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Transcript
ジーンコピア社 GLuc-ON™ プロモーターレポータークローンは、生細胞から安定的に分泌される Gaussiaルシフェラーゼ (GLuc) をレポーターとして使用し、20,000 種類以上のヒトプロモーターの活性を検出することができます。 プロモータークローンは、1.2 ～ 1.5 kb のインサートを持ち、この配列は、ヒト遺伝子の転写開始部位の100 bp までの下流領域と約 1.5 kb の上流領域に位置する 5’ 隣接配列に相当します。シス作用エンハンサーエレメントはクローニングされたプロモーター領域に存在することが予想されるため、レポーターアッセイで検出されるルシフェラーゼ活性が、ヒト細胞内でのこれらの遺伝子の実際のプロモーター調節を反映すると考えられます。
特長
原理
g g c c g c g c g t c c c a g a g a g c c a g c c c c g g c c g c c g t c g c g g g g a a g t g c c g c c t g g t g g gg t c a c g g c g c c t g a a g c c c a c g t g c g c c g c c g a g c c c g a g g t g g c c t c g a g c g c g g c g g ct g a c a g c a c a g c c c g c c t g a g c t g c c t c c c g c g c t c c t c c c c g a g g a a a g g a t t t t g a t tt c a a a g a a a g g a a g g a a g g a a g g a c a a c t c c c a g c t t c c c c g t c c c g c c c t c c c c g c t c cg a g g g c c g c g c c a g g c c a t g c c c a a g a a g g c g g c g g c g g c g g c g a a c c a g c a g a a g g g a ct t t c c t g g c a g c c c g g c g a c g a g g a g c g c g g a c a g t g a g t t t g c t c t g c c c c g g t t c a t gg t t c c t g c a a g c c c t c t a g g a g g c c g a a a g c t g c a g c c c c t c c c c t t g c c c c g a a g a g c ct t c c g c g t t c t c t c g c c c t c g g g c c c a c c c c g c g c c g c c c g g g c t c c c g c c g c c g c a g c cc a g t g c c c t c t g c c c g c g g c g g t g g a t g g c a t g a t g g t g c g g g g a a g g c a c c g c g g c c t tg g c c a g c t g a g t c g c g a c g g c c g c c g g g g c g g c g g c a g t g g c c g c g g c a g c g g c g g t g g ta g c g g g c t c c c c a g c g g c a t g c c a g t g c c c c c c g g g c g c g a t g g c t a g c g g c a g c g c c g gg a a g c c c a c t g g c g a g g c g g c t t c t c c g g c t c c t g c g a g c g c c a t c g g c g g g g c c a g c t cg c a g c c g c g g a a g a g g c t g g t a t c c g t c t g c g a c c a c t g c a a g g g c a a g a t g c a g c t g g tg g c t g a c c t g c t g c t g c t g t c g a g c g a g g c g c g g c c c g t g c t c t t c g a g g g c c c c g c c t cc t c t g g t g c c g g c g c c g a g t c c t t c g a g c a g t g c c g g g a c a c c a t c a t c g c g c g c a c c a ag g g g c t c t c c a t c c t c a c c c a c g a c g t g c a g a g c c a g c t c a a c a t g g g c c g c t t c g g g g ag g c g g g g g a c a g c c t g g t g g a g c t g g g c g a c c t g g t g g t g t c g c t g a c c g a g t g c t c g g cc c a c g c g g c c t a t c t g g c c g c t g t g g c c a c g c c g g g c g c c c a g c c c g c g c a g c c g g g c c tg g t g g a c c g c t a c c g c g t g a c g c g a t g c c g c c a c g a g g t g g a g c a g g g t t g c g c c g t g c tg c g c g c c a c g c c g c t g g c c g a c a t g a c g c c g c a g c t g c t g c t g g a g g t g t c g c a g g g c c tg t c g c g c a a c c t c a a g t t c c t g a c g g a c g c g t g c g c c c t g g c c a g t g a c a a g t c a c g g g a
ジーンコピア社ジーンコピア社
20,000 種類以上のヒトプロモーター活性を検出！
プロモーターレポータークローンプロモーター
レポータークローンジーンコピア社では、ヒト遺伝子のプロモーター活性を解析できるよう、Gaussia ルシフェラーゼ (GLuc) を
レポーターとして組み入れたプロモーターレポータークローンを20,000種類以上ご用意しています。
◆ 生細胞アッセイ細胞溶解操作不要、パルスチェイス法などの実験を簡易化
◆ デュアルレポーターシステム分泌型のGLuc と SEAP をレポーターとして採用トランスフェクションの正規化によりサンプル間の比較が可能
◆ 高感度GLuc は、firefly や Renilla ルシフェラーゼと比較して1,000 倍高感度
◆ 高品質＆便利なフォーマット全てのプロモータークローンは配列確認済みトランスフェクション -ready
◆ 迅速アッセイ 迅速で実際の活性に近い値が得られます
◆ ハイスループット対応 パスウェイ研究にも最適、多数のサンプルを処理可能Promoter GeneGenome
Promoter ReporterPlasmid
Promoter GLuc
Inducbibletranscription
TranslationStimulus
SecretedGLuc
CMVSEAP
Promoter ReporterPlasmid
Promoter GLuc
CMVSEAP
Promoter ReporterPlasmid
Promoter GLuc
CMVSEAP
Constitutive transcriptionSecreted
SEAP
Light
Light
図 1.GLuc-ON™ プロモーターレポータークローンの原理
GeneCopoeia, Inc. メーカー略号：GCP
Secrete-PairTM Dual Luminescence Assay Kit
◆ 20,000 種類以上のヒトプロモーターレポータークローンをご用意◆ 生細胞アッセイ (Gaussia ルシフェラーゼ )◆ デュアルレポーター設計により、サンプル間比較可
GLuc-ONTM Promoter Reporter clones
GeneCopoeia, Inc. メーカー略号：GCP
ベクター レポーター遺伝子 トラッキング遺伝子 選択マーカー
pEZX -PG01 Gaussialuciferase (GLuc) N/A* N/A
pEZX -PG02 Gaussialuciferase (GLuc) N/A* Puromycin
pEZX -PG03 Gaussialuciferase (GLuc)
Secreted alkaline phosphatase (SEAP)
N/A
pEZX -PG04 Gaussialuciferase (GLuc)
Secreted alkaline phosphatase (SEAP)
Puromycin
＊ SEAP発現ベクターを別途ご利用いただけます（3ページ参照）。
図 3. H1B1B と HEK293T 細胞における正規化済プロモーター活性Dual-reporter promoter clones またはコントロールを 2つの細胞系に duplicate にトランスフェクション。サンプルはトランスフェクション 24 時間後 (HEK293T) あるいは 48 時間後 (H1B1B) に分析。NEG（プロモーター配列不含）と EMPTY( 空ベクター )はネガティブコントロールとして使用。
【Gaussia ルシフェラーゼ】改良した GLuc(mGLuc) をレポーター遺伝子を用いていますので、極めて安定したシグナルが得られます。ヒト化野生型 GLuc(wtGLuc) で観察されるシグナルの早期減衰を改善します。
020406080
100120
0 5 10 15 20 25 30 35 40
RLU
/S (%
)
時間(分)
020406080
100120
0 5 10 15 20 25 30 35 40
RLU
/S (%
)
時間(分）
図 2. mGLuc( 青線 ) と wtGLuc( 赤線 ) のシグナルの安定性左：安定剤入りアッセイバッファー右：通常のアッセイバッファー (Secrete-Pair™ dual luminescence assay kit 使用 )
【デュアルレポーターシステム】2 種類のレポーター遺伝子を持つベクターをご用意しています。２つめの分泌性アルカリフォスファターゼ (SEAP) レポーターは、内部標準としてご利用いただけ、トランスフェクションの正規化が行えますので、正確なサンプル間比較が可能です。
0
5
10
15
20
EF1α GAPDH2 MYC CHUK NEG EMPTY
H1B1B
HEK293T
GLu
c/SE
AP ra
tio
ベクター表
原理Promoter GeneGenome
Promoter ReporterPlasmid
Promoter GLuc
Inducbibletranscription
TranslationStimulus
SecretedGLuc
CMVSEAP
Promoter ReporterPlasmid
Promoter GLuc
CMVSEAP
Promoter ReporterPlasmid
Promoter GLuc
CMVSEAP
Constitutive transcriptionSecreted
SEAP
Light
Light
図 1. GLuc-ON™ プロモーターレポータークローンの原理
Gluc-OnTM Promoter Reporter clone
◆ 20,000 種類以上のヒトプロモーターレポータークローンをご用意◆ 生細胞アッセイ (Gaussia ルシフェラーゼ )◆ デュアルレポーター設計により、サンプル間比較可
GLuc-ONTM Promoter Reporter clones
特長◆ 生細胞アッセイ細胞溶解操作不要、パルスチェイス法などの実験を簡易化
◆ デュアルレポーターシステム分泌型のGLuc と SEAP をレポーターとして採用トランスフェクションの正規化によりサンプル間の比較が可能
◆ 高感度GLuc は、firefly や Renilla ルシフェラーゼと比較して 1,000 倍高感度
◆ 高品質＆便利なフォーマット全てのプロモータークローンは配列確認済みトランスフェクション -ready
◆ 迅速アッセイ 迅速で実際の活性に近い値が得られます
◆ ハイスループット対応 パスウェイ研究にも最適、多数のサンプルを処理可能
GLuc-ONTM Promoter Reporter clones
4 種類のベクターをご用意しています。実験にあわせてお好みのベクターをお選びください。
2 3
ジーンコピア社ホームページ上のGLuc-ON™ Promoter Reporter Clones 紹介ページ(http://www.genecopoeia.com/product/promoter-reporter-clones/) を開きます。
のアイコンをクリックし、検索ページを開きます。
キーワード検索①ご希望の分野を選択します。②gene symbol、aliases、description、nucleotide accession、Entrez gene ID、カタログ /製品 I D、specific field、homology 検索等のキーワードで検索できます。右の ボタンを押すと検索が開始され、品番が表示されます。
希望販売価格はご照会ください。
商品検索方法
GLuc-ONTM Promoter Reporter clones
品 名 品 番 包 装 希望販売価格GLuc™-ON Promoter Reporter Clone HPRMxxxx-PG0y 1clone ご照会 (10 µg purified plasmid)
プロモーターレポータークローンGeneCopoeia, Inc. メーカー略号：GCP
＊ xxxxには任意の数字、yはベクタータイプにより数字が入ります。下記商品検索方法にてご確認ください。
各種コントロール商品用 途 品 名 対応ベクター 品 番
SEAP 発現クローン Secreted alkaline phosphatase (SEAP) プロモータークローンとのコトランスフェクション用 Expression clone
pEZX-PA01 SEAP-PA01
ポジティブコントロール EF1α positive control clone pEZX-PG04 EF1A-PG04 デュアルレポーターベクター用 LDHA positive control clone pEZX-PG04 LDHA-PG04 GAPDH positive control clone pEZX-PG04 GAPDH-PG04
ネガティブコントロール Negative control clone(Non-promoter sequence) pEZX-PG04 NEG-PG04
デュアルレポーターベクター用
ポジティブコントロール EF1α positive control clone pEZX-PG02 EF1A-PG02 シングルレポーターベクター用 LDHA positive control clone pEZX-PG02 LDHA-PG02 GAPDH positive control clone pEZX-PG02 GAPDH-PG02
ネガティブコントロール Negative control clone(Non-promoter sequence) pEZX-PG02 NEG-PG02 シングルレポーターベクター用※包装はすべて 1clone、希望販売価格はご照会ください。
GeneCopoeia, Inc. メーカー略号：GCP
2 3
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GLuc-ONTM Promoter Reporter clones
・Buffer GL-S (10X) ：GLuc buffer ( 安定剤含 ) GLuc シグナルの減衰を改善し、安定的な活性測定に有用です。
・Buffer GL-H (10X) ：GLuc buffer ( 高感度用 ) 低発現GLuc 検出に有用です。
・Substrate GL (100X) GLuc substrate
・Buffer AP (10X) ：SEAP buffer
・Substrate AP (100X)：SEAP substrate
0
20
40
60
80
100
0 5 10 15 20 25 30 35 40
RLU
/S (%
)
時間(分）
GL-S (Secrete-Pair)GL-H (Secrete-Pair)他社S他社 H
図 1. 異なるバッファーシステム ( 本製品と他社ルシフェラーゼアッセイキット ) の GLuc シグナル安定性の比較
ヒト化 GLuc レポータークローンをトランスフェクションした細胞から細胞培養上清ｗｐ10uL とりアッセイに用いた。各キット中のバッファーシステムを用いて、各製造元推奨のプロトコールによりアッセイを実施。シグナルの％は、シグナル安定性の指標として用いた。安定剤を含んだバッファー GL-S を使用したアッセイでは他社品に比べて非常に安定的な GLuc シグナルが得られた。
品 名 品 番 包 装Secrete-PairTM Dual Luminescence Assay Kit SPDA-D010 100 rxn SPDA-D100 1000 rxn
GeneCopoeia, Inc. メーカー略号：GCP
使用目的
特長
構成内容
◆ 培養上清中のGLuc と SEAP のレポーター活性を測定
Secrete-PairTM Dual Luminescence Assay Kit
細胞培養上清サンプル中に分泌される 2種類のレポータータンパク質、GLuc と SEAP の活性を測定します。細胞溶解操作は不要です。内部標準コントロールの SEAP を用いて、トランスフェクションの正規化を行い、トランスフェクションの変動の影響がないサンプル間の比較が可能です。
◆ 非常に安定した活性が得られるバッファーを採用 キット中の GL-S バッファーにより、発光の半減期を約 30 分まで延長 キット中のGL-H バッファーにより、低発現のGLuc をも検出可能
◆ デュアルレポータータンパク質を検出 GLuc と SEAP、トランスフェクション正規化を行うことでサンプル間の比較可能
◆ ハイスループット対応 迅速かつ簡単アッセイフォーマット、多数サンプルも処理可能
品 名 品 番 包 装Secrete-PairTM Gaussia Luminescence Assay Kit SPGA-G010 100 rxn SPGA-G100 1000 rxn
GeneCopoeia, Inc. メーカー略号：GCP 関 連 商 品
希望販売価格はご照会ください。
希望販売価格はご照会ください。GLuc のみを検出するシングルルシフェラーゼアッセイキットです。
● 希望販売価格 ･･･ 「希望販売価格」は参考であり、販売店様からの販売価格ではございません。 記載の希望販売価格は２０１１年 7月１日現在の希望販売価格です。 予告なしに改定される場合がありますので、ご注文の際にご確認下さい。消費税は含まれておりません。 ● 使 用 範 囲 ･･･ 記載の商品は全て、「研究用試薬」です。 人や動物の医療用・臨床診断用等としては使用しないよう、十分ご注意ください。
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