindebulunduğukumulus

hücrelerinde,folikülersıvılarındaveserumdüzeyindeKpvereseptörüileCox-2(PTGS2)ekspresyondüzeylerinintespiL

ü  KpileCox-2ekspresyonlarıarasındakikorelasyonunundeğerlendirilmesi

ÇALIŞMANINAMACI

FolikülerMikroçevreü  KumulusHücreleriü  FolikülerSıvı

OositMaturasyonuü  GVü  MIü  MII

Serum

Kisspep@nCOX-2

ÇALIŞMAGRUPLARI

ÖRNEK(n=25folikül)OositMaturasyonArrestOlguları

KONTROL(n=25folikül)MaturOositOlguları

KISITLAMALARİnfer@liteetyolojisidüşükoverrezervi,ağırendometriyozis,ağıroligoastenoteratozoospermiyadaazospermive39yaşveüzerindekadınhastalar

ü  U.Ü.T.F.KadınHastalıklarıveDoğumAnabilimDalıÜremeSağlığıveİnfer@liteMerkeziPolikliniğiveAmeliyathanesinde

ü  U.Ü.T.F.KadınHastalıklarıveDoğumAnabilimDalıÜremeSağlığıveİnfer@liteMerkeziEmbriyolojiLaboratuvarında

ü  U.Ü.T.F.HistolojiveEmbriyolojiAnabilimDalıLaboratuvarlarında

ü  U.Ü.T.F.MikrobiyolojiAnabilimDalıLaboratuvarlarında

ÇalışmaKapsamındaYapılacaklar

U.Ü.T.F.KadınHastalıklarıveDoğumAnabilimDalıÜremeSağlığıveİnfer@liteMerkeziPolikliniğiveAmeliyathanesindeü  Ovaryans@mülasyonprotokolüü  Follikülergelişimsürecinintakibiü  Follikülaspirasyonu

U.Ü.T.F.KadınHastalıklarıveDoğumAnabilimDalıÜremeSağlığıveİnfer@liteMerkeziEmbriyolojiLaboratuvarındaü  FollikülaspirasyonusonrasıfollikülsıvısıiçindenOCC’nin

toplanmasıü  OCCinvitrokültürüveoositmatürasyonunun

değerlendirilmesiü  Fer@lizasyonöncesioosi@nhazırlığı,fer@lizasyonyöntemi

tayiniveuygulamasıü  İnvitroembriyokültürü,değerlendirmesiveembriyotransferiü  Follikülsıvılarınınvekumulushücrelerinintoplanması

U.Ü.T.F.HistolojiveEmbriyolojiAnabilimDalıLaboratuvarlarındaü  Follikülsıvılarınınvekumulushücrelerinindondurulmasıve

saklanmasıü  Çözülmüşoositlerinışıkmikroskobikveelektronmikroskobik

olarakmorfolojisinideğerlendirmekamacıylauygunsolüsyonlardafiksasyonuvedokutakibi

ü  Oositlerinultrastriktürelmorfolojisinindeğerlendirmesiü  Oositlerinimmünohistokimyasalanalizi

U.Ü.T.F.MikrobiyolojiAnabilimDalıLaboratuvarlarında;ü  ELISAyöntemiilefollikülsıvısı,serumKıss1veCox-2miktar

tayiniü  Kumulushücreleriveoositlerinreal@me-PCRyöntemleriyleKıss-1vereseptörü,Cox-2ekspresyonanalizi

ü  Işıkmikroskobikveelektronmikroskobikolarakoositmorfolojisini

değerlendirilmesi

ü  OositvekumulushücreleriKISS1/KISS1R/COX-2immünohistokimyasal

tayini(?)

ü  TotalRNAeldesi,semiquanLtaLf(qPCR)vereal-LmePCR

ü  Eliza–FolikülerSıvıveSerumKISS1veGPCR54seviyetayini

GereçveYöntemler

Işıkmikroskobikveelektronmikroskobikolarakoositmorfolojisinideğerlendirmesi

ü  TotalRNAeldesi,semiquanLtaLf(qPCR)vereal-LmeqPCR

50adetOosit–KumulusHücreGrubu

(DNA-free)TotalRNAExtrac@onKitRNA

25adetkontrol 25adethasta

cDNA

SuperscriptIIIreversetranscriptase

Real;meqPCR•  KISS1/KISS1R/COX-2

genlerininGAPDHekspresyonuilegöreceligenanlabmpazernlerikıyaslanması

ü  Eliza

Kisspep;nELİSAkit

Serum FolikülerSıvı(PFF)

Oositmaturasyonundaetkinhücreiçisinyalyolaklarının

Ak;vasyonu/İnhibisyonu(?)

Oositinvitromaturasyonkültürlerine

KPeklen;si/KPinhibitöreklenmesi(?)

Kisspep@nALTERNATİFMİ?/GEREKLİMİ?

TEŞEKKÜREDERİM…