Aus dem Zentrum für Allgemeine Molekularbiologie und Proteindesign der Tierärztlichen Hochschule Hannover und dem Zentrum für Pharmaforschung und medizinische Biotechnologie des Fraunhofer Institutes für Toxikologie und Experimentelle Medizin Genexpressions- und Metabolismusuntersuchungen der menschlichen respiratorischen Nasenschleimhaut INAUGURAL-DISSERTATION zur Erlangung des Grades einer Doktorin der Veterinärmedizin ( Dr. med. vet. ) durch die Tierärztliche Hochschule Hannover Vorgelegt von Daniela Rahmel aus Berlin Hannover 2004
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Genexpressions- und Metabolismusuntersuchungen der ... · Nasenvorhöfe, Vestibula nasi: Die unmittelbar an die Nasenlöcher,Nares, angrenzenden Teile der Nasenhöhle stellen die
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Aus dem Zentrum für Allgemeine Molekularbiologie und Proteindesign der
Tierärztlichen Hochschule Hannover
und dem Zentrum für Pharmaforschung und medizinische Biotechnologie des
Fraunhofer Institutes für Toxikologie und Experimentelle Medizin
Genexpressions- und Metabolismusuntersuchungen der menschlichen
respiratorischen Nasenschleimhaut
INAUGURAL-DISSERTATION
zur Erlangung des Grades einer Doktorin der Veterinärmedizin
( Dr. med. vet. )
durch die Tierärztliche Hochschule Hannover
Vorgelegt von
Daniela Rahmel
aus Berlin
Hannover 2004
Wissenschaftliche Betreuung: Univ.-Prof. Dr. rer. nat. Bernd Otto
Univ.-Prof. Dr. rer. nat. Jürgen Borlak
1. Gutachter: Univ.-Prof. Dr. rer. nat. Jürgen Borlak
Univ.-Prof. Dr. rer. nat. Bernd Otto
2. Gutachter: Apl.-Prof. Dr. med. vet. Heiner Niemann
1. Einleitung ................................................................................................ 1 1.1 Anatomie der oberen Atemwege und der Nasenmuschel.............................................2 1.2 Zellulärer Aufbau der Nasenschleimhaut ......................................................................7 1.3 Physiologie und Funktionen der oberen Atemwege....................................................11 1.4 Funktion der Nasenschleimhaut in der Biotransformation.........................................13 1.5 Nasale Applikation von Arzneimitteln - Glucocorticoide – Soft Steroide..................18 1.6 Ziel der Arbeit.............................................................................................................. 21
2. Material und Methoden........................................................................ 22
2.1 Material ........................................................................................................................22 2.1.1 Probenmaterial .........................................................................................................22 2.1.2 Chemiaklien..............................................................................................................22 2.1.3 Geräte und Verbrauchsmaterialien.............................................................................27
2.2 Methoden......................................................................................................................31 2.2.1 Gewinnung und Transport des Probenmaterials..........................................................31 2.2.2 Genexpressionsuntersuchungen.................................................................................31 2.2.3 Proteinexpressionsuntersuchungen.............................................................................35 2.2.4 Metabolismusuntersuchungen....................................................................................40
3.1 Genexpression..............................................................................................................45 3.1.1 Qualität und Quantität der isolierten RNA..................................................................45 3.1.2 RT-PCR ..................................................................................................................47
3.2 Proteinexpression.........................................................................................................56 3.2.1 Poolgewichte und Bestimmung des mikrosomalen Proteingehaltes..............................56 3.2.2 Western blot.............................................................................................................56
9.1 Daten der Patienten für die Genexpression.................................................................. I 9.2 Daten der Patienten für die mikrosomalen Pools ........................................................II 9.3 Liste der verwendeten Primer....................................................................................VII 9.4 Liste der verwendeten Primär- und Sekundärantikörper.......................................... IX 9.5 Agarosegele und graphische Darstellung der Genexpression....................................X 9.6 Darstellung der Western blots ..............................................................................XLVII 9.7 HPLC-Chromatogramme von Loteprednol-Etabonat (LE) und seinen Metaboliten nach Inkubation menschlicher Nasenmuschelmikrosomen.........................................L
9.7.1 1. Versuchsabschnitt (Inkubation bei verschiedenen Inkubationszeiten): Serie 1 ...................................................................................................................... L 9.7.2 1. Versuchsabschnitt (Inkubation bei verschiedenen Inkubationszeiten): Serie 2 ....................................................................................................................LII 9.7.3 2. Versuchsabschnitt (Inkubation mit und ohne Glucuronidase-Zusatz) ...................LVII
9.8 HPLC-Chromatogramme von Testosteron und seinen Metaboliten nach Inkubation menschlicher Nasenmuschelmikrosomen..............................................LXI 9.9 Vorkommen von Enzymen in der respiratorischen Nasenschleimhaut (NM) bei verschiedenen Spezies......................................................................................LXIV
1. Einleitung 1
1. Einleitung
Die nasale Arzneistoffapplikation ist aufgrund der leichten Zugänglichkeit und der guten
Durchblutung der Nasenschleimhaut nicht nur für lokal wirksame, sondern auch für
systemisch wirksame Arzneimittel attraktiv. Trotz des wachsenden Interesses der
pharmazeutischen Industrie an der nasalen Applikationsform ist die menschliche
Nasenschleimhaut bislang kaum hinsichtlich ihrer Ausstattung an Arzneistoff-
metabolisierenden Enzymen untersucht worden, was u.a. in der schwierigen Verfügbarkeit
menschlichen Nasenschleimhautgewebes für wissenschaftliche Untersuchungen begründet
sein dürfte. Ziel dieser Arbeit war es deshalb, die menschliche respiratorische
Nasenschleimhaut bezüglich vorhandener Enzymsysteme sowie deren metabolischen
Kompetenz näher zu charakterisieren. Im Fokus stand dabei der Nachweis der verschiedenen
Isoformen des Cytochrom P450 Monooxygenasesystemes (CYPs), der wichtigsten
Arzneistoff-metabolisierenden Enzymfamilie. Da das Cytochrom P450-System durch
epigenetische Faktoren beeinflusst wird, wurde zusätzlich der Einfluss von Geschlecht und
Raucher-Status auf das Genexpressionsmuster mitberücksichtigt. Darüber hinaus wurde die
Verstoffwechselung des Glucocorticoids Loteprednol-Etabonat (LE) untersucht, welches sich
derzeit in der klinischen Phase der Zulassung für die Behandlung allergischer
Atemwegserkrankungen befindet (Szelenyi and Pahl, 2002). Damit sollte geprüft werden, ob
und in welchem Ausmaß eine metabolische Inaktivierung durch die in der menschlichen
Nasenschleimhaut vorhandenen Enzymsysteme erfolgt und ob dieser Arzneistoff somit
potentiell für die nasale Applikation zur lokalen Behandlung in Frage käme.
Im Folgenden werden zunächst die anatomischen Grundlagen der oberen Atemwege und der
Nasenmuscheln, von denen die untersuchte Nasenschleimhaut stammt, beschrieben.
Anschließend wird der zelluläre Aufbau der respiratorischen Nasenschleimhaut dargestellt. Es
folgen Physiologie und Funktionen der oberen Atemwege sowie die Funktion der
Nasenschleimhaut in der Biotransformation. Schließlich wird die nasale Applikation von
Arzneimitteln erläutert, so dass über die medikamentöse Therapie allergischer
Atemwegserkrankungen der Bogen zu den Glucocorticoiden und dem Arzneistoff
Loteprednol-Etabonat geschlossen wird.
1. Einleitung 2
1.1 Anatomie der oberen Atemwege und der Nasenmuschel
Die Nasenschleimhaut ist Teil des Respirationsapparates, der sich in die folgenden drei
Polymerase sowie 2 µl der jeweiligen 10 µM Primergebrauchslösung ( je 10 µl 5´ bzw. 3´ Primer auf
80 µl A. bidest.) wurden pro Ansatz 1 µl cDNA hinzugegeben und die Reaktion im Thermocycler für
15 min bei 95°C gestartet. Für die zyklische Amplifizierung wurden folgende Bedingungen gewählt:
Aktivierung der Polymerase 15 min bei 95°C, Denaturierung 45 s bei 95°C, Annealing 60 s mit
primerspezifischen Temperaturen (siehe Anhang Seite VII bis VIII), Elongation 60 s bei 72°C. Je
nach Oligomer wurden unterschiedliche Zyklenzahlen verwendet. Im Anschluss an den letzten Zyklus
erfolgte stets eine Reaktion für 7 min bei 72°C sowie ein Herunterkühlen des Gerätes auf 4°C zur
Konservierung der Proben.
Parallel zu den Proben wurden bei der PCR jeweils eine Leber- und eine Negativkontrolle
mitgeführt. Bei der Leberkontrolle handelte es sich um cDNA, die aus RNA humaner
Leberzellkulturen durch reverse Transkription gewonnen wurde. Leber wurde als Kontrolle
verwendet, da es sich bei der Leber um dasjenige Organ handelt, in dem die meisten Cytochrom
P450 Monooxygenasen exprimiert sind. Nicht in der Leber exprimiert sind dagegen die Cytochrome
2A13 (Koskela et al., 1999; Su et al., 2000), 2F1 (Carr et al., 2003; Chen et al., 2002; Ding and
Kaminsky, 2002, Nishimura et al., 2003), 2S1 (Rylander et al., 2001), 3A5 (Hukkanen et al.,
2003), 4B1 (Nhamburo et al., 1989; Nishimura et al., 2003) sowie die Enzyme FMO2 (Dolphin et
al., 1998) und UGT 2A1 Jedlitschky et al., 1999). Aus methodischer Sicht wurde damit in Kauf
genommen, dass nicht bei allen untersuchten Genen in der Leberkontrolle RT-PCR Amplifikate
nachgewiesen werden konnten. Bei der Negativkontrolle wurde anstelle der cDNA 1 µl A. bidest.
eingesetzt.
2. Material und Methoden 34
2.2.2.3 Linearitätsnachweis
Um den linearen Amplifikationsabschnitt zu gewährleisten, erfolgte vor der eigentlichen PCR für
jeden Primer eine Primereinstellung mit einem cDNA-Mix aller Proben, welcher pro Oligomer bei
30, 33, 36 und 39 Zyklen getestet wurde. Beispielhaft sind nachfolgend die Linearitäten einiger
Primer graphisch dargestellt.
Abbildung 9: Linearitätsnachweis für die Primer CYP 4B1, UGT 2A1, FMO 2, FMO 3, PPAR α und PPAR γ.
Dargestellt sind die an der Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA) gemessenen Lichtwerte bei
jeweils 30, 33, 36 und 39 Amplifikationszyklen.
CYP 4B1
0
5000
10000
15000
20000
25000
30 Zyklen 33 Zyklen 36 Zyklen 39 Zyklen
Lichtwerte
y = 7909,9x - 10609R2 = 0,9934
UGT 2A1
0
5000
10000
15000
20000
25000
30 Zyklen 33 Zyklen 36 Zyklen 39 Zyklen
Lichtwerte
y = 4183,5x + 3351,5R2 = 0,9982
FMO 2
0
10000
20000
30000
40000
50000
60000
70000
80000
90000
30 Zyklen 33 Zyklen 36 Zyklen 39 Zyklen
Lichtwerte
y = 34756x - 56596R2 = 0,9935
FMO 3
0
50000
100000
150000
200000
250000
30 Zyklen 33 Zyklen 36 Zyklen 39 Zyklen
Lichtwerte
y = 55290x - 31575R2 = 0,9976
PPAR a
0
10000
20000
30000
40000
50000
60000
70000
80000
30 Zyklen 33 Zyklen 36 Zyklen 39 Zyklen
Lichtwerte
y = 29092x - 44975R2 = 1
PPAG g
0
5000
10000
15000
20000
25000
30000
35000
30 Zyklen 33 Zyklen 36 Zyklen 39 Zyklen
Lichtwerte
y = 11013x - 14255R2 = 0,9975
CYP 4B1
0
5000
10000
15000
20000
25000
30 Zyklen 33 Zyklen 36 Zyklen 39 Zyklen
Lichtwerte
y = 7909,9x - 10609R2 = 0,9934
UGT 2A1
0
5000
10000
15000
20000
25000
30 Zyklen 33 Zyklen 36 Zyklen 39 Zyklen
Lichtwerte
y = 4183,5x + 3351,5R2 = 0,9982
FMO 2
0
10000
20000
30000
40000
50000
60000
70000
80000
90000
30 Zyklen 33 Zyklen 36 Zyklen 39 Zyklen
Lichtwerte
y = 34756x - 56596R2 = 0,9935
FMO 3
0
50000
100000
150000
200000
250000
30 Zyklen 33 Zyklen 36 Zyklen 39 Zyklen
Lichtwerte
y = 55290x - 31575R2 = 0,9976
PPAR a
0
10000
20000
30000
40000
50000
60000
70000
80000
30 Zyklen 33 Zyklen 36 Zyklen 39 Zyklen
Lichtwerte
y = 29092x - 44975R2 = 1
PPAG g
0
5000
10000
15000
20000
25000
30000
35000
30 Zyklen 33 Zyklen 36 Zyklen 39 Zyklen
Lichtwerte
y = 11013x - 14255R2 = 0,9975
2. Material und Methoden 35
2.2.2.4 Auswertung der Amplifikate
Zur amplifizierten cDNA wurden 6 µl 6x DNA-loading buffer – bestehend aus 40 mg
Bromphenolblau, 20 mg Xylencyanol, 100,64 g Glycerin ad 200 ml A. bidest. - hinzugegeben und je
Probe 10 µl in eine Kammer auf einem 1,5%igen Agarosegel (in 100 ml 1x TAE-Puffer, versetzt mit
1 µl Ethidiumbromid) aufgetragen. Der Größenkontrolle diente dabei der in die jeweils erste Kammer
gegebene DNA-Molekulargewichtsmarker (nachfolgend Ladder genannt). Nach 45-minütiger
Auftrennung der cDNA bei 120 V in der Elektrophoresekammer erfolgte die Darstellung mittels
UV-Licht an der Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA). Durch die
Verwendung spezifischer Primer ausreichender Länge und die Überprüfung der erwarteten bp-Länge
konnten die Amplifikate ausreichend verifiziert werden. Eine eigenständige Verifizierung in Form
einer Sequenzierung oder eines Restriktionsenzymverdaus wurde nicht durchgeführt.
Für die Auswertung wurden die Bandenstärken der PCR-Produkte der zu untersuchenden Gene mit
der 1D-Image Analysis Software für Windows Version 3.5.3B geldensitrometrisch ermittelt und die
Mittelwerte sowie Standardabweichungen aller Kandidatengene für die Raucher und die Nicht-
Raucher, sowie die männlichen und weiblichen Patienten berechnet. Die statistische
Signifikanzanalyse wurde mittels Mathematica4.2 der Wolfram Research, Inc. (www.wolfram.com)
durchgeführt, wobei das Programmpaket „Statistics´HypothesisTests´“ mit dem Programm
„MeanDifferenceTest“ und der Option TwoSided->True zur Anwendung kam. Voraussetzung für
die Anwendbarkeit dieses Tests ist das Vorliegen einer Normalverteilung, was vorab mit dem
Shapiro-Wilk-Test gesondert überprüft wurde.
Gemäß SOP wurde pro Patient und Primer eine RT-PCR durchgeführt, weshalb weder ein Intra-,
noch ein Inter-Assay Variationskoeffizient angegeben werden kann.
2.2.3 Proteinexpressionsuntersuchungen
Die Experimente zur Untersuchung der Proteinexpression wurden innerhalb des Fraunhofer Institutes
für Toxikologie und Experimentelle Medizin in den Räumen T2.03, T2.05, T2.09 und T2.033
durchgeführt.
2. Material und Methoden 36
2.2.3.1 Herstellung der Pufferlösungen
KCl-Puffer 0,15 M: 11,18 g KCl
ad 1 l A. bidest.
10x SDS-Laufpuffer 150g Tris
720g Glycin
50g SDS
ad 5 l A. bidest.
1x SDS-Laufpuffer 100 ml 10x SDS-Laufpuffer
900 ml A. bidest.
10x TBS-Puffer 121g Tris
400g NaCl
ad 5 l A. bidest.
mit 1 M HCl auf pH = 7,6 eingestellt
1x TBS-Puffer ohne Tween 100 ml 10x TBS-Puffer
900 ml A. bidest.
1x TBS-T 0,1% 1000 ml 1x TBS-Puffer ohne Tween
1 ml Tween20
10x Transfer-Puffer 151,5g Tris
720g Glycin
ad 5 l A. bidest.
1x Transfer-Puffer 100 ml 10x Transfer-Puffer
900 ml A. bidest.
pH = 8,3
TRIS-Stock 0,1 M: 6,35 g Trizma HCl
1,18 g Trizma Base
ad 500 ml A. bidest.
mit 1 M HCl auf pH = 7,4 eingestellt
2. Material und Methoden 37
TRIS-Sucrose-Puffer: 42,79 g Sucrose
100 ml TRIS-Stock
0,93 g EDTA
ad 500 ml A. bidest.
2.3.3.2 Isolation mikrosomaler Proteine durch Ultrazentrifugation
Aufgrund der geringen Gewebemengen mussten die Nasenmuscheln mehrerer Patienten gepoolt
werden, um für die nachfolgenden proteinanalytischen und metabolischen Untersuchungen
ausreichende Mengen an mikrosomalem Protein zu erhalten. So wurden insgesamt 15 Pools aus den
Nasenmuscheln von drei bis vierzehn Patienten gebildet (Patientendaten zu den einzelnen Pools siehe
Anhang Seite II bis VI). Eine Übersicht über Art und nachfolgende Verwendung der mikrosomalen
Pools gibt Abbildung 10.
Pool Art des Pools
Anzahl der
Patienten
WB LE I LE II Testost. EROD
60 min
120 min
mit Gluc.
ohne Gluc.
1 M-NR 5 X X 1 - - X - 2 M-NR 5 - X 1 X 2 - - - - 4 M-NR 6 X X 2 X 1 - - X - 5 M-NR 6 - X 2 X 1 - - - X 6 W-NR 6 X X 2 - - - X X 7 M-R 6 X X 2 X 1 - - - X 8 W-R 3 X X 2 - - - - - 9 M-NR 14 X X 2 X 2 - - X X 10 M-R 6 X X 2 X 2 - - X X 11 W-NR 5 X X 2 X 2 - - - - 12 M-NR 10 - - - X X - - 13 M-R 7 - - - X X - - 14 W-NR 10 - - - X X - - 15 W-R 5 - - - X X - - 16 W-? 4 - - - X X - -
Abbildung 10: Art und Verwendung der mikrosomalen Pools
Abkürzungen: EROD = Ethoxyresorufin-O-deethylase; LE-I = Loteprednol-Etabonat-Metabolismus Teil I
(verschiedene Inkubationszeiten) mit 1 = 1. Versuchsserie und 2 = 2. Versuchsserie; LE-II = Loteprednol-Etabonat-
Metabolismus Teil II (mit und ohne Glucuronidase-Zusatz); M = männlich; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher;
Testost. = Testosteron-Metabolismus; W = weiblich; WB = Western blot.
2. Material und Methoden 38
Nach Bestimmung der Poolgewichte wurden die jeweiligen Organpools in der dreifachen Menge
0,15 M KCl-Puffer mit einer Schere zerkleinert und anschließend mit dem Ultra Turrax
homogenisiert. Das gewonnene Homogenat wurde in ein Polycarbonatröhrchen gefüllt, mit 0,15 M
KCl-Puffer aufgefüllt und für 30 min bei 15.000 Upm und 4°C in der Ultrazentrifuge Optima LE-
80K (Beckmann Coulter, Palo Alto, USA) zentrifugiert. Der Überstand wurde entnommen und für
60 min bei 55.000 Upm und 4°C erneut zentrifugiert. Das entstandene Pellet wurde in einigen
Millilitern 0,15 M KCl-Puffer aufgenommen und im Gewebehomogenisator Dounce (7ml)
homogenisiert. Die erhaltene Suspension wurde nach Auffüllen mit 0,15 M KCl-Puffer nochmals für
60 min bei 55.000 Upm und 4°C zentrifugiert und das gewonnene Pellet in 500 µl TRIS-Sucrose-
Puffer aufgenommen und im Gewebehomogenisator Dounce (1ml) homogenisiert. 10 µl wurden für
die anschließende Proteinbestimmung eingesetzt, der Rest bei –80°C eingefroren.
2.2.3.3 Proteinbestimmung nach Smith et al. (1985)
Die Bestimmung des Gesamtproteingehaltes wurde nach der Methode von Smith et al. (1985)
durchgeführt. Hierzu wurde von jedem Pool eine Verdünnungsreihe (1:100 bis 1:1000) hergestellt.
Zur Quantifizierung des Proteingehaltes wurde vor jeder Probenmessung eine Kalibriergerade aus
bovinem Serumalbumin (BSA) erstellt. Alle Messungen erfolgten als Doppelbestimmungen und
wurden in einer 96-Well-Mikrotiterplatte durchgeführt, wobei pro Kavität 100 µl Probe und 100 µl
frisch angesetzte Färbelösung - bestehend aus 1 Teil 4% CuSO4 und 49 Teilen Bicinchoninic Acid -
eingesetzt wurde. Zur Beschleunigung der Reaktion wurde die Mikrotiterplatte 30 min bei 60°C im
Wärmeschrank inkubiert. Die Messung des Proteingehaltes erfolgte bei 550 nm mittels eines ELISA
Reader Dynatech MR5000 (Dynatech, Ohio, USA).
2.3.3.4 Proteinexpression ausgewählter CYPs
2.3.3.4.1 Auftrennung der Proteine mittels 1D-SDS-Polyacrylamidgelelektrophorese
Die Natriumdodecylsulfat-Polyacrylamidgelelektrophorese (SDS-PAGE) wurde nach der Methode
von Laemmli (1970) durchgeführt. Die mikrosomalen Proteine von acht Pools wurden entsprechend
ihres Molekulargewichtes mittels 1D-SDS-PAGE aufgetrennt, auf eine PVDF-Membran transferiert
und durch Inkubation mit einem Primär- und Sekundärantikörper die Cytochrome 1A1, 2A, 2B6,
2E1, 3A4 und 3A5 nachgewiesen.
2. Material und Methoden 39
Pro Pool wurden 45 µg mikrosomales Protein auf ein Volumen von 12 µl eingestellt, mit je 4 µl Roti
-Load1 4x-Konz. versetzt und 5 min bei 95°C inkubiert. Auf die erste Spur des 12%igen
Polyacrylamidgeles wurde ein Marker – bestehend aus 5 µl Precision blue protein standard
prestained und 0,5 µl Chemicon ECL – aufgetragen, auf die zweite Spur eine Positivkontrolle
(humane Lebermikrosomen). Zur besseren Auflösung der Proteinbanden wurden die Proben auf ein
Sammelgel aufgetragen, welches sich über dem eigentlichen Trenngel befand. Das Trenngel bestand
aus 3 ml 30% Acrylamid / 0,8% Bisacrylamid, 1,875 ml 1,5 M Tris pH 8,8, 2,55 ml A. bidest. und
37,5 µl 20% SDS, das Sammelgel aus 850 µl 30% Acrylamid / 0,8% Bisacrylamid, 625 µl 1 M Tris
pH 6,8, 3,47 ml A. bidest. und 25 µl 20% SDS. Zum Start der Polymerisierungsreaktion wurde dem
Trenngel 75 µl 10% Ammoniumperoxodisulfat und 7,5 µl TEMED, dem Sammelgel 50 µl 10%
Ammoniumperoxodisulfat und 5 µl TEMED hinzugegeben. Die Elektrophorese erfolgte bei
Raumtemperatur in einer Minigel-Elektrophoresekammer der Firma Biometra unter Zugabe von 1x
SDS-Laufpuffer. Anfänglich betrug die Stromstärke 20 mA pro Gel, nach Erreichen des Trenngels
wurde sie für etwa 60 bis 90 min auf 25 mA pro Gel erhöht.
2.3.3.4.2 Darstellung der Proteine mittels Western blot
Direkt im Anschluss an die Elektrophorese wurde das Gel aus der Elektrophoresekammer
entnommen und 10 min in 1x Transfer-Puffer getränkt. Parallel dazu wurde die PVDF-Membran 15
s in Methanol aktiviert, 2 min in A. bidest. gewässert und ebenfalls 10 min in 1x Transfer-Puffer
getränkt. Nach Beschicken der Kassette und Einsetzen der Kassette in die Blotkammer erfolgte das
Blotten über Nacht bei 90 mA und 4°C auf einem Magnetrührer Heidolph MR3000 der Firma
Heidolph Instruments GmbH & Co.KG.
Zur Sättigung freier, unspezifischer Bindungsstellen wurde die PVDF-Membran für 1 h bei
Raumtemperatur auf einem Schüttler (Roto-Shake Genie der Firma Scientific Industries, Inc.) mit
Blocking-Reagenz – bestehend aus neun Teilen 1x TBS-Puffer ohne Tween und einem Teil
Rotiblock, 10x Konzentrat – versetzt. Nach drei fünfminütigen Waschschritten mit Waschpuffer (1x
TBS-T 0,1%) wurde die Inkubation mit dem Primärantikörper, welcher in 10 ml Diluent – bestehend
aus 99 Teilen 1x TBS-Puffer ohne Tween und einem Teil Rotiblock, 10x Konzentrat – verdünnt
wurde (Angaben zu den verwendeten Primär- und Sekundärangaben und deren Verdünnungen siehe
Anhang Seite IX), für 1 h bei Raumtemperatur auf dem Schüttler durchgeführt. Nach erneutem
Waschen folgte die Inkubation mit dem Sekundärantikörper in analoger Weise. Anschließend wurde
die PVDF-Membran wieder gewaschen und in frisch angesetztem Entwicklungsreagenz 1 min bei
Raumtemperatur geschwenkt. Nach etwa 5 min erfolgte die Exposition an der Kodak Digital
2. Material und Methoden 40
Science Image Station 440 CF (Kodak, USA). Die Lumineszenz wurde nach 1 und nach 10 min
Expositionsdauer gemessen.
2.2.4 Metabolismusuntersuchungen
Die Inkubationsexperimente wurden in den Laboren T2.06, T2.07, T2.08 sowie T2.09 des Fraunhofer
Institutes für Toxikologie und Experimentelle Medizin durchgeführt.
2.2.4.1 Metabolismus von Loteprednol-Etabonat (LE)
Um die Verstoffwechselung von Loteprednol-Etabonat, dem ersten Vertreter der sog. Soft Steroide
(Szelenyi and Pahl, 2002), zu untersuchen, wurde 14C-Loteprednol-Etabonat als Substrat verwendet
und das entstehende Metabolitenprofil mittels Radio-HPLC bestimmt. Die Messung des
Loteprednol-Etabonats und seiner Hauptmetaboliten wurde dabei durch Frau Diplom-Chemikerin
Qiong Luo am Fraunhofer Institut für Toxikologie und Experimentelle Medizin durchgeführt.
Abbildung 11: Strukturformel von Loteprednol-Etabonat (LE), dem ersten Vertreter der sog. Soft Steroide.
[aus: Bodor N, Recent advances in retrometabolic design approaches. J. Control. Release, 62: 209-222, 1999.]
2. Material und Methoden 41
2.2.4.1.1 1.Versuchsabschnitt: Inkubation bei verschiedenen Inkubationszeiten
Im ersten Versuchsabschnitt erfolgten die Inkubationen der einzelnen mikrosomalen
Nasenmuschelpools sowie der mitgeführten Negativ- (nur Puffer und Substrat) und Positivkontrollen
bei 60 und/oder 120 min (siehe Abbildung 10). Die Versuche wurden dabei in zwei Versuchsserien
aufgeteilt, wobei in der ersten Serie Rattenlebermikrosomen, in der zweiten humane
Lebermikrosomen als Positivkontrolle verwendet wurden. Die konzentrierte Mikrosomensuspension
wurde mit 0,1 M TRIS-Puffer auf 1 mg mikrosomales Protein / ml eingestellt und mit 1 mM β-
NADPH versetzt. Zum Start der Reaktion wurde je Ansatz Loteprednol-Etabonat (25 µM) mit einer
Aktivität von 1 µCi/ml hinzugegeben und die Reaktionsansätze im Wasserbad bei 37°C 60 bzw. 120
min inkubiert. Im Anschluss wurden die Proben für 5 min bei 8.000 Upm und 4°C zentrifugiert und
bis zur weiteren Aufarbeitung bei –80°C schockgefroren.
Die Metaboliten wurden durch Festphasenextraktion nach folgender Methode gewonnen: Zunächst
wurden die Kartuschen (Waters Oasis HLB 3cc (60 mg) Extraction Cartridges der Firma Waters
Corporation, USA) mit 3 ml Ethanol und 2 ml A. bidest. konditioniert, dann die Proben aufgetragen.
Nach aufeinanderfolgenden Waschschritten mit 1 ml Ethanol (15%), 1 ml A. bidest. und 1 ml
Ethylacetat/Heptan (2:98) sowie Trocknen der Säule erfolgte die Elution mit 3 ml Ethylacetat/Heptan
(35:65) und 1 ml Ethylacetat. Anschließend wurde das Eluat unter Stickstoffstrom bei
Raumtemperatur bis zur vollständigen Trocknung eingedampft und das erhaltene Extrakt in 40 µl
mobiler Phase – bestehend aus Methanol und Essigsäure (0,5%, pH 3) im Verhältnis 62:38 –
aufgenommen.
Bei einem Injektionsvolumen von 10 µl und einer Flussrate von 0,3 ml / min wurden die Metaboliten
auf einer Spherisorb ODS-2-Säule (250 x 4 mm, Partikelgröße 3 µm, Latek, Eppelheim) bei 25°C
chromatographisch aufgetrennt. Die Trennung der Metaboliten erfolgte mit folgendem Gradienten der
mobilen Phase:
I. 0-9 min mit 62% Methanol, 38 % Essigsäure (0,5%, pH 3)
II. 9-16 min mit 74% Methanol, 26 % Essigsäure (0,5%, pH 3)
III. 16-39 min mit 74% Methanol, 26 % Essigsäure (0,5%, pH 3)
IV. 39-43 min mit 62% Methanol, 38 % Essigsäure (0,5%, pH 3)
V. 43-55 min mit 62% Methanol, 38 % Essigsäure (0,5%, pH 3)
Der Detektion diente ein Flow Scintillation Analyzer 500TR Series der Firma Packard BioScience
Company, USA.
2. Material und Methoden 42
2.2.4.1.2 2. Versuchsabschnitt: Inkubation mit und ohne Glucuronidase-Zusatz
Durch zusätzlichen Glucuronidase-Verdau können Glucuronide nachgewiesen werden. Aus diesem
Grund wurden die Proben in doppelter Menge angesetzt, im Anschluss an die LE-Inkubation
gesplittet und die eine Hälfte mit, die andere Hälfte ohne Glucuronidase behandelt. Parallel zu den
Organpools wurden zwei Positiv- (humane Lebermikrosomen) und zwei Negativkontrollen (nur
Puffer und Substrat) mitgeführt (jeweils mit und ohne Glucuronidase-Zusatz).
Auch hier wurde – mit Ausnahme von Pool 15 - der mikrosomale Proteingehalt mit 0,1 M TRIS-
Stock auf 1 mg / ml eingestellt und 1 mM β-NADPH zugesetzt. Bei Pool 15 musste die
Proteinkonzentration aufgrund der geringen Proteinausbeute auf 0,5 mg / ml halbiert werden. Nach
Zugabe von 25 µM Loteprednol-Etabonat mit einer Aktivität von 1 µCi/ml wurden die Proben im
Wasserbad bei 37°C 120 min inkubiert und anschließend 5 min bei 4°C und 8.000 Upm
zentrifugiert. Die Überstände wurden abgenommen, halbiert und eine Hälfte mit, die andere ohne β-
Glucuronidase inkubiert. Die Aliquots erhielten hierzu das gleiche Volumen an
Ammoniumacetatpuffer (200 mM, pH 4,5) unter Zugabe von 5 mg / ml β-Glucuronidase bzw. ohne
β-Glucuronidase-Zusatz (Kontrollen) und wurden über Nacht bei 37°C inkubiert.
Die Festphasenextraktion der Inkubate sowie die anschließende HPLC-Messung erfolgten wie unter
2.2.4.1.1 beschrieben. Vor dem HPLC-Auftrag wurden jeweils 5% des Probenvolumens
abgenommen, mit je 4 ml Rotiszint versetzt, gemischt und die Radioaktivität des 14C-Isotops jeweils
eine Minute als DPM (Desintegrations per Minute) im LS 6500 Multi-Purpos Scintillation Counter
der Firma Beckmann Coulter, Palo Alto, USA gemessen und für die Berechnung der Wiederfindung
eingesetzt.
2.2.4.2 Testosteron-Metabolismus
Testosteron wird von unterschiedlichen CYP-Isoformen stereo- und regioselektiv hydroxyliert und
liefert auf diese Weise Informationen über die Aktivität einzelner Isozyme. Pro Ansatz wurden 50
µM Testosteron eingesetzt. Zusätzlich wurde eine Negativ- (nur Puffer und Substrat) und eine
Positivkontrolle (humane Lebermikrosomen) mitgeführt. Der mikrosomale Proteingehalt wurde mit
0,1 M TRIS-Stock auf 0,5 mg / ml eingestellt und die Inkubation unter Zusatz von 1 mM β-
NADPH bei 37°C im Wasserbad durchgeführt. Nach 120 min wurden die Proben für 5 min bei
8.000 Upm und 4°C zentrifugiert und die Überstände und Pellets bei –80°C schockgefroren.
2. Material und Methoden 43
Von den Überständen wurden 900 µl abgenommen, mit jeweils 100 µl 2-Propanol, 5 ml Ethylacetat
sowie 1 µg 11-α-Hydroxyprogesteron als internem Standard versetzt und auf dem Rotoshake 20
min bei Raumtemperatur extrahiert. Zur Trennung der Phasen wurden die Proben 20 min bei
Raumtemperatur und 2.200 Upm zentrifugiert und die obere Ethylacetat-Phase mit den darin
gelösten Metaboliten unter Stickstoffstrom eingedampft. Zur HPLC-Messung wurden die Extrakte in
je 100 µl mobiler Phase (Wasser / Methanol / Acetonitril, 60/25/15, v/v/v) aufgenommen, von denen
jeweils 80 µl in das HPLC-System (Hewlett Packard HP Series 1100) injiziert wurden. Die mobile
Phase wurde durch eine HP 1100 Quaternary Pump mit einer Flussrate von 1 ml / min durch das
System gepumpt. Die chromatographische Auftrennung der Testosteronmetaboliten 6α-
Abbildung 30: Metabolismus von Loteprednol-Etabonat durch humane nasale Mikrosomen, 1.
Versuchsabschnitt (unterschiedliche Inkubationszeiten), 2. Serie: Inkubation bei 120 min. Radio-HPLC-
Ergebnisse dargestellt als prozentuale Peakfläche bezogen auf die Gesamtpeakfläche jedes
Chromatogramms.
3. Ergebnisse 61
Metabolit Relative Retentions-
zeit
Pool 1 (M-NR, 60 min)
Pool 2 (M-NR, 60 min)
Pool 4 (M-NR, 120 min)
Pool 5 (M-NR, 120 min)
Pool 7 (M-R,
120 min)
PK (60 min)
M 1 0.25 -- -- -- -- -- +
M 2 0.31 -- -- -- -- -- +
? 0.37 -- -- -- -- -- +
M 3 0.50 -- (+) -- -- -- +
M 5 0.59 -- (+) Ο -- -- +
M 8 0.78 Ο (+) Ο Ο Ο +
M 13 0.93 + + + + + + 14C-LE 1.00 + + + + + +
M 12 1.21 -- -- -- -- -- +
Abbildung 31: Metabolismus von Loteprednol-Etabonat durch humane nasale Mikrosomen, 1.
Versuchsabschnitt (unterschiedliche Inkubationszeiten), 1. Serie: Inkubation bei 60 und 120 min. Radio-
HPLC-Ergebnisse dargestellt als nachgewiesen oder nicht nachgewiesen, korrigiert um die jeweilige
Negativkontrolle.
+ Metabolit nachgewiesen, prozentuale Peakfläche > 25 % höher als die der Negativkontrolle (+) Metabolit nachgewiesen, prozentuale Peakfläche bis zu 25 % höher als die der Negativkontrolle Ο Metaboliten mit einer relativen Peakfläche ≤ Negativkontrolle -- Metaboliten nicht nachgewiesen ? Nicht identifizierte Peaks (Metaboliten).
Abbildung 37: Metabolismus von Loteprednol-Etabonat durch humane nasale Mikrosomen, 2.
Versuchsabschnitt (mit und ohne Glucuronidase-Zusatz) mit Glucuronidase-Zusatz . Radio-HPLC-
Ergebnisse dargestellt als prozentuale Peakfläche bezogen auf die Gesamtpeakfläche jedes
Chromatogramms.
3. Ergebnisse 67
Metabolit Relative Retentions-
zeit
Pool 12 (M-NR)
Pool 13 (M-R)
Pool 14 (W-NR)
Pool 15 (W-R)
Pool 16 (W-?)
PK
? 0.19 -- -- -- -- -- --
? 0.37 -- -- -- -- -- +
M 3 0.49 -- -- -- -- -- +
M 5 0.57 -- -- -- -- -- +
M 7 0.74 -- -- -- -- -- +
M 8 0.78 Ο Ο Ο (+) Ο Ο
M 13 0.93 Ο Ο Ο Ο Ο + 14C-LE 1.00 + + + + + +
Abbildung 38: Metabolismus von Loteprednol-Etabonat durch humane nasale Mikrosomen, 2.
Versuchsabschnitt (mit und ohne Glucuronidase-Zusatz) ohne Glucuronidase-Zusatz. Radio-HPLC-
Ergebnisse dargestellt als nachgewiesen oder nicht nachgewiesen, korrigiert um die Negativkontrolle.
+ Metabolit nachgewiesen, prozentuale Peakfläche > 25 % höher als die der Negativkontrolle (+) Metabolit nachgewiesen, prozentuale Peakfläche bis zu 25 % höher als die der Negativkontrolle Ο Metaboliten mit einer relativen Peakfläche ≤ Negativkontrolle -- Metaboliten nicht nachgewiesen ? Nicht identifizierte Peaks (Metaboliten).
9.4 Liste der verwendeten Primär- und Sekundärantikörper Primärantikörper Verdünnung Sekundärantikörper Verdünnung CYP 1A1 (Code MAb 1A3-03, rubitec GmbH, Bochum)
1 : 400 α-mouse (Code AP 160 P; Charge 20040081, Chemicon, Temecula, USA)
1 : 5.000
CYP 2A (Code sc-9896; Charge C280, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, USA)
1 : 100 α-sheep (Code AP 147 P; Charge 20021225, Chemicon, Temecula, USA)
1 : 10.000
CYP 2B6 (Code AB-1268; Charge 20120789, Chemicon, Temecula, USA)
1 : 4.000 α-sheep (Code AP 147 P; Charge 20021225, Chemicon, Temecula, USA)
1 : 10.000
CYP 2E1 (Code AB-1274; Charge 2210034, Chemicon, Temecula, USA)
1 : 2.000 α-sheep (Code AP 147 P; Charge 20021225, Chemicon, Temecula, USA)
1 : 10.000
CYP 3A4 (Code AB-1278; Charge 19101552, Chemicon, Temecula, USA)
1 : 1.000 α-sheep (Code AP 147 P; Charge 20021225, Chemicon, Temecula, USA)
1 : 10.000
CYP 3A5 (Code AB-1279; Charge 2103001, Chemicon, Temecula, USA)
1 : 1.000 α-rabbit (Code AP 132 P; Charge 20070556, Chemicon, Temecula, USA)
1 : 10.000
9. Anhang X
9.5 Agarosegele und graphische Darstellung der Genexpression CyclophillinA-Genexpression:
347 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung I: Cyclophillin A-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der Cyclophillin A-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
347 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
Cyclophillin A-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Cyclophillin A-Genexpression:
Lichtwerte, gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
347 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung I: Cyclophillin A-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der Cyclophillin A-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
347 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
Cyclophillin A-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Cyclophillin A-Genexpression:
Lichtwerte, gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
9. Anhang XI
GAPDH-Genexpression:
353 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung II: GAPDH-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der GAPDH-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
353 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
GAPDH-Genexpression:
Lichtwerte, gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
GAPDH-Genexpression:
Lichtwerte, gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
353 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung II: GAPDH-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der GAPDH-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
353 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
GAPDH-Genexpression:
Lichtwerte, gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
GAPDH-Genexpression:
Lichtwerte, gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
9. Anhang XII
CYP 1A1-Genexpression:
432 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung III: CYP 1A1-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der CYP 1A1-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
432 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
CYP 1A1-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
CYP 1A1-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
0
10.000
20.000
30.000
40.000
50.000
60.000
70.000
10.000
0
20.000
30.000
40.000
50.000
60.000
70.000
432 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung III: CYP 1A1-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der CYP 1A1-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
432 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
CYP 1A1-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
CYP 1A1-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
0
10.000
20.000
30.000
40.000
50.000
60.000
70.000
10.000
0
20.000
30.000
40.000
50.000
60.000
70.000
9. Anhang XIII
CYP 1B1-Genexpression:
301 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung IV: CYP 1B1-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der CYP 1B1-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
301 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
CYP 1B1-Genexpression:
Lichtwerte, gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
CYP 1B1-Genexpression:
Lichtwerte, gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
301 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung IV: CYP 1B1-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der CYP 1B1-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
301 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
CYP 1B1-Genexpression:
Lichtwerte, gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
CYP 1B1-Genexpression:
Lichtwerte, gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
9. Anhang XIV
CYP 2A6/7-Genexpression:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2
1151 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung V: CYP 2A6/7-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der CYP 2A6/7-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
1151 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
CYP 2A6/7-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
CYP 2A6/7-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
0
20.000
40.000
60.000
80.000
100.000
120.000
0
20.000
40.000
60.000
80.000
100.000
120.000
1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2
1151 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung V: CYP 2A6/7-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der CYP 2A6/7-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
1151 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
CYP 2A6/7-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
CYP 2A6/7-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
0
20.000
40.000
60.000
80.000
100.000
120.000
0
20.000
40.000
60.000
80.000
100.000
120.000
9. Anhang XV
CYP 2A13-Genexpression:
320 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung VI: CYP 2A13-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der CYP 2A13-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
320 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
0
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
CYP 2A13-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
CYP 2A13-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
20.000
40.000
60.000
80.000
100.000
120.000
140.000
20.000
40.000
60.000
80.000
100.000
120.000
140.000
320 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung VI: CYP 2A13-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der CYP 2A13-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
320 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
0
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
CYP 2A13-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
CYP 2A13-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
20.000
40.000
60.000
80.000
100.000
120.000
140.000
20.000
40.000
60.000
80.000
100.000
120.000
140.000
9. Anhang XVI
CYP 2B6-Genexpression:
357 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung VII: CYP 2B6-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der CYP 2B6-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
357 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
CYP 2B6-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
CYP 2B6-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
357 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung VII: CYP 2B6-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der CYP 2B6-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
357 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
CYP 2B6-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
CYP 2B6-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
9. Anhang XVII
CYP 2C8-Genexpression:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2
311 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung VIII: CYP 2C8-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der CYP 2C8-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
311 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
250.000
200.000
150.000
100.000
50.000
0
250.000
200.000
150.000
100.000
50.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
CYP 2C8-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
CYP 2C8-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2
311 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung VIII: CYP 2C8-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der CYP 2C8-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
311 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
250.000
200.000
150.000
100.000
50.000
0
250.000
200.000
150.000
100.000
50.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
CYP 2C8-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
CYP 2C8-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
9. Anhang XVIII
CYP 2C9-Genexpression:
437 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung IX: CYP 2C9-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der CYP 2C9-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
437 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
250.000
200.000
150.000
100.000
50.000
0
250.000
200.000
150.000
100.000
50.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
CYP 2C9-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
CYP 2C9-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
437 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung IX: CYP 2C9-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der CYP 2C9-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
437 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
250.000
200.000
150.000
100.000
50.000
0
250.000
200.000
150.000
100.000
50.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
CYP 2C9-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
CYP 2C9-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
9. Anhang XIX
CYP 2C18-Genexpression:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2
431 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung X: CYP 2C18-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der CYP 2C18-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
431 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
CYP 2C18-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
CYP 2C18-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2
431 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung X: CYP 2C18-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der CYP 2C18-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
431 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
CYP 2C18-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
CYP 2C18-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
9. Anhang XX
CYP 2C19-Genexpression:
431 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XI: CYP 2C19-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der CYP 2C19-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
431 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
250.000
200.000
150.000
100.000
50.000
0
250.000
200.000
150.000
100.000
50.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
CYP 2C19-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
CYP 2C19-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
431 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XI: CYP 2C19-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der CYP 2C19-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
431 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
250.000
200.000
150.000
100.000
50.000
0
250.000
200.000
150.000
100.000
50.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
CYP 2C19-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
CYP 2C19-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
9. Anhang XXI
CYP 2E1-Genexpression:
365 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XII: CYP 2E1-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der CYP 2E1-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
365 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
250.000
200.000
150.000
100.000
50.000
0
250.000
200.000
150.000
100.000
50.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
CYP 2E1-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
CYP 2E1-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
365 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XII: CYP 2E1-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der CYP 2E1-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
365 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
250.000
200.000
150.000
100.000
50.000
0
250.000
200.000
150.000
100.000
50.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
CYP 2E1-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
CYP 2E1-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
9. Anhang XXII
CYP 2F1-Genexpression:
283 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XIII: CYP 2F1-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der CYP 2F1-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
283 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
CYP 2F1-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
CYP 2F1-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
0
20.000
60.000
40.000
80.000
100.000
120.000
0
20.000
40.000
60.000
80.000
100.000
120.000
283 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XIII: CYP 2F1-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der CYP 2F1-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
283 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
CYP 2F1-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
CYP 2F1-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
0
20.000
60.000
40.000
80.000
100.000
120.000
0
20.000
40.000
60.000
80.000
100.000
120.000
9. Anhang XXIII
CYP 2J2-Genexpression:
389 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XIV: CYP 2J2-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der CYP 2J2-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
389 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
40.000
30.000
20.000
10.000
0
40.000
30.000
20.000
10.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
CYP 2J2-Genexpression:L
ichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
CYP 2J2-Genexpression:L
ichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
50.000
60.000
70.000
50.000
60.000
70.000
389 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XIV: CYP 2J2-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der CYP 2J2-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
389 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
40.000
30.000
20.000
10.000
0
40.000
30.000
20.000
10.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
CYP 2J2-Genexpression:L
ichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
CYP 2J2-Genexpression:L
ichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
50.000
60.000
70.000
50.000
60.000
70.000
9. Anhang XXIV
CYP 2S1-Genexpression:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2
312 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XV: CYP 2S1-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der CYP 2S1-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
312 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
CYP 2S1-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
CYP 2S1-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2
312 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XV: CYP 2S1-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der CYP 2S1-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
312 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
CYP 2S1-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
CYP 2S1-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
9. Anhang XXV
CYP 3A4-Genexpression:
324 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XVI: CYP 3A4-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der CYP 3A4-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
324 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
250.000
200.000
150.000
100.000
50.000
0
250.000
200.000
150.000
100.000
50.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
CYP 3A4-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
CYP 3A4-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
324 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XVI: CYP 3A4-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der CYP 3A4-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
324 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
250.000
200.000
150.000
100.000
50.000
0
250.000
200.000
150.000
100.000
50.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
CYP 3A4-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
CYP 3A4-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
9. Anhang XXVI
CYP 3A5-Genexpression:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2
472 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XVII: CYP 3A5-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der CYP 3A5-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
472 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
80.000
60.000
40.000
20.000
0
80.000
60.000
40.000
20.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
CYP 3A5-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
CYP 3A5-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2
472 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XVII: CYP 3A5-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der CYP 3A5-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
472 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
80.000
60.000
40.000
20.000
0
80.000
60.000
40.000
20.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
CYP 3A5-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
CYP 3A5-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
9. Anhang XXVII
CYP 4B1-Genexpression:
397 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XVIII: CYP 4B1-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der CYP 4B1-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
397 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
CYP 4B1-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
CYP 4B1-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
397 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XVIII: CYP 4B1-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der CYP 4B1-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
397 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
CYP 4B1-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
CYP 4B1-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
9. Anhang XXVIII
Epoxid-Hydrolase-Genexpression:
227 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XIX: Epoxid-Hydrolase-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der Epoxid-Hydrolase-Genexpression: Lichtwerte gemessen an derKodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
277 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
0
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
Epoxid-Hydrolase-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Epoxid-Hydrolase-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
20.000
40.000
60.000
80.000
100.000
120.000
140.000
20.000
40.000
60.000
80.000
100.000
120.000
140.000
227 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XIX: Epoxid-Hydrolase-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der Epoxid-Hydrolase-Genexpression: Lichtwerte gemessen an derKodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
277 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
0
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
Epoxid-Hydrolase-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Epoxid-Hydrolase-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
20.000
40.000
60.000
80.000
100.000
120.000
140.000
20.000
40.000
60.000
80.000
100.000
120.000
140.000
9. Anhang XXIX
FMO 2-Genexpression:
250 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XX: FMO2-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der FMO2-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
250 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
100.000
80.000
60.000
20.000
0
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
FMO2-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
FMO2-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA) 40.000
250 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XX: FMO2-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der FMO2-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
250 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
100.000
80.000
60.000
20.000
0
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
FMO2-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
FMO2-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA) 40.000
9. Anhang XXX
FMO 3-Genexpression:
301 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XXI: FMO3-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der FMO3-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
301 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
120.000
80.000
40.000
0
120.000
80.000
40.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
FMO3-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
FMO3-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
160.000
160.000
301 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XXI: FMO3-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der FMO3-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
301 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
120.000
80.000
40.000
0
120.000
80.000
40.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
FMO3-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
FMO3-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
160.000
160.000
9. Anhang XXXI
FMO 5-Genexpression:
500 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XXII: FMO5-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der FMO5-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
500 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
FMO5-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
FMO5-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
0
20.000
40.000
60.000
80.000
100.000
120.000
140.000
0
20.000
40.000
60.000
80.000
100.000
120.000
140.000
500 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XXII: FMO5-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der FMO5-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
500 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
FMO5-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
FMO5-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
0
20.000
40.000
60.000
80.000
100.000
120.000
140.000
0
20.000
40.000
60.000
80.000
100.000
120.000
140.000
9. Anhang XXXII
GST α2-Genexpression:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2
354 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XXIII: GST αα 2-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der GST αα 2-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
354 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
250.000
200.000
150.000
100.000
50.000
0
250.000
200.000
150.000
100.000
50.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
GST αα 2-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
GST αα2-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2
354 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XXIII: GST αα 2-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der GST αα 2-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
354 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
250.000
200.000
150.000
100.000
50.000
0
250.000
200.000
150.000
100.000
50.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
GST αα 2-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
GST αα2-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
9. Anhang XXXIII
GST µ1-Genexpression:
347 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XXIV: GST µ1-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der GST µ1-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
347 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
0
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
GST µ1-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
GST µ1-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
20.000
40.000
60.000
80.000
100.000
120.000
20.000
40.000
60.000
80.000
100.000
120.000
347 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XXIV: GST µ1-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der GST µ1-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
347 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
0
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
GST µ1-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
GST µ1-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
20.000
40.000
60.000
80.000
100.000
120.000
20.000
40.000
60.000
80.000
100.000
120.000
9. Anhang XXXIV
GST ρ1-Genexpression:
313 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XXV: GST ρ 1-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der GST ρ 1-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
313 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
GST ρ 1-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
GST ρ1-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
50.000
100.000
150.000
200.000
250.000
300.000
350.000
0
50.000
100.000
150.000
200.000
250.000
300.000
350.000
313 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XXV: GST ρ 1-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der GST ρ 1-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
313 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
GST ρ 1-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
GST ρ1-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
50.000
100.000
150.000
200.000
250.000
300.000
350.000
0
50.000
100.000
150.000
200.000
250.000
300.000
350.000
9. Anhang XXXV
UGT 1A1-Genexpression:
350 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XXVI: UGT 1A1-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der UGT 1A1-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
350 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
300.000
250.000
200.000
0
350.000
300.000
250.000
200.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
UGT 1A1-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
UGT 1A1-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
350.000
50.000
100.000
150.000
50.000
100.000
150.000
350 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XXVI: UGT 1A1-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der UGT 1A1-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
350 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
300.000
250.000
200.000
0
350.000
300.000
250.000
200.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
UGT 1A1-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
UGT 1A1-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
350.000
50.000
100.000
150.000
50.000
100.000
150.000
9. Anhang XXXVI
UGT 2A1-Genexpression:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2
297 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XXVII: UGT 2A1-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der UGT 2A1-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
297 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
200.000
150.000
100.000
50.000
0
200.000
150.000
100.000
50.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
UGT 2A1-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
UGT 2A1-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2
297 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XXVII: UGT 2A1-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der UGT 2A1-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
297 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
200.000
150.000
100.000
50.000
0
200.000
150.000
100.000
50.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
UGT 2A1-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
UGT 2A1-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
9. Anhang XXXVII
AhR-Genexpression:
284 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XXVIII: AhR-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der AhR-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
284 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
AhR-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
AhR-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
284 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XXVIII: AhR-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der AhR-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
284 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
AhR-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
AhR-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
9. Anhang XXXVIII
CAR β -Genexpression:
350 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XXIX: CAR ß -Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der CAR ß-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
350 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
100.000
75.000
50.000
25.000
0
100.000
175.000
50.000
25.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
CAR ß-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
CAR ß-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
125.000
150.000
125.000
150.000
350 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XXIX: CAR ß -Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der CAR ß-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
350 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
100.000
75.000
50.000
25.000
0
100.000
175.000
50.000
25.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
CAR ß-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
CAR ß-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
125.000
150.000
125.000
150.000
9. Anhang XXXIX
LXR α -Genexpression:
351 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XXX: LXR α -Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der LXR α -Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
351 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
70.000
60.000
50.000
40.000
30.000
20.000
10.000
0
70.000
60.000
50.000
40.000
30.000
20.000
10.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
LXR α -Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
LXR α-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
351 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XXX: LXR α -Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der LXR α -Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
351 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
70.000
60.000
50.000
40.000
30.000
20.000
10.000
0
70.000
60.000
50.000
40.000
30.000
20.000
10.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
LXR α -Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
LXR α-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
9. Anhang XL
PXR-Genexpression:
351 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XXXI: PXR-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der PXR-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
351 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
0
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
PXR-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
PXR-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
20.000
40.000
60.000
80.000
100.000
120.000
140.000
20.000
40.000
60.000
80.000
100.000
120.000
140.000
351 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XXXI: PXR-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der PXR-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
351 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
0
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
PXR-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
PXR-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
20.000
40.000
60.000
80.000
100.000
120.000
140.000
20.000
40.000
60.000
80.000
100.000
120.000
140.000
9. Anhang XLI
PPAR α -Genexpression:
357 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XXXII: PPAR α-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der PPAR α-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
357 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
PPAR α-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
PPAR α-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
357 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XXXII: PPAR α-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der PPAR α-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
357 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
PPAR α-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
PPAR α-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
9. Anhang XLII
PPAR γ-Genexpression:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2
302 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XXXIII: PPAR γ -Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der PPAR γ -Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
302 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
25.000
20.000
15.000
10.000
5.000
0
25.000
20.000
15.000
10.000
5.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
PPAR γ -Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
PPAR γ-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2
302 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XXXIII: PPAR γ -Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der PPAR γ -Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
302 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
25.000
20.000
15.000
10.000
5.000
0
25.000
20.000
15.000
10.000
5.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
PPAR γ -Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
PPAR γ-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
9. Anhang XLIII
IL-1β -Genexpression:
294 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XXXIV: IL-1β -Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der IL-1β -Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
294 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
60.000
50.000
40.000
30.000
20.000
10.000
0
60.000
50.000
40.000
30.000
20.000
10.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
IL-1β -Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
IL-1β-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
294 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XXXIV: IL-1β -Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der IL-1β -Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
294 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
60.000
50.000
40.000
30.000
20.000
10.000
0
60.000
50.000
40.000
30.000
20.000
10.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
IL-1β -Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
IL-1β-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
9. Anhang XLIV
IL-6-Genexpression:
371 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XXXV: IL-6-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der IL-6-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
371 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
60.000
50.000
40.000
30.000
20.000
10.000
0
60.000
50.000
40.000
30.000
20.000
10.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
IL-6-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
IL-6-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
371 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XXXV: IL-6-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der IL-6-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
371 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
60.000
50.000
40.000
30.000
20.000
10.000
0
60.000
50.000
40.000
30.000
20.000
10.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
IL-6-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
IL-6-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
9. Anhang XLV
IL-8-Genexpression:
391 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XXXVI: IL-8-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der IL-8-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
391 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
200.000
150.000
100.000
50.000
0
200.000
150.000
100.000
50.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
IL-8-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
IL-8-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
391 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XXXVI: IL-8-Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der IL-8-Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
391 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
200.000
150.000
100.000
50.000
0
200.000
150.000
100.000
50.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
IL-8-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
IL-8-Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
9. Anhang XLVI
TNF α -Genexpression:
599 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XXXVII: TNFα -Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der TNFα -Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
599 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
TNFα -Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
TNFα-Genexpression:L
ichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
599 bp
Ladder LK NK 1 12 4 53 2 3 4 5
Abbildung XXXVII: TNFα -Genexpression bei Rauchern (A) und Nicht-Rauchern (B):jeweils oben: Darstellung des 1,5 %igen Agarosegeles
unten: graphische Darstellung der TNFα -Genexpression: Lichtwerte gemessen an der KodakDigital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
Abkürzungen: bp = Basenpaare; LK = Leberkontrolle; M = männlich; NK = Negativ-Kontrolle; NR = Nicht-Raucher; R = Raucher; W = weiblich
LK NKW-R M-R
Ladder
599 bp
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
W-R M-R
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6 7
W-NR M-NR
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
A: Raucher :
B: Nicht-Raucher:
TNFα -Genexpression:
Lichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
TNFα-Genexpression:L
ichtwerte,gemessen an der
Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA)
9. Anhang XLVII
9.6 Darstellung der Western blots CYP 1A1
Abbildung XL: CYP 1A1-Proteinexpression mittels Western blot: Messung der Lumineszenz nach 10 min Expositionsdauer an der Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA).
Abkürzungen: M = männlich; NR = Nicht-Raucher; PK = Positiv-Kontrolle; R = Raucher; W = weiblich CYP 2A
Abbildung XLI: CYP 2A-Proteinexpression mittels Western blot: Messung der Lumineszenz nach 10 min Expositionsdauer an der Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA).
Abkürzungen: M = männlich; NR = Nicht-Raucher; PK = Positiv-Kontrolle; R = Raucher; W = weiblich
Ladder PKPool 8(W-R)
Pool 7(M-R)
Pool 10(M-R)
Pool 6(W-NR)
Pool 11(W-NR)
Pool 1(M-NR)
Pool 4(M-NR)
Pool 9(M-NR)
100 kDa75 kDa
50 kDa
37 kDa
Ladder PKPool 8(W-R)
Pool 7(M-R)
Pool 10(M-R)
Pool 6(W-NR)
Pool 11(W-NR)
Pool 1(M-NR)
Pool 4(M-NR)
Pool 9(M-NR)
100 kDa75 kDa
50 kDa
37 kDa
Ladder PKPool 8(W-R)
Pool 7(M-R)
Pool 10(M-R)
Pool 6(W-NR)
Pool 11(W-NR)
Pool 1(M-NR)
Pool 4(M-NR)
Pool 9(M-NR)
100 kDa75 kDa
50 kDa
37 kDa
25 kDa
Ladder PKPool 8(W-R)
Pool 7(M-R)
Pool 10(M-R)
Pool 6(W-NR)
Pool 11(W-NR)
Pool 1(M-NR)
Pool 4(M-NR)
Pool 9(M-NR)
100 kDa75 kDa
50 kDa
37 kDa
25 kDa
9. Anhang XLVIII
CYP 2B6
Abbildung XLII: CYP 2B6-Proteinexpression mittels Western blot: Messung der Lumineszenz nach 10 min Expositionsdauer an der Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA).
Abkürzungen: M = männlich; NR = Nicht-Raucher; PK = Positiv-Kontrolle; R = Raucher; W = weiblich CYP 2E
Abbildung XLIII: CYP 2E-Proteinexpression mittels Western blot: Messung der Lumineszenz nach 10 min Expositionsdauer an der Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA).
Abkürzungen: M = männlich; NR = Nicht-Raucher; PK = Positiv-Kontrolle; R = Raucher; W = weiblich
Ladder PKPool 8(W-R)
Pool 7(M-R)
Pool 10(M-R)
Pool 6(W-NR)
Pool 11(W-NR)
Pool 1(M-NR)
Pool 4(M-NR)
Pool 9(M-NR)
100 kDa
75 kDa
50 kDa
37 kDa
25 kDa
Ladder PKPool 8(W-R)
Pool 7(M-R)
Pool 10(M-R)
Pool 6(W-NR)
Pool 11(W-NR)
Pool 1(M-NR)
Pool 4(M-NR)
Pool 9(M-NR)
100 kDa
75 kDa
50 kDa
37 kDa
25 kDa
Ladder PKPool 8(W-R)
Pool 7(M-R)
Pool 10(M-R)
Pool 6(W-NR)
Pool 11(W-NR)
Pool 1(M-NR)
Pool 4(M-NR)
Pool 9(M-NR)
100 kDa75 kDa
50 kDa
37 kDa
25 kDa
Ladder PKPool 8(W-R)
Pool 7(M-R)
Pool 10(M-R)
Pool 6(W-NR)
Pool 11(W-NR)
Pool 1(M-NR)
Pool 4(M-NR)
Pool 9(M-NR)
100 kDa75 kDa
50 kDa
37 kDa
25 kDa
9. Anhang XLIX
CYP 3A4
Abbildung XLIV: CYP 3A4-Proteinexpression mittels Western blot: Messung der Lumineszenz nach 10 min Expositionsdauer an der Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA).
Abkürzungen: M = männlich; NR = Nicht-Raucher; PK = Positiv-Kontrolle; R = Raucher; W = weiblich CYP 3A5
Abbildung XLV: CYP 3A5-Proteinexpression mittels Western blot: Messung der Lumineszenz nach 10 min Expositionsdauer an der Kodak Digital Science Image Station 440 CF (Kodak, USA).
Abkürzungen: M = männlich; NR = Nicht-Raucher; PK = Positiv-Kontrolle; R = Raucher; W = weiblich
Ladder PKPool 8(W-R)
Pool 7(M-R)
Pool 10(M-R)
Pool 6(W-NR)
Pool 11(W-NR)
Pool 1(M-NR)
Pool 4(M-NR)
Pool 9(M-NR)
100 kDa75 kDa
50 kDa
37 kDa
25 kDa
Ladder PKPool 8(W-R)
Pool 7(M-R)
Pool 10(M-R)
Pool 6(W-NR)
Pool 11(W-NR)
Pool 1(M-NR)
Pool 4(M-NR)
Pool 9(M-NR)
100 kDa75 kDa
50 kDa
37 kDa
25 kDa
Ladder PKPool 8(W-R)
Pool 7(M-R)
Pool 10(M-R)
Pool 6(W-NR)
Pool 11(W-NR)
Pool 1(M-NR)
Pool 4(M-NR)
Pool 9(M-NR)
100 kDa75 kDa
50 kDa
37 kDa
25 kDa
Ladder PKPool 8(W-R)
Pool 7(M-R)
Pool 10(M-R)
Pool 6(W-NR)
Pool 11(W-NR)
Pool 1(M-NR)
Pool 4(M-NR)
Pool 9(M-NR)
100 kDa75 kDa
50 kDa
37 kDa
25 kDa
9. Anhang L
9.7 HPLC-Chromatogramme von Loteprednol-Etabonat (LE) und seinen Metaboliten nach Inkubation menschlicher Nasenmuschelmikrosomen 9.7.1 1.Versuchsabschnitt ( Inkubation bei verschiedenen Inkubationszeiten ) Serie 1
Negativkontrolle 1 ( Puffer + Substrat ) Inkubation 60 min
Negativkontrolle 2 ( Puffer + Substrat )Inkubation 120 min
Positivkontrolle ( Rattenlebermikrosomen ) Inkubation 60 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 1 ( M-NR ) Inkubation 60 min
Negativkontrolle 1 ( Puffer + Substrat ) Inkubation 60 min
Negativkontrolle 2 ( Puffer + Substrat )Inkubation 120 min
Positivkontrolle ( Rattenlebermikrosomen ) Inkubation 60 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 1 ( M-NR ) Inkubation 60 min
9. Anhang LI
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 2 ( M-NR ) Inkubation 60 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 4 ( M-NR ) Inkubation 120 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 5 ( M-NR ) Inkubation 120 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 7 ( M-R ) Inkubation 120 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 2 ( M-NR ) Inkubation 60 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 4 ( M-NR ) Inkubation 120 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 5 ( M-NR ) Inkubation 120 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 7 ( M-R ) Inkubation 120 min
9. Anhang LII
9.7.2 1.Versuchsabschnitt ( Inkubation bei verschiedenen Inkubationszeiten ) Serie 2
Negativkontrolle ( Puffer + Substrat ) Inkubation 60 min
Positivkontrolle ( humane Lebermikrosomen )Inkubation 60 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 4 ( M-NR ) Inkubation 60 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 5 ( M-NR ) Inkubation 60 min
Negativkontrolle ( Puffer + Substrat ) Inkubation 60 min
Positivkontrolle ( humane Lebermikrosomen )Inkubation 60 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 4 ( M-NR ) Inkubation 60 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 5 ( M-NR ) Inkubation 60 min
9. Anhang LIII
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 6 ( W-NR ) Inkubation 60 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 7 ( M-R )Inkubation 60 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 8 ( W-R ) Inkubation 60 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 9 ( M-NR ) Inkubation 60 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 6 ( W-NR ) Inkubation 60 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 7 ( M-R )Inkubation 60 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 8 ( W-R ) Inkubation 60 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 9 ( M-NR ) Inkubation 60 min
9. Anhang LIV
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 10 ( M-R ) Inkubation 60 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 11 ( W-NR )Inkubation 60 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 10 ( M-R ) Inkubation 60 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 11 ( W-NR )Inkubation 60 min
9. Anhang LV
Negativkontrolle ( Puffer + Substrat ) Inkubation 120 min
Positivkontrolle ( humane Lebermikrosomen )Inkubation 120 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 2 ( M-NR ) Inkubation 120 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 9 ( M-NR ) Inkubation 120 min
Negativkontrolle ( Puffer + Substrat ) Inkubation 120 min
Positivkontrolle ( humane Lebermikrosomen )Inkubation 120 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 2 ( M-NR ) Inkubation 120 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 9 ( M-NR ) Inkubation 120 min
9. Anhang LVI
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 10 ( M-R ) Inkubation 120 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 11 ( W-NR )Inkubation 120 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 10 ( M-R ) Inkubation 120 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 11 ( W-NR )Inkubation 120 min
9. Anhang LVII
9.7.3 2.Versuchsabschnitt ( Inkubation mit und ohne Glucuronidase-Zusatz )
Negativkontrolle ( Puffer + Substrat ) mit Glucuronidase-ZusatzInkubation 120 min
Positivkontrolle ( humane Lebermikrosomen ) mit Glucuronidase-ZusatzInkubation 120 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 12 ( M-NR ) mit Glucuronidase-Zusatz Inkubation 120 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 13 ( M-R ) mit Glucuronidase-Zusatz Inkubation 120 min
Negativkontrolle ( Puffer + Substrat ) mit Glucuronidase-ZusatzInkubation 120 min
Positivkontrolle ( humane Lebermikrosomen ) mit Glucuronidase-ZusatzInkubation 120 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 12 ( M-NR ) mit Glucuronidase-Zusatz Inkubation 120 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 13 ( M-R ) mit Glucuronidase-Zusatz Inkubation 120 min
9. Anhang LVIII
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 14 ( W-NR ) mit Glucuronidase-ZusatzInkubation 120 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 15 ( W-R ) mit Glucuronidase-ZusatzInkubation 120 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 16 ( W-? ) mit Glucuronidase-Zusatz Inkubation 120 min
Negativkontrolle ( Puffer + Substrat ) ohne Glucuronidase-Zusatz Inkubation 120 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 14 ( W-NR ) mit Glucuronidase-ZusatzInkubation 120 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 15 ( W-R ) mit Glucuronidase-ZusatzInkubation 120 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 16 ( W-? ) mit Glucuronidase-Zusatz Inkubation 120 min
Negativkontrolle ( Puffer + Substrat ) ohne Glucuronidase-Zusatz Inkubation 120 min
9. Anhang LIX
Positivkontrolle ( humane Lebermikrosomen ) ohne Glucuronidase-ZusatzInkubation 120 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 12 ( M-NR ) ohne Glucuronidase-ZusatzInkubation 120 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 13 ( M-R ) ohne Glucuronidase-Zusatz Inkubation 120 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 14 ( W-NR ) ohne Glucuronidase-Zusatz Inkubation 120 min
Positivkontrolle ( humane Lebermikrosomen ) ohne Glucuronidase-ZusatzInkubation 120 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 12 ( M-NR ) ohne Glucuronidase-ZusatzInkubation 120 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 13 ( M-R ) ohne Glucuronidase-Zusatz Inkubation 120 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 14 ( W-NR ) ohne Glucuronidase-Zusatz Inkubation 120 min
9. Anhang LX
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 15 ( W-R ) ohne Glucuronidase-ZusatzInkubation 120 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 16 ( W-? ) ohne Glucuronidase-ZusatzInkubation 120 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 15 ( W-R ) ohne Glucuronidase-ZusatzInkubation 120 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 16 ( W-? ) ohne Glucuronidase-ZusatzInkubation 120 min
9. Anhang LXI
9.8 HPLC-Chromatogramme von Testosteron und seinen Metaboliten nach Inkubation menschlicher Nasenmuschelmikrosomen
Negativkontrolle ( Puffer + Substrat )Inkubation 120 min
Positivkontrolle ( humane Lebermikrosomen )Inkubation 120 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 1 ( M-NR )Inkubation 120 min
Negativkontrolle ( Puffer + Substrat )Inkubation 120 min
Positivkontrolle ( humane Lebermikrosomen )Inkubation 120 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 1 ( M-NR )Inkubation 120 min
9. Anhang LXII
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 4 ( M -NR )Inkubation 120 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 6 ( W-NR )Inkubation 120 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 9 ( M -NR )Inkubation 120 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 4 ( M -NR )Inkubation 120 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 6 ( W-NR )Inkubation 120 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 9 ( M -NR )Inkubation 120 min
9. Anhang LXIII
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 10 ( M-R )Inkubation 120 min
humane Nasenmuschelmikrosomen Pool 10 ( M-R )Inkubation 120 min