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フラグメンテーションフラグメンテーション
横浜市立大学・高山光男横浜市立大学・高山光男
1.1. 分子量関連イオンのフラグメンテーション分子量関連イオンのフラグメンテーション
2.2. フラグメンテーションとイオン化の関係フラグメンテーションとイオン化の関係
3.3. フラグメンテーションは電子イオンとフラグメンテーションは電子イオンと(EI) (EI) とと化学イオン化化学イオン化 (CI) (CI) が基本が基本
44.. 強制的に起こすフラグメンテーション強制的に起こすフラグメンテーション
MASSPECSMASSPECS(本内容の無断転載を禁じます)(本内容の無断転載を禁じます)
Page 2
1.分子量関連イオンのフラグメンテーション1.分子量関連イオンのフラグメンテーション
検出器検出器
イオン源イオン源(ion source)(ion source)
質量分離部質量分離部((mm//zz analyzer)analyzer)
MM MM+.+.
mm++
MM+.+.
mm++
ISDISD PSDPSD
InIn--source decay (ISD)source decay (ISD)
PostPost--source decay (PSD)source decay (PSD)
Page 3
イオンの寿命とフラグメンテーションイオンの寿命とフラグメンテーション
検出器検出器
イオン源イオン源(ion source)(ion source)
質量分離部質量分離部((mm//zz analyzer)analyzer)
・・ 寿命の短い(内部エネルギーの多い)イオン寿命の短い(内部エネルギーの多い)イオン (M(M+.+.)* )* ははイオン源で分解,イオン源で分解,
・・ 寿命の長い(内部エネルギーの少ない)イオン寿命の長い(内部エネルギーの少ない)イオン MM+.+. はは
検出器まで到達する.検出器まで到達する.・・ 中間的な寿命のイオンはイオン源を出て検出器に到達中間的な寿命のイオンはイオン源を出て検出器に到達するまでの間に分解する.するまでの間に分解する.
MASSPECSMASSPECS
Page 4
ISD: ISD: イオン源の中で起こるフラグメンテーションイオン源の中で起こるフラグメンテーション
MM MM+.+.
mm11 mm22 mmii
mm1,11,1 mm1,21,2 mm1,i1,i
イオン化イオン化 分解は分解はμμss 以内に以内に
起こり,生成したフ起こり,生成したフラグメントイオンはラグメントイオンはマススペクトル中にマススペクトル中に観測される.観測される.
MASSPECSMASSPECS
Page 5
分子量関連イオンとフラグメントイオン分子量関連イオンとフラグメントイオン
MASSPECSMASSPECS
フラグメントイオンも重要な質量分析情報フラグメントイオンも重要な質量分析情報
Page 6
2.フラグメンテーションとイオン化の関係2.フラグメンテーションとイオン化の関係
イオン化法に依存する分子量関連イオンのイオン化法に依存する分子量関連イオンの生成とフラグメンテーション生成とフラグメンテーション
フラグメンテーションは分子量関連イオンのフラグメンテーションは分子量関連イオンのエネルギー量と構造に支配されるエネルギー量と構造に支配される
MASSPECSMASSPECS
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フラグメンテーションの考察は,フラグメンテーションの考察は,分子量関連イオンの構造を考えるところから始まる分子量関連イオンの構造を考えるところから始まる
いろいろな分子量関連イオンいろいろな分子量関連イオン
MASSPECSMASSPECS
Page 8
0
50
100
50 100 150 200 250 300 350 400 m/z
391
279
149
83
69
5543
29167
15
[M+H] +
Relative abundance (%)
(b) FAB
0
50
100
50 100 150 200 250 300 350 400 m/z
149
85
7157
43
31
167
Relative abundance (%)
(a) EIO
O
O
O
フタル酸ジオクチルエーテル (Mr 390)
MASSPECSMASSPECS
Page 9
0
20
40
60
80
100
50 100 150 200 250 300 M/Z
237
177
131
121
81
23
Salicyl Phenyl/Na[TG+Na] +
[DTT+Na] +
[M+Na] +
Na + OH
O
O
(a)
0
20
40
60
80
100
50 100 150 200 250 300 M/Z
279
17713181
23 Salicyl Phenyl Ac/Na
[TG+Na] + [DTT+Na] +
[M+Na] +Na +
O
O
O
O CH 3
(b)
MASSPECSMASSPECS
Page 10
0
20
40
60
80
100
800 900 1000 1100 1200 1300 1400 1500 M/Z
1380
1135
[M+H] +
[M+H+GGL] +
OO
O O O O
OO
OO
OO
OO
OH
OH
OH
OH
HO
HOOH
OH OHOHOH
OH
OH
HO
HO
HO
HO
OHHO HO HO
H 2NO
NHO
NHO
OH
b-CD
GGL
MASSPECSMASSPECS
Page 11
0
20
40
60
80
100
700 750 800 850 900
M/Z
720
840
736
696
672
744768 792 816
856
C 60+.
C 70+.
C 60 O+.
C 70 O+.
(a)
0
20
40
60
80
100
700 750 800 850 900
M/Z
C 60-
C 70-
720
840
736856
C 70 O-C 60 O
-
(b)
MASSPECSMASSPECS
Page 12
O
O
O O O O
O
O
OO
OO
OO
O H
O H
O H
O H
H O
H OO H
O H O H
O HO H
O H
O H
H O
H O
H O
H O
O H
H O H OH O
N +
H 3C
H 3C
C H 3
O
O
C H 3
b-CD
AC +
0
20
40
60
80
100
800 900 1000 1100 1200 1300 1400 1500 M/Z
12801157
1135
965
B-CD + AC+
[M+H] +
[M+AC] +(b)
MASSPECSMASSPECS
Page 13
0
50
100
100 200 300 400
385
369
353255213173
145119
105
9581
65
5543
29 [M - H] +
コレステロール
MASSPECSMASSPECS
Page 14
0
50
100
50 100 150 200 250 300 350
299
57
反応イオン t-C 4H 9+
[M+H] +
化学イオン化法
m/z
Relative abundance %
イオン分子反応によるプロトン化分子
のみ与え、フラグメントイオンは生じ
ない
0
50
100
50 100 150 200 250 300 350
m/z
298
267213
199
143
12997
87
74
5543
255
241185157115
Relative abundance %
電子イオン化法M +.
フラグメントイオンが多く、
ハードイオン化の特徴をもつ
0
50
100
50 100 150 200 250 300 350
299
267109
8369
5543
29
m/z
[M+H] +
Relative abundance % 高速原子衝撃法
イオン分子反応によるプロトン化分子
を与えるが、原子衝撃によるフラグメ
ントイオンも生じ、ソフトとハードの
両イオン化特性を示す
MASSPECSMASSPECS
Page 15
0
20
40
60
80
100
50 100 150 m/z
135
93
7766
43
39
H N CH 3
O
C 8H 9NOM +.
0
20
40
60
80
100
50 100 150 m/z
135
9320 eV/EI
MASSPECSMASSPECS
電子エネルギーを変えて分子イオン電子エネルギーを変えて分子イオン内部エネルギー量を変えるとフラグメ内部エネルギー量を変えるとフラグメンテーションの進み具合も変わるンテーションの進み具合も変わる
70 70 eVeV
20 20 eVeV
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3.フラグメンテーションは電子イオン化3.フラグメンテーションは電子イオン化(EI) (EI) と化学イオン化と化学イオン化 (CI) (CI) が基本が基本
・・ EI EI に多いに多い不対電子誘導型不対電子誘導型のフラグメンテーションのフラグメンテーション
キーポイントは不対電子位置の仮定の妥当性キーポイントは不対電子位置の仮定の妥当性
・・ CI CI に多いに多い電荷誘導型電荷誘導型のフラグメンテーションのフラグメンテーション
キーポイントは電荷位置の妥当性キーポイントは電荷位置の妥当性
MASSPECSMASSPECS
Page 17
不対電子誘導型のフラグメンテーション不対電子誘導型のフラグメンテーション
安息香酸メチルエステルの安息香酸メチルエステルのEIEIマススペクトルマススペクトル
51
77
105
136M+.
0
50
100
O
OCH3
O
OCH3
M+.
m/z 136 m/z 105
- OCH3
←←不対電不対電
MASSPECSMASSPECS
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不対電子誘導型のフラグメンテーションでは不対電子誘導型のフラグメンテーションでは不対電子の位置が大事不対電子の位置が大事
電子を放出し易い位置から推定電子を放出し易い位置から推定
N
CH3O
H
lone pair electron
Pi electron
Sigma electron
N
CH3O
H
N
CH3O
H
N
CH3O
H
e-
M+.
CH3O
NH2
> >>不対電子不対電子 →→
↑↑不対電子不対電子
不対電子不対電子 →→
MM+.+.
MASSPECSMASSPECS
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電荷誘導型のフラグメンテーション電荷誘導型のフラグメンテーション
[M+H][M+H]++ ではプロトン付加の位置が大事ではプロトン付加の位置が大事
[M+H]+
H3N
NH2
O
O
CH3H2C
NH2
O
O
CH3
NH3
- NH3
84 144
161[M+H]+
129112101
Lysine methyl ester
Methane/CI
プロトン化プロトン化
↓↓
MASSPECSMASSPECS
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電荷誘導型のフラグメンテーション電荷誘導型のフラグメンテーション
フラグメントイオンでも電荷の位置が大事フラグメントイオンでも電荷の位置が大事
O
OCH3
51
77
105
136M+.
O
OCH3
- OCH3
M+.
0
50
100
m/z 136 m/z 105
CO
m/z 77
- CO
←← 電荷位置電荷位置
MASSPECSMASSPECS
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演習. 下図は環境ホルモンの疑いのあるビスフェノールAの化学構造と電子イオン化マススペクトルである.ビスフェノールAのフラグメンテーションの特徴であるメチル基の脱離を,分子イオンM+.
の構造から説明せよ.
MASSPECSMASSPECS
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解答. ベンゼン環のπ電子またはフェノール水酸基の酸素原子の孤立電子対からの電子放出を考える.
→
↑
MASSPECSMASSPECS
Page 23
44.. 強制的に起こすフラグメンテーション強制的に起こすフラグメンテーション
イオン源イオン源(ion source)(ion source)
質量分離部質量分離部((mm//zz analyzer)analyzer)
衝突誘起分解衝突誘起分解(collision(collision--induced induced dissociation, CID)dissociation, CID)
MM+.+.
mm++
検出器検出器
MASSPECSMASSPECS
Page 24
0100 200 300 400 500 600 700
346391
566645
701
CID OF MK OF IKARI B
[M+K] +
OHO
OH O
OH
O
OHO
HOO
OOH
OH OH
+ K+
m/z 391
- H + K+
m/z 346
- H + K+
m/z 566
- H + K+
m/z 645
100 200 300 400 500 600 700
331
376
685
CID OF MNA OF IKARI B
[M+Na] +
OHO
OH O
OH
O
OHO
HOO
OOH
OH OH
+ Na +
m/z 376
- H + Na+
m/z 331
100 200 300 400 500 600 700
CID OF MH OF IKARI B
355
501
66
3
[M+H] +
OHO
OH O
OH
O
OHO
HOO
OOH
OH OH
+ 2H m/z 355
+ 2H m/z501
MASSPECSMASSPECS
Page 25
フラボノイド配糖体のフラボノイド配糖体のCIDCIDスペクトルスペクトル
←← 糖鎖情報糖鎖情報
←← アグリコン情報アグリコン情報
MASSPECSMASSPECS
Page 26
フラグメンテーションの解析は慎重にフラグメンテーションの解析は慎重に
メチルステアレートのメチルステアレートのEIEIマススペクトルはお馴染み,マススペクトルはお馴染み,フラグメンテーションも単純に見えるがフラグメンテーションも単純に見えるが !!
MASSPECSMASSPECS
Page 27
重水素ラベルによって証明された転移水素の位置重水素ラベルによって証明された転移水素の位置
by Fred R. by Fred R. McLaffertyMcLafferty (1959)(1959)
MASSPECSMASSPECS
Page 28
他のフラグメントイオンの説明他のフラグメントイオンの説明
単なる数値あわせ単なる数値あわせ
MASSPECSMASSPECS
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メチルステアレートのメチルステアレートのEIMSEIMSの新しい説明の新しい説明
数値あわせの部分を再検討した結果、数値あわせの部分を再検討した結果、m/zm/z 101101 がキーフラグメントがキーフラグメント
MASSPECSMASSPECS
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フラグメンテーションの説明には,フラグメンテーションの説明には,
・高分解測定・高分解測定・同位体ラベル法・同位体ラベル法・・CIDCID法法
の使用が欠かせないの使用が欠かせない
メチルステアレートのメチルステアレートの分子イオン分子イオン MM+.+. ((mm//zz 298)298)およびフラグメントイオンのおよびフラグメントイオンの
CIDCIDスペクトルスペクトル
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フラグメンテーションの研究は,フラグメンテーションの研究は,イオン化イオン化のの研究以上に困難が多い研究以上に困難が多い
分子量関連イオンのエネルギー量分子量関連イオンのエネルギー量
分子量関連イオンの構造分子量関連イオンの構造
MASSPECSMASSPECS