Ak.god. 2011/2012. Klinička enzimologija korištenje podataka o aktivnostima enzima u dijagnostičke svrhe 1.Uroñene greške metabolizma – nasljedne, genetski uvjetovane bolesti (enzimopatije) 2. Stečeni deficit enzima – obično zbog promjene funkcije organa (▼sinteza) 3. Razna patološka stanja – oštećenje stanica i izlazak enzima u izvanstaničnu tekućinu (▲ aktivnost) Enzimi u stanicama a) konstitutivni (sintetiziraju se stalnom brzinom – npr. kreatin kinaza,CK proporcionalna masi mišićnih stanica, pojava u serumu uglavnom posljedica nekroze ) b) Inducibilni (sinteza enzima mijenja se u ovisnosti o koncentraciji supstrata; najčešće enzimi koji pregrañuju tvari apsorbirane iz probavnog trakta; npr. glukokinaza) Enzimi Enzimi u u serumu/plazmi serumu/plazmi Mi Mišićna na aktivnost aktivnost Tki vna Tki vna sekreci j sekreci j a a Krvne Krvne stan ice stan ice Obnova Obnova stan ica stan ica Endotel Endotel ž ž il a il a
This document is posted to help you gain knowledge. Please leave a comment to let me know what you think about it! Share it to your friends and learn new things together.
Transcript
Ak.god. 2011/2012.
Klinička enzimologijakorištenje podataka o aktivnostima enzima
u dijagnostičke svrhe
1.Uroñene greške metabolizma – nasljedne, genetski uvjetovane bolesti (enzimopatije)
2. Stečeni deficit enzima – obično zbog promjene funkcije organa (▼sinteza)
3. Razna patološka stanja – oštećenje stanica i izlazak enzima u izvanstaničnu tekućinu (▲
aktivnost)
Enzimi u stanicama
a) konstitutivni (sintetiziraju se stalnom brzinom – npr. kreatin kinaza,CK proporcionalna masi mišićnih stanica, pojava u serumu uglavnom posljedica nekroze )
b) Inducibilni (sinteza enzima mijenja se u ovisnosti o koncentraciji supstrata; najčešće enzimi koji pregrañuju tvari apsorbirane iz probavnog trakta; npr. glukokinaza)
SadrSadržžaj enzima u krvi u svakom aj enzima u krvi u svakom trenutku uzimanja uzorka krvi trenutku uzimanja uzorka krvi
rezultat je:rezultat je:
�� oslobañanja iz stanicaoslobañanja iz stanica
nanaččina ulaska u cirkulacijuina ulaska u cirkulaciju
nanaččina eliminacije iz cirkulacijeina eliminacije iz cirkulacije
StaniStaniččni enzimi dospijevajuni enzimi dospijevajuu plazmu kao posljedica u plazmu kao posljedica obnove stanicaobnove stanica
StaniStaniččni enzimi pojani enzimi pojaččanoanodospijevaju u plazmu kao dospijevaju u plazmu kao posljedica oposljedica oššteteććenja ilienja iliproliferacije stanicaproliferacije stanica
SadrSadržžaj enzima u krvi u svakom aj enzima u krvi u svakom trenutku uzimanja trenutku uzimanja uzorkauzorka rezultat je:rezultat je:
oslobañanja iz stanicaoslobañanja iz stanica
�� nanaččina ulaska u cirkulacijuina ulaska u cirkulaciju(Mr, stupanj sinteze,stupanj o(Mr, stupanj sinteze,stupanj oššteteććenja stanice)enja stanice)
nanaččina eliminacije iz cirkulacijeina eliminacije iz cirkulacije
StaniStaniččni enzimini enzimiLD, AST, ALTLD, AST, ALT
Plazma specifični enzimi
• Djeluju u plazmi• Sintetiziraju se u jetri• U plazmi su prisutni u većim koncentracijama nego u tkivu
• Klinički značajna: aktivnost• Promjene – pokazatelj funkcije jetre
Plazma nespecifični enzimi(aktivnosti manje u plazmi nego u tkivima)
a) enzimi sekrecije – egzokrine žljezde (pankreas, prostata, mukoza želudca);
klinički značajno: , zbog pojačane sinteze ili otežane eliminacije)
Klinički značajno: (stanice oštećene ili nekrotične)
b) Enzimi intermedijarnog metabolizma – koncentracije u tkivima vrlo visoke; oštećenje ili nekroza stanica omogućuje “bijeg”enzima u plazmu (CK, LD, AST, ALT....)
�� Referentni intervali za enzimeReferentni intervali za enzime
�� vrijeme uzimanja uzorka krvi vrijeme uzimanja uzorka krvi
Enzim se sastoji od 4 polipeptidna lanca koji Enzim se sastoji od 4 polipeptidna lanca koji pripadaju tipu H (pripadaju tipu H (heartheart--srce) i M (srce) i M (musclemuscle--mimiššiićć))
UuUunutar stanice nalazi se u citoplazmi (izoenzim C; AST I; 35%) i nutar stanice nalazi se u citoplazmi (izoenzim C; AST I; 35%) i mitohondrijima (izoenzim M; AST II; 65%)mitohondrijima (izoenzim M; AST II; 65%)
Enzim u citoplazmi stanica je aktivan kao dimer Enzim u citoplazmi stanica je aktivan kao dimer polipeptidpolipeptidaa tipa M (tipa M (musclemuscle) i ) i polipeptida polipeptida tipa B (tipa B (brainbrain))
3 izoenzima3 izoenzima
CKCK--BB, CKBB, CK--MB i CKMB i CK--MMMM
KliniKliniččki je znaki je značčajna razliajna različčita raspodjela izoenzima u ita raspodjela izoenzima u skeletnim i skeletnim i srsrččanom mianom miššiićću (CKu (CK--MB)MB)
Alkalne fosfataze su skupina glikoproteina smjeAlkalne fosfataze su skupina glikoproteina smješštena tena uglavnom unutar staniuglavnom unutar staniččne membranene membrane.
Amilaza u serumu uglavnom potjeAmilaza u serumu uglavnom potječče iz acinarnih e iz acinarnih stanica stanica guguššterateračče, e, žžlijezda slinovnicalijezda slinovnica, testisa, ovarija, , testisa, ovarija,
pluplućća i masnog tkivaa i masnog tkiva
Amilaza ima malu molekulsku masu pa je jedan od enzima Amilaza ima malu molekulsku masu pa je jedan od enzima iz seruma koji se normalno nalazi u mokraiz seruma koji se normalno nalazi u mokraććii
αααααααα--amilaza (endoamilaza) hidrolizira linearne ili amilaza (endoamilaza) hidrolizira linearne ili razgranate ugljikohidrate sastavljene od razgranate ugljikohidrate sastavljene od αααααααα--D glukoze D glukoze bilo gdje u lancu stvarajubilo gdje u lancu stvarajućći brzo smjesu dekstrina, i brzo smjesu dekstrina,
• Izoenzimi (pravi) – mono-ili češće multimerni izoenzimi nastali pod kontrolom gena
• Multipli enzimski oblici-– nastali posttranslacijskim mehanizmima “in vivo” ili “in vitro
Razlike i sličnosti
Pravi izoenzimi Multipli oblici
Različiti po katalitičkim i imunokemijskim, Nema razlika u katalitičkimsvojstvima, stabilnosti, naboju, svojstvima, imunokemijski suvrlo male razlike u Mr slični, male razlike u
stabilnosti, razlike u naboju,velike razlike u Mr
Kovalentne/nekovalentne modifikacije (u organizmu, tijekom pročišćavanja, izolacije, pohranjivanja..)
• Deamidacija• Djelomično cijepanje polipeptidnog lanca• Promjenjena fosforilacija• Acilacija• Promjene u ugljikohidratnom dijelu lanca• Agregacija• Povezivanje s drugim biomolekulama (makroenzimi)
a) CK-imunoglobulini → makroCK tip 1 (autoimune bolesti)b) CK-MiMi → makroCK tip 2 (maligne bolesti)
(dimer) (oligomer)
�� enzimi kao tkivni biljezienzimi kao tkivni biljezi
Karakteristike profila promjene aktivnosti enzima uinfarktu miokarda (alfa-HBDH=LD-1)
satisati danidani
Alkalna fosfataza izoenzimi
• izoE genetska kontrola Mr___________________________________________________Placenta odvojeni gen 74000
intestinalna odvojeni gen 92000
koštana/ 94000jetrena/ 92400bubrežna zajednički gen 95800_____________________________________________________! Samo u slučaju placentarnog izoE- alelne varijacije; kod ostalih,heterogenost je posljedica posttranslacijskih modifikacija enzimske molekule
-
Alkalna fosfataza izoenzimi
Starost ALP izoenzimi (%)kost jetra ostali (intestinalni)
Starije osobe 30 60 < 10___________________________________________________________normalna raspodjela
Slučaj 1.
65 godišnji muškarac dolazi u ambulantu s vidljivom žuticom kojaje intenzivne boje. Nema bolova ali je zamijetio da gubi težinu ida je njegova stolica blijeda. On umjereno pije i nije na nikakvojterapiji lijekovima. Njegovi funkcijski jetreni testovi su:
• Bilirubin 250 µmol/L (3-20 µmol/L)• AST 87 U/L (11-38)• ALT 92 U/L (12-48)• ALP 850 U/L (60-142)
• Što bi bila diferencijalna dijagnoza?• Koja druga ispitivanja bi bila od pomoći za postaviti dijagnozu?
ODGOVOR:
U ovom slučaju najvjerojatnija dijagnoza je karcinomglave pankreasa koji opstruira zajednički žučni kanal.To rezultira, obično bezbolnom žuticom s bilirubinom odoko 250 umol/L. To je nekomplicirana opstruktivnažutica koja je karakterizirana aktivnošću ALP koja jeviše nego tri puta iznad gornje granice ref.intervala.AST i ALT ne pokazuju teško hepatocelularno oštećenje.
Daljnja korisna ispitivanja uključuju slikanjestruktura u blizini glave pankreasa i zajedničkog žučnogkanala da se vidi uzrok opstrukcije.
Slučaj 2.
54-godišnja žena primljena je je u hitnuslužbu s akutnom abdominalnom boli utrajanju od 4 sata. Bol je epigastrična i širi seu leña. Kod ispitivanja bolesnica je bolna ihipotenzivna, postoji epigastrična mekoća.Ispitivanja pokazuju da je amilaza u serumu6 500 U/L (23-91 U/L). Koja je najvjerojatnijadijagnoza?
ODGOVOR:
Postoje mnogi uzroci povećanja serumske amilaze, alivrijednosti 10x veće od gornje granice normale sugotovo uvijek uzrokovane akutnim pankreatitisom, paje klinička slika u ovom slučaju sukladna ovoj dijagnozi.
Umjerenije povećanje (>5x) može biti uzrokovanopankreatitisom ali i drugim uzrocima abdominalne boli,kao perforiranim peptičkim vrijedom. Blago povećanjevidljivo je u bubrežnom poremećaju, budući se amilazačisti bubrezima.
Mira Grudić...ima 54 god. Primljena je u bolnicu prije 4 dana, 5sati nakon što je osjećala bolove u grudima.Liječnik u hitnoj službi uzeo je uzorak krvi zaodreñivanje koncentracije mioglobina, aktivnostiCK, CK-MB i koncentracije srčanog troponina T,cTnT. Rezultati su potvrdili dijagnozu akutnoginfarkta miokarda (AIM) i ona je hospitalizirana. Zbog odreñenih razlika u strukturi sličnih proteinau različitim tkivima (CK-MB, troponin) postavljenaje dijagnoza oštećenja stanica miokarda.
Mira Grudić ima AIM. Dijagnoza se djelom temelji navrijednostima CK-MB, mioglobina i cTnT. Rana dijagnozaje odlučujuća za odreñivanje terapijske intervencije kojaće se primjeniti. Mioglobin zbog svojih karakteristika ima negativnu prediktivnu vrijednost u prvih 2-6 satinakon pojave simptoma. cTnT se pojavljuje u serumurelativno kasno ali je vrlo specifičan za oštećenjemiokarda. U slučaju AIM najčešće se otkriva 3-5 satinakon pojave simptoma, pozitivan je u većini slučajevanakon 8 sati, a približava se osjetljivosti od 100% poslije10-12 sati Vrijednost ostaje povišena sljedećih 5-10 dana.