Dizel Egzoz Partiküllerinin (DEP) KOAH’lı Hastalardan Elde Edilen Bronş Epitel Hücrelerinin Canlılığı ve Apoptozisi Üzerindeki Etkisi * Hasan Bayram 1,2 , Bülent Gögebakan 2 , Öner Dikensoy 1 , Serdar Öztuzcu 3 , Serpil Güldal 1,2 , Erhan Ekinci 1 . Gaziantep Üniversitesi Tıp Fakültesi, 1 Göğüs Hastalıkları AD, 2 Hücre Kültürü Laboratuarı, 3 Moleküler Biyoloji Laboratuarı, Gaziantep. *Gaziantep Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Yönetim Birimi ve TÜBİTAK tarafından mali olarak desteklenmiştir.
20
Embed
*Gaziantep Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Yönetim Birimi ve
Dizel Egzoz Partiküllerinin (DEP) KOAH’lı Hastalardan Elde Edilen Bronş Epitel Hücrelerinin Canlılığı ve Apoptozisi Üzerindeki Etkisi *. Hasan Bayram 1,2 , Bülent Gögebakan 2 , Öner Dikensoy 1 , Serdar Öztuzcu 3 , Serpil Güldal 1,2 , Erhan Ekinci 1 . - PowerPoint PPT Presentation
Welcome message from author
This document is posted to help you gain knowledge. Please leave a comment to let me know what you think about it! Share it to your friends and learn new things together.
Transcript
Dizel Egzoz Partiküllerinin (DEP) KOAH’lı Hastalardan Elde Edilen
Bronş Epitel Hücrelerinin Canlılığı ve Apoptozisi Üzerindeki Etkisi *
Hasan Bayram1,2, Bülent Gögebakan2, Öner Dikensoy1, Serdar Öztuzcu3, Serpil Güldal1,2, Erhan Ekinci1.
Gaziantep Üniversitesi Tıp Fakültesi, 1Göğüs Hastalıkları AD, 2 Hücre Kültürü Laboratuarı, 3Moleküler Biyoloji Laboratuarı, Gaziantep.
*Gaziantep Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Yönetim Birimi veTÜBİTAK tarafından mali olarak desteklenmiştir.
Giriş-1• Partiküler hava kirliliği ile respiratuar
morbidite ve mortalite arasında ilişki(Samet JM, et al. N Engl J Med 2000)(Atkinson RW, et al. Am J Respir Crit Care Med 2001)
• Dizel egzoz partikülleri (DEP) primer insan bronş epitel hücrelerinden (BEH) inflamatuar mediyatörlerin salınımını artırmaktadırlar. (Bayram H, et al. Am J Respir Cell Mol Biol 1998).
Giriş-2• DEP, serumsuz ortamda, hücre
siklüsünü uyarmak, apopitozisini baskılamak suretiyle canlı A549 hücre sayısını artırmaktadır.
• DEP bu etkilerini oksidatif stresi artırarak, p21CIP1/WAF1 ekspresyonunu baskılayarak, JNK ve NF-B yolaklarını uyararak yapmaktadır(Bayram H et al, Eur Respir J 2006)
Giriş-3• DEP’nin KOAH’lıların BEH canlılığını
etkileyip etkilemedikleri bilinmemektedir.
Amaç• DEP’nin KOAH’ı olan ve olmayan primer
BEH– Canlılığı– hücre apoptozisi üzerine etkisini araştırmak
• N-acetylcysteine (NAC) ve JNK inhibitorünün (SP600125) DEP’nin yol açtığı değişikliklere etkisini araştırmak
Hastaların Demografik Özellikleri
Hastalar Sayı Yaş Ort(min-maks)
K/E
Sigara içmeyen
8 58.5 (28-75) 5/3
Sigara içen 6 55.5 (44-66) 0/6
KOAH olan 12 63.8 (52-75) 0/12
Hücre Kültürü
Hücre Canlılığı• Hücrelerin 0, 5,10, 50 ve 100g/ml DEP
ile 24, 48 ve 72 saat inkübasyonu• 10 ve 100g/ml DEP
varlığında/yokluğunda NAC (3.3, 10,33mM) ve JNK inh (SP600125; 3.3, 10 ve 33M) ile 48s inkübasyonu
• MTT ile hücre canlılığı
Akım Sitometri• Hücrelerin 100g/ml DEP ile 48s
inkübasyon• Akım sitometri (FACS) yöntemi ile
propidium iodide/Annexin V boyası kullanılarak apoptozis tayini
DEP’nin Sigara İçmeyenlerin Bronş Epitel Hücre Canlılığına Etkisi
NS 0 5 10 50 100
0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
Dizel Egzoz Partikülleri ( g/ml)
Opt
ik D
ansi
te
NS 0 5 10 50 100
0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
Dizel Egzoz Partikülleri ( g/ml)
Opt
ik D
ansi
te
NS 0 5 10 50 100
0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
Dizel Egzoz Partikülleri ( g/ml)
***
Opt
ik D
ansi
te
24.saat24.saat 48.saat 72.saat ***p<0.0001
DEP’nin Sigara İçicilerin Bronş Epitel Hücre Canlılığına Etkisi
NS 0 5 10 50 100
0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
Dizel Egzoz Partikülleri ( g/ml)
Opt
ik D
ansi
te
NS 0 5 10 50 100
0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
Dizel Egzoz Partikülleri ( g/ml)
**
Opt
ik D
ansi
te
NS 0 5 10 50 100
0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
Dizel Egzoz Partikülleri ( g/ml)
***Opt
ik D
ansi
te
24.saat24.saat 48.saat 72.saat
***p<0.0001**p<0.001
DEP’nin KOAH’lı Hastaların Bronş Epitel Hücre Canlılığına Etkisi
NS 0 5 10 50 100
0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
Dizel Egzoz Partikülleri ( g/ml)
*Opt
ik D
ansi
te
NS 0 5 10 50 100
0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
Dizel Egzoz Partikülleri ( g/ml)
**Opt
ik D
ansi
te
NS 0 5 10 50 100
0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
***
Dizel Egzoz Partikülleri ( g/ml)
Opt
ik D
ansi
te
24.saat24.saat 48.saat 72.saat
**p<0.001 ***p<0.0001***p<0.01
N-Asetilsisteinin DEP ile 48s İnkübe Edilen KOAH’lı Hücre Canlılığına Etkisi
NS 0 3.3 10 33 0 3.3 10 33 0 3.3 10 330.0
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
N-Asetilsistein(mM)
*** *** ***
*
#p<0.01 - 0g/ml DEP;*p<0.01 ve ***p<0.0001 - SF/DEP
#
0g/ml DEP0g/ml DEP10g/ml DEP
100g/ml DEP
Opt
ik D
ansi
te
JNK İnhibitörünün DEP ile 48s İnkübe Edilen KOAH’lı Hücre Canlılığına Etkisi
NS 0DMS 3.3 10 33
DMS 3.3 10 33 0DMS 3.3 10 33
0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
JNK İnhibitörü (SP600125, M)
***
**###
##p<0.001, ###p<0.0001 - 0g/ml DEP;**p<0.001 ve ***p<0.0001 - SF/DEP+DMSO
**
##
0g/ml DEP0g/ml DEP10g/ml DEP
100g/ml DEP
Opt
ik D
ansi
te
DEP ile 48s İnkübasyonun KOAH’lı Hücrelerin Apoptozisine Etkisi
LL(A-/P-) LR(A+/P-) UR(A+/P+) UL(A-/P+)0
20
40
60
80
100SFDEP(100g/ml)
*
*
*p<0.05 - SF
Kadranlar
% H
ücre SF
Özet• DEP (100μg/ml) BEH canlılığını
– sigara içmeyenlerde 72 s,– sigara içenlerde 48 ve 72 s,– KOAH’lılarda 24, 48. ve 72. saatlerde azalttı.
• NAC KOAH’lı BEH canlılığını azalttı• JNKinh serumsuz ortamda ve 10g/ml DEP
varlığında KOAH’lıların hücre canlılığını baskılarken, 100g/ml DEP’nin baskıladığı hücre canlılığını artırdı
• 100g/ml DEP KOAH’lı BEH’nin apoptozisini artırdı.
Sonuç• DEP primer bronş epitel hücrelerin
canlılığını baskılamakta ve apoptozisini artırmaktadır. DEP bu etkilerini JNK gibi hücre içi sinyal ileti yolaklarını etkilemek suretiyle gerçekleştirmektedir.
• KOAH’lıların BEH’leri DEP’nin etkilerine daha hassastır.