EXPRESSION DES GENES HOX DANS L'ALVEOLISATION EXPRESSION DES GENES HOX DANS L'ALVEOLISATION Responsable de stage : Jacques BOURBON, Directeur de recherche Equipe « Pathologie des épithéliums respiratoires et du développement pulmonaire » Stage réalisé dans le Laboratoire INSERM Unité 651, Faculté de Médecine : 8, Rue du Général Sarrail, 94010 Créteil Cedex Mémoire présenté par Amine GHOZLANE
Mémoire présenté par Amine GHOZLANE. EXPRESSION DES GENES HOX DANS L'ALVEOLISATION. Responsable de stage : Jacques BOURBON, Directeur de recherche Equipe « Pathologie des épithéliums respiratoires et du développement pulmonaire » Stage réalisé dans le Laboratoire INSERM Unité 651, - PowerPoint PPT Presentation
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EXPRESSION DES GENES HOX DANS L'ALVEOLISATIONEXPRESSION DES GENES HOX DANS L'ALVEOLISATION
Responsable de stage : Jacques BOURBON, Directeur de rechercheEquipe « Pathologie des épithéliums respiratoires et du développement pulmonaire »
Stage réalisé dans le Laboratoire INSERM Unité 651,Faculté de Médecine : 8, Rue du Général Sarrail, 94010 Créteil Cedex
Mémoire présenté par Amine GHOZLANE
• Alvéolisation :– Dernière phase du développement pulmonaire– Aboutit à la formation d’un poumon mature et
• Les gènes Hox :– facteurs de transcription à homéodomaine– impliqués dans l’organogenèse– inactivation Hoxa5 = défaut d’alvéolisation
(Kinkead et al. 2004)– pas d’autres données sur les Hox dans
l’alvéolisation
• Implication des gènes Hox dans les mécanismes de contrôle de l’alvéolisation ?
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2 jpp 7 jpp 21 jpp
Hoxa5
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Hoxa4
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Hoxa2
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Confirmation des variations de l’expression des gènes Hoxa2, Hoxa4 et Hoxa5 par une méthode plus précise : la PCR en temps réel
Les gènes Hox sont effectivement plus exprimés pendant l’alvéolisation dans les fibroblastes.Les variations sont-elles spécifiques de la période de l’alvéolisation ?
Profil temporel d’expression des gènes Hoxa2, Hoxa4, Hoxa5 dans le poumon de rat depuis la période fœtale (stade canaliculaire) jusqu’à l’âge adulte
Augmentation de l’expression des gènes Hox dans le poumon entier seulementpendant l’alvéolisation.
Alvéolisation
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F18 F19 F21 J1 J3 J5 J8 J14 J20 Adulte
Hoxa2Hoxa4Hoxa5
naissance
Y a-t-il modification de l’expression de ces gènes lors de l’altération du développement alvéolaire ?
jours
(% de F18)
• Hyperoxie : FiO2 à 95%
• Administration d’un glucocorticoïde :
Modèles expérimentaux d’altération du développement alvéolaire
Hyperoxie (FiO2 = 95%)
100 µm
Air (FiO2 = 21%)
100 µm
Dex 0.1 µg/g/j
Dexamethasone (0,1µg/g/j pendant 5 jours).
Diluent
Témoin
Effets de l’exposition du rat nouveau-né à l’hyperoxie (FiO2>95%) sur l’expression des gènes Hoxa2, Hoxa4 et Hoxa5.
Diminution de l’expression des gènes Hox dans le poumon entier sous hyperoxie.
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Hoxa2
air O2 air O2
NS
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Hoxa4
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Hoxa5
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Témoin Dex0,1µg/g/j
Dex0,5µg/g/j
Hoxa5
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Effets de l’administration répétée de dexamethasone (dex) 0,1µg/g ou 0,5µg/g
par jour sur l’expression des gènes Hoxa2, Hoxa4 et Hoxa5 chez le rat nouveau-né.
Diminution de l’expression des Hox dans le poumon entier après administration de dexamethasone.
Hoxa4
Témoin Dex0,1µg/g/j
Dex0,5µg/g/j
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Témoin Dex0,1µg/g/j
Dex0,5µg/g/j
Hoxa2
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Effets in vitro de la dex sur l’expression des gènes Hoxa4 et Hoxa5 dans des fibroblastes isolés du poumon de rats nouveau-nés.
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Témoin
Hoxa4
dex 10-6 M
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Témoin
Hoxa5
dex 10-6 M
Pas d’effet de la dexamethasone sur l’expression des gènes Hoxa4 et Hoxa5 dans les fibroblastes en culture.
Conclusion
• L’expression des 3 gènes Hox :– est augmentée pendant l’alvéolisation– est diminuée lors de l’altération de
l’alvéolisation– suit un profil identique
• Ces résultats sont en faveur d’un rôle positif de ces gènes dans le mécanisme de contrôle de l’alvéolisation
Bilan du stage
• Techniques pratiquées:– Isolement et culture primaire de fibroblastes– Extraction des ARN– RT- PCR temps réel
• Aborder et exposer une problématique scientifique