-
Extensiones SanguneasEl frotis sanguneo consiste en la extensin
uniforme de una gota de sangre sobre un portaobjetos; la misma que
se lleva a cabo con otro portaobjetosEl frotis sanguneo se realiza
de forma manual y automatizada ( spinner )
-
Partes de una extensinCabeza- es la zona inicial de la extensin-
es la regin mas gruesa- en esta regin se encuentra el mayor nmero
de linfocitos y GR apilados- No es una zona de lecturaCuerpo - es
la zona media del frotis- su espesor es el apropiado- en ella
existe una adecuada proporcin de leucocitos- contiene la zona ideal
de observacin, que corresponde a la zona que limita con la cola
-
Cola - es la zona final de la extensin- suele tener un aspecto
redondeado- es la regin mas fina- mayor proporcin de leucocitos
grandes, hemates deformados y tonalidad uniforme
Caractersticas de un buen frotis- la cabeza ha de estar cerca de
uno de los extremos del porta- la cola debe estar cerca de uno de
los bordes- toda la extensin ha de ser fina y homognea- los bordes
laterales han de estar separados de los bordes del porta por 1 mm
aproximadamente- presencia de barbas en el extremo terminal
-
Defectos de una extensin Presencia de escalones o estras.
originado por una falta de uniformidad en el momento de realizar la
extensinUn lmina con zonas huecas redondeadas por efecto de restos
de grasa y suciedadExcesiva longitud y escaso grosor o escasa
longitud excesivo grosorError en el tamao de la gotaError en la
velocidad de la extensinError por causa de un ngulo inapropiadoSe
debe tener en cuenta el Hto del paciente, dependiendo de esta, se
aplicar el ngulo apropiado de extensin
-
Coloraciones HematolgicasLas coloraciones hematolgicas son un
conjunto de procesos que conducen a la coloracin de las estructuras
que componen las clulas sanguneasEsto tiene por objeto el aumentar
el contraste entre esas estructuras y el medio que las rodea, y
esto permite observarlas con mayor facilidadLas tinciones
hematolgicas se pueden clasificar en :De acuerdo al nivel de
vitalidad de lo que se quiere coloreara . Vitalesb . No vitalesDe
acuerdo a su frecuencia :a . Rutinab . Especiales
-
Tinciones HabitualesColorantes cidos: tienen especial afinidad
por las estructuras alcalinas de las clulas, como por ejemplo la
hemoglobina. El principal de ellos es la eosina.Colorantes bsicos :
especial afinidad por las estructuras cidas de las clulas, como por
ejemplo los cidos nucleicos. Uno de ellos es el azul de
metilenoColorantes neutros : son los que no tienen afinidad con las
estructuras cidas o bsicas, uno de ellos es el Sudn III
-
Existen tambin combinaciones de colorantes que dan origen a
tinciones polcromasEl primero de ellos fue Romanowsky, y todos los
colorantes hematolgicos de la actualidad suelen derivar del que l
preparEstos colorantes constan de un colorante cido (eosina) y
otros bsicos (tiacinas).las tiacinas son el azul de metileno y los
azuresTambin existen tinciones panpticas rpidas que producen una
coloracin fcil y rpida en las estructuras celulares
-
Estructuras acidfilas : son aquellas que fijan colorantes de
naturaleza cida. Si captan la eosina se llaman eosinfilas. Con las
tinciones habituales adquieren un color rosadoEstructuras basfilas
: son aquellas que fijan colorantes de naturaleza alcalina. Con los
tinciones habituales adquieren un color azulado.Si se tien de lila
o prpura con colorantes de tipo azur, se llaman azurfilas.
-
Tinciones especialesSolo se usan en condiciones especficas
Tinciones fluorescentes : emplean colorantes (fluorocromos) que se
fijan a las clulas y que, cuando son estimulados por LUV, emiten
una radiacin visible caracteristica.Tinciones Citoqumicas :
demuestran la presencia, mas o menos abundante, o la ausencia de
determinadas sustancias y/o enzimas, localizadas en el interior de
los grnulos citoplasmticos de los leucocitos.Sirven para reconocer
clulas normales de las anmalas, y por tanto, reconocer una leucemia
de otra. Por ejemplo : PAS, Sudan Black, MPO, alfa Naftilestearasa,
etc
-
Coloracin cida
-
Coloracin Bsica
-
Causas de Error en las Tinciones Habituales de Frotis SanguneoSi
la tincin de una extensin sangunea es demasiado rosa, probablemente
se deba a :Un pH bajo de coloranteUn tiempo de coloracin
insuficienteUn lavado excesivamente prolongadoSi la tincin es
demasiado azul probablemente sea por :Un empleo de portas
suciosFalta de filtracin del coloranteUna coloracin excesivamente
prolongadaUn secado del colorante durante al tincinUn lavado
insuficiente
-
Preparacin del Colorante de Wright ( Merck )Pesar 2 3 gr del
colorante en polvo comercial1000 ml de metanolGlicerina ( 5 ml )
opcionalColocar en un mortero el colorante y aadir la
glicerinaAadir de a pocos el metanol al mortero e ir machacando
hasta que adquiera una coloracin azul intensa y luego verter a un
frasco color caramelo o mbar, previo filtrado con papel
filtroRepetir la operacin hasta que se acabe el metanolGuardar en
lugar oscuro, fuera de la luz para evitar su oxidacin por aprox.
una semana hasta que madureLuego de cumplido el tiempo filtrar
nuevamenteListo para su usotcnica de tincin :Cubrir el frotis con
el colorante por 1 3 minutosAgregar agua tamponada pH 7.2 7.4 por 5
7 minutos ( homogenizar )Verificar la formacin de una pelcula
plateada sobre el coloranteLavar con agua corriente y dejar
secarLeer con objetivo de inmersin
-
Para tener en cuenta Un aspecto clave es el grosor del
extendido. Una extensin de calidad no debe ser gruesa ni muy
delgadaUna extensin gruesa dificultar la observacin de la morfologa
eritrocitaria y la diferenciacin entre linfocitos y monocitos.
Adems de dificultar al ojo inexperto la tincin de las clulas
sanguneasPor el contrario, si es muy fina, la mayora de neutrfilos
y monocitos se hallarn en las reas perifricas. Esto alterar la
relacin normal de la distribucin celular leucocitariaSe recomienda
entonces, que el grosor ideal, es aquel que nos permita leer a
travs de la extensin
-
Estudio de Lmina PerifricaEl estudio de lmina perifrica
comprende la evaluacin morfolgica de las tres lneas celulares (
elementos formes ) que componen la sangreSerie Blanca :
LeucocitosSerie Roja : HematesSerie Tromboctica : Plaquetas
-
Procedimiento del Diferencial Manual de Sangre PerifricaExamen
ocular a bajo aumento ( 10X )Determinar las caractersticas de la
tincinDeterminar la distribucin celulara. verificar si hay
presencia de agregadosplaquetarios que pueden producir errores de
conteo en los equipos o llevar a conteos bajos falsos b. Verificar
la presencia de Rouleaux en GRc. verificar la presencia de
agregados leucocitarios causados por inadecuada mezcla de sangre
despus de su coleccinSeleccionar la mejor rea para una detallada
evaluacin morfolgicaa. buscar una distribucin homognea donde los
eritrocitos no se sobrepongan unos a otrosb. evitar reas huecasc.
evitar reas extremas donde los eritrocitos adopten forman
geomtricas
-
Lectura a mediano aumento ( 40X o 50X )este tipo de lectura nos
sirve para tener una visin panormica y completa del frotis y es de
utilidad para el personal adiestrado en el reconocimiento celular,
porque nos permite lecturas a mayor velocidad, sin sacrificar la
precisin. Se recomienda su uso para lminas de pacientes
leucopnicos.Algunas personas inclusive pueden calcular el numero de
leucocitos pmmc contando las clulas blancas normales y rotas,
contando 10 campos, luego obteniendo su media y posteriormente
multiplicandolo por 3000
-
Lectura a mayor aumento ( 100x )Se lleva acabo usando un
tabulador o contmetro, manual o digital. Deben incluirse todas las
clulas de la serie blanca, maduras e inmaduras.No deben incluirse
en el recuento de 100 leucocitos a los GR nucleados y
megacariocitos nucleadosCualquier leucocito conteniendo una
inclusin anormal deber ser reportado pero con un conteo en paralelo
por las 100 clulas contadasEjemplo : Ud observ 60 neutrfilos en su
conteo de100 de los cuales 20 de ellos tenan cuerpos de Dhle, ud
deber informar al final del recuento : neutrfilos (60%), y cuerpos
de Dhle 20%Se deber reportar los siguientes inclusiones : - cuerpos
de Dhle- cuerpos de Auer- anomala de Pelger Huet- anomala de May
hegglin- inclusiones de Alder Reilly- inclusiones Chediak Higashi-
granulaciones txicas - vacuolas citoplasmticas o degenerativas
-
Usted deber reportar cualquier clula anormal o indiferenciada
que observeDeber reportar GR nucleados si estos exceden al 6% y
corregir su recuento de leucocitos con la siguiente formula :
Leucocitos contados / mm3 x 100 = leucocitos corregidos / mm3
100 + N hemates nucladosEjemplo : si un paciente tiene un conteo de
15,000 leucocitos pmmc y 35 % de GRN, su conteo corregido ser de
11,111 pmmc
-
Evaluacin de la Serie RojaEn este punto el observador deber
reportar su minucioso examen de los GR, indicando la presencia de
Hipocroma, Anisocitosis y Poiquilocitosis.Deber reportar tambin
inclusiones eritrocitarias y hemoparsitos si los hubiera.Tambien
indicar la presencia de clulas inmaduras de la serie roja si las
hubieran
-
MADURACINSERIE
ROJA
-
Hipocroma : cuando una clula roja individual contiene un rea
plida central que es mayor a la tercera parte de su dimetro se
denomina clula hipocrmicaRango medio para denominar hipocrma en 10
campos microscpicos ( 100 160 hemates por campo )
a. normocroma : 0 - 5b. leve hipocroma : 6 - 15c. moderada
hipocroma : 16 - 30d. marcada hipocroma : > 30
Nota : la hipercroma no esta reportada aqu pero se relaciona con
la presencia de esferocitos.
Hipercroma : se denomina as a las clulas rojas profundamente
coloreadas en relacin al resto, y esto debido a su alto contenido
en hemoglobina, mayor al que debera contener
-
Anisocitosis : cuando se presenta en el campo eritrocitos de
diferentes tamaosNormoctos :dimetro longitudinal : 7 8 Diamatro
transversal ( espesor )perifrico : 2 central : 1 Superficie : 120 -
140 Volumen : 80 95
Microcitosis : hemates con un dimetro inferior a 7 y un volumen
inferior a 80 3Macrocitosis : hemates con un dimetro superior a las
8 y un volumen superior a las 100 3Megalocitos : hemates con
dimetro superior a las 11
Rango medio para anisocitosis / 10 campos
Normal Leve Anisocitosis Moderada Anisocitosis Marcada
Anisocitosis
0 - 5 6 - 15 15 - 30 > 30
-
Poiquilocitosis : cuando se presentan varias formas diferentes
en los hemates en un campo microscpicoSi se observa solo un tipo
leve de anormalidad la poiquilocitosis ser leve, pero si coexisten
diferentes formas de hemates, entonces ser marcada, no importando
que individualmente sean leves Se recomienda que cada forma anormal
sea evaluada separadamente
Rango medio para tipificar poiquilocitosis /10 campos
Normal : 0 - 1Leve : 1 - 5Moderada : 6 - 15Marcada : > 15
-
Acantocitos AHAA. sideroblsticaAHMEnfermedad hepticaEnfermedad
renal Post- esplecnotomaDrepanocitos Clulas facliformesA.
drepanocticaEnfermedad Hb S - C
-
Esquistocitos Son GR fragmentadosAHMA. megaloblasticaTalasemia
mayorA. hemolticasLeucemia agudaHiperesplenismo Megalocitos
Anemias megaloblasticasDimetro > a 11 micras
-
ANEMIA MEGALOBLASTICA ELIPTOCITOSIS HEREDITARIA MIELOFIBROSIS
TALASEMIA MAYOR TRAUMA MECANICO
-
Rouleaux Cuando los GR se presentan en fila de monedaMieloma
MultipleIncremento de gamma globulina Macroglobulinemia de
Waldenstrom
-
Dianocito Clula en Tiro al Blanco ESTOMATOCITOSIS HERDITARIA
LEUCEMIA AGUDA ALCOHOLISMO CON ENFERMEDAD HEPTICA ARTEFACTOS
TALASEMIAS
-
Anillo de CabotCuerpos de PappenheimerPunteado BasfiloCuerpos de
Heinz
-
Reticulocitos Policromatofila Cuerpos de Howell
JollyPappenheimer
-
Serie BlancaLa frmula leucocitaria es la denominacin usual que
se da al recuento porcentual de los diferentes leucocitos que
circulan en la sangreEn condiciones de normalidad esta constituida
por 5 poblaciones de leucocitos :Neutrfilos ( en su gran mayora
segmentados )Eosinfilos Basfilos Monocitos Linfocitos
-
Variables que pueden influir en la formula leucocitaria
realizada mediante el mtodo visualDistribucin irregular y no
aleatoria de los leucocitos en la extensinRealizacin de la lectura
en una zona inapropiadaVariaciones de la calidad y las
caractersticas de la tincin ( tincin cida o bsica )Observacin de un
nmero insuficiente de clulasPericia del observador en la
identificacin celular neutrfilos segmentados Vs neutrfilos en banda
monocitos Vs linfocitos activados o atpicos formas inmaduras de
granulocitos neutrfilos
-
SERIE
MIELOIDE
-
Mieloblastos :Es redondeadoDimetro entre 15 20 Su ncleo es
grande, redondeado, rojizo y tiende a centrarseSu cromatina es laxa
y contiene de 2 a 3 nucleolos visiblesSu citoplasma es basfilo y
algunas contienes finas granulaciones azurfilas
-
Promielocito :Se origina por maduracin y maduracin del
mieloblastoEs redondeadoDimetro de 16 25 Ncleo grande, redondeado,
menos rojizo y tiende a excentraraseCromatina laxa y generalmente
se observa nucleolos en ella, puede presentar zonas de
condensacinCitoplasma abundante, repleto de grnulos primarios muy
azurfilos
-
MIELOCITOS
-
JUVENILES O METAMIELOCITOS
-
METAMIELOCITOS
-
Metamielocitos Vs No SegmentadosRegla de la Mediana : Si al
completar mentalmente la circunferencia nuclear y trazamos una lnea
media imaginaria y esta muestra la hendidura antes de la media
estamos frente a un juvenil o metamielocito. Si por el contrario la
hendidura esta detrs de la lnea media, estamos frente a un
abastonado Juvenil No Segmentado
-
Metamielocitos Vs No segmentadosRegla del Dimetro : esta se basa
en el ancho del ncleo. Si la anchura de esta es similar a la mitad
de la longitud del ncleo estamos frente a un metamielocito o
juvenil, en cambio si el ancho nuclear es menor a la mitad de la
longitud del ncleo, estamos frente a una clula en banda. Juvenil No
Segmentado
-
CLULAS ENBANDAOEN CAYADOOABASTONADOS
-
Clulas Neutrfilas en Banda
-
Neutrfilos Vs No SegmentadosRegla del TercioSi la estrangulacin
de la continuidad nuclear es menor a un tercio de la parte mas
ancha del mismo ncleo, entonces es un segmentado
Regla del FilamentoSe dice que estamos frente a un segmentado
siempre y cuando se observe un ncleo polisegmentado y se observe al
menos un puente de cromatina
-
Neutrfilos Vs No SegmentadosNeutrfilos Clulas en Banda
-
Criterios para la diferenciacin entre neutrfilos Vs no
segmentadosSi seguimos con la mirada la continuidad nuclearY en
algn momento esta se entrecruza con otraLnea del mismo ncleo ,
entonces lo llamamosSegmentado. Del mismo modo si al termino de
laObservacin de la continuidad de la membranaNuclear sobra ncleo lo
llamamos segmentado.( Fig. 1 )
Si al observar la continuidad nuclear no notamosCruce de lneas,
entonces lo estamos frente a unAbastonado. ( fig. 2 )
Fig. 2
-
Son clulas redondeadas, de tamao entre 12 y 14 um. Su ncleo est
segmentado en 2 a 5 lbulos, unidos por unos finos puentes
cromatnicos. El citoplasma es rosa plido y contiene numerosos
grnulos neutrfilos que se tien de color marrn con las coloraciones
panpticas habituales, as como cierto nmero de grnulos primarios (
10 20 % ) o azurfilos dificilmente visibles al quedar enmascarados
por los neutrfilos. Su ncleo es de color violeta oscuro y presenta
cromatina densaAlgunas veces su ncleo presenta un pequeo pndice en
palillo de tambor ( cromatina sexual )
NEUTRFILOSPOLISEGMENTADOS
-
Granulaciones Txicas Pelger - Huet
-
Vacuolas CitoplasmticasVacuolas Degenerativas
-
BASFILOPoseen un ncleo bilobulado y grandes grnulos esfricos
basoflicos y metacromticos dados por heparina e histamina. Liberan
adems aminas vasoactivas y sustancia de reaccin lenta de la
anafilaxia.
-
Clula redondeada12 17 Ncleo violeta, generalmente bilobulado
simtrico unido por un puente de cromatina o en forma de
anteojosPresenta grnulos, grandes y acidfilos que no cubren el
ncleoEstos grnulos se tien con la eosina y contienen diversas
sustancias como la peroxidasa, fosfatasa cida, hidrolasas, etc
Eosinfilos
-
Serie Linfoide:
Linfoblasto Linfocitos Prolinfocitos
-
Dimetro variable de 7 18 Pueden diferir en su relacin N / CEl
citoplasma es variable ( escaso o abundante )Su coloracin es azul
plida, pero aumenta en los linfos reactivos ( estimulados )Pueden
presentar una granulacin azurfila escasa en el ciptoplasmaNcleo
redondeado y cromatina compactaLa densidad de la cromatina puede
variar entre los diferentes estados. Es generalmente elevada pero
pueden presentar zonas mas laxas
Linfocitos
-
LINFOCITOS ATPICOS
-
MAS LINFOCITOS ATPICOS
-
Plasmocitos 8 20 de dimetroRelacin N/C 2:1 o 1:1Ncleo redondo u
ovalCromatina densa azul purpura con grandes muescas cerca al
margen nuclearNo presenta nucleolosCitoplasma moderado, basfilo,
con zona clara perinuclear adjacente al ncleoPuede contener una o
mas vacuolasNo presenta granulaciones citoplasmticas
-
Monoblasto Promonocito Monocito Serie Monoctica
-
MONOCITOSSon las clulas circulantes de mayor tamao. Poseen un
ncleo excntrico en forma de U en forma arrionadaEl ncleo suele
presentar una ubicacin central 14 20 de diametro Citoplasma
abundante y de color lila plidoPresenta fina granulacin
azurfilaPresenta cromatina laxa o filamentosaEn ocasiones se halla
vacualizadoSon los precursores del sistema mononuclear fagoctico,
que incluye macrfagos (histiocitos), osteoclastos, macrfagos
alveolares, clulas de Kupfer en el hgado y la microglia en el
sistema nervioso central.
-
El recuento diferencial leucocitario suministra informacin sobre
aspectos cualitativos y cuantitativos de los diferentes leucocitos
de la sangre y permite la deteccin de clulas anormalesSe basa en la
observacin microscpica de 100 a 200 leucocitos dispuestos en una
extensin de sangre ( frotis ) convenientemente teidaLa calidad de
la extensin de la sangre es de vital importancia para la realizacin
de una correcta lectura de la lmina.
-
Promegacariocito Megacariocito GranularMegacariocito en
BrotacinMegacariocito Productor de Plaquetas
-
Serie Tromboctica
Las plaquetas son las clulas sanguneas mas pequeas del organismo
Se producen por fragmentacin simple del citoplasma de los
megacariocitos. Son clulas anucleadas de forma discoide de 2 4
micras de dimetro y 8 micras de volumen. poseen una vida media de 7
- 10 das y su rango va de 150,000 a 450,000 pmmc
Trombocitopenia :
Leve: 150,000 - 100,000Moderada : 100,000 - 50,000Severa: <
50,000
-
Macroplaqueta Plaquetas Normales
-
Serie Tromboctica Debemos reportar la cantidad de plaquetas en
lmina ( trombocitopenias o trombosis )Debemos dar un informe
detallado sobre la citomorfologa de las plaquetasReportar si hay
plaquetas normales, degranuladas, pequeas o macroplaquetasSe debe
informar si existe la presencia de agregados plaquetariosEs muy
importante una impecable tcnica en el momento de realizar el
frotis, es decisivo.
-
Recuento en Lmina Perifrica Damacheck :
( Rcto 1000 GR + F ) x 100
Factor = ?
Hto 35 ( + 5 )Hto : 35 - 39 ( + 3 )Hto : 40 ( + 1 )