Evaluacion de un nuevo metodo directo de determinacion de ...ƒmica... · Evaluacion de un nuevo metodo directo de determinacion de colesterol de HDL M.L. Arranz Pena. J. Tasendc

Nota t"eniea QUfMICA CLfN1CA 1997: 16 (6) 392-396

Evaluacion de un nuevo metodo directo de determinacionde colesterol de HDL

M.L. Arranz Pena. J. Tasendc Mala. M,e. Banuelos Ramon. H. Marcos Sanchez.S. Lopez Hcrn:lndcz.. J.A. Alonso RodrIguez.

Resulllen

Sc 1m el'olll(/(Io /III 1lI1(~I'Q lIu:/mlu din~clf1 lie delerllli"acioll(Ie /11 C(/IICI~lIlmci611 de co/e.~(er()l de IIJJL ell cl labort/toriocllllic/}. 1~'1I dlllWl'O IIIIJ/Ot!O. <!l t·olf!.~lerlJl (Ie /IIJL .~e ,Ierel'm;­

I/ll medillllie fa IIliIi:aci/J/I lie Ill.\' i!1I:;I//U,\' c(j'e.~terol eslerrlSl/y Cf/le,I'/ero/uxitJa,1'(j lratadas COli 'JOlielile,,~/ic(/f prcl,ju adj­citl/l (limn/io lie r('(/Cd/JII lie a ·ciclodexlrillfl m/ja(mltl. iOllesmaglle.fio)' mlfafo lie de:rtrtll/lJ.

l..ll rC/1I!tihilitlflll imrllserilll e illler,\'crifli. expre,wda t"(}//If)

coe/idelll/: tie 1'(lri(U:;tJn. 1/(1 s;tl0 n!Sl,ectil'(/lI/clI/e 4,3%)'6,9% l}(In/ 111/ IIwlerilt/ (Ie coll/rol COlllt'rc;al COli IUltI COf/CI'II­

/Tl/ciOIl Ill' C'Olnfeml de IIOf- lit· U.SJ IJIIIWI/f- Y lie 1.9J'7e- y5.04% pi/ra tJlnJ IIllIl1!rial dl' cmllrol COli 111/11 CIJIICelllraciOIlIll' 1.19 llII/wllt. Elmilooo l'S li"e(/I destle 0,06 /IIl1Iolll-has­

fa J.88 till/wilL It nmcelllmciOfll'S lie 17.U /IIl1Iollt de lrigli.cerillo la rl'CIIIJemcioll file lie 92.86'k,

EIIIIII'I'O /IIilmla. cO//la cOIISeC1Il'IIcili lie 1111 I'rror lie lipoCOIIUlll/fe, IlrOlwrcimlll re,\'llluulo,\' /lUll' uilOS que los de 11I1

metodo de precipitaciolf COif licido fmfatllusgfico J' elorurode maglle~'i(J, J' qlle 1m' de 1111 //Ieloda de IIllmcemrijl/gacioll.

Ala I'isla de IIIlesfros remIUldo.\· y lo.\" IJllhlicado.\" por otro,~

al//lJre,~. cIII/sidemlllOS que ellIIlCl'O melmlo e,~ /II1ll huella al­ferll(l/il'(f 1110.1' /llili:ado,~ (/cIII(/ll1Iell/e lie I/f(fl/('rli rf/li"aria ellhu d('/ermiff(fciIJlle,~de coln/eml de IIIJL

Intl'odm:d6n

La rde"ancia de Ia conccntracion de co1c~tcrol de lipoprotei­na.\. de aha del\~idad (colc.'>lerol de HOL) en cJ de.\.;lrToJlo decardiopalia i~qucmic;, esla firmcrnelile c~l:lblccida por numc­rol'>a:> c\'idcncia~ clinko-epidemioI6g.ka... ) cXllerimentale.\.(I), Fue de-.crita por prilllera \el a fin;llc~ de 10'" ;liio~ cuarenl;ly principio... de la l'>iguienle dcc;ld;1 en lo~ Imbajo... de Barr.Ru.\.:> y Eder (2). Aqucllas primerJ.:> ob~ .... acionc... fueron m:ho nlCno~ ignomdal'> hal'>la que. dur.ullC 10'" :liiQ'> <;clenta. do:> illl­ponalllC'" c"'ludiol'> cpidcllliol6gico~ rclan/aron d inlerC:> por cIcolc~lcrol de I-IDL) ..." rclaci6n con 1;1 :merioc..ckrosi... (3,4).

La!> lipoprotein:l!> de aha den.\.idad (HOL) e~l;'in impli{'adal'>en difercn1e~ proce'o... mel"b6lico~ {'OlllO c11r.lrl~pon~de Hpi­dOl>. form:lci6n de [l('ido:. biliare~. el>lcrcido1;cnc~i~. inmunorc­gul"ci6n, de~loxifiC;lci6ny proliferacion ccJular. adem:h deinlcrvcnir en lol'> mcc;lt1il'>mo~ de accion del ...i~lenl:l de la:> pro-

s~, \Ie'", ,k ,\",,1 i,i, ('I ;,,,,,,,,1I"'p",,1 U",,,'I"","''' 1),,1 IH" Il",!~~"\,,,1"'01,,11<1Ke"",h,J." 21·2·'17I\,'~pl",k" 21·M-'"

392 Qllllllit'a Cllniea 1997: 16 ((,)

SumnHlI')' _

We Tl'/lOrl/lle (llUllpicllf performal/ce ofa lIeM' tlireet asmy ofIIfJL clloles/erol ill /he clilliwl faboratory. III fhe lIell' met·Itm/ IIIJL dw/c,dcrol "'tIS dlJllJrmillcti t'll::'.I'lIImictlfly ".1' ".~i"l;

/lle /JOlyetlly/elle glit'ol-modijied el/:'Yl/le,~ t:l1fJ/e,~tem/e,WeraseI/Ild clwfe,\'Ierol oxiduse (ffler mldilioll of .wlfutell a ,(·yelo.

tleXlri". 1I111~lleJill/ll(//ul dex/nm ,m/filll'.

Bo/h /lit' illler.\"erifil (///(1 illlra.~erifil prel'isioll (CV) wert'

dl'fermilletl hy ,~eptlrflle lIH'II)'S of IM'O I-IOL cllOlesterol COII­Imls (II ClI/lC1!IIlr(l/iollS 0.83 //I//IoIIL (f1U1 1.19 //II/IoIIL Tile

CV M'ere -1.3% IlIId 6.9'7r for Ille firsf collfrol (/Jul 1.91<;t, ami5.0-/%for flit> secolld Ollt>. The IIIl!tltmlwtlS Iillt'lIr ill I/Ie rlll/­ge 0.0tJ.l.88 //IItIoIIL il/lriglyuride cmlcell/rnlhlllS of 17.U"'II/olltllte recm'er)" M'as 91.86lJ.. As COIIJf:qllellu ofa COIlS­((fill I'rmr fl,c IICM' l1Ietllod SIIOM'l'd Mgller resl/lts 111011 hOlll

lilt> pllOSplu}//l1Igstic llcid I fIIl1glll'sil///I pmcedllrt> nl1d II,ecellfrifllgalioll //Iel/lOd.

Ilccorllillg to ollr result,\' tmd 11/(}~'e reported b.\· OIlier lIIl­

///Ors we cOl/sider IIII' IleM' assay as a good alterllalhe for

IIfJL-clloleslerol meaSllre/llellf ill /111.' rol/tille clillical labora­lory.

leill;l~:I,~ (5). Entre OlraS funciOl1cl> importanlc:> de la:> HOLe:>la la dc proleger a las lipollrolcll1:t:> de baj;l den~id;ld (LOL)frcnle:l la oxidaci6n (6) e inlcrvenir en 1;1 mo\ iliz:lci6n de co·1c:>lerol de 10:> lejidos pcrifcricol'> hada eI hfgado (tran:>port~

T'C\ er~o de cole"terol) (5).

L.:a finalidad de delenninar la conccnlraci6n de cole~lerol deBOL e~ doble: en primer lugar c'lablccer la concemraci6n decoJc~lerol de BOL per se ) en ...egundo lugar delerminar laconcenlr.ici6n dc colestcrol de LDL ~icndo la ahemali\'a m:hpracticable) comunmenle ulilil-ada ~u dlculo mediante laf6nllula de Friedewald que implica la dClemlinaci6n pre\ ia dela concenlraci6n de co1cslcrol de HOt (7).

EI primer informe del I\dll// Trell/IIII'II/ Ptlllel del NmiollalCholl"s/I'ml Edl/cmioll Pmgmlll (NCEP) -.ciial6 que cuando laconcernr.lci6n ...eriea de colel>terol de HOL c~ < 0.91 1ll1ll0llLl'>C compona como un facfOr de ri~~go ma)or de enfermed:ldcoronaria (H). EI NmiOlUlJ '''Slilllt('I' of 0('(11,11 (NIH) en ~u

confcrencia COlbcn~o celebrada en febrero de 1992 :>dial6lacvidencia del papel cau:>al del cole:>lcrol de 1-101. en la ell fer­mcdad coronal'ia (9),

,\I,I'C' ';lllm" "0 e,I~l\Ilari(~d:,,:

NCE,!' Nall"n,,1 Ch"k~lel'ol Education 1'n'I1"''''I: "'III Nallonal In,mUle, ofIlcahh: CIX': Cenler for I)i",·",..;:, Conl ....1

EI ~egundo infurme del A(/II/1 Tre(l/lI/l'lII fJwll'1 del NCE? en1993 n:afirm6 (lue la~ concclllradolll.'~ !>cric:l~ de eole!>terol deHDL < 0.91 IllmolfL !>on un f'll:lOr de rie~go mayor de enfer­medad coron:lri:1 y que concentracione~ de eoh::~h.::rol de HDL> 1.55 1II11l0lfL rcduecn el rie!>go de eardiop'l1ia i~qucmica

(f0).En la 'letualidad. lo!> m"'lOdo~ C:\:i!>h:ntC!> pam determinar la

coneentr:.lci6n de cole!>terol de HDL ~n la ultr.H:entrifugacion(f I J. la elL-!::troforesi:. (/2) )' los de precipitaei6n (IJ). [k eSlosmctodm.. 1m. mas usados son 1m. de pTt."'Cipil:lei6n. auoque pre­:.entan la dc!>\'t.·ntaja de requ<.'rir tiempOl> largo, de realizaci6n.grande:. \olumene:. de suero y limilacione:. de aUlOmati7.aeionadellla:. de una gr:m hcterogcneidad en euanto a rcaelivos yconcentmc10n de lo~ mismo~ ~ refiere. Toda \e/ que las con­sidcTilcione~ antcrionnenle seiialada:. eontribuycn al error ana­litieo (/./) r6ult:l just ifie:lda 1:1 nece:.idad de procedimientossin tmtamientos previos de la mue~tr.l.

Predsamcnte cl \\I(}rki,,~ CmUI} (I/! U{Jllprolein MClI.wre­weill dd NCEI' cn ~u £.H.'{'II/i\·l' SlImll/(II:r de 1995. -,e:iiaI6 que:para la (klcrmin:lci6n de l:l cOIH::enlraci6n de colcsterol (kHDL se requieren nucvos lIletudos. alternativos a los actll.tlesde precipit'll.:i6n. E~tos llIetodo~ debcrian ser ~'apaccs de pro­ducir result<ldos que cumpl•.lIl 0 e:\:ced'l11 lo~ objctivos de cali­dad analltica lij<ldos par.. 1988. Oichos objctivos c~tan c:\:pre­s:ldo:. en lcnninos de un error anaHtico lot'll no :.uperior a un1311- (imprcdsi6n :s ~'k. inexactitud S srk) (/5).

Recicnt....nlClllc. ~e h.m propuesto varios metodo:. P.1rJ. la de­terminaci6n directa d.... 1:1 eoncentr:lei6n de cole:.terol de HOLen su.... ro :.in prL'Cipitaci6n ylo eentrifugaci6n pOl>t.... rior. En unode 10:. metodo~ :.c precipilan la:. pankula:. eontenicndo apo·proteina B tllcdiante :.ulfato de de:\:tr:.mo. que no requiere cen­lrifugaci6n)'a que el sulfatode dextr.mo ~ halla ligado a par1i­eula:. magneti/.ablcs que son atrapada~ por un di;;co magnelicosituado en el fondo deltubo de reacci6n. Otro de los mctodosdirectos utili!.a polietilenglicol paroJ fonllar ('omplejo~ con laspartfcula:. lipoprotci'na:. de muy baj:1 dcn~idad (VLOL). 1.01. Yquilomierone!> que. en un:l scgund:l cl:lpa. fonn:lII inmunocolll­plejos al reaccionar con anticueq)()!> eOl1\ra la~ apolipoprOlci­na~ B y ClII (16-IX).

EI metodo que ell e~te trab:tju eVaIU:llllOS permit.... la determi­nacion. ~in precipitacion. de la cOllc .... ntraeioll de culesterol deHOL (19) l11 ....diante la lltili7aci6n de co1csterol esterasa y co­leslerol oxid<lsa pretrat<ldas con pulietilcnglicol. De est;1 form;l.la l~ole~lerol e~leraS:l presenta una activid'ld c:llal[lic,l selectiv:Ipara cl col .... sterol de HOL y cl col ....~terol dc VLDL y 101 wleste­rol oxida~a pOl' el colesterol de HDL y cl cole~tcrolde quilomi­crone:.. La se1cctividad deli nit iva por el cole~terol de HOL ~e

consiguc OIl utili/.ar a-eic1ode:\:trina :.ulfatad<l que. cn pre:.enci'lde ione!> m:lgnesio reduce 101 re:lCti, id:ld del colc!>terol de lasp<lr1icul<ls lipoprotcica~ con baja rclacion lipidolprotcfna (Ia n:­actividad dd cole~terolde LDL:.e TL"'{}ucc al 85'1- y la de coles­lerol de quilomicrones y del eole:'lerol de VlDL al 20 'k) sinafectar la de eolc~lcrol de HOL. La rc:lcli,'idad rcsidual del ca­lesterol no HOL:.c anula lotalmente aiiadicndo una baja con­centmci6n de ~ulfalo de de:\:tmno en elmedio d.... reaccion .

En este tmbajo!>C presentan lo!> rc!>ultado!> de la cV:lluaci6nde un metodo directo de detenninaci6n de la coneelllr.J.ei6n deeole~terol de HDL en compamci6n con el metodo de prccipita­cion u:.ado en 1:1 rutin:1 de nue~tro labor:.llorio y ('on el mel<xlode ultmcentrifugaeion.

Material y metodos

EspccfmclIcsLo~ especilllene~<k S:lngre. IOdus pcrlcn ....cientcs <I p:lci ntcsd.... Atenci6n Prinwria de nu .... :.tra Are:1 de Salud. fueron c nlri-

fugado:. a 2000 g durante 15 Illinlllo~. Tr:lS hi sep:lracion delsuero. 6te !>e guard6 a ~ "C hasla d momenlO dc :.u an.i1i!>is.

Oblcncion del conccntr:ldo de colcstcrol de HDLEI ai!>lamienlO y conc....mr.lcion d.... eolc~terol de HDL sc oblu\'oaiiadiendo a una mezcla dL' :.u .... ro!> un reactivo pr....cipitantc deVLDL y LDL ( :icido fo:.fotung:.tico: OA~ mrnol/L) cloruro del1I'lgnc:.io: 20 mrllol/L) en la proporci6n I:3.5. La mada M'­agit6 dur.lIlte 30 segundo:. para a,egurar una buena hOlllogc­neizaci6n. ~ dej6 reposar a lempcroJturoJ ambicme dUr.lnte 10minutos y posteriormeme M' cemrifug6 a ~OOOg dumnte OIro:.10 minuto~.

EI :.obrenadame asi oblcnido '>C dialil.o a tr.J' 6 de una mem­brana !>emipermcablc en una :.0luci6n fosfato de pH 7.2 a finde c1iminar cI acido fosfotungsllco y cl doruro de tI1agne~io_

Tm:. 1:1 diali.,j:. :.e aiiadieron 290 mg de bromuro potasico pOl'

mililitro de di:lliz:ldo y se cenlrifllg6'1 -l88000 g Y 16"C du­rante 9 hora:. .... n una uItracentrffllga TLA- I00.3 (Bc('k IllanInstruments. California. EEUU). El conccl1\rado d.... cole~terolde HDL se diali76 de nuevo en soluci6n fosfato de pH 7.2 paraelil11inar el bromliTO pOI.bicu, Lol allscnci.1 en el cOI1(.:entr<ldode Olra~ lipoprotdnas dislil1\as a la~ HDL ~e conllrm6 median­te la rcalizaci6n de cleclrofore~is y tinci6n para lipidos lIsandocl sislcma Parang6n (Be('kman lnstrumelll~).

Mctodos c inslmmentaci6nMetodo dircclO de determinaci6n de colcsterol de HDL: lae":Ilu:lci6n del m"'todo :'10' re.lliz6 ....n un anatlzador aUlOmatlcoBM/Hitachi 717 utiliz:lIldo cI r....acli, 0 110L-c ref. 1731157que permite la determinaci6n diTt.'Cta. !>in trat:uniento previadel ~ucro. de la concentmci6n de cote!>tcrol de HDL)' cl cali·brJdor c.La.!>_ HDULOL-e ref. 1778501. Analizador. reacti\'oy calibiJdor :.on comercializado, pol' Boehringer Mannheim(f\bnnheim. Alemania). En la TL"COlbtilucion del reacti\'o y ddcalibmdor a:.f como en el protocolo del procedimiento de ana­lisi:.:.c han M'guido Ia.s in!>truccioncs dC'! fabri(·ante.

MClodo de preeipilaci6n para la dClenninaei6n de colcsterolde HDL: la:. VLOL y LDL:.e prccipitarun con un rcaClhoeon~tilllfdopOl' :icido fosfullingslico y eloruro de m..gnesio(Boehringer Manllheim: ref. 5~300~). Tra~ centrifugaci6n. 1aconcel1\racion de colcsterol de HDL del ~()brenadante se deter­min6 en un :1I1alizador aulol11{11 ico BM/I-! it:lChi 7 17 medianl ....elmctodo enzim.lticu CHOD-PAP ulili/.<lndo el reactivo ref.1489~37 (Boehringer rvlannheitliJ..,iglliendo c1 protocolu d....an.ilisb n:colllendado por cI fabricantc.

Metodo de ultracentrifugacion para la determinaci6n d.... co­lcsterol de HDL: cl metodo milil.ado c!> una modilleaci6n ddmetodo de rcft.::rell('ia del Ct'/I/l'r for Dist'ase.l· COII/m{ (CDC)(20). Sc comenl.o aii:ldiendo (en tubo:. de poli('arbonalo de13 x 5lmm) :1 1.5 lllL de suero. 1.5 mL de soluci6n d.... densi­dad 1006 giL: sc centrifug6 a ~88000g) 16"C dumllle 3 hOf:b.... n una uhracentriTuga TLA-lOO.3 de 1'0101' de angulo fijo(Bc<::kmall Instruments). Tr3:. la cemrifugaei6n. se separaronlos 1.5 mL que confonnan 10.1 capa :.upcrior y que contiene la:.VLDL y 10:. quilomierones de los 1.5 mL que forman ta eapainferior y que conti .... ne las LDL y I·IDL. La eoncentr:lci6n deeolc!>terol de HDL en la capa inferior fue determillad:t por cImctodo de prccipitaei6n anterionn....nte de~crito.

Dctennil1;1ci6n de I.. conccntnlci6n de colesterol y de trigli­cerido: hi concentracion de eo1cslerol y triglicerido se d.... lenlli­naron en un an:llizador alilormitico BMfl-lilachi 717 por lo~

mctndos cnzimaticos CHOD-PAP y crO-PAP usando losreacl ivos de dcterl11 inaci6n d........ole ... tcrnl (ref. I~89437) Ydcdeterminacion d.... trigJiccridu (reLI-l88ll9 lJ) de BuehringerMannheilll y siguicndo las recolllendacion .... s del fabril·ant .....

Quimica Clinic.. 1997: 16 (6). 393

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Stm.c........... Ii<" ftOLIICl!ricor. ~ 11l1l1loOUL1

'"fh:.uno I. Lmcall<bd.

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PrOlocolo de cvaluaci6nEstudio de rcpclibilidad: sc han Illiliz,ldo controks COlllcn:ia­Ic.~ ados conccrllrilcioncs difcrcntc~: Prccinorm* L (Boehrin·gel' Mannllcim: rd.78IS27) y Pn::cipalh- HDLlLDL·c(Boehringer Manllhcim: ref. 1778552)

Para cJ CSlUdio de 1:1 Tcpctibilid,ld intmscrial :.c ha dctcmli­nado la cOI1{.-entrJCi6n de colestcrol de HDL. en una misma~­ric. de 20 alicuolaJoo de ,-ada uno de los malcrialcJoo de COntrol.

Pam cI cSlUdio de 13 rcpclibilidad intcrscrial loe ha rcalizadouna dClcTminal'i6n de COll('cntracion de COICl>ICrol de HDL.cad'l dr••. a cada uno de los l1lalcrialc.~ de control durante 20llias. Sc Ila calculado 1:1 media. la dcsviaci6n lipica y eJ coefi­ciellle de variaeion.

E~ludio del error total: el error 10lal es la suma del error si.~­

tt:rnalko mas el error alealorio (/4.20). A p<lrtir dt: lo~ re~ult<l­

dos del eSludio de repctibilid<ld ~c ha c<llcul<ldo cI crror 101al.exprcsado COnlO porcem<lje. que pucde cometerse cuando sehaec una determinaci6n de la concemraci60 de eo!esterol deHOL a los malerialcs de control utilizados en el eSludio de re­pclibilidad (Prccinorm- L y Pn:cip<lth HOULOL-c) que tie­nen respcctiv:llncnte una concentraei6n rcconocida de coleste­rol dc HOL de 1.19 rnrnol/L y 0.83 mmol/L. La cxpresi6nulilizada h<l ~ido: £1(%) = Es(%) + Ea(%)

Tabln I. Estudio de repelibilidad

Et(Ck): error total e.l;prc~ado como pon:entajeS(c;f) = rlK'dia intcrscrial - ,:oI\Ccntraci6n l\."'COnocida x 100 1conecntmci6n r<."COnocidaSI(Ck) = 1.96 CVt: eVt~ = CVintr.l~ + eVinte~

eVt: cocficiellte de v'lriaci6n total: CVilltr.t: cocficicnte devariacion illlr.l~rial: Clljnler: cocficicnh: de v'lriacion il1\er~­

rial.ESludio de linealidad: a partir de una l1lezcla de SllerO:'l'on

una l'oneentraci6n de eoleslerol de I·IOL de 1,37 mmol/L y deun eonl'elllr.Ldo de eolc~lerol de HOL de 5.30 mmol/L ~c hanoblcnido prepaf'oleiolles con coneentraciollc:- de colestcrol deHOL eomprendidas entre 4.65 mmol/L y 1.55 mmol/L.Asimismo, a partir de I.::t mezda con coneelllraci6n de coleste­rol de HOL de 3.88 mmol!L.!>C han obtenido prcparaciones pordilucion scriada con soluci6n salina fisiol6gica hasta una con­cemrolei6n de eolesterol de HOL de 0.06 nunollL. A todas la:­prcparaciones Ics rue detcrrninada la eonee11lr.Lci6n de colc:-le­rol de HOL por lriplkado y en series distinlas.

Inlrol~ri::tl (II '" 20)

.f (mmollL) .~ (mmoVL)

ImeNrial (II '" 20)

Prccinom,· LPrccip:uh· HDULDL~C

1.190,82

0.0230,036

CV(Ok)

1.93·U

_T (mmol!L)

1.170.81

s(mmoVL)

0,0590,056

CV('K)

5m6.9

C\'t (Ok)

5398.13

'Hlhla II. Conccnlrucioncs de clllcslerol, lrigliccrido)' colestcrol de HDL

Colc~lcrol Triglictrido Cokslerol de HDL

Gropo I(II = 77)....,Gropo [I(II '" 271)...,

(mmoVL)

6,281.63

5Jl91.37

(mIllOVL)

2,0-12,29

1.631.-11

Dirceto(IIlmollL)

1330,41

1.25038

Precipilaci6n(mmoI/L)

1.210.311

1.230.311

Ultr.K:Cllln fugaci6n(IIlnlollL)

1.2-10.39

39-1 Quimica Clinica 1997; 16 (6)

E~tudio de interfcrencia [rente a Irigliccrido: la inlerferenciafrente a trigliccrido l>C evalu6 ~iguiendo. en [fnc:!:> generales. cIprocedimiemo de~rito por Glick (2/). Pam ello. a una mezdade ~ucros con una concemraci60 de cokslerol de HDL de 1,27mmol/L se han aiiadido eamidadc~ ercciemc~ de triglieerido(Inlra[ipid 20%. Pharmacia. Upp~ala. Succia). obleniendoseprep:lraeione~ con eoncentr.,Jcionc~ de triglicerido cornprendi­das entre 5.71 I1lnloi/L y 17.14 rl1lllol/L.

ESludio de comparat'i6n de mClOdos: .~e han ineluido un lOla Ide 271 espetfmenes. A lodos cllos se les ha delerminado. enpar:tlclo. la cuncenlraci6n de COIcSll..'rol de HOL por el111clododireeto objeto de estudio y por cl metodo de precipitaci6n usa­do en la rutina de nuestro laboratorio. Asirnismo. a 77 de los271 e~pecfll1ene:. amcriores sc les ha determinado Ia concen­tracion de colc:'lerol de HDL por clmcuxio de ullr:leemrifuga·cion. Por falla de volumen de :.ucro no pudo realizan.c eI mClo­do de uhracentrifugaci6n a lodm. lo~ especimene:..

Tralamicnto cst.ldfsticoLa eSladislica descripliv;I aplicada a los resultados de rnaleria­Ics de control y sueros se realiz6 llledi'Ulh.' una hoj" de calculoMicrosoft Excel versi6n 5.0. La eomparaei6n dc melodos seIlevo a c:lbo por el mClodo de Pa:.~ing)' Bablok (22) utilizando

Tabla III. Comparaci6n de mctodos

LillealidadEn la figura [ sc representa gr.:'ificamente. en un eje de coonk­nadas. Ia.-. medias de las concentmciones hall:1da:. (y) [renle alas cOllCcntmciones IOOriCa.-. (x). Se traz61a bi~-ctriz y la cUI"\'aobtenida. Por inspo.."'Ccion vi~ual ob'-CI"\'amo~ que eI nuc\"o InC­lodo cs lineal desde 0.06 mmollL hasla 3.88 mmo[/L. Se hiJ.Ouna rcgre~i6n linea[ del imervalo consider:ldo lineal por in~­

pccci6n visual. oblenicndo~e una recta que re~lX'nde a I.. eCU;l­ci6n y 0:: 0.990x + 0,005.

Interfercnci:l frente a trigliccridoEn la figura 2 se representa 1:1 concentraci6n de co1csh:rol deHOL obtenida para cada una de las prepamciones con :.obre­caf',:;a de Introllipid expre~ada como pon:entaje de la coneen·lraeion de la soluci6n lesligo (y). [rente a la concenlmci6n deinterferenle (x). A eoncclllmciones de 17.14 mmol/L de trigli­ccrido cneontramos una recupcmcion de[ 92.86'>'-. Por in"pec­cion ViSU:ll de I.. figur.! 2 SC ObM'r\';l que lo~ valores en ella re­presentados definen una rect .. euya regresi6n lineal respondeala ecuacion y 0:: 100.75-0.47x. Oe ella "10 dedu('c que unainex:l('tilud del I07c se a1canzarfa con 22.87 mmol/L de trigli­ccri-do y una inexaclitud del 5% con 12.23 II1mol/L de trigli.cerido.

" i.e. b I.e. ,

Di rel;lofU Ilraccnlri fug<lci(m 0.066 (0.013·(1.103) 1,032 (1.00·1.071 ) 0.98(II'" 77)

M. Direclo/Prct'ipiladon 0.026 (0.026-0,053) 1.000 (0.968· [.(00) 0.99(11 '" 271)

a: o«knatla en uri"en (mmoVLj. b: pcntlH:I1l~'" i.,.: illlCl"\alo de {"()Illiam:a Oil 9Yl

el programa Iblll/t' Sill/is/irs A(M-ill para Micro~ofl Excel(1993-1995 DOU So[tw:lre. Uni\"en.idad de Lced", Groin Bre­l:ll"la.).

Resultados }' disclIsion

Rcpctibilid..dEn la t:lbl.. I M' TIlue"tran lo~ re"u!l;ldm. del e"tudio de rcpctibi.Iidad intraM'rial e illleNCrial a"i como eI codicicnte de \'aria­don 10lal (CVl) OOlenido" con IQ!, dm. materialc:. de control co­mercial. Los criterio.. gufa del NCEP recomiendan cI u:.o de 1:1dt'~viaci6n tfpic:l (.I') p:lr:1 concenlracione~ de t'olc"lcrol deI-IDL < 1.09 mmol/L y cI CV para concentr:teione~ de wk..tc­rul de HOL> 1,09 mmol/L. La repelihilidad inlerserial del mc­lmlo direl:to cumple lu~ objelivo" recomend,ldo" para concen·traciones de t'olesterol <It' HOL de 0.83 nllllol/L (.I' 5 0.06mmol/L) y 1.19 11111l01/L (CV S 6'}) "in I[eg:lr a alc:lllzar lo~

objClivo~ recol1len(!<ldo~ para 1998 (s S 0.04 mmo[/L) paraconcenlracione.. < [.09 111moi/L y (CV S 4~) pam concenlm·cione~ ~ 1.09 mmol/L (/5).

Error total£1 error total eneoJlll':ldo ha ~ido de 11.24q. p,ml eI maleria[ deC0111rol Pret'inorm L y IS.33,} para elm<llerial de controlPrecip<llh'l> HDLlLDL-c aju"dndo~e a las recomend..cione~del NCEP sobre el cokslerol de !oIOL (error 100al S 22%) perono Ilegando a cumplir 10" objelivo" fijados par:I 1988 (error 10­1,,1 S 13q.J.

Comp..mci6n de mClodosLos espcdmenes ~bre los que sc re:llizo el e"tudio se di\'idie­ron en dos grupos: Grupo I (II '" 77) fornwdo por los sueros:1los que se Ics delermin6 la concenlr,Ici6n de coleslerol deHOL por los tres mCtodos (directo. precipilaci6n y ultracenlri­rugacion ) y grupo [[ (II '" 271) formado por lo.~ suero~ :1 lo~

que se Ics delennino la concentracion de colc~lerol de HOLpor d metodo direclo y por e[ metodo de prt.-cipilaci6n.

En la labia IlloC expres:," 10:. re~uhadm. OOlenidos en la de­tt.'nninad6o de la concentraci6n de coksleroJ. lriglicerido }co!cslt.'rol de HOL por 1m di"linto" ll.ctodo". en [omla de me­dia y desviaci6n tipiea. par.! lo~ do" grupo" de e"pedmene...

Los resultados obtenido~ en Iii comp<lr:tci6n de mClodo~ porI.. regresi6n no parametric.. de Passing y Bablok :lsf como clcoclicienlc de correl;tci6n de Spearman entre el mctodo direc­10 y c1mclodo de ultracenlrifugaci6n y entre cl metodo diret'loy el melodo de precipilaci6n se expresan en la labia 111.

L:lS ordenad:ls en eI origen y las pendienlcs. asi como MI~

rcspcctivQ!, intel"\'alQ!, de eonlianl.a rc\'elan que la~ pendiente~

no difieren de I miemm~ (Iue la.. ordenada" en cI origen ~f quedifiercn de O. lanlO p'lra la comp'lraci6n efccwada ('on d me­todo de prt."'Cipilaci6n como parol la rcalilada con d melOdo deultracenlrifug:j(-ion. Lo~ re:.ullado~ obtenido" I)()r 1m Ire" n.c­lodos mue~trJn un:1 [uenc corrcl'lci6n. No ob~lantc. los dd me­10do dircclO rcsullan estadf~lic:Hnente m,b alto~ como COll~e­

cut.'nci:l de un error de lipo constante. Resultados simitare~

han sido comunicados por Olros aUlorcs (23). La diferenciacxistente entre el melodo direclo y cI de uitr<lcenlrifugaci6npodrfa debcr:-c a que cl nuevo lIlctodo determina panfcul:l!> de

QuimiC"'oI C1inica 1997: 16 (6) 395

HDL de mayor ma:.a y comenido en :lI>OlipoprOldna E que no"On compktaJllcnte prccipitabk... por alguno:. predpitalllc...... co-munmentc utili/ado... (2-J). En Otr;1 dc 101'" c\'aluacione "'e ha!oCnal:ldo un pn.--dominio (SW de la~ mue...tr.l"" de \:lIon: infe-rion: ... a lo~ del m':todo d(' referenda (/6). A"imi ... mo. en unae\ alU:lcillll prdiminar ...e ha ob:-er\ ado que las conCl:mmcione~mcdi:.... de cok~tcrol de HDL fueron un 2.8'k infcrion:" a Ia~

del mctndo CDC I..' igualc~ :1 la~ de un 1Il':lodo de precipitacioncon :\cido fosfolllng"ti..:o y dar-uro til: magnc~io (25).

En ,·orK"lu"i6n. ellll"todo directo de detefillinacion de co­k"'lcrol de HOL repre ...enta un gran a\:lI1c(' t':cnico. Utili!.a tan...0104 J.lL de muc ... lra. 10 que fa\'orcce ~u ernplco en e:.pecfme­ne... pcdi:ltrico:. 0 "on ele\'ada coneentr:lci6n dc trigliccrido. Dtotal mente automatitablc. no n.·quiricndo la" mue...tr:t ... ctapa:.preparati\as y 10... re ... ultado... "'C obtienen en diet minutos. 10que rcl>re~ntac1mcnor tiempo po... iblc de entre todo... 10-. mc­todo ... dhponibk~ facilitando el pnx·c ...amiento de amplias ~e­

ric .... Pre:.enta una buena calid:1<1 analitica (cumplicndo 10), cri­terio.' vigentes I,'n cmUlto a prl,"'bion y eX:lctitud "c refiere) una1llplio inter\'alo analilico y 101 po"ibilid:ld de (Iu,,: hi m:lyoria delos e~pedlllcne~ "on ekvada conCentr:!t:ion de lriglic':ridoIconcentmdone" S 22.87 mmol/L de triglicC'rido "eglln 10), cri­terio" de incX:LCtilUd \ igentc" (± IW}) 0:$ 12.23 mrnol/L detriglicerido '<eglin 10... criterio ... de inexactitud propuc... lO-, para1998 ) :Ino), ),uce i\ 0-. (± jCk )Il>ued:m -.cr dircclamentc :mali·1.:ld:I:.. 10 que no ucedl· con 10:. metoda... de pn."'(.·ipita<:i6n.

A 1:1 \ i~t:l de Ilue ... tro:. re-,ult;ldo... ) 10'" publicado... por OIro":tulore... y:l :mlerionnenlc cilado... crccmo:. que el nue\o 111':10­

do 1..'''' una buena ahem;ll!":! a los utili1.ados aClUalmente en ru­

tin:1 y que "er:! bh:n :tceptado en I:t mayorfa de laborator!os cli­nicos. en espct:ial en :t(luellos cu)';l.... "eries de dctermina"ionessean alllplias. No uhstanle. con~idcr:tl1lo" Ilct:cS:tri;1 b realiz;l­"ion de nuevas evalual:ione....

Agradccimicntos

Querelllo,. agmdi.-'Ccr :ll pen-onal de la ...cccion d(' :lUloanali/-.a­dore" por la alllable a) ud:1 prcsl;ld:1 en b realit.:aci6n dcltraba­jo (C~peci:llme11leal teeniw J.e. Fernandez Senovilla)) al Dr.F.J. Martin Gil.

Tal1lhi"n agr'ldeceillos l:t l:OI.lbora(·i6n d..: BoehringerMannheilll en la ce~i6n de los reat:ti\'o~.

Com""<pond':r1c:,a:M.L Amllu Pei\;t50."0 M:IO .... An.:ilN_ Clfni<."O'lk",piullkl Kio llon~"

\,o.b Saol:l T.-n-.;! .Ju·HOIO VJllaoohd

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