ESTUDIO EXPERIMENTAL DEL EFECTO INMUNOMODULADOR DEL EXTRACTO HIDROALCOHÓLICO DE CAPSICUM ANNUNM SOBRE LA ARTRITIS INDUCIDA EN RATAS MINISTERIO DE SALUD INSTITUTO NACIONAL DE SALUD CENTRO DE INFORMACIÓN Y DOCUMENTACIÓN CIENTÍFICA 2005 Q.F. DIANA VERGARA NÚÑEZ IVÁN LOZADA-REQUENA SERIE INFORMES TÉCNICOS Nº36
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ESTUDIO EXPERIMENTAL DEL EFECTOINMUNOMODULADOR DEL EXTRACTO
HIDROALCOHÓLICO DE CAPSICUMANNUNM SOBRE LA ARTRITIS INDUCIDA
EN RATAS
MINISTERIO DE SALUDINSTITUTO NACIONAL DE SALUDCENTRO DE INFORMACIÓN Y DOCUMENTACIÓN CIENTÍFICA
2005
Q.F. DIANA VERGARA NÚÑEZ
IVÁN LOZADA-REQUENA
SERIE INFORMES TÉCNICOS Nº36
ESTUDIO EXPERIMENTAL DEL EFECTO INMUNOMODULADOR DEL EXTRACTO HIDROALCOHÓLICO DECAPSICUM ANNUNM SOBRE LA ARTRITIS INDUCIDA EN RATAS
CÓDIGO OGITT: 2-01-04-02-093
Título en castellano del artículo:
ESTUDIO EXPERIMENTAL DEL EFECTO INMUNOMODULADOR DEL EXTRACTO
HIDROALCOHÓLICO DE CAPSICUM ANNUNM SOBRE LA ARTRITIS INDUCIDA EN RATAS
Título en inglés del artículo:
EXPERIMENTAL STUDY OF EFFECT INMUNOMODULADOR OF EXTRACT
HIDROALCOHOLICO OF CAPSICUM ANNUNM ON ARTHRITIS INDUCED IN RATS
Título corto:
EFECTO DEL EXTRACTO HIDROALCOHÓLICO DE CAPSICUM ANNUNM SOBRE LA
ARTRITIS.
INVESTIGADORES:
Diana Vergara Núñez1, Iván Lozada-Requena2,
1 Centro Nacional de Control de Calidad. Instituto Nacional de Salud. Lima, Perú2 Sección Inmunología. Facultad de Ciencias y Filosofía. Universidad Peruana CayetanoHeredia. Lima, PerúQ.F. Diana Mabel Vergara Núñez, Analista de Certificación. - Dirección Ejecutiva deCertificación – Centro Nacional de Control de Calidad – Instituto Nacional de Salud. Lima, Perú.Dirección: Av. Defensores del Morro No. 2268 (ex Huaylas) Chorrillos- Lima 9.Teléfono: (511) 467-6696 Anexo 589Correo electrónico: [email protected]
ESTUDIO EXPERIMENTAL DEL EFECTO INMUNOMODULADOR DEL EXTRACTO HIDROALCOHÓLICO DECAPSICUM ANNUNM SOBRE LA ARTRITIS INDUCIDA EN RATAS
RESUMEN
Objetivos: El propósito de este trabajo es obtener el extracto hidroalcoholico del Capsicum
annum y comprobar el efecto inmunomodulador en ratas con Artritis rematoidea (AR) inducidas
por colágeno. Material y Métodos: Se realizaron ensayos analíticos de identificación para
detectar la presencia de alcaloides mediante reacción de color, aislamiento y determinación del
principio activo de la capsaicina por cromatografía en capa delgada del extracto
hidroalcoholico, utilizando estándar de capsaicina con pureza de 97% (SIGMA). Se realizó una
prueba piloto utilizando un test de ELISA para la determinación de TNF-αen suero de ratas
Sprague-Dawley y determinar el efecto inmunomodulador. Resultados: A partir del extracto
hidroalcohólico se logró identificar los alcaloides mediante la marcha fotoquímica por reacción
de color, y mediante cromatografía capa delgada (CCD) identificamos el principio activo de
capsaicina. La prueba piloto no evidenció cambios significativos en los niveles de TNF- α
respecto al control positivo. Conclusiones: La purificación e identificación del principio activo
(capsaicina) del extracto hidroalcohólico, debido a que las ratas Sprague-Dawley no
desarrollaron completamente la inducción por colágeno la artritis reumatoidea (AR) es
necesario obtener ratas con cepas susceptibles (AR), ratas específicamente con cepas LEWIS.
Reveladores: Solución de 2,6-dibromoquinone-chlorimide in metanol al 0,5 % y camara con
vapores de amoniaco.
Obtención de extractos oxindólicos:
En un matraz erlenmeyer con tapa esmerilada colocar 1 g de la muestra pulverizada
agregar amoniaco al 10% para humedecer durante una hora y lograr la liberación de los
componentes químicos, dejar que el amoniaco se volatilice y luego agregar 20 mL de agua
destilada, mezclar bien y pasar por un embudo de separación, realizar tres extracciones
con 30 mL de diclorometano, separar por filtración la fase diclorometanica sobre un papel
de filtro que contiene 1 g de sulfato de sodio anhidro, para desecar la solución
diclorometanica que se esta filtrando, se recibe en un beacker, se evapora el solvente
diclometano y se obtiene el extracto diclorometanico que contiene los alcaloides
oxindólicos y otros metabolitos secundarios, fueron controladas en capa fina en la misma
forma que los extractos obtenidos por Cromatografía en columna rápida (CCR).
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ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN
Ratas hembras Sprague-Dawley de 3 meses de edad, con peso entre 150 – 200 g se
obtuvieron del bioterio de la Universidad Peruana Cayetano Heredia. El bioterio mantiene
líneas de ratas con parámetros estándar en cuanto a su reproducción y características
adecuadas de mantenimiento de la línea. Los animales fueron alimentados con alimento
balanceado y agua ad libitum.
TOMA DE MUESTRA
Se realizó la toma de muestra a dos ratas para lo cual se tuvo que anestesiarlas.
La toma de muestra se realizó por punción intra-orbital.
Se obtuvo muestras de suero de ambas ratas.
Realización del ensayo de ELISA
Se utilizó el kit Rat TNF-αELISA de BD Biosciences, el cual se basa en el inmunoensayo
asociado a una encima de tipo “sándwich”que determina la presencia de la citokina TNF- α.
El ensayo se realizó siguiendo las instrucciones del fabricante y todo el ensayo duro
aproximadamente 6 horas.
Las lecturas se realizaron con equipo de la Sección Inmunología –UPCH.
RESULTADOS
Preparación del extracto hidroalcoholico:
El extracto de Capsicum obtenida tenia el aspecto de un liquido transparente de color
anaranjado rojizo de olor fuerte característico, sabor picante ardiente.
Por cromatografía de capa delgada se obtuvo el perfil del extracto comparándolo con el
estándar, el color azul y el valor del Rf de la mancha principal obtenida a partir de la solución de
prueba corresponde a la propiedad de la mancha principal obtenida a partir de la solucion
estándar. (USP 28 2005:336)
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En la tabla 1 se muestran los resultados de las corridas de la cromatografícas en los diferentes
extractos estudiados en relación con el estándar.
Tabla 1. Índices medidos a los diferentes extractos de extractos de C. annuum
Nª demuestra
Extractos Rf Mancha azul
La intensidad y el valor Rf de la
mancha principal obtenida de la
solución prueba corresponden a
los obtenidos en la solución
estándar (USP 28 2005:336)
1 Estándar 0,73 + Corresponde
2 Alcaloides oxindólicos 0,74 + Corresponde
3 Capsaicina aislada 0,73 + Corresponde
4 n-hexano --- - No se evidencia
5 Diclorometano 0,73 + Corresponde
6 Metanol 0,73 + Corresponde
7 Agua destilada --- - No se evidencia
En las fig. 1 se presentan los perfiles cromatográficos obtenidos en las diferentes condiciones y se relacionan los intervalos devalores de Rf y el color para cada una de las bandas detectadas como a continuación se describe detallan.
Donde: ST1-7 : Estándares (Concentración TNF-)RT1 : Rata con Artritis Inducida por ColágenoRT2 : Rata con Artritis Inducida por Adyuvante Completo de Freund* : Sueros que presentaron hemólisis
Lecturas a 450 nm en unidades de Densidad Óptica (DO):