Flaxseed oil: Extraction, Characterization and purification

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS (Universidad del Perú, DECANA DE AMERICA)

FACULTAD DE QUIMICA E INGENIERÍA QUIMICA

ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE QUIMICA

INFORME DEL CURSO

INVESTIGACION EN QUIMICA B

“Extracción, caracterización y purificación del aceite de la Linaza Linum usitatissimun”

Alumno: Gamarra Romero, José Alejandro - 07070012

Profesor asesor: Ale Borja, Neptalí

SEMESTRE ACADEMICO: 2015-1

INVESTIGACION EN QUIMICA B 2015-I

ÍNDICE Página

I. Resumen………………………………………….

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II. Introducción……………………………………..

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III. Objetivos………………………………………… 6

IV. Parte experimental……………………………... 7

V. Resultados y Discusión………………………. 10

VI. Conclusiones…………………………………… 15

VII. Bibliografía………………………………………. 16

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I.RESUMEN

La extracción del aceite de linaza se realizo a través de una prensa tipo Batch y por hexano, obteniéndose un rendimiento del 10% y 35%, respectivamente. La caracterización o determinación de los parámetros fisicoquímico fueron los siguientes: índice de refracción, 1,4791 y 1.4551; índice de saponificación 192,37 y 157,93; índice de acidez 1,55 y 1,76; acidez 0,76 y 0,88; índice de peróxido 6,65 y 2,79; índice de yodo 186 y 141; obtenidos para el aceite extraído por prensa y solvente, respectivamente. Mientras que la determinación de la densidad relativa y el perfil espectrofotométrico UV-Visible se obtuvieron solo del aceite extraído por prensa cuyos resultados fueron de 0.9266 23°C y el perfil mostró una absorbancia máxima en UV a una longitud de onda de 234nm y absorbancia máximas (en orden decreciente) en el Visible a longitudes de onda de 444, 420 y 471nm. En cuanto a la purificación o refinamiento del aceite se procedió a remover los mucilagos o gomas con agua hirviendo con agitación vigorosa por alrededor de 15 a 30min luego el lodo formado es separado por centrifugación, mientras que con el mucilago no hidrosolubles (fosfolípidos o fosfátidos) se adiciona acido cítrico o fosfórico (al 75%) para convertir estos fosfolípidos en hidrosoluble y para su posterior eliminación con agua. Este tipo de aceites tienen alto contenidos de fosforo y polisacáridos que oscurecen al aceite, por lo que su reducción se debe hacer para su uso alimenticio y obtención de lecitina. El siguiente proceso es el de neutralización de los ácidos grasos libres con NaOH 0.1N, como también neutralizar la acidez proveniente del proceso de demucilagación, seguido de la eliminación de la borra por centrifugación. Los procesos de blanqueamiento y de desodorización no son recomendables para este tipo de aceite, ya que reduce la estabilidad oxidativa del aceite. Por último, se agrega antioxidante sintéticos comerciales (BHA, PG, TBHQ) o de antioxidantes extraídos de fuentes vegetales (ají, aguaymanto*, zanahoria, etc.) y se envasa en botellas ámbar almacenadas a bajas temperaturas y libre de la luz.

Palabras claves: aceite, linaza, prensa, hexano, caracterización, refinamiento, mucilago, antioxidantes, perfil espectrofotométrico UV-visible.

*Estudio aun en progreso por parte del investigador

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II.INTRODUCCION

La linaza es más conocida por su goma en la preparación del emoliente (bebida a base de cebada y otras hierbas) que de sus otras propiedades o contribuciones. La linaza y su aceite tienen propiedades, por ejemplo, medicinales en enfermedades relacionadas a prevenir al cáncer de acuerdo a su contenido de polifenoles y otros antioxidantes (Alister D. Muir and Neil D. Westcott, 2003). La linaza posee minerales tales como K, Mg, Ca, S, P, Zn, Fe, Mn así como trazas de Cd y Co; adicionalmente posee vitaminas (C, B1, B2, B3) (James K. Daun et al.2003). En cuanto a su aceite, es reconocido mundialmente ya que contiene a los omega 3, 6 y 9, que son ácidos grasos esenciales para el ser humano, la cual radica sus propiedades medicinales. Además, contiene ácidos saturados como el esteárico y palmítico en cantidades menores (Zhen-Shan Zhang et al, 2014). Lamentablemente el aceite es usado más en la industria de pinturas y barnices que en formulación de aceites de consumo humano, porque los ácidos insaturados son extremadamente susceptibles a la oxidación la cual origina la propiedad secante tan requerida y útil en las pinturas (Bruno García, Silvio, 1965). En el aceite de linaza, la oxidación del acido linoleico y α–linolenico origina un sabor rancio cuando se expone a la luz o cuando su conservación no es la adecuada. La mejor manera de conservar este aceite es disminuir la cantidad de acido linolenico al menos del 1 o 3% por hidrogenación la cual lo hace menos susceptible, pero sus propiedades medicinales decrecerán (Minna Nykter y Hanna-Riitta Kymalainen. 2006).

Los métodos de extracción se resaltan el conocido Expeller que consta de un tornillo

sin fin capaz de separar el aceite del cake o parte solida (que aun retiene algo de aceite) la cual origina un proceso continuo. También están las prensas hidráulicas discontinuas o por lotes que son cilindros con poros donde una manga (yute u otra tela) es colocado junto con la semillas tratadas seguidamente aplicando presión (25000 psi) a través de un embolo originando la extracción del aceite. Un método químico es mencionado usando solventes (más usado es el Hexano) que también puede acompañar a la etapa posterior a la extracción por prensa (Richard D. O´Brien, 2009). Sin embargo, este procedimiento es toxico por lo que su eliminación del aceite es necesaria. Un método de extracción mas limpio es el de CO2 supercrítico con posee rendimientos altos (Tabla 2) (Udeak G. Akpan, 2012).

La etapa siguiente es importante para purificar y producir productos comerciales. La purificación o refinación consta de cuatro procesos importantes como son la desmucilaginizacion, neutralización, decoloración y desodorización, donde dependiendo el

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uso o el producto a fabricarse se hará un proceso extra (hidrogenación, para aceites comestibles; oxidación, para uso pinturas). El aceite crudo recuperado de la extracción contendrá componentes no triglicéridos e impurezas. Estos componentes e impurezas incluyen ácidos grasos libres, fosfolípidos, mucilagos, pigmentos, peróxidos, metales, enzimas perjudiciales (lipasas y lipoxidasas), así como también contaminantes medioambientales tales como los pesticidas (E. M. Hernández y A. Kamal-Eldin, 2013).

La desmucilaginización consiste en la eliminación de mucilagos o gomas que también son acompañados por fosfátidos o fosfolípidos (no hidrosolubles). Dependiendo de la selectividad del solvente, se obtendrá un aceite más puro, por lo tanto pequeñísimas cantidades de mucilagos, la cual se eliminaría durante la destilación del aceite por calentamiento brusco (G. B Martinenghi, 1971). Si no se elimina de la etapa previa a la neutralización, el jabón absorberá fosfátidos que a su vez jalaran al aceite originando una pérdida de aceite. Se puede disminuir separando las fosfátidos hidrosolubles por el proceso de desgomado acuoso, y los no hidrosolubles (que consiste de las sales de calcio y magnesio del acido fosfátidico) se pueden remover por medio de ácidos. Los más usados son el acido fosfórico (al 75%) y cítrico debido a su grado alimenticio. El acido fosfórico no incrementa el contenido de fosforo en el aceite (Michael Bockisch, 1998).

La neutralización es seguida inmediatamente después del desgomado. Se utiliza hidróxido de sodio diluido para neutralizar los ácidos grasos libres así como neutralizar la acidez producida por la adición de acido fosfórico (o cítrico). Luego, se produce la borra la cual es separada por centrifugación, y el aceite es seguido con un lavado con agua caliente. Para aceites de bajo contenido de insaturados (<3%) es normal seguir los procesos de decoloración y desodorización. Sin embargo, el aceite de linaza contiene antioxidantes liposolubles la cual pueden ser removidas en las etapas mencionadas disminuyendo su estabilidad oxidativa (Youn Young Shim et al.2015). Etapas de mejoramiento del aceite para aumentar la estabilidad oxidativa se consiguen con la hidrogenación y adición de antioxidantes.

La hidrogenación permite convertir los ácidos poliinsaturados en ácidos grasos saturados. Sin embargo, esta técnica no es adecuada para el aceite de linaza que contiene alto contenido de acido α-linolenico la cual lo hace más caro y además es no-especifico (Minna Nykter y Hanna-Riitta Kymalainen. 2006). Esta proceso muchas veces genera productos indeseables que confieren mal sabor al producto debido a la generación de acido isolinoleico (Green. 1986).

Los antioxidantes permiten proveen gran estabilidad oxidativa, alargando su vida útil y disminuyendo la rancidez. Su función es de inhibir el mecanismo de radical libre que genera el deterioro del aceite. Existen antioxidantes de origen sintético que puede proveer mayor estabilidad al aceite de linaza que otros que se hayan usado hasta ahora, por ejemplo,

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la terbutilhidroquinona (TBHQ) que recién se está usando posee gran potencial de estabilizar comparable al propil galato (PG), pero mayor al butilhidroxianisol (BHA) o butilhidroxitolueno (BHT); debido a que su estructura es mas hidroxilado. Por otro lado, los antioxidantes naturales se han convertido más deseables debido al rechazo del uso de productos sintéticos en los alimentos. Los tocoferoles son los más usados pero no protegen como se desea (Richard D. O´Brien. 2009). Aunque son los antioxidantes naturales del aceite dentro de la semilla de linaza la cual están presentes entre 85 a 395ppm (Daun et al. 2003). Por otro lado, se ha probado la eficiencia del Capsicum o capsaicina extraído del ají adicionándolo al aceite y como consecuencia mejorando su estabilidad (Ahindra Nag, 2000).

Estudios de estabilización con antioxidantes extraídos a partir de fuentes vegetales me ha inspirado a presentar el aceite estabilizado con un producto autóctono y de color similar al mismo, por lo que de alguna manera su aplicación en ensaladas sería más difundida. Por esta razón el objetivo de esta investigación es formular el aceite para consumo partiendo de su extracción y siguiendo con el análisis de sus propiedades fisicoquímica, y estabilizando con polifenoles extraídos de aguaymanto Physalis peruviana L.

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III.OBJETIVOS

Estudiar la extracción del aceite de linaza por el método solvente y mecánico.

Determinar las variables fisicoquímicas y el contenido de ácidos grasos del aceite de linaza

Estudiar la estabilidad oxidativa del aceite con el extracto de polifenoles de aguaymanto Physalis peruviana L.

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IV.PARTE EXPERIMENTAL

1. Materiales y Reactivos

La linaza (Linum usitatissimun) se compro 3 Kg con anticipación (pasados 7 meses) y almacenados en refrigeración durante el tiempo mencionado hasta el comienzo de las pruebas. El material se adquirió del mercado local que de acuerdo al comerciante proviene del distrito de Uripa, departamento de Apurímac. Se mando a fabricar un cilindro con agujeros junto a su embolo, y un plato recolector de aceite para ser acoplado como una prensa tipo Batch (figura 1). Los reactivos usados en el análisis de caracterización fueron de grado analito suministrados por el profesor asesor. Además, se compro solución de Wijs (0.2N) de la marca Merck para la determinación de yodo.

2. Preparación de la muestra

Las semillas fueron limpiadas manualmente y molidas finamente (lo máximo del aparato) en un molinillo eléctrico de la marca Oster modelo BVSTBMH23, y almacenadas en refrigeración en bolsas de plástico hasta su uso posterior.

3. Extracción del aceite

3.1 Extracción por solvente

El aceite fue extraído con n-hexano (1:5, g: mL) usando un equipo de condensación de bolas dispuesto de forma inclinada tapado con un papel aluminio agujereado en el extremo, mientras que el balón que contenía las semillas y el solvente se puso a baño maría a temperatura de 40°C en un agitador magnético a una velocidad de 600rpm por 2 horas. Luego se filtro el aceite a través de una tela y se repite dos veces más con la misma cantidad de hexano. Luego toda la solución fue colectada en un solo recipiente y concentrado en un rotavapor a presiones de 300 a 310mBar a 40°C por poco más de una hora o hasta que no haya señales que gotea o de condensación del hexano en el refrigerante. El aceite concentrado se deja a secar en la estufa por media hora a 50°C. Se pesa el aceite y se calcula el rendimiento. El hexano recuperado se almacenara para usos posteriores.

3.2 Extracción mecánica

Como se mencionó antes se utilizó una prensa tipo Batch que consiste de un cilindro con orificios, un embolo y un plato de recolección del aceite. Las semillas molidas y pesadas se vacían dentro de una bolsa o manga de yute o de otra tela disponible y se coloca en el interior del cilindro la cual se tapona con el embolo y se ejerce presión alrededor de los 25Kpsi o hasta que haya señal de que el aceite sale a través de los orificios del cilindro.

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Se deja reposar por media hora. La presión disminuye debido a la evacuación del aceite, por lo que se repite dos veces más con el mismo procedimiento. Se pesa el aceite obtenido y se calcula el rendimiento.

4. Caracterización de los aceites obtenidos

Las caracterización de los aceites se baso en sus propiedades fisicoquímica las cuales se investigaron en términos de densidad relativa (ρ) (NTE INEN 0035.1973), índice de refracción (R) (ISO 6320:2000), índice acidez (IA) y acidez (A) (ISO 660:2009), índice de peróxido (IP) (ISO 3960: 2007), índice de saponificación (IS) (ISO 3657:2013) e índice de yodo (I) ( ISO 3961:2013).

5. Análisis espectrofotométrico UV-Visible

Se obtuvieron las absorbancias del aceite (extraído por prensa) en hexano preparadas una en relación de 1:500 y otra de 1:10 donde ambas muestras se le hizo un barrido desde los 800 hasta los 200nm en un espectrofotómetro UV-Vis. de la marca Shimadzu modelo 1700 manejado a través del computador por el software UV-Probe.

6. Análisis espectroscópico infrarrojo IR

El análisis de las dos muestras de aceites en el IR se hizo a través del espectrofotómetro infrarrojo IR Affinity – 1 de la marca Shimadzu manejado a través de la PC con la ayuda del software IR Solution, por la técnica de ATR.

7. Contenido de ácidos grasos

Se prepara los metilesteres de los ácidos grasos de las muestras de aceite siguiendo el método de la ISO 12966-2:2011. La descripción del equipo de cromatografía de gases GC no se posee ya que aún no se llevó a cabo este análisis, debido a que el equipo tenía que certificarse antes de su funcionamiento según la empresa que hace el análisis (USAQ), por lo tanto hasta ahora no se obtenido ningún valor. Se ha comprado el patrón de la mezcla de esteres de ácidos grasos (FAMEs, siglas en ingles) se adquirió de Sigma-Aldrich con la marca Supelco - AOCS No. 2 (RM-2) para cuantificar el contenido de ácidos grasos en el aceite. Sin embargo, el estándar aun está en camino, ya que se está importando.

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8. Purificación del aceite

50g de aceite extraído por prensa se trata con dos volúmenes de agua hirviendo, para extraer los mucilagos, que luego son separados en una centrifuga. Luego, se adiciona acido 10mL de acido fosfórico al 75%, todo el sistema en caliente. Agitar vigorosamente hasta que se forme otra fase, luego repitiéndose los pasos de remoción del mucilago explicado anteriormente. El aceite se colecta en una pera de decantación. Enseguida se neutraliza con hidróxido de sodio 0.1N, agregando antes 5 gotas de fenolftaleína al aceite (debe ser incolora) enseguida agregar gotas de hidróxido y agitando vigorosamente hasta que el aceite tome una tonalidad rosada. Reposar y agitar si el color ha desaparecido de lo contrario continuar. Por último, agregar un exceso del 5%, agitar y seguido por una centrifugación para separar la borra. Se hace un lavado para remover la soda remanente. Medir el pH con papel indicador si es necesario. Si ya se tiene el antioxidante preparado del aguaymanto para estabilizar el aceite, se prueba su solubilidad (es decir la cantidad necesaria de antioxidante por gramo de aceite). Se almacena en botella de vidrio y refrigerado (Panreac Química, S.A. 2000.).

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V. RESULTADOS Y DISCUSION

1. Extracción del aceite

El rendimiento de diferentes métodos de extracción se muestra en la Tabla 1. El método del solvente usando hexano produce mayor rendimiento. Lo obtenido por este trabajo fue del 35% que es menor de lo obtenido por otros trabajos pero es superior a la extracción que se hizo por prensa. El 10% obtenido por extracción mecánica se puede mejora si sigue pretratamientos como el precocinado, el uso de enzimas, etc. (C. Gros. 2003)

Tabla 1: contenido de aceite en la linaza por diferentes técnicas de extracción Técnica de extracción gAceite/100gSemilla -solvente aHexano bHexano -bPrensa -aCO2 supercrítico

42 35 10 36

aRabie Y. Khattab y Mohammad A. Zeitoun. 2013. b Presente trabajo

Figura. 1: Esquema del equipo de extracción por prensa tipo Batch. Figura de la derecha, muestra el equipo en funcionamiento.

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2. Caracterización de los aceites obtenidos

Las propiedades fisicoquímicas del aceite se muestran en la Tabla 2. Estos parámetros en su mayoría coinciden con los de la British Pharmacopoiea. Sin embargo, hay una obvia diferencia entre los parámetros del índice de peróxido, yodo y de saponificación en ambos aceites. Definitivamente ambas extracciones salen de una misma muestra, que ha estado almacenado a no menos de 4°C en el refrigerador. Comenzando con el índice de peróxido, algo ha desencadenado le formación de peróxido en el aceite de prensa que el del solvente. Una hipótesis es que las enzimas, bacterias, el almacenamiento o alguna especie arrastrada en la extracción hayan desencadenado su oxidación. Se sabe que los peróxidos se descomponen en días por lo que podría ser la respuesta. Significa además que los ácidos grasos insaturados se hayan descompuesto (especialmente el acido linolenico) disminuyendo su grado de insaturación la cual es reflejada con el índice de yodo. Sin embargo, esto no es reflejado con el aceite de prensa, es más, es lo opuesto. El aceite extraído por solvente presenta menor valor de índice de yodo que el extraído por prensa. No hay una explicación lógica que informe que ha sucedido. En cuanto al índice de saponificación mide cuantos miligramos de KOH necesitas para saponificar 1g de aceite. Esto indirectamente dice sobre el peso molecular. Significa que el aceite por prensa es más pesado que el extraído por hexano. Ya que, en lo extraído por prensa no solo extrae aceite, sino arrastra compuestos liposolubles (carotenos, tocoferoles, clorofila, etc.)

Tabla 2: Propiedades fisicoquímicas del aceite de linaza por diferentes métodos de extracción

Aceite extraído por solvente Prensa British Pharmacopoiea. 2009 R 1.4551 1,4791 Alrededor de 1.480

ρ ---------- 0.9266 Alrededor de 0.931

IA gAceite

mgKOH 1,76 1,55 Max. 4.5

A gAceite

OleicogAc. 0,88 0,76 ------------

IP KgAceitemeqO2 2,79 6,65 Max. 15

I gAceite

cgI 141 186 Entre 160 - 200

IS gAceite

mgKOH 157,93 192,37 Entre 180-195

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3. Perfil espectrofotométrico UV-Visible

El aceite de linaza presentó un máximo de absorción en el UV a 234nm, así como en el visible a 420, 444 y 471nm (Figura. 2). Estos perfiles son muy parecidos obtenidos por Zhen-Shan Zhang et al (2011). La radiación UV es responsable del deterioro de las células de la piel. Este aceite puede usarse para producir protectores solares contra el UV debido a su absorción en este rango del espectro. El color amarillo del aceite es indicado por la absorbancia en el rango del visible. Este puede incluir a carotenoides tales como los carotenos y annatos. Esta característica sería muy útil en la fabricación de mantequillas sin utilizar colorantes primarios usuales.

Figura. 2 : espectros UV-Visible del aceite de linaza en hexano diluido en 1:500 (izquierda) y 1:10 (derecha)

4. Análisis por espectroscopia infrarroja IR

La figura 3 muestra las bandas características de los grupos funcionales presentes en el aceite de linaza extraído por prensa. La asignación e intensidades de estas bandas se mencionan en la tabla 3. También se analizo por IR el aceite extraído por hexano, pero no difiere mucho en las bandas del espectro de la figura 3, pero si poco en las intensidades especialmente en los C-H alifáticos debido a los CH alifáticos del solvente. Por esta razón no se adjunto su espectro al presente trabajo.

Los ácidos carboxílicos presentan bandas OH alrededor de los 3000 y 2500 cm-1. Sin embargo no se ilustra en el espectro adjuntado, lo que se deduce a partir de ella que la muestra está como ester (triglicérido).

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Figura 3: Espectro IR del aceite de linaza

Tabla 3: Aceite de linaza

INTENSIDAD ASIGNACIÓN

3010 3.32 w =CH estiramiento alquenos

2890 3.46 m CH estiramiento asimétrico alifático

2830 3.53 w CH estiramiento simétrico alifático

1740 5.75 s C=O estiramiento

1650 6.06 vw C=C estiramiento

1455 6.87 w CH2 Flexión en el plano

1160 8.62 m c-o-c estiramiento ester.

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5. Contenido de ácidos grasos

Como se ya menciono, no se pudo correr la muestra debido ,uno, por la tardanza del estándar importado y , dos, por la indisponibilidad del equipo de la empresa que hace análisis, ya que no habría otro lugar con bajo costo, especialmente, para correr la muestra. De todas maneras la tabla 4 muestra el contenido de ácidos grasos presentes en el aceite (Zhen-Shan Zhang et al. 2011) siendo el acido linolenico el de mayor porcentaje. La cantidad de ácidos grasos saturados no supera el 17% del total.

Tabla 4: contenido de ácidos grasos en el aceite de linaza

6. Purificación del aceite

La purificación o refinamiento no tuvo problemas con el método expuesto. Pero sin el antioxidante adicionado el aceite trae como resultado su deterioro con rapidez. La extracción de los polifenoles se hizo con satisfacción, pero se necesita liofilizar la muestra para obtenerlo en polvo. Viendo que demoraba, lo deje inconcluso debido a la fecha límite para presentar este informe.

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VI. CONCLUSIONES

Los métodos de extracción han dado resultados positivos para remover el aceite de la semilla. Aunque uno con mejor rendimiento que el otro.

Los parámetros fisicoquímicos, el contenido de ácidos grasos, el espectro IR y UV-Visible esta en mayor concordancia con los valores teóricos expuestos, lo que asegura la identidad del aceite, así como su potenciales aplicaciones en la industria alimentaria o de pinturas.

Aunque no se llego a completar el estudio de estabilidad del aceite con el extracto de aguaymanto, la bibliografía expuesta garantiza un resultado satisfactorio para expender el producto para su consumo humano con valor agregado.

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VII.BIBLIOGRAFIA

1. Bruno García, Silvio. 1965. Anteproyecto para implementar una fábrica de aceite de linaza por el método de extracción con solvente en extractores rotatorios. Tesis. UNMSM. FQIQ

2. James K. Daun, Véronique J. Barthet, Tricia L. Chornick, and Scott Duguid.2003. Flaxseed in Human Nutrition.

3. Wikipedia [Internet]. Visto 9 Jul. 2015. Disponible en http://es.wikipedia.org/wiki/Linaza

4. Alister D. Muir and Neil D. Westcott. Flax: the genus Linum Medicinal and Aromatic Plants.

5. Uduak G. Akpan .2012.Oilseeds. Publisher: InTech,

6. G. B Martinenghi.1971. Physical refining of oils and fats

7. C. Gros, J.L. Lanoiselle´ and E. Vorobiev. 2003. Towards an alternative extraction process for linseed oil. Institution of chemical engineers., vol 81, part A.

8. Ernesto M. Hernández y Afat Kamal-Eldin. 2013. Processing and Nutrition of fats

and oils. Wiley Blackwell

9. Rabie Y. Khattab , Mohammad A. Zeitoun. 2013. Quality evaluation of flaxseed oil obtained by different extraction techniques. LWT - Food Science and Technology 53.pp 338-345

10. Zhen-Shan Zhang , Li-Jun Wang , Dong Li , Shu-Jun Li & Necati Özkan Characteristics of Flaxseed Oil from Two Different Flax Plants International. Journal of Food Properties: Volume 14, Issue 6, 2011. pages 1286-1296

11. T. Yano, R. Matsuno y K. Nakamura.1994. Developments in Food Engineering. p

624: solvent extraction of Flaxseed

12. Youn Young Shim, Bo Gui, Yong Wang, Martin J.T. Reaney. 2015. Flaxseed (Linum usitatissimum L.) oil processing and selected products. Trends in Food Science & Technology, Volume 43, Issue 2, Pages 162-177

13. Green, A.G. 1986. Genetic conversion of linseed oil from industrial to edible

quality. In: Special Publication. Agronomy Society of New Zealand. p. 266–270.

16

INVESTIGACION EN QUIMICA B 2015-I

14. Minna Nykter, Hanna-Riitta Kymalainen. 2006. Quality characteristics of edible linseed oil. Agricultural and Food Science. Volume 15 402–413.

15. Richard D. O´Brien. 2009. Fats and Oils: Formulating and Processing for

Applications, 3rd edition

16. Ahindra Nag. 2000. Stabilization of flaxseed oil with capsicum antioxidant. Journal of the American Oil Chemists' Society. Volume 77, Issue 7, pp 799-800.

17. B. Dave Oomah, Giuseppe Mazza, Roman Przybylski. 1996. Comparison of Flaxseed Meal Lipids Extracted with Different Solvents. LWT - Food Science and Technology: Volume 29, Issue 7, Pages 654–658.

18. British Pharmacopoeia 2009. The Stationary Office. Department of Health, United Kingdom. Volume I & II. 3579 p.

19. Sathyadevi M, Subramanian S. 2015. Extraction, isolation and characterization of

bioactive flavonoids from the fruits of Physalis Peruviana Linn extract. Asian J. Pharm. Clin. Res., vol 8, issue 1, 152-157

20. Panreac Química, S.A. 2000. Métodos oficiales de análisis: Aceites y Grasas.

21. ISO 3657:2013 Animal and vegetable fats and oils: Determination of saponification

value

22. ISO 3961:2013 Animal and vegetable fats and oils : Determination of iodine value

23. ISO 6320:2000 Animal and vegetable fats and oils: Determination of refractive index

24. ISO 660:2009 Animal and vegetable fats and oils: Determination of acid value and acidity

25. ISO 3960: 2007 Animal and vegetable fats and oils: Determination of peroxide value, Iodometric (visual) endpoint determination

26. ISO 12966-2: 2011. Animal and vegetable fats and oils : Gas chromatography of fatty acid methyl esters, Part 2: Preparation of methyl esters of fatty acids.

27. ISO 659:2009 Oilseeds: Determination of oil content (Reference method)

28. ISO 3656:2011 Animal and vegetable fats and oils: Determination of ultraviolet absorbance expressed as specific UV extinction

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29. NTE INEN 0035 (1973): Grasas y aceites comestibles. Determinación de la densidad relativa

30. Michael Bockisch. 1998. Fats and oils Handbook. Pág. 803: Analytical Methods.

18