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FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
ESCUELA ACADÉMICA PROFESIONAL DE FARMACIA Y
BIOQUÍMICA
ACTIVIDAD ANALGÉSICA DEL EXTRACTO ETANÓLICO
DEL FRUTO VALLEA STIPULARIS L. f. “chuillur” EN
RATONES
Tesis para optar el Título Profesional de Químico Farmacéutico
Presentado por:
Br. María Elena, Ortiz Chaparro.
Asesora:
Dra. Juana Elvira, Chávez Flores.
Lima - Perú
2016
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DEDICATORIA
Al finalizar mi carrera profesional he logrado uno de mis objetivos en mi vida y quiero
darles las gracias de manera especial a las personas que me apoyaron, superando todos
los obstáculos para lograrlo, con todo respeto y amor dedico este triunfo.
En principio a Dios, por darme la oportunidad de ser parte de este mundo, darme salud y
fuerza para enfrentar diversas dificultades y lograr mis metas satisfactoriamente.
A mi asesora y amiga. Dra. Juana Elvira, Chávez Flores, quien me brindó su apoyo,
confianza y conocimiento durante mi etapa universitaria y el desarrollo de mi tesis. Pero
sobre todo por la motivación durante la carrera universitaria.
Con todo mi amor y cariño a mis padres (Eleodoro y Anastasia), las personas más
importantes de mi vida, que me han brindado todo: la confianza, apoyo, paciencia y amor
incondicional pero sobre todo por enseñarme valores únicos y necesarios para
desenvolverme en mi vida profesional y personal.
A mis hermanos (Alcira, Beatriz y Christian) por estar siempre presente a la expectativa
de mis logros profesionales y personales, ya que estos cinco años me dedicaron palabras
de motivación e inspiración para poder superar cada día más y así poder culminar mi
meta.
A mis sobrinos (Diego y Ariana) que con sus travesuras y ocurrencias me alegran la
vida.
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AGRADECIMIENTO
A los miembros de mi jurado. Dr. Enrique león Soria, Mg. Bertha Jurado Teixeira y
Mg. Luis Miguel Félix Veliz por brindarme sus conocimientos y apoyo en el desarrollo
de esta investigación.
A la Dra. Juana Elvira Chávez Flores un especial agradecimiento por la orientación,
apoyo y sobre todo por el tiempo que dedicó al desarrollo de esta investigación y a
todas sus enseñanzas que nos impartió dentro y fuera de las aulas de estudio.
Al Ing. Carlos Albornoz e Ing. Pedro Sáenz, por su apoyo y guía en los análisis
estadísticos que permitieron la realización del presente trabajo.
A mi familia que considero que son personas admirables, esto no hubiera sido posible
sin el apoyo que me otorgaron y el cariño que me inspiraron de forma incondicional,
entendiendo mis ausencias, mis buenos y malos ratos pero sobre todo por el apoyo
moral durante mi etapa universitaria.
A mi Alma Mater la Universidad Privada Norbert Wiener, la Carrera de Farmacia y
Bioquímica por ser el templo del saber que me permitió ser parte de la misma y
adquirir conocimientos nuevos y por su intermedio a todos mis maestros/as que me
impartieron sus conocimientos durante la carrera universitaria.
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ÍNDICE GENERAL
Pág.
Resumen
Summary
I. INTRODUCCIÓN 1
1.1. Planteamiento del problema 2
1.2. Formulación del problema 2
1.3. Justificación 3
1.4 Objetivos 4
1.4.1. Objetivo general 4
1.4.2. Objetivos específicos 4
1.5. Variables 4
1.5.1. Variable independiente 4
1.5.2. Variable dependiente 4
1.6. Hipótesis 4
II. MARCO TEÓRICO 5
2.1. Antecedentes de la investigación 5
2.1.1. Antecedentes internacionales 5
2.1.2. Antecedentes nacionales 6
2.2. Bases teóricas 8
2.2.1. Taxonomía de la especie Vallea stipularis L.f. “chuillur” 8
2.2.2. Características de la familia Elaeocarpaceae 8
2.2.2.1. Especies vegetales de la familia
Elaeocarpaceae 8
2.2.2.2. Propiedades de las especies vegetales
de la familia Elaeocarpaceae 9
2.2.2.3. Metabolitos primarios y secundarios de la
familia Elaeocarpaceae 9
2.2.3. Estudio botánico de la especie Vallea stipularis
L.f. “chuillur” 10
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2.2.3.1. Nombre común de la especie Vallea stipularis
L.f. “chuillur” 10
2.2.3.2. Observaciones para el reconocimiento de la
especie Vallea stipularis L.f. “chuillur” 10
2.2.4. Descripción botánica 11
2.2.5. Distribución de la especie Vallea stipularis L.f. “chuillur” 11
2.2.6. Usos populares y propiedades medicinales 12
2.3. Flavonoides 13
2.3.1. Clasificación de los flavonoides 14
2.3.2. Efectos farmacológicos de los flavonoides 16
2.4. Estudios de actividad analgésica 20
2.4.1. Analgesia 20
2.4.2. Dolor 20
2.4.3. Fisiología del dolor 20
2.4.4. Origen del dolor 22
2.4.5. Clasificación del dolor 23
2.5. Escala analgésica de la O.M.S. 24
2.6. Analgésicos 26
2.7.1. Analgésico menores (no opioides) 26
2.7.2. Analgésicos opiáceos 27
III. MATERIALES Y MÉTODOS 30
3.1. Tipo de investigación 30
3.2. Población y muestra 30
3.2.1. Población 30
3.2.2. Muestra 30
3.3. Criterios de inclusión y exclusión 30
3.3.1. Criterio de inclusión 30
3.3.2. Criterio de exclusión 31
3.4. Materiales, solventes y reactivos 31
3.5. Metodología de la preparación y evaluación de la actividad
analgésica 35
3.6 Lugar de ejecución 36
3.7. Estudio fitoquímico 36
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3.7.1. Recolección del material botánico 36
3.7.2. Preparación del extracto etanólico del fruto de
Vallea stipularis L.f. “chuillur” 36
3.8. Ensayos preliminares 37
3.8.1. Prueba de solubilidad de la especie Vallea stipularis
L.f. “chuillur” 37
3.8.2. Análisis fitoquímico de la especie Vallea stipularis
L.f. “chuillur” 38
3.9. Procedimiento de la actividad analgésica en ratones 39
3.10. Estudio farmacológicos 40
3.10.1. Animales de experimentación 40
3.10.2. Preparación de las dosis del extracto etanólico
Vallea stipularis L.f. “chuillur” 40
3.10.3. Preparación de los medicamentos Q.P. 40
3.10.4. Evaluación de la técnica del ácido acético 0,8 % 41
3.10.5. Análisis estadístico de la actividad analgésica 43
IV. RESULTADOS 44
4.1. Prueba de solubilidad de la especie Vallea stipularis
L.f. “chuillur” 44
4.2. Análisis fitoquímico de la especie Vallea stipularis
L.f. “chuillur” 46
4.3. Análisis estadístico SPSS versión 22,0 del extracto
etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f. “chuillur” 48
V. DISCUSIÓN 56
VI. CONCLUSIONES 59
VII. RECOMENDACIONES 60
VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 61
IX. ANEXOS 68
Page 7
ÍNDICE DE FIGURAS
Pág.
Figura 1. Estructura básica de los flavonoides 13
Figura 2. Estructura básica de los flavonoides “propiamente dichos” 15
Figura 3. Estructura básica de los compuestos relacionados a los
flavonoides 15
Figura 4. Estructuras químicas de los distintos tipos de Flavonoides 18
Figura 5. Escalera analgésica de la O.M.S. modificada 25
Figura 6. Formula química del paracetamol 27
Figura 7. Formula química de clorhidrato de tramadol 29
Figura 8. Preparación y evaluación de la actividad analgésica del
extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f. “chuillur” 35
Figura 9. Selección de los animales de experimentación 56 ratones
albinos especie Mus musculus y de cepa Balb/C53/CNPB 39
Figura 10. Prueba de solubilidad del extracto etanólico del fruto de
Vallea stipularis L.f. “chuillur” 45
Figura 11. Análisis fitoquímico del extracto etanólico del fruto de
Vallea stipularis L.f. “chuillur” 47
Figura 12. Efecto analgésico del extracto etanólico del fruto de Vallea
stipularis L.f. “chuillur” sobre las contorsiones abdominales
inducidas por AcOH 0,8 % en ratones 54
Figura 13. Porcentaje de inhibición del extracto etanólico del fruto de
Vallea stipularis L.f. “chuillur” sobre las contorsiones
abdominales inducidas por AcOH 0,8 % en ratones 55
Figura 14. Separación del fruto Vallea stipularis L.f. “chuillur” 70
Figura 15. Fruto maduro de Vallea stipularis L.f. “chuillur” 70
Figura 16. Extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f.
“chuillur” 71
Figura 17. Observando los ensayos preliminares (prueba de solubilidad
y análisis fitoquímico) de la especie Vallea stipularis L.f.
“chuillur” 71
Page 8
Figura 18. Aclimatación del material biológico (ratones albinos de
especie Mus musculus y de cepa Balb/C53/CNPB). 72
Figura 19. Preparación de los tratamientos y el grupo control
(AcOH 0,8 %) 72
Figura 20. Administración de los tratamientos por vía oral a los ratones
albinos de especie Mus musculus y de cepa Balb/C53/CNPB 73
Figura 21. Observación y cuantificación de las contorsiones abdominales
de los ratones albinos de especie Mus musculus y de cepa
Balb/C53/CNPB 73
Figura 22. Evaluación de las contorsiones abdominales de los grupos
experimentales 74
Figura 23. Observación de las contorsiones abdominales de los grupos
experimentales 74
Page 9
ÍNDICE DE TABLAS
Pág.
Tabla 1. Información etnofarmacológica de Vallea stipularis L.f.
“chuillur” 12
Tabla 2. Efecto farmacológico de algunos flavonoides 19
Tabla 3. Distribución aleatoria de animales de experimentación
(Ratones albinos de especie Mus musculus) 41
Tabla 4. Prueba de solubilidad del extracto etanólico del fruto de
Vallea stipularis L.f. “chuillur” 44
Tabla 5. Análisis fitoquímico del extracto etanólico del fruto de
Vallea stipularis L.f. “chuillur” 46
Tabla 6. Promedio y porcentaje de inhibición (%) de las contorsiones
abdominales del extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis
L.f. “chuillur” 48
Tabla 7. Prueba de normalidad (KS) de las contorsiones abdominales
de todos los grupos experimentales 49
Tabla 8. Prueba de homogeneidad de varianza de contorsiones
abdominales de todos los grupos experimentales 50
Tabla 9. Prueba de ANOVA de las contorsiones abdominales de todos
los grupos experimentales 51
Tabla 10. Prueba de T de Dunnett de las contorsiones abdominales de
todos los grupos experimentales 52
Tabla 11. Prueba de post hoc de HSD Tukey de contorsiones
abdominales de todos los grupos experimentales 53
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ABREVIATURAS
Ac. Ácido
AAS Ácido acetilsalicílico
AcOH Ácido acético glacial
AAP Analgésicos con propiedades antipiréticas
AINE Antiinflamatorio no esteroideo
AT Ácido thuriférico
Bz Benceno
COX Ciclooxigenasa
cm Centímetro
°C Grado centígrado
Ct Contorsiones del grupo tratado
Cc Contorsiones del grupo control
CM Carboximetilcelulosa
DP Desoxipodofilotoxina
DPP Desoxipicropodofilina
Et2O Éter etílico
EP Éter de petróleo
EtOH Etanol
Et2O Éter etílico
EP Éter de petróleo
EtOAc Acetato de etilo
Ex-EtOH Extracto etanólico
EVA Escala visual analógica
EVD Escala verbal descriptiva
FS Fracción soluble
FNS Fracción no soluble
g Gramos
g/d Gramos por día
g/L Gramos por litro
Hex Hexano
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h Hora(s)
IP Vía intraperitoneal
I.A.S.P. Asociación Internacional para el Estudio del Dolor
IM Vía intramuscular
IV Vía intravenoso
kg Kilogramo
L Litro(s)
LOX Lipoxigenasa
µ Micra(s)
mL Mililitro(s)
mg/d Miligramos por día
mg/kg Miligramo por kilogramo de peso
Me2CO Acetona
MeOH Metanol
m.s.n.m. Metros sobre el nivel del mar
ng Nanogramo
n-buOH N-butanol
NeuPSIG Grupo de interés especial del dolor neuropático
INS Instituto Nacional de Salud
OMS Organización Mundial de la Salud
OEA Organización de los Estados Americanos
Pg Prostaglandina
QP Químicamente puro
SNC Sistema Nervioso Central
Tx Tromboxanos
UNMSM Universidad Nacional Mayor de San Marcos
VO Vía oral
μ Mu
k Kappa
∂ Delta
% Porcentaje
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RESUMEN
En la actualidad el auge de la utilización de plantas medicinales ha planteado
nuevos retos en la investigación, diversos pueblos indígenas del Perú han
utilizado desde tiempos inmemoriales las plantas medicinales; en esta
investigación se estudió la especie Vallea stipularis L.f. “chuillur”, que se
encuentra en el distrito de Tamburco, provincia de Abancay, departamento de
Apurímac, a 3,100 m.s.n.m. y tiene propiedades para: escorbuto, cicatrizante,
gastritis, reumatismo, purgante drástico, antiinflamatorio y como analgésico. Se
empleó el método de contorsiones abdominales inducidas por ácido acético 0,8
% (Koster, et al.), se usó 56 ratones albinos de la especie Mus musculus y de
cepa Balb/C53/CNPB de ambos sexos, los ratones albinos fueron distribuidos
al azar en 7 grupos de 8 cada uno, los extractos etanólicos (50 mg/kg, 100
mg/kg y 200 mg/kg), el paracetamol Q.P. 300 mg/kg y el clorhidrato de
tramadol Q.P. 40 mg/kg se administraron por vía oral, 30 minutos después de
haber administrado los tratamientos se administró por vía intraperitoneal ácido
acético 0,8 % a una dosis de 0,1 mL/10 g peso corporal, el grupo sin
tratamiento recibió solo agua destilada y el grupo control solo se le administró
ácido acético al 0,8 %; inmediatamente cada grupo de los ratones albinos
fueron observados por 20 minutos. Obteniendo como resultado que todos los
grupos lograron disminuir significativamente (p < 0,05), el número de
contorsiones abdominales al ser comparados con el grupo control, el efecto
máximo se alcanzó a la dosis de 200 mg/kg con un 70 % de inhibición.
Palabras clave: actividad analgésica, compuestos fenólicos, flavonoides,
extracto etanólico, Vallea stipularis L.f.
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SUMMARY
Today the rise of the use of medicinal plants has posed new challenges in
research, various indigenous peoples of Perú have used medicinal plants since
time immemorial; in this research the species studied Vallea stipularis L.f.
"chuillur" it located in the district of Tamburco province of Abancay, Department
of Apurimac, 3,100 m.s.n.m. and it has properties for: scurvy, healing, gastritis,
rheumatism, drastic purgative, anti-inflammatory and analgesic. the method of
contortions induced by acetic acid and 0,8 % was used (Koster, et al.), 56
albino mice of the species Mus musculus strain BALB/C53/CNPB of both sexes
was used, the albino mice were randomized into 7 groups of 8 each, the
ethanolic extracts (50 mg/kg, 100 mg/kg and 200 mg/kg), paracetamol Q.P. 300
mg/kg and tramadol hydrochloride Q.P. 40 mg/kg were administered orally 30
minutes after treatments were administered intraperitoneally administered 0,8 %
acetic acid at a dose of 0,1 mL/10 g body weight, the untreated group received
only water distilled and control group was only administered 0,8 % acetic acid;
each group immediately albino mice were observed for 20 minutes. The result
being that all groups achieved significantly lower (p < 0.05), the number of
crunches when compared with the control group contortions, the maximum
effect was achieved at a dose of 200 mg/kg with 70 % inhibition
.
Keywords: analgesic activity, phenolic compounds, flavonoids, ethanol extract,
Vallea stipularis L.f.
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1
I. INTRODUCCIÓN
Desde la antigüedad la medicina tradicional ha desempeñado un rol importante
aliviando las enfermedades y el dolor. Actualmente existe un gran interés por el
mejor conocimiento y uso de medicinas alternativas, existen investigaciones
científicas que avalan los beneficios de diversas plantas medicinales en
diversas afecciones crónicas o leves. El amplio uso de la medicina tradicional
se atribuye a su accesibilidad y asequibilidad, siendo muchas veces la única
fuente para la atención sanitaria de los pacientes de menores recursos 1.
Si bien la medicina moderna está bien desarrollada en la mayor parte del
mundo, grandes sectores de la población de los países en desarrollo todavía
dependen de los profesionales tradicionales, las plantas medicinales y los
medicamentos herbarios para su atención primaria. Es más, durante los últimos
decenios, el interés de la población en las terapias naturales ha aumentado
enormemente en los países industrializados, y se halla en expansión el uso de
plantas medicinales y medicamentos herbarios 2.
Toda planta es considerada planta medicinal, cuando es recolectado o
separado de la naturaleza, tiene una composición y unas propiedades tales,
que constituyen la forma bruta del medicamento o de los cuales se extraen
precursores hemisintéticos de moléculas bioactivas. En este contexto el
desarrollo de fármacos tradicionales mejorados se transforma en una
necesidad, mediante el estudio fitoquímico, farmacológico y toxicológico de
especies vegetales, capaces de producir en ciertos casos fármacos eficaces y
no tóxicos para las poblaciones 3.
A pesar del gran avance en la fitoquímica, todavía hay un vacío en el
conocimiento completo de la composición química de las plantas medicinales,
lo que es motivo para la búsqueda de nuevos compuestos químicos y su
relación con la actividad biológica, para ello el aislamiento e identificación de
los constituyentes vegetales en la actualidad se realiza con mayor exactitud en
el desarrollo de mejores y nuevas herramientas en química analítica 4.
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2
1.1. Planteamiento del Problema
Las plantas constituyen un recurso valioso en los sistemas de salud de los
países en desarrollo. Aunque no existen datos precisos para evaluar la
extensión del uso global de plantas medicinales, la Organización Mundial
de la Salud (OMS) ha estimado que más del 80 % de la población mundial
utiliza, rutinariamente, la medicina tradicional para satisfacer sus
necesidades de atención primaria de salud y que gran parte de los
tratamientos tradicionales implica el uso de extractos de plantas o sus
principios activos 5.
La flora peruana comprende alrededor de 25.000 especies, que se
distribuyen en los distintos pisos ecológicos 6. Los pueblos indígenas, y
principalmente aquellos originarios del Perú, poseen un enorme bagaje de
conocimientos sobre plantas medicinales. Este conocimiento ha sido
transmitido a través de varias generaciones; es por ello que el estudio de
estas plantas se convierte en una necesidad orientada a salvaguardar y
proteger esos saberes tradicionales 7.
Se contempla también otro aspecto de actualidad, referido a la
biodiversidad, ya que la desaparición de las plantas medicinales ocasiona
pérdidas irreparables al patrimonio de la humanidad. Las plantas
medicinales, corren un serio riesgo de desaparición, muchas de ellas se
mantienen gracias a tradiciones milenarias, por sus propiedades
medicinales, pero la ruptura de las costumbres ancestrales, por los
movimientos migratorios hacia las urbes, amenaza su continuidad de uso 6.
1.2. Formulación del problema
¿Tendrá actividad analgésica el extracto etanólico del fruto Vallea stipularis
L.f. “chuillur” en ratones?
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3
1.3. Justificación
La población ha ido aumentando el uso de las plantas medicinales, bajo la
creencia que las plantas son inocuas por su naturaleza, pero mediante
estudios e investigaciones farmacológicas y toxicológicas, se determinó
que los principios activos presentes en una planta medicinal tienen
propiedades beneficiosas pero a altas concentraciones pueden ser
perjudiciales para el organismo vivo.
En la actualidad cientos de plantas son utilizadas y estudiadas en el campo
de la medicina; pero se requiere seleccionar, analizar, comparar y clasificar
los efectos terapéuticos, para agrupar las plantas con propiedades
similares y para conocer los principios activos responsables de curar y
aliviar las enfermedades.
La presente investigación pretende contribuir con el estudio de una planta
medicinal, ya que no se tiene conocimiento de que se hayan realizado
trabajos y publicaciones del fruto de la especie Vallea stipularis L.f.
conocida por nuestros pobladores con el nombre popular de “chuillur”,
perteneciente a la familia de Elaeocarpaceae, se encuentra en el distrito de
Tamburco, provincia de Abancay, departamento de Apurímac a 3,100
m.s.n.m. y tiene propiedades que le han sido atribuidas por los habitantes
de esa región, para: escorbuto, cicatrizante, gastritis, reumatismo, purgante
drástico, antiinflamatorio y como analgésico.
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4
1.4. Objetivos:
1.4.1. Objetivo General.
Determinar la actividad analgésica del extracto etanólico del fruto
Vallea stipularis L.f. “chuillur” en ratones.
1.4.2. Objetivos Específicos:
Realizar el análisis fitoquímico del extracto etanólico del fruto
Vallea stipularis L.f. “chuillur” por análisis cualitativo.
Comprobar la actividad analgésica del extracto etanólico del fruto
Vallea stipularis L.f. “chuillur” en ratones.
1.5. Variables:
1.5.1. Variable Independiente.
Extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f. “chuillur”.
1.5.2. Variable Dependiente.
Actividad analgésica.
1.6. Hipótesis.
El extracto etanólico del fruto Vallea stipularis L.f. “chuillur” presenta
actividad analgésica.
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5
II. MARCO TEÓRICO
2.1. Antecedentes de la investigación.
2.1.1. Antecedentes Internacionales.
En el estudio titulado “Validación preclínica de actividad analgésica
periférica y central de la decocción de hojas frescas de Persea americana
Mill. (aguacate) y Musa x paradisiaca L. (plátano)” presentado por Garcia
A, et al. Cuba, 2014 8. Objetivo: determinar la actividad analgésica
periférica y central de las hojas de Persea americana Mill. (aguacate) y
Musa x paradisiaca L. (plátano). Métodos: se evaluó la actividad
analgésica periférica mediante el modelo de contorsiones inducidas por
ácido acético (writhing test) en ratones, a los 60 minutos de haber recibido
el tratamiento correspondiente, se inyectó por vía IP ácido acético 0,75 %
(0,1 mL/10 g), y la actividad analgésica central fue evaluada aplicando el
modelo de inducida por inmersión de la cola en agua caliente (tail flick) en
ratones, a los 60 minutos de haber recibido el tratamiento, se sumergió el
tercio distal de su cola en agua a 55 0C, inmediatamente fueron
observados por 15 minutos, con la dosis de 10 mg/kg de material
vegetal/kg en ambos estudios. Resultados: en la evaluación de la
actividad analgésica periférica, inhibieron de forma significativa la
respuesta dolorosa y en la evaluación de la actividad analgésica central
no tuvieron respuesta significativa. Conclusiones: se determinó que las
hojas de Persea americana Mill. (aguacate) y Musa x paradisiaca L.
(plátano) ambas especies medicinales presentan actividad analgésica
periférica y en cuanto a la actividad analgésica central no presentó
respuesta significativa.
En el estudio titulado “Actividad antiinflamatoria y analgésica de un
extracto orgánico del alga roja Galaxaura rugosa (J. Ellis & Solander) J.V.
Lamouroux” presentado por Duménigo A, et al. Cuba, 2014 9. Objetivo:
evaluar la actividad antiinflamatoria y analgésica del extracto en
diclorometano del alga roja Galaxaura rugosa. Métodos: la actividad
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6
analgésica se evaluó mediante el método de contorsiones abdominales
inducidas por ácido acético 0,8 % (Koster, et al.) los ratones se
distribuyeron al azar en 6 grupos de 10 cada uno. El extracto en
diclorometano (3 mg/kg, 6 mg/kg, 12,5 mg/kg y 100 mg/kg.), Ácido
acetilsalicílico (AAS) 68 mg/kg y suero fisiológico 0,9 %. Transcurrido 1
hora en el caso que se les administró el AAS y 30 minutos en el caso que
se les administró extracto, se procedió a administrar ácido acético al 0,8
% por vía IP y se cuantificó el número de contorsiones durante 20 minutos
y la actividad antiinflamatoria tópica se evaluó con el modelo de edema de
la oreja inducido por aceite de Crotón en ratones, con dosis de 0,125;
0,25; 0,5; 1 y 2 mg/oreja, dexametasona 0,1 mg/oreja y indometacina 0,5
mg/oreja. y se les administraron por vía IP. Resultados: el efecto máximo
se alcanzó a la dosis de 100 mg/kg con un 94,68 % de reducción de las
contorsiones y en el caso de la actividad antiinflamatoria el efecto máximo
se alcanzó a la dosis de 2 mg/oreja, con un 79,2 % de inhibición.
Conclusiones: se evaluó la actividad analgésica del extracto orgánico del
alga roja Galaxaura rugosa alcanzando un efecto máximo a la dosis de
100 mg/kg con un 94,68 % de inhibición de las contorsiones y la actividad
antiinflamatoria alcanzó un efecto máximo a la dosis de 2 mg/oreja, con
un 79,2 % de inhibición.
2.1.2. Antecedentes Nacionales.
En el estudio titulado “Actividad analgésica y antiinflamatoria de derivados
de podofilotoxina” presentado por Guerrero E, et al. Perú, 2013 10.
Objetivo: comprobar la actividad analgésica y antiinflamatoria de
derivados de podofilotoxina en ratones y ratas respectivamente.
Métodos: en el estudio de las hojas de Juniperus thurifera L. se aislaron,
entre otros compuestos, desoxipodofilotoxina (DP) y desoxipicropodofilina
(DPP) además del ácido thuriférico (AT). En la evaluación de la actividad
analgésica se emplearon ratones machos que fueron divididos en 5
grupos, a cada grupo le fue suministrado por vía oral uno de los
siguientes tratamientos: Ácido acetilsalicílico (AAS) 200 mg/kg, morfina 4
mg/kg, DP 50 mg/kg, DPP 50 mg/kg y AT 50 mg/kg. Todos los productos
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7
fueron suspendidos en carboximetilcelulosa (CM) al 2 %, además se
incluyó un grupo control que recibió CM 2 %; 0,1 mL/100 kg. Una hora
después de haber recibido el tratamiento, se les administró ácido acético
al 1 %, vía IP e inmediatamente se cuantifico las contorsiones en un
período de 20 minutos. Para evaluar la actividad antiinflamatoria se
empleó el test del edema plantar por carragenina en ratas 150 - 200 g.
Resultados: se determinó que el grupo DP 50 mg/kg con 77,8 % de
efecto inhibitorio frente AAS 59,5 %. En cuanto a la actividad
antiinflamatoria se obtuvo con DP 68,8 % de efecto inhibitorio frente
indometacina, 62,8 %. Conclusiones: se comprobó la actividad
analgésica de los derivados de podofilotoxina con la fracción de DP 77,8
% y la actividad antiinflamatoria de derivados de podofilotoxina alcanzó su
efecto con la fracción de DP 68,8 %.
En el estudio titulado “Acción analgésica y neurofarmacológica de las
fracciones soluble y no soluble del extracto etanólico de la semilla de
Jatropha curcas L.” presentado por Salazar A, et al. Perú, 2014 11.
Objetivo: evaluar la actividad analgésica de las fracciones de la semilla
de Jatropha curcas L. Métodos: la actividad analgésica se evaluó
mediante el método de contorsiones abdominales inducidas por ácido
acético 1,5 % (Writhing) en ratones, se distribuyeron en 8 grupos de 6
cada uno, ácido acético 0,1 mL/10 g, extracto etanólico 500 mg/kg
fracción soluble (FS), extracto etanólico 250 mg/kg fracción no soluble
(FNS), extracto etanólico 500 mg/kg fracción no soluble (FNS), extracto
etanólico 750 mg/kg fracción no soluble (FNS), agua destilada 0,1 mL/10
mg, clorhidrato de tramadol 10 mg/kg y diclofenaco sódico 10 mg/kg se
les administró por vía oral los tratamientos, luego de 30 minutos se les
aplicó por vía IP el ácido acético 1,5 %. Resultados: la dosis de 750
mg/kg de FNS se obtuvo 62,86 % presentando el mayor porcentaje de
inhibición con respecto al grupo de ácido acético 54,48 %. Conclusión:
se evaluó la actividad analgésica presentando inhibición con la FNS de
750 mg/kg del extracto etanólico de Jatropha curcas L.
Page 21
8
2.2. Bases teóricas.
2.2.1. Taxonomía de la especie Vallea stipularis L.f. “chuillur”.
La clasificación taxonómica se dio según el herbario del Museo de
Historia Natural de la U.N.M.S.M. e identificada por la Dra. Haydee
Montoya Terreros, según el sistema de clasificación de Cronquist
(1988).
División : Angiospermae
Clase : Dicotyledoneae
Sub clase : Arquichlamydeae
Orden : Malvales
Familia : Elaeocarpaceae
Género : Vallea
Especie : Vallea stipularis L.f.
Nombre vulgar : “chuillur”
2.2.2. Características de la familia Elaeocarpaceae 12, 13.
La familia Elaeocarpaceae con 10 géneros y cerca de 400 especies
está estrechamente relacionada a la familia Tiliaceas, Bombacaceae,
Malvaceae y Sterculiaceae. Más de la mitad de las especies
pertenecen a los géneros Elaeocarpus (250) y Sloanea (100). Se
distribuye en regiones tropicales y subtropicales de Asia, Australia y
América, ausente en el Continente Africano.
2.2.2.1. Especies vegetales de la familia Elaeocarpaceae.
Vallea stipularis L.f. “chuillur” (Perú) 14-16.
Aristotelia chilensis (Mol) Stutnz, “maqui” (Chile y Argentina) 17.
Elaeocarpus ganitrus “rudraksha” (India) 18, 19.
Elaeocarpus sphaericus Leaf (India, Bangladesh, Bhutan,
Nepal, Pakistan y Srilankar) 20, 21.
Page 22
9
2.2.2.2. Propiedades de las especies vegetales de la familia
Elaeocarpaceae.
Aristotelia chilensis (Mol) Stutnz, “maqui” (hojas) contiene un
efecto analgésico por vía tópica, al utilizar como modelo
algesiométrico el ensayo de tail flick 17.
Elaeocarpus ganitrus “rudraksha” (hojas) contiene efectos
analgésico, antiinflamatorio, hipoglucémico, antiulcerogénico y
muy alta actividad antimicrobiana 18, 19.
Elaeocarpus sphaericus Leaf (hojas) contiene efecto
analgésico y antiinflamatorio, utilizando el método de retirada
de la cola en ratones y carragenina inducida rata edema de la
pata en ratas respectivamente 20.
Los extractos de hojas y frutos Elaeocarpus sphaericus Leaf
tiene propiedades analgésicas, antiepilépticas,
anticonvulsivos, antihipertensivos, hipnóticos, tranquilizantes,
termogénicos, sedantes, relajantes del músculo liso 21.
2.2.2.3. Metabolitos primarios y secundarios de la familia
Elaeocarpaceae.
Aristotelia chilensis (Mol) Stutnz, “maqui” entre los estudios
químicos realizados a las hojas de esta especie se ha
identificado la presencia de los siguientes metabolitos:
triterpenos, flavonoides (quercetina), cumarinas
(escopoletina), esteroles (β-sitosterol), alcaloides (indólicos,
quinolínico e isoquinolinico) entre otros 17.
La fruta Elaeocarpus ganitrus “rudraksha” tiene muchos
fitoconstituyentes tales como alcaloides (isoelaeocarpicine,
isoelaeocarpine elaeocapine), flavonoides (quercetina),
Page 23
10
taninos, esteroides, triterpenoides, hidratos de carbono y
glucósidos cardiacos 18, 19.
Elaeocarpus sphaericus Leaf tiene varias sustancias químicas
tales como triterpenos, glucósidos, esteroides, alcaloides
(elaeocarpidine, elaeocarpine, isoelaeocarpine,
epiisoelaeocarpiline, epialloelaeocarpiline, alloelaeocarpiline,
pseudoepiisoelaeocarpiline) también indolizina (grandisines),
flavonoides (quercetina), taninos (ácidos gálico y elágico),
ácidos grasos (palmítico y linoleico), hidratos de carbono,
proteínas y cenizas 20, 21.
2.2.3. Estudio botánico de la especie Vallea stipularis L.f. “chuillur”.
2.2.3.1. Nombre común de la especie Vallea stipularis L.f.
“chuillur” 14, 15, 22.
El nombre popular de la especie Vallea stipularis L.f. es
“chuillur” a esta especie se le conoce también como:
Achacapuli, cugur, crosckash, chchicllur, chuillur (Tamburco),
chijllurmay (Cusco), gorgor, yongasil, sacha capuli, olla- olla,
tchillurnay, peralilo, rosa, cubillo, guisho (Ecuador), pera
caspi, capulí (Bolivia).
2.2.3.2. Observaciones para el reconocimiento de la especie
Vallea stipularis L.f. “chuillur” 15.
La especie Vallea stipularis L.f. “chuillur” es fácilmente
reconocible por sus hojas acorazonadas, con los peciolos
ensanchados en sus extremos, es característico también la
pubescencia en la zona de inserción del peciolo en la lámina y
en el envés de ésta.
Page 24
11
2.2.4. Descripción Botánica 14, 15.
Es un árbol de 8 a 10 metros de altura aproximadamente, de copa
redonda y tronco cilíndrico.
2.2.4.1. Corteza. La parte externa es fisurada, de color café, sin
secreciones ni exudados.
2.2.4.2. Hojas. Son acorazonadas, alternas (4 - 7 cm. de largo y de 2
- 4 cm. de ancho) de color verde amarillento brillante
por el haz y verde claro por el envés con peciolos
largos simples, alternos de base truncada, ápice
acuminado y borde entero.
2.2.4.3. Inflorescencia. Es una panícula de 9 -14 flores.
2.2.4.4. Flores. Son completas de color rojo¸ el cáliz es caduco y
pentámero, al igual que la corola; el androceo está
compuesto generalmente de 32 estambres y el gineceo de
un ovario supero con estilo simple y estigma compuesto.
2.2.4.5. Fruto. Es una cápsula globosa negruzca cuando está
madura, la misma que contiene de 2 - 5 semillas de color
blanco.
2.2.5. Distribución de la especie Vallea stipularis L.f. “chuillur” 14, 15.
La familia de Elaeocarpaceae se desarrolla en regiones tropicales y
subtropicales con algunas especies en zonas templadas. El género
Vallea, posee dos especies en hábitat desde Venezuela hasta Bolivia,
una de ellas, nativa del Perú: Vallea stipularis L.f. “chuillur”, se
desarrolla a una temperatura media anual 10 – 17 °C y se encuentra
en el distrito de Tamburco, provincia de Abancay, departamento de
Apurímac a 3,100 m.s.n.m. Observada en el Ecuador entre los 2,500
Page 25
12
– 3,900 m.s.n.m., en el Perú entre los 2,200 – 3,200 m.s.n.m., y en
Colombia de 2,200 – 3,400 m.s.n.m.
2.2.6. Usos populares y propiedades medicinales 14, 15.
Vallea stipularis L.f. “chuillur”, es una planta de la región andina,
empleada por las comunidades campesinas para el tratamiento de:
escorbuto, cicatrizante, gastritis, reumatismo, purgante drástico,
antiinflamatorio y como analgésico (tabla 1).
Tabla 1. Información etnofarmacológica de Vallea stipularis L.f. “chuillur”.
Propiedades
terapéuticas
Parte
utilizada
Preparación Administración
Afecciones del
hígado
Hojas Infusión 10 g/L x 10´ Tomar 1 taza en ayunas
Analgésico y
Antiinflamatorio
Hojas y
fruto
Infusión 10 g/L x 10´ Tomar 1 taza, 3 veces al día
Cicatrizante Hojas y
fruto
Cocimiento 10 g/L x 5´ Lavar la zona afectada 2 - 3
veces x día, en caso del fruto
moler las semillas y aplicarse
a la herida
Purgante
drástico
Fruto Infusión 10 g/L x 5´ Tomar 1 taza en ayunas
Escorbuto Hojas 4 semillas de fruto
fresco, triturar hasta
obtener un jugo
Usar un hisopo y aplicarse
antes de dormir
Gastritis
Hojas Infusión 10 g/L x 10´ Tomar 1 taza, 3 veces al día
Prostatitis
Hojas Infusión 10 g/L x 10´ Tomar 1 taza, 3 veces al día
Fuente: Chávez J. 14, Rafaile S. 16
Page 26
13
2.3. Flavonoides.
Los flavonoides se encuentran ampliamente distribuidos en las plantas,
principalmente las angiospermas en (hojas, flores y frutos) aunque poco se
ha detectado en hongos y algas. Los flavonoides proceden del metabolismo
secundario de las plantas a través de la ruta de los policétidos que sintetiza
el anillo A, y por la ruta del ácido shikimico que sintetiza el anillo B y la
unidad C de los flavonoides 23.
Los flavonoides tienen una estructura de anillos formada por 15 átomos de
carbono (C6-C3-C6), que consiste en dos anillos aromáticos (A y B) que
contienen generalmente grupos hidroxilos unidos por una cadena lineal de
tres carbonos como se muestra en la figura 1. En algunos casos el anillo
heterocíclico C se encuentra de forma abierta. Los diferentes tipos de
flavonoides difieren en el nivel de oxidación y la saturación del anillo C,
mientras que los compuestos individuales dentro de una clase difieren en el
patrón de sustitución de los anillos A y B 24.
Figura 1. Estructura básica de los flavonoides.
Fuente: Solís M. 25
Page 27
14
2.3.1. Clasificación de los flavonoides 25-27.
Los flavonoides se clasifican a partir de sus variaciones estructurales.
Al modificar el esqueleto común de los flavonoides por glicosilación,
oxidación, reducción o alquilación; el núcleo genera un escaso
número de estructuras básicas de las cuales se derivan la amplia
gama de flavonoides.
Se trata de compuestos polifenólicos que se caracterizan por poseer
un mismo elemento estructural, conocido como encadenamiento
diaril-propánico, fenilcromano o benzopiránico. Esta estructura es del
tipo Ar-C3-Ar o bien C6-C3-C6, lo que viene a decir que: C6 son anillos
bencénicos (anillo A y anillo B) unidos entre sí a través de una cadena
de 3 átomos de carbono que puede formar o no un tercer anillo pirano
o pirona anillo C).
Todos ellos comparten una estructura común, un grupo fenol, al que
pueden asociarse núcleos aromáticos con diversos tipos de
sustituyentes, predominando los grupos hidroxilos. Sus estructuras
químicas les permiten donar hidrógeno/electrones a los radicales
libres, lo que les confiere el carácter antioxidante.
Atendiendo a lo anteriormente expuesto los compuestos flavónicos se
pueden clasificar en dos grupos, los flavonoides “propiamente dichos”
y los compuestos relacionados con ellos. Los flavonoides propiamente
dichos (figura 2) se caracterizan por poseer un núcleo fenilcromona
(fenil – benzo - y - pirona), y dependiendo de la posición del anillo
fenólico B, se subdividen en compuestos 2- fenilcromona
(flavonoides) y compuestos 3-fenilcromona (isoflavonoides). A su vez,
estos compuestos dan origen a las flavanonas e isoflavanonas por
hidrogenación del anillo C. Asimismo, la hidroxilación del carbono 3
en la serie de las 2-fenilcromonas da lugar a los flavonoles y a los
flavanonoles (2,3-dihidroflavonoles).
Page 28
15
Figura 2. Estructura básica de los flavonoides “propiamente dichos”.
Fuente: Bonkanka C.26
Figura 3. Estructura básica de los compuestos relacionados a los
flavonoides.
Fuente: Bonkanka C.26
Page 29
16
Por otro lado, entre los compuestos relacionados a los flavonoides
(figura 3) podemos incluir a las catequinas, flavan-3-oles, flavan-3,4-
dioles, antocianos, chalconas, auronas, xantonas y los neoflavonoides.
2.3.2. Efectos farmacológicos de los flavonoides.
Los flavonoides constituyen una de las familias de compuestos naturales
más interesantes por su amplia bioactividad y presencia en la dieta
humana, numerosos estudios in vitro han confirmado sus efectos
antioxidantes, reducen la formación de radicales libres, inhiben la
peroxidación lipídica, poseen efectos antimutagénicos y tienen la
capacidad de inhibir diversas enzimas. Estudios in vivo han demostrado
que los flavonoides presentan numerosas actividades farmacológicas:
antianginosa, antitumoral, analgésica, antiinflamatoria, antialérgica,
antiulcerosa, hepatoprotectora y acción protectora vascular 27.
Esta variedad estructural está relacionada con las diversas actividades
biológicas que poseen los flavonoides, de entre las cuales destaca, tal
vez por ser una de las más estudiadas, sus propiedades
antiinflamatorias. Desde 1948 se describieron las propiedades
antiinflamatorias de la hesperidina, la naringenina y la nobiletina,
presentes en la fracción soluble en agua de casi todas las especies de
Citrus; a partir de entonces son muchos los estudios in vivo e in vitro que
describen las propiedades antiinflamatorias de los flavonoides y sus
mecanismos 28.
Los flavonoides destacan desde el punto de vista farmacológico por su
baja toxicidad y por presentar numerosos efectos biológicos y
actividades terapéuticas, estudios in vivo demuestran que los
flavonoides potencialmente presentan numerosas actividades
farmacológicas, antitumoral, analgésica, antiinflamatoria, antialérgica,
antiulcerosa y hepatoprotectora, etc. 28, 29.
Page 30
17
Antocianinas, (figura 4) son un subgrupo perteneciente a la gran familia
de flavonoides, tiene beneficios para la salud como: anticancerígenos,
antitumorales y antinflamatorios 30.
Quercetina, (figura 4) es una flavona más comúnmente hallada en la
naturaleza que posee efectos antiinflamatorios y analgésicos 17, 23.
Hesperidina, (figura 4) una flavanona importante de Citrus sp, posee
efectos antiinflamatorios y analgésicos, se ha utilizado para el
tratamiento de ciertas enfermedades como la artritis 31, 32.
Los flavonoides que se encuentran en altas concentraciones en las hojas
de Aristotelia chilensis (Mol) Stutnz, “maqui”, es una especie
perteneciente a la familia Elaeocarpaceae jugarían un rol importante en
la actividad analgésica, antiinflamatoria y antioxidante 17, 33, 34.
Además de sus propiedades analgésicas y antiinflamatorias se ha
descrito una variedad de efectos producidos por diversos metanolitos.
En la tabla 2 se describen los efectos terapéuticos más representativos
de los flavonoides 28.
Page 31
18
Figura 4. Estructuras químicas de los distintos tipos de flavonoides.
Fuente: Sánchez J. 35
Page 32
19
Tabla 2. Efecto farmacológico de algunos flavonoides.
Efectos farmacológicos Flavonoides
Antineoplásico Quercetina, kaemferol, fiselina.
Cardiotónicos 3 – metil – quercetina.
Disminuyen la fragilidad
capilar
Rutina, quercetina, naringenina.
Antitrombóticas Tangeretina, hesperidina y rutina.
Colesterol Liquiritigenina.
Protección y
regeneración hepática
Gosipina, hispidulina, hidroxietilrutósido, kolavirona,
quercetina, silimarina y apigenina.
Antiulcerosa Kaemferol, quercetina, rutina, solona y naringina.
Antimicrobianos Quercetina y baicalina.
Antibacterial Crisina y rutina.
Antiviral Crisoeriol.
Antifúngica Cloroflavonina y apigenina.
Antiinflamatorio Hesperidina, apigenina, crisina, gosipina, hibrifolina,
luteolina, miricetina, nepetina, quercetina,
quercitrina, rutina, y sidertoflavonona.
Analgésico Quercetina, hesperidina y miricitrina.
Anticancerígeno Baicaleína, epigalocatequina, nobiletina,
quercetina, rutina, y tangeretina.
Antialérgica Quercetina.
Antiaterogénica Quercetina.
Antidiabética Quercetina.
Antidiarreica Apigenina, kaenferol, morina, miricetina,
naringenina, quercetina y quercitrina.
Antiespasmódica Apigenina, crisina, kaenferol y quercetina.
Antiosteoporotica Ipriflavona.
Protector vascular Antocianidina, citrina y rutósido.
Fuente: Bonkanka C.26, Estrada R. 28
Page 33
20
2.4. Estudios de actividad analgésica.
2.4.1. Analgesia
La palabra analgesia procede del griego a - carencia, negación, y
algos - dolor. Por lo tanto, define a la analgesia como la falta o
supresión de toda sensación dolorosa, sin pérdida de los restantes
modos de la sensibilidad, es decir, es una condición en la cual se
perciben los estímulos nociceptivos pero no se interpretan como
dolor, por lo común va acompañada de sedación sin pérdida de la
conciencia 36.
2.4.2. Dolor
La International Association for Study of Pain (IASP) definió al dolor
como “una experiencia sensorial y emocional desagradable
asociada a una lesión en los tejidos real o potencial” 37.
El dolor afecta de forma relevante la calidad de vida de la población,
con importantes consecuencias en el ámbito personal, familiar y
social. Representa un problema de salud pública dada su gran
repercusión socioeconómica y constituye uno de los motivos más
frecuentes de utilización de los servicios de salud 38.
2.4.3. Fisiopatología del dolor 36, 39.
El componente fisiológico del dolor se denomina nocicepción, el cual
consiste en el proceso de transducción, transmisión y modulación de
las señales nerviosas generadas en respuesta a un estímulo nocivo
externo. Este es un proceso fisiológico que resulta en una percepción
consciente del dolor. En su forma más simple, el sistema puede ser
considerado como una cadena de tres neuronas, con una neurona
denominada de primer orden que se origina en la periferia y que se
proyecta a la médula espinal, otra neurona de segundo orden que
Page 34
21
asciende desde la médula espinal, y una neurona de tercer orden que
se proyecta a la corteza cerebral. En una forma más compleja del
sistema puede haber comunicación con otras neuronas sensitivas y
vías neuronales descendentes inhibitorias que provienen del cerebro
medio y que son capaces de modular el estímulo doloroso.
Para que se produzca una sensación dolorosa se requiere de la
estimulación de receptores específicos o nociceptores, que
corresponden a terminaciones nerviosas especializadas, propias de
nervios sensitivos o neuronas de primer orden, que se encuentran en
piel y órganos, las cuales pueden ser estimuladas por una diversidad
de estímulos como presión y lesión de las fibras del dolor, calor
superior a 45 °C, inyección de sustancias químicas o por daño tisular.
El dolor se inicia con un trauma que a nivel de los tejidos provoca la
liberación de: prostaglandinas (Pg), cininógeno, bradicidina y
tromboxanos (Tx).
Esta produce edema y liberación de histamina, serotonina,
bradiquinina, acetilcolina, degranulación de los mastocitos, etc., que
estimulan los nociceptores (receptores del dolor) que están
localizados en los tejidos periféricos.
Este trauma, junto con la cadena de acontecimientos señalados,
produce vasodilatación y aumento de la permeabilidad vascular
(edemas), se liberan proteasas a nivel periférico y promueven la
proteólisis e inflamación, se produce exudación del plasma y la
presencia de leucocitos polimorfo nucleares, monocitos y linfocitos.
En las células comienza la activación de la cascada del ciclo del ácido
araquidónico que activa la destrucción de los fosfolípidos de la
membrana, la misma que lo hace por la presencia de la enzima
fosfolipasa. Aumenta la producción del ácido araquidónico y por
efecto de la lipooxigenasa (Lox) y la ciclooxigenasa (Cox), se generan
Page 35
22
las prostaglandinas, leucotrienos y tromboxanos. Se inicia así otra vía
de activación del dolor: la de los hidroximetabolitos y leucotrienos.
2.4.4. Origen del dolor: 37, 40 – 42
2.4.4.1. Dolor nociceptivo.
Es causado por la activación de los receptores del dolor
(nociceptores) en respuesta a un estímulo (lesión,
inflamación, infección, enfermedad). Como ocurre con el dolor
agudo, suele haber una relación directa entre su intensidad y
la gravedad de la agresión.
2.4.4.2. Dolor neuropático.
Special Interest Group on Neuropathic Pain (NeuPSIG) de la
Asociación Internacional para el Estudio del Dolor (IASP),
propuso a finales del 2007 una nueva definición de dolor
neuropático como “El dolor que se origina como consecuencia
directa de una lesión o enfermedad que afecta al sistema
somatosensorial”. Es causado por el daño estructural y la
disfunción de las neuronas del sistema nervioso central
S.N.C. o periférico. Además, el dolor neuropático puede
deberse a compresión nerviosa o al procesamiento anormal
de las señales dolorosas por el cerebro o la médula espinal.
2.4.4.3. Dolor somático.
El dolor somático se debe a lesiones en los tejidos corporales
tales como (piel, boca, nariz, uretra, ano, etc.), o en tejidos
profundos como: articulares, músculos y huesos. Se
caracteriza por ser bien localizado, pero variable en la
descripción y la experiencia. Por ejemplo, las alteraciones
tisulares ocasionadas por cortes o esguinces producen dolor
Page 36
23
somático superficial, mientras que los calambres musculares
por falta de oxigenación producen dolor somático profundo.
2.4.4.4. Dolor visceral.
El dolor visceral se caracteriza por ser, cólico cuando la
víscera es hueca, profundo, sordo, difuso, mal localizado
que en ocasiones se irradia o se refiere en un área distante
al órgano afectado. Suele acompañarse de sintomatología
vegetativa, como náuseas, vómitos, sudoración, aumentos
de la presión arterial y frecuencia cardiaca. Ejemplos de
este tipo de dolor seria el asociado con apendicitis,
colecistitis, o patología pleural.
2.4.5. Clasificación del dolor: 37, 40 – 42
2.4.5.1. Dolor agudo.
Inicialmente el dolor agudo se definió simplemente en términos
de duración, pero en la actualidad se define como “una
experiencia desagradable y compleja con factores cognitivos y
sensoriales que suceden como respuesta a un trauma tisular”.
2.4.5.2. Dolor crónico.
Se define como “el dolor que se extiende más de 3 ó 6 meses
desde su aparición o que se extiende más allá del período de
curación de una lesión tisular, o está asociado a una condición
médica crónica”.
Page 37
24
2.5. Escala analgésica de la O.M.S 43.
Existen unas normas de uso de la escala analgésica:
La cuantificación de la intensidad del dolor es esencial en el manejo y
seguimiento del dolor. Generalmente se utilizan escalas
unidimensionales como la escala verbal descriptiva (EVD) o la escala
visual analógica (EVA).
La subida de escalón depende del fallo al escalón anterior, (figura 5). En
primer lugar se prescriben los analgésicos del primer escalón. Si no
mejora, se pasará a los analgésicos del segundo escalón, combinados
con los del primer escalón más algún coadyuvante si es necesario. Si no
mejora el paciente, se iniciarán los opioides potentes, combinados con
los del primer escalón, con el coadyuvante si es necesario.
Si hay fallo en un escalón el intercambio entre fármacos del mismo
escalón puede no mejorar la analgesia (excepto en el 3 escalón).
Si el segundo escalón no es eficaz, no demorar la subida al tercer
escalón.
La prescripción de co-analgésicos se basa en la causa del dolor y se
deben mantener cuando se sube de escalón.
No mezclar los opioides débiles con los potentes.
Prescribir cobertura analgésica del dolor irruptivo.
Page 38
25
Figura 5. Escalera analgésica de la OMS modificada.
Fuente: Argitalpen E.43
Analgésicos no opioides:
- AINE
- Paracetamol
- Metamizol
Pueden asociarse a los fármacos
del primer escalón en
determinadas situaciones.
Pueden asociarse a los fármacos del
primer escalón en determinadas
situaciones.
Opioides débiles:
- Codeína
- Dihidrocodeina
- Clorhidrato de Tramadol
Opioides potentes:
- Morfina
- Fentanilo
- Oxicodona
- Metadona
- Buprenorfina
Primer escalón
Segundo escalón
Tercer escalón
Posibilidad de usar coadyuvantes en cualquier escalón según la situación clínica y causa específica del dolor.
Page 39
26
2.6. Analgésicos
Los analgésicos son los fármacos de elección para las diversas
clasificaciones del dolor, siguiendo ciertos principios básicos como: la
elección del fármaco más adecuado en cada caso; la determinación de la
dosis, intervalo y vía de administración; asociaciones de fármacos para
conseguir una mayor potencia; y tratar de evitar en lo posible la aparición
de efectos adversos. Aunque la solución ideal para el dolor sería eliminar la
causa que lo produce, con frecuencia esto no es posible o no puede
hacerse con la suficiente rapidez y se precisa un tratamiento sintomático.
Para ello se utilizan fundamentalmente los analgésicos, aunque también
pueden emplearse coadyuvantes 40.
2.7.1. Analgésico menores (no opioides)
Los analgésicos con propiedades antipiréticas (AAP) y con
propiedades antiinflamatorias de carácter no esteroideo (AINE)
deben ser considerados inicialmente por lo que son adecuados para
dolores leves y moderados. Cubren un número importante de
indicaciones terapéuticas, tienen un "techo" analgésico, es decir, que
por encima de la dosis máxima no tienen mayor eficacia analgésica,
su asociación a codeína con o sin cafeína, aumenta algo este
"techo" estos fármacos, como todos, tienen sus ventajas y sus
riesgos 44, 45.
Su mecanismo de acción se basa en la inhibición de la
ciclooxigenasa (COX), que interviene en la síntesis de
prostaglandinas, los leucotrienos y otros importantes productos
metabólicos, todos ellos derivados del ácido araquidónico. La
inactivación de estas enzimas bloquea la sensibilización y activación
de fibras nerviosas periféricas, disminuyendo el número de impulsos
hacia el sistema nervioso central 46, 47.
Page 40
27
2.7.1.1. Paracetamol (acetaminofén)
Derivado p-aminofenólico, inhibidor de la síntesis de
prostaglandinas a nivel central por acción sobre la
ciclooxigenasa. Al contrario que los AINE el paracetamol
(figura 6) no presenta acción antiinflamatoria, ni
antiagregante plaquetaria 40, 45, 48.
El paracetamol es analgésico y antipirético pero es mucho
menos irritante a la mucosa gástrica que los antiinflamatorios
no esteroideos y ácido acetilsalicílico, por lo que es
preferible su uso en situaciones febriles y dolorosas 46, 49.
Figura 6. Formula química del paracetamol.
Fuente: Munive R.50
2.7.2. Analgésicos opiáceos 45, 49, 51, 52.
Constituyen un grupo que se caracteriza por poseer afinidad selectiva
por los receptores opioides (μ, k, ∂,) y como consecuencia inducen
analgesia de elevada intensidad, producida sobre el S.N.C., por ello
es de gran utilidad para aliviar dolores moderados a severos
particularmente de origen visceral (como en el cáncer); su
Page 41
28
administración repetida ocasiona dependencia y tolerancia. Durante
su administración se debe evitar el consumo de alcohol u otros
depresores del S.N.C., en especial en el tratamiento a pacientes con
depresión respiratoria.
Para obtener una dosis que proporcione un alivio adecuado del dolor
con un grado aceptable de efectos colaterales, las dosis de morfina o
de otros opioides potentes tienen que incrementarse gradualmente
hasta que sean eficaces. Al contrario de lo que ocurre con el
paracetamol y los AINE, no hay un límite superior para las dosis de
analgésicos opioides. El objetivo del ajuste de las dosis para aliviar el
dolor consiste en seleccionar la dosis que evite que el paciente sufra
dolor entre una administración y la siguiente, utilizando la mínima
dosis eficaz. La mejor forma de lograr este objetivo consiste en
realizar evaluaciones frecuentes del alivio del dolor, ajustando las
dosis del analgésico según sea necesario.
Este grupo de fármacos constituyen la herramienta más potente
disponible en la actualidad para el tratamiento del dolor. De todos los
analgésicos son estos los que presenten un intervalo de eficacia más
amplio, proporcionando el método más seguro para conseguir un
alivio rápido del dolor de intensidad moderada a severa.
2.7.2.1. Clorhidrato de Tramadol
Es un opioide débil muy prescrito para el tratamiento del
dolor moderado. La eficacia analgésica es intermedia entre
la codeína y la morfina. El clorhidrato de tramadol tiene alta
biodisponibilidad (70 – 90 %), por lo que se absorbe rápida y
casi totalmente después de la administración oral 53.
Su mecanismo de acción no está aclarado del todo, aunque
parece que coexisten dos mecanismos complementarios.
Por una parte se une a receptores μ, y por otra actúa
Page 42
29
inhibiendo la recaptación de la norepinefrina y la serotonina
a nivel presináptico. 52.
El clorhidrato de tramadol (figura 7) posee una elevada
afinidad tisular, siendo su unión a las proteínas plasmáticas
del 20%, mientras que su concentración plasmática máxima
se alcanza cinco horas después de la administración, debido
a esto, esta droga atraviesa las barreras hematoencefálica y
placentaria y en unos porcentajes mínimos (< 0,2 %) pasa a
la leche materna y su periodo de semidesintegración es de
aproximadamente 6 horas, independiente del modo de
administración 50.
Figura 7. Formula química de clorhidrato de tramadol.
Fuente: Munive R.50
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30
III. MATERIALES Y MÉTODOS
3.1. Tipos de investigación.
Experimental
Observacional y
Descriptivo
3.2. Población y muestra.
3.2.1. Población
La población de estudio está conformada por ratones albinos de cepa
Balb/C53/CNPB y especie Mus musculus de 2 meses de edad
provenientes del Instituto Nacional de Salud (INS).
3.2.2. Muestra
Se tomó 56 ratones albinos de cepa Balb/C53/CNPB y especie Mus
musculus de ambos sexos de 25 38 g de peso corporal.
3.3. Criterios de inclusión y exclusión.
3.3.1. Criterios de inclusión
Ratones albinos de ambos sexos.
Ratones albinos de 25 38 g de peso corporal.
Ratones albinos que no tengan características apreciables de
enfermedad.
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31
3.3.2. Criterios de exclusión
Ratones albinos que no cumplan con el rango de peso corporal
especificado.
Ratones albinos que hayan sido utilizados anteriormente para
modelos de experimentación.
Ratones albinos con características apreciables de enfermedad.
3.4. Materiales, solventes y reactivos.
3.4.1. Material vegetal.
Fruto de la especie Vallea stipularis L.f. “chuillur”.
3.4.2. Material biológico.
Para esta investigación se usó 56 ratones albinos de ambos sexos de
la especie Mus musculus y de cepa Balb/C53/CNPB entre 25 38 g de
peso corporal, provenientes del Instituto Nacional de Salud (Centro
Nacional de Productos Biológicos) de Chorrillos – Lima.
3.4.3. Material químico.
3.4.3.1. Solventes químicos:
- Agua destilada.
- Acetato de etilo Q.P. Merck Chemical®.
- Acetona Q.P. Merck Chemical®.
- Benceno Q.P. Merck Chemical®.
- Cloroformo Q.P. Merck Chemical®.
- Etanol Q.P. Merck Chemical®.
- Éter etílico Q.P. Merck Chemical®.
- Éter de petróleo Q.P. Merck Chemical®.
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32
- Hexano Q.P. Merck Chemical®.
- Metanol Q.P. Merck Chemical®.
- N-butanol Q.P. Merck Chemical®.
3.4.3.2. Reactivos químicos:
- Mayer.
- Dragendorff.
- Tricloruro férrico.
- Popoff.
- Gelatina + Cloruro de sodio.
- Fehling A y Fehling B.
- Tricloruro de aluminio.
- Shinoda.
- Ninhidrina.
- Salkowski.
- Liebermann - Burchard.
- Wagner.
3.4.4. Materiales para obtención de la muestra.
- Beacker 100 mL y 250 mL de vidrio tipo Pyrex®.
- Gasa Medica 20 x 20 cm.
- Algodón CKF 500 g
- Papel filtro whatman N°40.
- Gotero de plástico.
- Bagueta de vidrio.
- Frasco de vidrio de 20 L.
- Fuente de vidrio Pyrex®.
- Guantes látex descartable N° 6 ½ y 7.
- Mascarillas descartable Prosemedic.
- Gorra descartable Prosemedic.
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33
3.4.5. Equipos para obtención de la muestra.
- Balanza semi - analítica de marca Sartorius® (modelo ELT602,
serie 25955357).
- Balanza analítica de marca Sartorius® (modelo TE 4101, serie
17503114).
- Balanza granataria de marca OHAUS® (modelo 28073).
- Estufa de marca Memmert Gmbh + Co.KG Typ Um 20.
- Campana extractora de marca KtPERÚ, (modelo: CL – 1000).
- Lámpara UV (modelo 4305M/MH).
- Molino nacional (marca: Rey).
- Tamices luz de la malla 20 µ.
3.4.6. Materiales para determinación de los ensayos preliminares.
- Beacker 100 mL y 250 mL de vidrio tipo Pyrex®.
- Gotero de plástico.
- Pipetas de vidrio 1 mL, 2 mL, 5 mL y 10 mL.
- Propipeta de goma.
- Mortero y pilón de porcelana.
- Espátula de metal.
- Bagueta de vidrio.
- Tubos de ensayo de vidrio 13 x 100 mL.
- Cuba cromatografíca de vidrio 10 x 10 cm.
- Probeta de 100 mL.
- Cocinilla eléctrica de marca CERAN® 500209.
- Guantes látex descartable N° 6 ½ y 7.
- Mascarillas descartable Prosemedic.
- Gorra descartable Prosemedic.
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34
3.4.7. Materiales para determinación de los estudios farmacológicos.
- Sonda orogástrica N° 18 de metal.
- Jaula de metal para ratones.
- Beacker 50 mL de vidrio tipo Pyrex®.
- Gotero de plástico.
- Jeringa de insulina graduada 1 mL Terumo®.
- Guantes látex descartable N° 6 ½ y 7.
- Mascarillas descartable Prosemedic.
- Gorra descartable Prosemedic.
3.4.8. Reactivo.
- Ácido acético glacial 100 % Q.P. Merck Chemical®.
3.4.9. Medicamentos y otros.
- Clorhidrato de Tramadol Q.P.
- Paracetamol Q.P.
- Extracto etanólico del fruto Vallea stipularis L.f. “chuillur”.
3.4.10. Alimento.
- Comida balanceada pellets para ratones.
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35
3.5. Metodología de la preparación y evaluación de la actividad analgésica.
Figura 8. Preparación y evaluación de la actividad analgésica del extracto
etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f. “chuillur”.
Selección
del fruto
maduro
Pulverización del
fruto
Macerar en etanol
de 70 ° x 7 días
Filtrar
Pesado del
extracto
Estufa a 40 °C
hasta secar la
muestra
Solución
traslúcida
Gasa
Algodón
Papel
filtro
Fuente de
vidrio pírex
Concentración del extracto
(evaporación de alcohol)
Marco
Muestra del extracto seco del fruto de Vallea
stipularis L.f. “chuillur” en un frasco ámbar de
vidrio (rotulado)
Prueba de solubilidad
Análisis fitoquímico
Actividad analgésica
del extracto etanólico
del fruto de Vallea
stipularis L.f. 50 mg,
100 mg y 200 mg.
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36
3.6. Lugar de ejecución.
El presente trabajo de investigación se desarrolló en el Centro de
Investigación de Productos Naturales, Laboratorio de Farmacología y
Bioterio de la Universidad Privada Norbert Wiener, entre los meses de
enero – marzo del 2015.
3.7. Estudio fitoquímico.
3.7.1. Recolección del material botánico
La especie Vallea stipularis L.f. “chuillur” fue recolectada en enero
del 2015, un aproximado de 10 kilos, de la comunidad de San
Antonio, ubicada en el distrito de Tamburco, provincia de Abancay
departamento de Apurímac, a 3,100 m.s.n.m. La muestra
recolectada y seleccionada se envolvió con papel kraff y se roció
alcohol 96° para su conservación y se embaló en cajas de cartón
con su respectivo rotulo.
3.7.2. Preparación del extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis
L.f. “chuillur”.
De la especie vegetal recolectada se seleccionaron cuatro kilos de
los frutos de Vallea stipularis L.f. “chuillur”, se procedió a la
pulverización de las mismas, usando un molino mecánico marca
nacional, hasta obtener un polvo fino, el cual pasó por un tamiz de
20 µ para la homogenización de partículas. El polvo fino se maceró
en un recipiente herméticamente cerrado en alcohol de 70° donde
permaneció por 7 días, se procedió al filtrado para ser colocado en
una estufa a 40 °C hasta obtener el extracto seco que fue 120
gramos.
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37
3.8. Ensayos preliminares.
3.8.1. Prueba de solubilidad de la especie Vallea stipularis L.f.
“chuillur” 54.
La prueba de solubilidad es una técnica cualitativa para determinar
el comportamiento de disolución del extracto seco del fruto Vallea
stipularis L.f. “chuillur en diversos solventes con diferentes
polaridades, permitiendo encontrar el sistema de solvente apropiado.
Se realizó con 11 tubos de ensayo lo cual se tomó una cantidad
aproximadamente de 2 mg del extracto seco del fruto Vallea
stipularis L.f. “chuillur” con una bagueta incorporándolo en las bases
de los tubos, luego se agregó 1 mL de los siguientes solventes:
Agua destilada.
Etanol.
Metanol.
N-Butanol.
Acetona.
Acetato de etilo.
Cloroformo.
Hexano.
Benceno.
Éter etílico.
Éter de petróleo.
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38
3.8.2. Análisis fitoquímico de la especie Vallea stipularis L.f.
“chuillur” 14, 15.
El análisis fitoquímico es una técnica cualitativa, basándose en
pruebas de coloración y precipitación, por lo cual se utilizan
diversos reactivos químicos, con el fin de confirmar la presencia o
ausencia de metabolitos primarios y secundarios presentes en el
extracto seco del fruto Vallea stipularis L.f. “chuillur”,
Se realizó con 12 tubos de ensayo de la siguiente manera:
Se tomó una cantidad aproximada de 20 mg del extracto seco del
fruto Vallea stipularis L.f. “chuillur” incorporándolo en la base del
tubo de ensayo con la ayuda de la bagueta, a esta muestra se le
solubilizo con un solvente soluble (metanol), luego se le agrego
aproximadamente I a V gotas de los siguientes reactivos químicos:
Mayer.
Dragendorff.
Tricloruro férrico.
Popoff.
Gelatina + Cloruro de sodio.
Fehling A y Fehling B.
Tricloruro de aluminio.
Shinoda.
Ninhidrina.
Salkowski.
Liebermman - Burchard.
Wagner.
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39
3.9. Procedimiento de la actividad analgésica en ratones.
Figura 9. Selección de los animales de experimentación 56 ratones albinos
especie Mus musculus y de cepa Balb/C53/CNPB (28 ratones hembras y 28
ratones machos).
Grupo I
Agua destilada
Grupo II
AcOH
0,8 %
Grupo III
Extracto
EtOH
50 mg/kg
Grupo IV
Extracto
EtOH
100 mg/kg
Grupo V
Extracto
EtOH
200 mg/kg
Grupo VI
Paracetamol
Q.P.
300 mg/kg
Grupo VII
Clorhidrato de
Tramadol Q.P.
40 mg/kg
7 días de aclimatación y 24 horas de ayuno previos al
ensayo
Se seleccionaron 7 grupos aleatoriamente, cada grupo
consta de 8 ratones (4 hembras y 4 machos)
Adquisición del material biológico: 56 ratones albinos de
especie Mus musculus y de cepa Balb/C53/CNPB con un
peso corporal comprendido entre 25 38 g.
Grupo sin
tratamiento
Grupo
Control
Extracto etanólico del fruto Vallea
stipularis L.f. “chuillur”
Paracetamol
Q.P. 300
mg/kg
Clorhidrato de
Tramadol Q.P.
40 mg/kg
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40
3.10. Estudios farmacológicos.
3.10.1. Animales de experimentación.
Se utilizaron 56 ratones albinos de especie Mus musculus y de
cepa Balb/C53/CNPB, con un peso corporal comprendido entre
25 38 g procedentes del Instituto Nacional de Salud (Centro
Nacional de Productos Biológicos) de Chorrillos - Lima.
Los ratones albinos se mantuvieron aclimatando en el bioterio de
la Universidad Privada Norbert Wiener, durante 7 días, luego se
emplearon aleatoriamente un total de 7 grupos, con 8 ratones
cada uno. Después de ser pesados fueron alojados en jaulas
metálicas bajo condiciones ambientales normales, con libre
acceso a comida balanceada y agua, con el ciclo de 12 horas de
luz y 12 horas de oscuridad.
3.10.2. Preparación de las dosis del extracto etanólico del fruto
Vallea stipularis L.f. “chuillur”.
A partir del extracto etanólico del fruto Vallea stipularis L.f.
“chuillur” se preparó con agua destilada, tres dosis del extracto
etanólico de diferentes concentraciones 50 mg/kg, 100 mg/kg y
200 mg/kg, dejando en reposo por 5 minutos, para luego ser
empleados con fines de experimentación.
3.10.3. Preparación de los medicamentos Q. P.
A partir de los medicamentos químicamente puros de
paracetamol y clorhidrato de tramadol al 100 %, se preparó a
concentraciones que requirió el método, paracetamol Q.P. 300
mg/kg y clorhidrato de tramadol Q.P. 40 mg/kg disueltos con
agua destilada dejando en reposo por 5 minutos para luego ser
empleados con fines de experimentación.
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41
3.10.4. Evaluación de la técnica del ácido acético 0,8 %.
La acción analgésica se evaluó mediante el método de
contorsiones abdominales inducidas por un agente irritante como
ácido acético 0,8 % (Koster, et al.) 55.
Los ratones albinos de especie Mus musculus y de cepa
Balb/C53/CNPB, se mantuvieron aclimatados en el bioterio por 7
días acondicionándoles 12 horas de luz y 12 horas de oscuridad.
Se trabajó con ratones albinos de un peso corporal comprendido
entre 25 38 g y aleatoriamente se formaron 7 grupos, con 8
ratones cada uno (tabla 3), previamente al ensayo se les
mantuvo 24 horas de ayuno.
Tabla 3. Distribución aleatoria de animales de experimentación
(ratones albinos de especie Mus musculus)
Grupos Tratamiento
Grupo I sin tratamiento Agua destilada
Grupo II control AcOH 0,8 %
Grupo III extracto EtOH Extracto EtOH 50 mg/kg + AcOH 0,8 %
Grupo IV extracto EtOH Extracto EtOH 100 mg/kg + AcOH 0,8 %
Grupo V extracto EtOH Extracto EtOH 200 mg/kg + AcOH 0,8 %
Grupo VI paracetamol Paracetamol 300 mg/kg + AcOH 0,8 %
Grupo VII clorhidrato de
tramadol
Clorhidrato de tramadol 40 mg/kg +
AcOH 0,8 %
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42
El peso de los ratones albinos se usó para calcular las dosis de
los tratamientos expresados en mg/kg. Los siete grupos
empleados: extractos EtOH (50 mg/kg, 100 mg/kg y 200 mg/kg),
el paracetamol Q.P. 300 mg/kg y el clorhidrato de tramadol Q.P.
40 mg/kg se dosificaron por vía oral usando una cánula
orogástrica N° 18 de acero inoxidable, de acuerdo al peso
corporal de cada ratón albino, 30 minutos después de haber
actuado los extractos EtOH (50 mg/kg, 100 mg/kg y 200 mg/kg),
el paracetamol Q.P. 300 mg/kg y el clorhidrato de tramadol Q.P.
40 mg/kg se les administró por vía intraperitoneal ácido acético
0,8 % con la ayuda de una jeringa de insulina descartable de 1
mL a una dosis de 0,1 mL/10 g peso corporal.
Al grupo sin tratamiento se le administró solo agua destilada y el
grupo control solo se le administró ácido acético al 0,8 %,
inmediatamente se procedió a cuantificar el número de
contorsiones abdominales de cada grupo de los ratones albinos
de especie Mus musculus durante 20 minutos.
De las contorsiones abdominales producidas, se calculó el
porcentaje de inhibición empleando la formula siguiente:
Dónde: Ct -número de contorsiones del grupo tratado.
Cc -número de contorsiones del grupo control.
Transcurrido los 10 días de tratamiento se sacrificó a los
animales de experimentación (ratones albinos de especie Mus
musculus) con una sobredosis de pentobarbital sódico 40 mg/kg
por vía intraperitoneal.
% Inhibición = 100 – (Ct / Cc) x 100
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43
3.10.5. Análisis estadístico de la actividad analgésica.
Para analizar los resultados de las contorsiones abdominales, se
realizaron análisis estadísticos SPSS versión 22,0 consistentes
en prueba de Normalidad (KS), la prueba de homogeneidad de
varianza, análisis de varianza (ANOVA), la prueba de T de
Dunnett y la prueba Post hoc de HSD Tukey, para determinar si
existían diferencias significativas entre las medias de los
tratamientos respecto del grupo control con un nivel de p < 0,05.
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44
VI. RESULTADOS
4.1. Prueba de solubilidad de la especie Vallea stipularis L.f. “chuillur” 54.
El extracto etanólico del fruto Vallea stipularis L.f. “chuillur”, es soluble en
solventes polares; principalmente en metanol, etanol y agua destilada e
insoluble en n-butanol, acetona, acetato de etilo, cloroformo, hexano, benceno,
éter etílico y éter de petróleo (tabla 4 y figura 10).
Tabla 4. Prueba de solubilidad del extracto etanólico del fruto de Vallea
stipularis L.f. “chuillur”.
Solventes Solubilidad
Agua Destilada +
Etanol +
Metanol +
N-butanol -
Acetona -
Acetato de Etilo -
Cloroformo -
Hexano -
Benceno -
Éter etílico -
Éter de petróleo -
Leyenda: (+) soluble, (-) insoluble
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45
Figura 10. Prueba de solubilidad del extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f. “chuillur” 54.
Se observa que el extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f. “chuillur” muestra solubilidad
principalmente en metanol, etanol y agua destilada. En donde se deduce que los componentes químicos
mayoritarios son de estructura y naturaleza polar.
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46
4.2. Análisis fitoquímico de la especie Vallea stipularis L.f. “chuillur” 14, 15.
El análisis fitoquímico permite determinar cualitativamente los principales
metabolitos de la planta medicinales. En la tabla 5 y figura 11, se muestra los
resultados del extracto etanólico del fruto Vallea stipularis L.f. “chuillur”, se
observa la presencia de flavonoides, taninos, compuestos fenólicos, grupo
amino libre, esteroides y/o triterpenos y ausencia de alcaloides y azúcares
reductores.
Tabla 5. Análisis fitoquímico del extracto etanólico del fruto de Vallea
stipularis L.f. “chuillur”.
Reactivos Metabolitos primarios
y secundarios
Resultados
Tricloruro de aluminio. Flavonoides +
Shinoda. Flavonoides +
Tricloruro férrico 1 %. Compuestos fenólicos
y/o taninos
+
Gelatina + NaCl. Taninos +
Mayer. Alcaloides -
Dragendorff. Alcaloides -
Popoff. Alcaloides -
Wagner Alcaloides -
Salkowski Esteroides +
Liebermman - Burchard Esteroides y/o
Triterpenos
+
Fehling A y Fehling B Azúcares reductores -
Ninhidrina. Grupo amino libre +
Leyenda: (+) presencia, (-) ausencia.
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47
Figura 11. Análisis fitoquímico del extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f. “chuillur” 14, 15.
Se observa que el extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f. “chuillur” presenta metabolitos
como los flavonoides, compuestos fenólicos, taninos, esteroides, triterpenos y grupo amino libre.
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48
4.3 .Análisis estadístico SPSS versión 22,0 del extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f. “chuillur”.
Tabla 6. Promedio y porcentaje de inhibición (%) de las contorsiones abdominales del extracto etanólico del fruto de Vallea
stipularis L.f. “chuillur”.
Grupos Tratamientos Promedio Contorsiones
abdominales
Inhibición (%) Contorsiones
abdominales
Grupo I Grupo sin tratamiento (agua destilada). 0 0
Grupo II Grupo control AcOH 0,8 %. 35,00 0
Grupo III Grupo extracto EtOH 50 mg/kg. 22,00 37,14
Grupo IV Grupo extracto EtOH 100 mg/kg. 17,75 49,29
Grupo V Grupo extracto EtOH 200 mg/kg. 10,50 70,00
Grupo VI Grupo paracetamol Q.P. 300 mg/kg. 15,63 55,34
Grupo VII Grupo clorhidrato de tramadol Q.P. 40 mg/kg. 3,00 91,43
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49
En la tabla 7 se muestra la prueba de normalidad (Kolmogorov - Smirnov) (p > 0,05), determinó que el tipo de
distribución de los grupos experimentales fue Gaussiana, esta prueba compara la eficacia de los fármacos con
los extractos empleados, determinando que no hay diferencias significativas.
Tabla 7. Prueba de normalidad (KS) de las contorsiones abdominales de todos los grupos experimentales.
Pruebas de normalidad
Tratamiento Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Estadístico gl Sig. Estadístico gl Sig.
Contorsiones Grupo control (AcOH 0,8 %). ,198 8 ,200* ,956 8 ,773
Extracto EtOH 50 mg/ kg. ,138 8 ,200* ,957 8 ,780
Extracto EtOH 100 mg/kg. ,196 8 ,200* ,931 8 ,521
Extracto EtOH 200 mg/kg. ,128 8 ,200* ,983 8 ,975
Paracetamol 300 mg/kg. ,186 8 ,200* ,957 8 ,783
Clorhidrato de Tramadol 40 mg/kg. ,250 8 ,150 ,860 8 ,120
*. Esto es un límite inferior de la significación verdadera.
a. Corrección de significación de Lilliefors
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50
En la tabla 8 la prueba de homogeneidad de varianza de Levene (estadístico: 1,679; gl1: 5 y gl2: 42;
p > 0,05) esta prueba compara la eficacia de los fármacos con los extractos empleados, indicando la
igualdad de varianzas entre los grupos tratados.
Tabla 8. Prueba de homogeneidad de varianza de contorsiones abdominales de todos los grupos
experimentales
Prueba de homogeneidad de varianzas
Contorsiones
Estadístico de Levene gl1 gl2 Sig.
1,679 5 42 ,161
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51
En la tabla 9 la prueba de ANOVA mostró un valor (p < 0,05) esta prueba compara el grupo
control con los grupos experimentales, determinando que existe diferencias significativas
entre los efectos de los tratamientos empleados.
Tabla 9. Prueba de ANOVA de las contorsiones abdominales de todos los grupos experimentales.
ANOVA
Contorsiones
Suma de cuadrados gl Media cuadrática F Sig.
Entre grupos 4712,938 5 942,588 248,400 ,000
Dentro de grupos 159,375 42 3,795
Total 4872,313 47
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52
De acuerdo con la tabla 10 la prueba Post hoc de T de Dunnett se observa que hay diferencias significativas
de los tratamientos empleados comparadas con el tratamiento del grupo control (p < 0,05). Las últimas
columnas muestran los límites para un intervalo de confianza de estas diferencias al 95 %, notemos que los
límites de los intervalos son del mismo signo, esto nos está indicando que los promedios son diferentes.
Tabla 10. Prueba de T de Dunnett de las contorsiones abdominales de todos los grupos experimentales.
Comparaciones múltiples
Variable dependiente: Contorsiones
T de Dunnett (bilateral)a
(I) Tratamiento (J) Tratamiento Sig. 95% de intervalo de confianza
Límite inferior Límite superior
Extracto EtOH 50 mg/ kg. Grupo control (AcOH 0,8 %) ,000 -15,55 -10,45
Extracto EtOH 100 mg/kg. Grupo control (AcOH 0,8 %) ,000 -19,80 -14,70
Extracto EtOH 200 mg/kg. Grupo control (AcOH 0,8 %) ,000 -27,05 -21,95
Paracetamol 300 mg/kg. Grupo control (AcOH 0,8 %) ,000 -21,92 -16,83
Clorhidrato de Tramadol 40 mg/kg. Grupo control (AcOH 0,8 %) ,000 -34,55 -29,45
*. La diferencia de medias es significativa en el nivel 0.05.
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53
En la tabla 11 se muestra la prueba de Post hoc de HSD Tukey en la cual se observa que las diferencias
significativas se encuentran entre estos cuatro grupos: clorhidrato de tramadol 40 mg/kg 3,00; extracto EtOH 200
mg/kg 10,50 y extracto EtOH 50 mg/kg 22,00 y un grupo conformado por el paracetamol 300 mg/kg 15,63 y el
extracto EtOH 100 mg/kg 17,75 que estadísticamente tienen efectos ligeramente similares.
Tabla 11. Prueba de Post hoc de HSD Tukey de contorsiones abdominales de todos los grupos experimentales.
Contorsiones
HSD Tukeya
Tratamiento N Subconjunto para alfa = 0.05
1 2 3 4
Clorhidrato de Tramadol 40 mg/kg. 8 3,00
Extracto EtOH 200 mg/kg. 8 10,50
Paracetamol 300 mg/kg. 8 15,63
Extracto EtOH 100 mg/kg. 8 17,75
Extracto EtOH 50 mg/ kg. 8 22,00
Sig. 1,000 1,000 ,268 1,000
Se visualizan las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos.
a. Utiliza el tamaño de la muestra de la media armónica = 8,000.
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54
35,0
22,0
17,8
10,5
15,6
3,0
0,0
5,0
10,0
15,0
20,0
25,0
30,0
35,0
40,0
Grupo control (AcOH 0,8 %) Extracto EtOH 50 mg/ Kg. Extracto EtOH 100 mg/Kg. Extracto EtOH 200 mg/Kg. Paracetamol 300 mg/Kg. Tramadol 40 mg/Kg.
Contorsiones
Porcentaje de inhibición de las contorsiones inducidas con AcOH 0,8%.
Figura 12. Promedio del extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f. “chuillur” sobre las contorsiones abdominales
inducidas por ácido acético 0,8 % en ratones.
Los valores del eje de las ordenadas representan la media de cada grupo. Los valores sobre la barras representan el número
promedio de contorsiones. Se puede apreciar que transcurrido 20 minutos después de la administración del extracto, todos los
grupos lograron disminuir significativamente (p < 0,05) el número de contorsiones abdominales comparadas con el grupo control,
el extracto EtOH de 200 mg/kg presentó una reducción superior al grupo de paracetamol 300 mg/kg.
Tratamientos
Me
dia
de c
onto
rsio
ne
s
Page 68
55
0
37,14
49,29
70
55,34
91,43
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Grupo control (AcOH 0,8%)
Extracto EtOH 50 mg/ Kg. Extracto EtOH 100 mg/Kg. Extracto EtOH 200 mg/Kg. Paracetamol 300 mg/Kg. Tramadol 40 mg/Kg.
Contorsiones
Tratamientos
¿
Figura 13. Porcentaje de inhibición del extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f. “chuillur” sobre las
contorsiones abdominales inducidas por ácido acético 0,8 % en ratones.
Los valores sobre la barras representan los porcentajes de inhibición de las contorsiones. Todos los grupos lograron
disminuir significativamente el número de contorsiones abdominales comparadas con el grupo control, el efecto
máximo se alcanzó a la dosis 200 mg/kg con un 70 %.
Me
dia
de C
on
tors
ion
es
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56
V. DISCUSIÓN
En el proceso de la prueba de solubilidad del extracto etanólico del fruto
Vallea stipularis L.f. “chuillur” se determinó que es altamente soluble en
metanol, etanol y agua destilada (tabla 4 y figura 10) por lo tanto la
mayoría de los componentes químicos son de estructura y naturaleza
polar 54. La solubilidad de los flavonoides, depende de la forma en que se
encuentren y el número y clase de sustituyentes presentes, las agliconas
flavonoides altamente hidroxiladas son solubles en alcohol (etanol,
metanol y n-butanol), mientras que las poco hidroxiladas lo son en
solventes como éter etílico, acetato de etilo y acetona. Las agliconas
flavonoides altamente metoxiladas son solubles en solventes menos
polares como el éter de petróleo y el cloroformo 56, 57.
En el análisis fitoquímico del extracto etanólico del fruto Vallea stipularis
L.f. “chuillur” se demostró la presencia de flavonoides, compuestos
fenólicos, taninos, esteroides, triterpenos y grupo amino libre (tabla 5 y
figura 11). En otros estudios realizados también determinaron la presencia
de estos metabolitos en el extracto etanólico de las hojas Vallea stipularis
L.f. 14 - 16.
Otros estudios realizados determinan que los flavonoides presentan
numerosas actividades farmacológicas, entre ellas la actividad analgésica
y antiinflamatoria 26, 28 - 32. En la investigación realizada del extracto
etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f. “chuillur” se determinó la
presencia de los flavonoides mediante los ensayos de coloración
(Shinoda) y con tricloruro de aluminio (AlCl3) se observó una formación de
halo amarillo que se observa en la lámpara UV visible a 365 nm 54.
Otros estudios realizados determinan que la familia Elaeocarpaceae de
diferentes especies (Aristotelia chilensis (Mol) Stutnz “maqui” 17, 33, 34,
Elaeocarpus ganitrus “rudraksha” 18, 19 y Elaeocarpus sphaericus Leaf 20,
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57
21, presenta la actividad analgésica en sus extractos de hojas y frutos.
Posiblemente el extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f.
“chuillur” perteneciente a la familia Elaeocarpaceae presente actividad
analgésica.
La mayoría de las investigaciones experimentales aplican el método de
contorsiones abdominales en ratones a diferentes dosis de ácido acético
(0, 75 %; 0,8 %; 1,0 %; 1,5 %), determinando la evaluación de la actividad
analgésica 8, 9, 11, 58. En esta investigación se determinó por el método de
contorsiones abdominales inducidas por un agente irritante como el ácido
acético a una dosis de 0,8 % por vía intraperitoneal, determinando la
actividad analgésica del extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f.
“chuillur”.
Generalmente para determinar la actividad analgésica se emplea
medicamentos como los AINE y opioides 8, 9, 11, 58. El extracto etanólico del
fruto Vallea stipularis L.f. “chuillur” a diferentes concentraciones (50, 100 y
200 mg/kg) se comparó la actividad analgésica con dos medicamentos
farmacéuticos paracetamol Q.P. 300 mg/kg y clorhidrato de tramadol Q.P.
40 mg/kg obteniéndose un mejor resultado en la eficacia de 200 mg/kg del
extracto etanólico como se observa en la (figura 12 y 13) 58.
Los resultados presentados en este estudio demuestran por primera vez,
que el extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f. “chuillur”, está
constituido por una mezcla de compuestos capaces de inhibir con una
elevada eficacia farmacológica el dolor inducido por agentes irritantes,
estos efectos fueron similares y en algunos casos superiores a los
observados en fármacos (paracetamol 300 mg/kg y clorhidrato de
tramadol 40 mg/kg) comúnmente utilizados en la práctica clínica 55, 58.
La prueba de ANOVA (tabla 9) mostro un valor p < 0,05 determinando que
existe diferencias significativas entre los extractos a diferentes
Page 71
58
concentraciones (50, 100 y 200 mg/kg), los fármacos (paracetamol 300
mg/kg y clorhidrato de tramadol 40 mg/kg) y el grupo control 9.
La prueba de normalidad (KS) y la prueba de homogeneidad de varianza
(tabla 7 y 8) mostro un valor de p > 0,05 determinando que no existe
diferencias significativas entre los extractos a diferentes concentraciones
(50, 100 y 200 mg/kg) y los fármacos (paracetamol 300 mg/kg y
clorhidrato de tramadol 40 mg/kg) 9.
Todos los grupos lograron disminuir significativamente el número de
contorsiones abdominales comparadas con el grupo control, podemos
determinar que a medida que aumentamos la concentración del extracto
etanólico, obtenemos mejores resultados (figura 12).
El efecto analgésico de Vallea stipularis L.f. “chuillur”, se evaluó en 3 dosis
diferentes, llegándose a determinar que a dosis menores de 100 mg/kg el
efecto fue escaso, lo que indica que su actividad farmacológica es menor
a un opioide como clorhidrato de tramadol pero es similar a un AINE como
paracetamol. La dosis de 200 mg/kg si tiene efecto analgésico,
presentando un efecto máximo de inhibición con un 70 % (figura 13).
Page 72
59
VI. CONCLUSIONES
Se determinó la actividad analgésica del extracto etanólico del fruto Vallea
stipularis L.f. “chuillur” logrando una reducción de 70 % de inhibición en las
contorsiones abdominales a partir de la dosis de 200 mg/kg.
Se realizó el análisis cualitativo del extracto etanólico del fruto Vallea
stipularis L.f. “chuillur” observando la presencia de compuestos fenólicos,
flavonoides, taninos, esteroides, triterpenos y grupo amino libre.
Se comprobó que la dosis de 100 mg/kg y 200 mg/kg del extracto etanólico
del fruto Vallea stipularis L.f. “chuillur” presento actividad analgésica
mediante el método de contorsiones abdominales inducidas con ácido
acético 0,8 % con un 49,29 % y un 70 % de inhibición respectivamente muy
similar al paracetamol con un 55,34 % de inhibición.
Page 73
60
VII. RECOMENDACIONES
1. Continuar y contribuir al conocimiento con otros estudios
farmacológicos con el fin de establecer y validar un diseño
experimental más amplio del género Vallea stipularis L.f. “chuillur”.
2. Profundizar en el aislamiento, identificación y caracterización de los
compuestos con actividad farmacológica presentes en el fruto de
Vallea stipularis L.f. “chuillur” por medio de técnicas analíticas
como: análisis de cromatografía gases - masas, análisis
espectrales de resonancia magnética nuclear, análisis infrarrojo,
análisis espectrometría de masas, etc.
3. Las potencialidades que presenta este extracto etanólico del fruto
Vallea stipularis L.f. “chuillur” en la terapia de las patologías que
involucran procesos inflamatorios y dolorosos sugiere la necesidad
de realizar estudios toxicológicos por vía intragástrica que permitan
validar su seguridad.
4. Realizar más investigaciones sobre la medicina tradicional en el
Perú, hay una gran diversidad de plantas cultivadas, de las cuales
no hay registro de las actividades farmacéuticas que presentan.
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VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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IX ANEXOS
Anexo 1. Constancia de la especie Vallea stipularis L.f “chuillur”.
Page 82
69
Anexo 2. Certificado sanitario de los ratones albinos de especie Mus
musculus.
Page 83
70
Figura 14. Separación del fruto Vallea stipularis L.f. “chuillur”.
Figura 15. Fruto maduro de Vallea stipularis L.f. “chuillur”.
Page 84
71
Figura 16. Extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f. “chuillur”.
Figura 17. Observando los ensayos preliminares (prueba de
solubilidad y análisis fitoquímico) de la especie Vallea stipularis
L.f. “chuillur”.
Page 85
72
Figura 18. Aclimatación del material biológico (ratones albinos
de especie Mus musculus y de cepa Balb/C53/CNPB).
Figura 19. Preparación de los tratamientos y el grupo
control (AcOH 0,8 %).
Page 86
73
Figura 20. Administración de los tratamientos por vía oral a los
ratones albinos de especie Mus musculus y de cepa
Balb/C53/CNPB.
Figura 21. Observación y cuantificación de las contorsiones
abdominales de los ratones albinos de especie Mus musculus y
de cepa Balb/C53/CNPB.
Page 87
74
Figura 22. Evaluación de las contorsiones abdominales de los
grupos experimentales.
Figura 23. Observación de las contorsiones abdominales de
los grupos experimentales.