Extracção do DNA do kiwi

Extracção do ADN do Kiwi

Actividade experimental - extracção do ADN do kiwi

Maceração do kiwi

Depois de descascado, introduziu-se o kiwi na liquidificadora. Com a força centrífuga, as células que constituem a polpa do fruto são dissociadas dos tecidos a que pertencem e pode haver destruição da sua estrutura (parede e membrana celular).

Actividade experimental - extracção do ADN do kiwi

Destruição das paredes e membranas celulares

Para ajudar a romper membranas celulares (incluindo as membranas nucleares) removendo os lípidos das suas estruturas, juntou-se detergente ao kiwi e sal para neutralizar proteínas e estabilizar o ADN.

Sal

Detergente

Actividade experimental - extracção do ADN do kiwi

Separação dos fragmentos celulares das moléculas de ADN através de 2 filtrações:

1ª com papel de filtro

2ª com algodão hidrófilo

Obteve-se um filtrado.

Actividade experimental - extracção do ADN do kiwi

Aglutinação das moléculas de ADN com separação dos restantes constituintes do filtrado

Ao filtrado juntou-se álcool com a formação de duas fracções: uma alcoólica e outra aquosa.

Sendo o ADN insolúvel em álcool, precipitou e formou uma massa filamentosa esbranquiçada.

Álcool

Filtrado

Actividade experimental - extracção do ADN do kiwi

Sendo o ADN insolúvel em álcool, precipitou e formou uma massa filamentosa esbranquiçada.

Actividade experimental - extracção do ADN do kiwi

Extracção do precipitado para coloração

Com a ajuda de gaze, procedeu-se à filtração do precipitado.

Actividade experimental - extracção do ADN do kiwi

Coloração do ADN

Utilizando a técnica de Feulgen (ADN em água destilada, ADN em HCl, ADN em água destilada e ADN em reagente de Schiff) não se obtiveram os resultados esperados: “flóculos carmins”.

Com a aplicação de verde de metilo ao ADN (experimentando), obteve-se apenas um contraste como evidencia a figura.

ADN

Actividade experimental - extracção do ADN do kiwi

Discutindo os resultados...

Tendo em conta que os procedimentos foram seguidos com rigor, a coloração não terá sido bem evidente por alteração da qualidade do corante utilizado (?...)

•Concluindo ...

Recomenda-se a repetição de todo o processo de coloração com a utilização de outros reagentes (o corante do protocolo - reagente de Schiff, bem como de outros corantes com afinidade com o ADN - verde de metilo, azul de metileno, água iodada...) para identificação e destaque do ADN extraído.