Top Banner
) ! BE&! 666$0 4&+"1 ] >; ) ! BE&! & >; ^ ^ 9:;< ^ %" ) < ! ! ! "! # $ # % &' (! ) *"+ , -!+ ./!0! * ,) 00 1! * 21! 1! 0 3+ 4!&0 5 6$7"+ # % &' 1&!&'7"+ -,5 1&588666$0889:;< =(5 5>?<89:;< @+6!5 .)!1 &1+000! &! +00 $0 1"1 1"1& !0" 4% A, 2 *(" 1! &1" 0 " !0 4, = %!15 ;8<8>; 45 ! "! $ # &' #% B!!1 & ) #"1 21"1& & + ()0 ! ) =" =!0+ CD 9:;< 5>?<89:;< C>;D .)!1 0" 1 &00 &1! ) " !0+ !0"! ! 61 61 1"1 1"1& !0" &!!! 21+ 0 ! " 1 "& 6 0 ! !!+! !"! ! 0" 1! 6+ 1 ) 0&! &!!" 1"1 !" 1 01 E&! ! ( 1! "1 1 &! !0& ! !0 6 1"1 1"1& && !" )!1 ! !+! ) 1 !+ ) )0 21! !& 6! 1 " +!! ) " ) !+01! +! 1"!+ )0 1 )E+ ) 1 && 6! 1 ! !+ & 1 &)! & 1 ! ) 1 +!! 61 21 0 ) 1 )!1 "1 61 1"1 1"1& 01"! &! 1 ) ) " !" !0+ 6 &!!! + 0! ) 1 !"1 ) !" 61 ! 0! ) 1 " ) !"0 ! 1 0 ! 0&1 1 ) 0 ) 6 0&! "# 21 0& ) 1! 0 0 ) 1&588666$0889:;<8 2 1 )!1 C D 1! !00!!)+ !!1 ! ))0 !+ + ) )0! !!! 21 )!1 + ))! 3 "" &!!! 1 !&0+ 1 " ) E!" !"0 & ! E&!!" )!0 &! 21! &6) 0 '! &!! 0' )) 0 +&! 61 0" 61 &1"! !01 ! 1 0!! ) 1 0! ) !!0 )0 9 =)) ! ) )0 0 ! )!1 +! &" 1 &&!! ) 1 !+ : ) 1! )0 ! ! +' $0 ) 1 0 21 " ) 1! 1 0& 1 1! ! 1 +' )0 0 &) 0+ 0 $0 !")0+ 0" 1 $0 6" 1"1 &0+ ) 1 )0 ?F %! 6' !" 1 )!1 ! 1"1 1"1& !+! ) 1 !+ ) )0 !16 !00!!) ?F 21! !+! ! !0 ) !! &"!! 0 +' $0 ) + +! !" )!00 ! ! ) 1 0 ( " 61 1! 1! !& 1! & !!1 1"1+ ))0 1"1 1"1& && 61 1 & " " ! ) 1"!+ )0 +! 0' 1 &"!! ) 1 )0 " 1 ) 61 ) 0&! 1 1 !!1 !& ! &!! " & F>>> !+01! +! !0 ) !! &"!! &0!!" 1! 6+ & 9>> +! & 1 B+! ! ! 1 0 !" !+! !" 1"! "&! ) )0 /1 1 !& ))0! ) )0 '6 & 0!! &"!! ! 1 ! +! )0 61 B ! 1 ! < 21! !+ !0! 1 1"1 1"1& && 1 1! !!1 " " ! ) )0 +! 1 !!3 +!! ) 1 0 &"!! " & ) 0&
9

Establishment and Optimization of a High Throughput Setup to Study Staphylococcus epidermidis and Mycobacterium marinum Infection as a Model

Apr 10, 2023

Download

Documents

Welcome message from author
This document is posted to help you gain knowledge. Please leave a comment to let me know what you think about it! Share it to your friends and learn new things together.
Transcript
Page 1: Establishment and Optimization of a High Throughput Setup to Study <em>Staphylococcus epidermidis</em> and <em>Mycobacterium marinum</em> Infection as a Model

��������)���!��������BE&��� ���! 666$���0�

4�&+��"1��]��>�;����������)���!��������BE&��� ���! �&�����>�;�^����^��9�:;<�^�%�"�����)�<

�����������

������������������������������������������������������������������ ����������� ������������������������������������������������ ��� ����!�������������� �������������������������������������������������� ���!�����!�������"�����!��������� �����#����$�����#�� ���%��&���'�

�(�!��������)�*����"+��,������-�����!��+�./�!0����!�*��,�)���0���0�����1��!�*��21�!�����1��!�0������������3����+

4����!&�����0����5������������� ������6$���� ��7�����"+��������������#�� ���%��&���'����1&!&���'7�����"+������������

-�,5�1��&588666$���0� 8�����89�:;<= (5����5�>�?<�89�:;<

@�+6���!5�.����)�!1�����&1+��0�00�!��&���� ���!���+0���0����� � ����� ������ �������$�0������1�"1��1���"1&���!0������"��4 %���A,�����2*��( �"����1�!��&��1�"���������0���������"�!0������4,��

=����%����!1��5�;8<8�>�;

4�������5����� �������������������������������������� ���!�������"�����!����������$�����#���&���'��#%�B!�����!1 �������� &�� ��������)���#�"1�21���"1&�������&��������+����������� ����������� ��������������������������(�)�0������!���������)���=��"�=�!0����+������ ������CD���9�:;<�����5�>�?<�89�:;<�C�>�;D

�����

.����)�!1�������0� ��"���������������������1��&��0����0���&1�!���)����"���!0����+�!0������"!��!���61������� ��� �����6��1�1�"1��1���"1&��!0������"�&�!!��������!�21�+�0�������!����������"���1��"�&����6����0������!����!!�+!������������!��"�!�������������������������� � ����� ����!������0��"������1�!�6�+���1���� �����)�0� &����!�&�!!��"��1���"1������!���"�����1�� �01� �����E&��!����������� ����!�(���1�!���"1������1��&��!���� ���!0��&���!���!0����������6�1�"1��1���"1&���&�&�������!��"������)�!1��!�������� �����!+!�� �)����1��!���+��)����������� ���������� ����������������������������)�0�����21�!�!���&�����6!��1��"������������������+!�!��)����"���� �����)�!+�01�����!�� ��+�!1� �"����!�+���)�0��������������1��)��E������+��)��1��&�&����������6!��1���!��������!��+�� &�� ������1���&���)�� !����� &������1����!��������)��1������+!�!�61����������21��0� ����������)��1�������)�!1���"��1���6��1������������1�"1��1���"1&�����01����"��!��&��!��1��)������)����"��!���"�������!0����+������6�&�!!��������!��������+���0��!���)��1��!����"�1��)��!��"���61������� ��� �����������!����0��!���)��1�����"���� ����)�����!"���0�����!������������1���0�������!��������0�&1����1�� �����)��0������)���6�0� &����!

������"��#

21��������0� &�������)��1�!�����0���0������)��������1��&588666$���0� 8�����89�:;<8

���������

2��������1�������)�!1�C���������D�1�!������!�00�!!)���+��!�����!1����!�����))�0����� ��������!���+���������+��)���)�0����!���!��!�!��21������)�!1�� ��+���))��!����3����������� �"��"�&�!!��������!���������1��������!&����0+������1�����"���� �����)��E�!���"�����!"���0���&����������!�E&��!!��"�)�����!0����&������!�21�!�&�6��)���0� ��������� �'�!����&�!!�����������0'���))������� ����0�����+&�!������ ��61����������0���"�6��1&��1�"��!�!�01��!������������������������1��0��!�!������������)����������� � ���������������� ����������� ���1�� ����0��!�������)��� ���������!!�0��������)�0������9�=�))�����������!��)���)�0�����0�������!�����������)�!1�� ��+�!���&�����"�����1��&��&�!�!��)��1��!���+:

����)��1�!����)�0����������!��!�+��'���$�0������)��1����0������21�� �����������"���)��1�!� ��1���0� &���������1����1��!��!��1���+��'���)�0�����0�����&��)�� ������� ���0���+�����������0���$�0������!�"��)�0����+�����0��"��1����$�0������� ����������6��"�1�"1���&����0������+��)��1����)�0����?�F

%������!�6��'���!��"��1�������)�!1��!���1�"1��1���"1&���������� �����!+!�� �)����1��!���+��)�������������� ������������������)�0�����!1�6��������!�00�!!)��?�F�21�!�!+!�� ��!���������!0�����)�����!��!��&��"��!!��������������0�+��'���$�0������)�����+�� ��+�!������!��"�)�����!0��0����������!��� ��!����)����1����0������������(���"��� ����6��1��1�!����������1�!�!���&�1�!�������&�� ����������!�����!1�����1�"1�+��))�0�����1�"1�1���"1&���&�&������6��1��1��&������������"�����������"���� ���!��)�1� �"����!�+���)�0����� ��+�!��������0'��1��&��"��!!�����)��1����)�0���������"��1���� ���)��������� ����6��1����� �����)�0� &����!����1��1���!�����!1���!���&�����!�&�!!��������"���������&����F�>>>�!+�01�����!� ��+�!����!0�����)�����!��!��&��"��!!�����&��0�!!��"�����1�!�6�+��&������9>>�� ��+�!�&���1����B ��+�!�����!��������!�������1������0������������!��"�������� �����!+!�� ����!����"�1� �"����!�"���&!��)���)�0�����������/���1�� ������������������1��!���&���))�0�!��)���)����0��'��6����&������������0���!�!�&��"��!!������� � ��!�1�����������!�������� ��+�!���)�0����6��1������������B���!����������1�� ��������������!�����<

21�!�!���+���!0����!������������1��1�"1��1���"1&���&�&�������1���1�!�������!�����!1�����������������"�����������"���� ���!��)���)�0����� ��+�!�����1��!��!�3���������+!�!��)��1����0�������&��"��!!���������"�������& ���������)����0� &���������� ���

Page 2: Establishment and Optimization of a High Throughput Setup to Study <em>Staphylococcus epidermidis</em> and <em>Mycobacterium marinum</em> Infection as a Model

��������)���!��������BE&��� ���! 666$���0�

4�&+��"1��]��>�;����������)���!��������BE&��� ���! �&�����>�;�^����^��9�:;<�^�%�"�����)�<

$�����

%&�'�����������������(�)��*��������

� %��&����������������� ����0��� 5� 2�'��!������������������0������!�)�� �������������� �!������ �;?��0��������"���&����F<��������� 41���+��E&��!!������0����C=��*���

,���&����!1��D�)�� ���,�����*�������C,*D��"���&�����!�&&�� ������6��1��>�G"8 ��01���� &1���0�������0�������������"1������?�H4�����9 ��,*� ���� �!�&&�� ������6��1��>�G"8 ��01���� &1���0������ ����"�!��"�

� 4�����)�"���� ���)��1��0�������������>>>�I�"�)����� �������!��!�3�����+�6�!1��1� ��E�6��1��� ��!�������&1�!&1������))�����!������C%*�D6��1�>�J�C�8�D�26����F>

� ���!�����1���&��0������!��+����:>>�� �C =:>>D��������������1����0�������!�!&��!���������� =:>>��)�>������J�C68�D�&��+���+�&+���������;>C&�&;>D����%*��K���5���� =:>>��)�>��0����!&���!�����>�I��>

F�0����+�)�� ��"�����!8 ��C0)�8 �D

� %��&������������������0��� 5� 2�'��!������������������0������!�)�� ������������!�����������B���0��������"��1��&��2�� 41���+���0����!����+��E&��!!��"� 41���+�>

)�� �������������'�?#�>��"���&�����6��1��>J�C�8�D�����������'� �=4�����01 ����!�&&�� ������6��1�9>�G"8 ��1+"�� +0������0�������������"1������F�H4�����>� ���)�����������'�?#<�����1�6��1��>J�C�8�D�����������'��=4�����01 ����!�&&�� ������6��1�9>�G"8 �1+"�� +0��

� 4�����)�"���� ���)��1��0�������������>>>�I�"�)����� �������!��!�3�����+�6�!1�����E�6��1��� ��!�������%*��6��1�>�J�C�8�D�26����F>� ���!�����1�� =:>>��������������1����0�������!�!&��!���������� =:>>��)�>������J�C68�D�&�&;>����%*��K���5���� =:>>��)���0����!&���!

����>�I��>F�0)�8 �

+&�$�����,�������� ���

� %��0�� �E� � �?>� ��������9>�)� ����6�����+&�������)�!1�!�&������+�������1�����"���������"���!!���K���5�&��0���1��)� ����)�!1�����1����6��&�����)��1�����"���������"���!!��

� �� �����1��!�&��������1����E����+�����1�� �����"����������1�������)�!1�!������������"� 4����0���1���""!�����1������� ��)��1�����"���������"���!!����1���"1��1���""�0����0���������9>� �������)������6��1��""�6�����C:>�L"8 ����!����

�0����!���!���D

-&���.������/������

� ������0� ��0����+�����������0�!�� � ����"��!!�0�&�������!�������!�6��1������������� ������)��>�L

0&� 1���������������������.�����

� *�����>>� ���)��J�C68�D��"���!������""�6����������0�����������&&��E� ����+�;>�M4�%�����"���!��������1������ ����� �0����$�0���!�&��������&��0���1����>�;�6����!�� &�������1���"���!��K���5��1��&������!�����+�����!��61���0��������6�

� ���1������ ����� �0����$�0�����&������"�!�)�6����0��0'����N4���������!��"�O���1���0��0'����N�>�;O�6����"��������&��0���1���"���!��&���������1� �0����$�0��������0����������1��&������+�0��0'��"�����1��!0���������1��0������&�!�������)��1��6���

� P�����N������� ���O�����0��0'����N0����������������1�����O; /�����1����$�0�������������!��"��� �0�����������&�6��1����1����>�L��&�&;>�0��������"��>>�0)�8���������������� �����>�0)�8�������������������!�

&�&;>��!� �0'���$�0����9 %��0���1�������������1������ ����� �0�����$�0��������0����������1��E��+�&�!�������+���6����"���� ����"��1����������&�����0��0'��"�����1�

!0���������1��&�!�������)��1���������21���0����������1����&�!�������)��1����������+�0��0'��"�����1��!0���������1��&�!�������)��1����&��)��1�������

: =�!���������1���""!�������1���"���!��"�����!��"���&��!��0�����!)���&�&���������� �����E0�!!��""�6�����%��0���1���"���!��"��������1����� ����� �0����$�0���

? P������1��N(�$�0����� ���O�������$�!���1��N(�$�0�����&��!!���O�!�����"�����>>�1%���N(�$�0������� �O�>��!�0�����N4� &��!������&��!!���O��9�1%��61�01�0��������!�6��1�����������1��/� ��$���!�����"!� ���

F 4��0'����N(�$�0�����O������$�0���1���������&����< 4����0���1���""!��)������$�0������+�6�!1��"��1� ��������%�������!1�C<��I��:� D��6��1��� �E� � ��)�?>�� ��+�!�&���%�������!1��������0��������

�F�H4

2&�3��)����������������

� %��&�����1�����"��&����0���)��6�0+�� ������00�����"�����1�� ���)�0�����O!���!���0����!�����)�����1��!� &���0�&�����!1���1�)�����0���������6��1�""�6����

� ����1���&������"�!�)�6�����"������1��N%�2O� ���������!���1��)����6��"�!�����"!5�:9>���)����1��N���O�01����������>���)����1��NP����O����NQ����6O�01�����!�21���"�����N21��!1���!O� ���������!���1��)����6��"�!�����"!5�N &��0������!��+O��1��!1����!�"���5�<?9� ��C4 %���A,������59>D������1��N2� �� )�/��"1�O�C2 /D� ��� � ������>�G!�0�C4 %���A,������5�F>>D�����������������0���1����)����0���)������!

� /�������+!�!�6��1����!�����"��1��� ��+�!�"�����!��&�9;��)�������+!�!�����!�����"��1��� ��+�!��������%�������!1�"�����!��&�99����)�������+!�!����!�����"��1��� ��+�!��������<:�6����&�����"�����!��&�9:

Page 3: Establishment and Optimization of a High Throughput Setup to Study <em>Staphylococcus epidermidis</em> and <em>Mycobacterium marinum</em> Infection as a Model

��������)���!��������BE&��� ���! 666$���0�

4�&+��"1��]��>�;����������)���!��������BE&��� ���! �&�����>�;�^����^��9�:;<�^�%�"�����)�<

; %��0���1��� ��+�!�����1��!� &���0�&�����0��0'����N!����O����!������1������+!�!��1�������� ��+�!���������+����!��&��1������+!�!��+�0��0'��"���N!��&O�������1��������+�0��0'��"����N���������O�K���5��������������!�������!�2A2��,�=��=�2��4�������*��2�)���!�/����6��1��&����0������!��&9?

9 %��0���1��� ��+�!�����1��!� &���0�&�������)�����1�� �E� � ��)�?>�� ��+�!�&���&�����������!�������+��������"�?>�����1��N����O� ����%��0����� &�+�%�������!1��������1��!����������0��0'����N�����������O��1����1��%�������!1��!�)�������!�����1��������+�0��0'��"����N���������O�K���5����������!�!�������!�2A2��,�=��=�2��4�������*��2�)���!�/����6��1��&����0������!��&�9?

: %��0���1��� ��+�!�����1��!� &���0�&�������)�����1�� �E� � ��)���� ��+��&���6����������!�������+��������"�������1��N����O� ����%��0����� &�+�<:�6����&�����������1����)��&�����1����������0��0'����N/����&����O��1����1��<:�6����&������!�)�������!�����1��������+�0��0'��"����N���������OK���5�����������!�!�������!�2A2��,�=��=�2��4�������*��2�)���!�/����6��1��&����0������!��&�9?

? P����1��2A2�)�������&��0�!!��1����6��������!���1��)����6��"������)������!�����"!5�N�����!�!���0�O5�;>�������)��!��"��1��!���� ������N�����!�!���O5�:21����!���1���� ���!�)�� ��1��������)�����!0��0��!�"����)�� ��1��N���O�01���������0��0�������1�������"�������1��!���������������)��1�� ���%�����1�!�������!��!�������������!0������"��&1!

4&� ���������

� ����+�������!�����������+!�&�!����$�0�����C�&�D���������������)�0����� ��+�!�����6���3����"���&!��!��"��1�����"��&����0���)��6�0+�� �����C!��&99D�2���������"���&�6��1���0� &������)�������!�������!�0�������!�������������1���6��1�0�������!�������������C0������D��&&�+�!� ���������� ���!��� �0'���$�0����0������������!��)������������0�!�����))�0�!

� ��&�������;�����9��&���1������+!�!�C!��&�99D�������)��!1��1���""�6���������""�6�����0��������"��1��0� &����

5&������6����������������

� ���!�1�������1��� ��+�!�6��1�>>�J�C68�D���))�������� ���������0��0�����1+���!����C2��0����D�����""�6������>� �����)��������+!�!� %��&�����1����������������� ������0������"�2�01����"+�!+!�� ������1��,��"��%����0����� &�����00�����"�����1�� ���)�0�����O!

��!���0����!� ����0���1����)����0��� �"�!�0����!&�����"�����1���"���)��1��� ��+�!�)�� ��1��N( �"��"�R� �$�0��R�=���0���������&O� ���; ����0���1��� ������)�&�0����!����������������������� �����+��1����������������� ������0������"�2�01����"+�!+!�� �)�� ��1��N( �"��"�R

�����!������ �"�!O� ���9 %��0����<:�6����&�����)������6��1�� ��+�!�C)�� �!��&�9:D�������1����)��&�����1�������)��1��,��"��%����0����� &���������0��0'����N����&����O: �1������� ��+���!�����0��������0����0��+�&�!�������S�� �"���1��1���������1�������!�&������+�6��1��1��4,����!��"����>A�&�������+���$�0����

����!���01��1��� �"�!��)���6���!��!��"�� �"��&��0�!!��"�!�)�6���

6��������!��6�����

21��&��!������!���!�!1�6��1����1��1�"1��1���"1&���&�&���������!���+�������������� ������������������)�0�����1�!������!�00�!!)���+��!�����!1�������1��� �+�����E������������1�����)�0����� ����!�/��!��+���1���!���)��1�����"���������"���!!���C3�����%�D����!�������1��&����!1���!+!�� ��+�������������C�>��D����������!����"�����������"���� ���!��)�!+�01�����!��""!����!��"��������!��))�����"���1�"1�0��������)��1��!&�6���"�&��0�!!K�E������������������$�0�����"���� �����)�� ��+�!������!1����&�������)��� ������� &���������!�����)��1��&������!�+�������&������� ����� �0�����$�0�����!+!�� ?�6�!��!���C3�����%�D�2���!!�!�61�01��!��1����!��������& ������!��"��)���+��'���)�0��������$�0����!�6��1�������������� ���������������6����&��)�� �����������1����))������!��"�!����6����������9���0����!��"����00�����"�����1����!0��&����� �����+�@� ���������C�<<9D��

(�$�0����!�6��1��>>�0)��������������� ����6�����1���:�������F�0����!��"��&���������1����!����)�0�����&�������C3�����+D�21����0������&����)��������!�����1��+��'�)�������+!�����!&�����������1�����+�)�� ����&����6���!�%��)�� ��"���$�0����!���)�����1���:�0����!��"���������1�"1� �������+�)�� �;�&���������$�0������)�����1���9:�0����!��"��!1�6��� ����+���0�������"��6�1���!�����1��+��'�6��1�1����+���+���0������!&������"���!�����1�����+��)��1�� ��+��T�����)�0�������)���0��������������6�!�&��)�� ����+�)�����!0��0�������!��+�����+!�!��!��"��1�����"��&����0���)��6�0+�� ������!���!0������+����� ���������C�>��DF�C3�����-D

�!��������!�!1�6����1����1���&�� ���������& ������!��"��)�����$�0������)��>�0)���������������$�0������!����6�����:������F�0����!��"��)����1�B���!������C3�����0�D��������6�����:�:;�0����!��"��6��1��1�� ���������������!������C3�����0'D�B ��+�!���$�0��������1�!��!��"�!�!1�6����0�������"��6�1���!�����1��+��'�����!&������"��)��1����0�������1���"1��1��� ��+��C3�����5D�(�)�0�����6��1����1�!�����!������������!��"�!&��!���������!&�0�)�0�"�������������0�������"��6�1�������"��1��� ��+�!���������)����;��&�� ���1����1���1��������� ��+�!���$�0�������������!��"�!��0��������������6�!���!���0��������1��+��'

K�E���&��!�����"�6��1����"��&����0���)��6�0+�� �����C3�����%'D�"������������"��1� �"����!�"���&!��)���)�0����)�!1��E0�����"���������1�"1�+��)�0����� ��+�!�C3�����2������4�D��)����&��!�����"���������������)�0����� ��+�!�6������������6��1���)� &�0������)��!����������������0���!�!���"�%������!�!�����!��� ��!��������1�������� ����6��1���)� &�0����������!���)��>>�G���))�0�����+�����0�!��������������)�0�������������)�!1?���2�'��"��������"���)��1�����"���� �����)�1� �"����!�+���)�0����� ��+�!�"���������6��1��1��1�"1��1���"1&���!���&������� ����6��1���))�������!�!�6�!�&��)�� ���B ��+�!���)�0����6��1��������������!������������������)���;F�1���!�6��1������;������>>�G����)� &�0���!1�6����������0��))�0�����+� +0���0���������)�0������������!����&������� ������C3�����2'D�(�����6��)��1���))�0���������0������)��1����)�0������!��"���)� &�0���������!���)��>>�G���1�!�0��0����������6�!��!���)����1��)�������E&��� ���!�(�������6��1��1��&������!���!�����!���+��"���0��������������&��"��!!����!��"������������B���!��������!�"��)�0��������0������;�1���!�������6���!��)��������� ����6��1��>>�G����)� &�0���6�!���!������C3�����4'D��

/���1�� ������)�1�"1� �"��)�0������� �"��"��!���3�������)��1�!��� ��+�!���1�+�0��������!&��+������� ���0���+����<:�6����&����!�C3�����%*D��)�� 61�����1��!� &��!�0����������+�����!��"��1����������������� ������0������"�2�01����"+�!+!�� �6��1��1��,��"��%����0����� &���� �������������4,��

21����������������� ������0������"�2�01����"+�!+!�� �6��1��1��,��"��%����0����� &�����!���!+!�� ��1���0������1������ ��������������4,�����!������ �0��!0�&��21�!�����0������6!��1��������"��)���������)�E���� ��+�!�)�� ���<:�6����&�����������'�0������������� ���0���+��1���"1���"��!!

Page 4: Establishment and Optimization of a High Throughput Setup to Study <em>Staphylococcus epidermidis</em> and <em>Mycobacterium marinum</em> Infection as a Model

��������)���!��������BE&��� ���! 666$���0�

4�&+��"1��]��>�;����������)���!��������BE&��� ���! �&�����>�;�^����^��9�:;<�^�%�"��;��)�<

0�&�����+���������������!�������)������)��1��0� ��������1����!�������"���C��������!�������������D�( �"�!��)��1��� ��+��������������������!�0������ ���6��1��1�����������0� �������6��1�����E�������4,���C3�����5D�B ��+�!�6����!��!�3�����+��������!)����������1��0����0��������6�!���0��������

�3�����%&�����������1���������������&��7�������)�!1�����&�����"��1������ ������""!�����0����0��������"�������������"���!��&����������$�0����'7�21����$�0�����""!�������0�����������FH4�����6�������&���!������)���&�!!��������"������ ����*7����!�3���������+!�!��+����"��&����0��)��6�0+�� ��������8���,��"��%����0����� &���8��������������� ������0������"�2�01����"+�6��1�4,��

Page 5: Establishment and Optimization of a High Throughput Setup to Study <em>Staphylococcus epidermidis</em> and <em>Mycobacterium marinum</em> Infection as a Model

��������)���!��������BE&��� ���! 666$���0�

4�&+��"1��]��>�;����������)���!��������BE&��� ���! �&�����>�;�^����^��9�:;<�^�%�"��9��)�<

�3�����+&� �������������������������������������������� ����#���.�����&�.����)�!1�� ��+�!�6������$�0��������1��+��'������))�����������& ������!��"�!�)�� ������9���0����!��"��6��1��>>�0)���)�������������� �B ��+�!���$�0�������6����������F�0����!��"��!1�6�����0������"��6�1�����1��+��'�����1�"1� �������+�)�� �;��&��B ��+�!���$�0�������6�����:�������F�0����!��"��!1�6�����0�������"��6�1�����1��+��'�������!����1�����+�!������"�������&��B ��+�!���$�0�������6�����9:�����9���0����!��"��!1�6��� ��+���0�������"��6�1���!�����1��+��'

�3�����-&�8��������������������������������������������������)�������&��>>�0)���)�������������� �6������$�0����������1��+��'��)�����)�!1�� ��+�!��7�-&����9��&�����01���+��"���&!��)��>�� ��+�!�6����1� �"�����������&����������0��+��!1�6��"��1�������"���E&��������"��6�1���!�������6�������"�0�����&��0�!�C���������!�U��B�D�'7�,��"��&����0���)��6�0+�� ���������+!�!�!1�6!��1�������"��)�����!0��0��!�"���)�� �������$�0��������������������� ���$�0����� ��+�!��>��:>�� ��+�!�&���0���������6��������+����C���������!�U��B�D����))������������!�����0���!����!��0���!�"��)�0������))����0�!��+�����6�+��K ���)����6����+�2�'�+V!�&�!��1�0���!��C��W�>>>�D���!5�����!�"��)�0������))����0�!�*7�4�������������6����0)�����������"��)�����!0��0��!�"�����)�"���&!��)��>�������������� ���)�0����� ��+�!�C���������!�U��B�D�21�!�)�"����1�!������ ���)���)�� ����� ���������C�>��DF

Page 6: Establishment and Optimization of a High Throughput Setup to Study <em>Staphylococcus epidermidis</em> and <em>Mycobacterium marinum</em> Infection as a Model

��������)���!��������BE&��� ���! 666$���0�

4�&+��"1��]��>�;����������)���!��������BE&��� ���! �&�����>�;�^����^��9�:;<�^�%�"��:��)�<

�3�����0&� ������������������������������������������������#���.�����&�.����)�!1�� ��+�!�6������$�0������������1����))�����������& ������!��"�!�)�� ������9���0����!��"��6��1��>�0)���)������������B���������!�������9�'7�B ��+�!���$�0����)�� ���F�0����!��"��!1�6��!� �����!&������"����� �������+�6��1����1�!�����!��7�B ��+�!���$�0�������6�����:���F�0����!��"��6��1�B���!������!1�6���)�� �������)�"������ �!����!+!�� �0���)�0�����61�����1�!����$�0����)�� ��9:����9���0����!��"��'�&����0��������������������1��+��'�'7�B ��+�!���$�0�������6�����:�:;0����!��"��6��1���!������!1�6���)�� �������)�"������ ����'��!���0����!�����!+!�� �0���)�0�����61�����1�!����$�0����)�� ���F����9���0����!��"��'�&���0��������������������1��+��'

Page 7: Establishment and Optimization of a High Throughput Setup to Study <em>Staphylococcus epidermidis</em> and <em>Mycobacterium marinum</em> Infection as a Model

��������)���!��������BE&��� ���! 666$���0�

4�&+��"1��]��>�;����������)���!��������BE&��� ���! �&�����>�;�^����^��9�:;<�^�%�"��?��)�<

�3�����2&������������������������������������)��������������������������������&�B ��+�!���$�0�������6�����:�:;�0����!��"��6��1�>�0)���)��������������!������6���������1���"1��1�����"��&����0���)��6�0+�� �����������&��������!����������6��"���&!��)������!0�����"��1���������8���1�"1�+���)�0����� ��+�!��7�/�����!0��0���)������������� ��+�!�������1�"���&!�'7�B ��+�!���������6��1���)� &�0���C�(/D�)���;F�1������!�!��)������;������>>�G��6��������+�������;��&�S��1������0�������������!�!�"��)�0����+�����0���*7���&��!���������4 %���&��)���!��)�� ��+�!��������6��1�=�� �������)� &�0��������!�!��)������;������>>�G��)����;�1��*�0�������������������!�����������!�����0������+��1������&��'!�*����������&��!���!��1��&��)�����)��1����� ����!������C;��&)������)�!1�� ��+�D��+��1��4 %���:>�<>�� ��+�!�&���0���������6��������+����B�01�����&�������&��!���!���������������� ��+�������!���������0������!� ����X��B���!5�����!�"��)�0������))����0�!�����+!�!��)�!����!��0���!�"��)�0��0���)��))����0�!�6�!�&��)�� ����+�����6�+��K ���)����6����+�2�'�+V!�&�!�1�0���!�

�3�����4&��������������������������������������)�������������������������������&�B ��+�!���$�0�������6�����:�:;�0����!��"�6��1��>�0)���)������������B���!������6���������1���"1��1�����"��&����0���)��6�0+�� �����������&��������!����������6��"���&!��)������!0�����"��1�

Page 8: Establishment and Optimization of a High Throughput Setup to Study <em>Staphylococcus epidermidis</em> and <em>Mycobacterium marinum</em> Infection as a Model

��������)���!��������BE&��� ���! 666$���0�

4�&+��"1��]��>�;����������)���!��������BE&��� ���! �&�����>�;�^����^��9�:;<�^�%�"��F��)�<

��������8���1�"1�+���)�0����� ��+�!��7�/�����!0��0���)������������� ��+�!�������1�"���&!�'7�B ��+�!���������6��1���)� &�0���C�(/D�����>>G�������"�;���+!�6��������+����!1�6��"���!�"��)�0��������0������)��1����0�������������)��������+��)������ ����<>�� ��+�!�&���0���������6�������+���������!���������0������!� ����X��B��=�))������������!�����0����!�"��)�0������))����0�!����6������ ��&����!��)��1��!� ������� ���������0���!�!�"��)�0������))����0�!�6��1�0�������"���&��!5�����!�"��)�0������))����0�!�����+!�!��)�!����!��0���!�"��)�0��0���)���))����0�!�6�!�&��)�� ���+�����6�+��K ���)����6����+�2�'�+V!�&�!�1�0���!��C��W�>>9D�/�"����*D�1�!������ ���)����)�� ��&���'�������C�>��D��

�3�����5&�6������������������� %%����#���.����������������������������������������������������������*"��&�4��)�0��.�!��0'�C!���01������ �"�!D��)���9��&��)�����")&�;�� ��+���7�,����� ��+��!1�6��"�&����)���������)������������B�����0������C���D��1���"1����1�����+�'7�/�E���9��&��)����")&�� ��+��!1�6��"������������B�����0������C���D��1���"1�����1�����+�0����0������"�6��1����0�0+��!�C��"1������D����0�����+�,�&��!����� ���!������"�9

���������

21��1�"1��1���"1&��� ��1�����"+���!0����������1�!�&�&���&������!���)�!������0�!���))�0�����&�&���������!0�����1�"1��� �����)�)�!1�� ��+�!�����������6��1���))�������+&�!��)���)�0����!�-!��"��1�����"���������"���!!�����!������)�������������!��"������)� ��+��������"����'!�)�0���������0�������)��1��!&�6���"�&��0�!!�����"�����������)����"����� �����)�!+�01�����!��""!����1����� &���������!�����)��1������ ����� �0�����$�0����!+!�� ?������!�&�!!����������$�0���&������9>>��""!��� �!����������1��!� ��0����!��"��6��1�����1�����1��1�!���&����!������ &������!�)�6��������!)��!����������$�0�� �����""!��1���&������!�+�6�!�&�!!�����61�01�0�������!������&��)�� ����"�����"�!0����!�6��1���0�������&����)���������!�����������#�6������1�!� ��1����!�!������� ��������+��'���$�0��������1�����$�0����������!�)����E� &�����!0�������+�*�����������C�>��D:��6����1�&�)���+�����0��&�����������1������ ����� �0�����$�0�����!+!�� �����1�������)�����

���1��"1��1�!�� ��1��!��������01 ��'���)���!0������"������)�!1�����6���������!�)���)����&&��0�����!�6��1���1���)�!1�!&�0��!��!�6����/����!���0����1��0� ���0��&�1�!����������0��������1�����������"�!�)������"�!0����!�,�'�������)�!1���""!���������+�!��"��� ��+�!�)�� 0� ���0��&���������!&����������6��1��1�� �����������"���)���!����"��!&�6��!�����)�1��������1��!���!��)��""!������1�������������+��)�����������!��1����))����� ����0��!�����"�����0���0'"������:

21������+!�!��)����"��� ����!��)���)�0����� ��+�!��!������6��1��1��1�"1��1���"1&������"��&����0���)��6�0+�� �����21�!�����0��0���!�������+����� ��+�!������ �����6����&����!������%�������!1� �'��"�����!&�0����+�!��������)�����!���"����"���� ���!��)�0� &����!�()���1�"1���� �"��"��!���������!����������1����1��!���&��!����&���������6�+��1����1�����"��&����0���)��6�0+�� �������01����"+�0�������!���)���&���!0������"����!��!�3�����+�����+����1��!� &��!������ ���� ��1���"1&��������1�"1�����!��������21�!�0������������!��"��1����������������� ������0������"2�01����"+�?��F�21�!�����0��0������� ���0���+�0����0����������)�E���� ��+�!����6����������?���+!�&�!��)�������������)�� ��� �����6����&�����������'0����������� �"���:>H��1���"1���0�&�����+��!��"�4,������!������ �0��!0�&+�������!&�!���"������������'�0��������!�����6��"� ������!�����"�)��1��� ��+�!���!�������1�� �0��!0�&�0�� �"�!�/������� &���� ���!�6��������6��1��!�����"��)��1��� ��+���)����� �"��"�������1�� �����6���&�������1���)���� �'��"����&�!!��������!0��������� ���0���+����"���� �����)������������� ��+�!�������� ��6��1�4,����!!� ��"��1������)������&&��0�����!��1����������������� ������0������"�2�01����"+�!+!�� �0�����!�����0����0��������1�����"��&����0���)��6�0+�� �������01����"+6��1�����1��������)�&�������!&��!��"������������� �����6����&����!��6�������������� ���������0���!�����"

21�!�&�&�����!0����!��1���!�����!1 ���������&�� ���������)���1�"1��1���"1&���!���&����!���+�������������� ������������������)�0������!��� ����)������"���!0����+�(���� ��!�����!��1����1�����0� ���)��1�!����0��������$�0����������1��+��'���&���!�����1��������& ������!��"���)��1���""!����1���� ���)���$�0�����(�$�0���"������������B�������:���F�0����!��"������1����!����������:�:;�0����!��"������!�����1��!� ����)�0�����&��������!0�������������$�0������:�#�6������1�!�!���&��!������� ���������1��&����)���������)���0�������&��1�"��!����+�(��6�!�!1�6����)�����1�������!�&�!!�������������0���+���$�0��!�������!�0��������"�=K����K����� ��&1�����!�)�������!"���!�!��������E&��!!��������"����'��0'���6��!�����!����!&�0�����+��/���1�� ��������6�!�!1�6���1����1�!�!���&��!���!���!�)���)����1��!���+��)�0��0���0����&����)������������ �"�������21���)�����1�!�&�&������&��!���!�����!������ ��1���)���1�"1��1���"1&���!0����!��)���������+��)�!�"���� �01���! !�����1��0����E���)��������� ����+���&&����������)�0����!���!��!�

Page 9: Establishment and Optimization of a High Throughput Setup to Study <em>Staphylococcus epidermidis</em> and <em>Mycobacterium marinum</em> Infection as a Model

��������)���!��������BE&��� ���! 666$���0�

4�&+��"1��]��>�;����������)���!��������BE&��� ���! �&�����>�;�^����^��9�:;<�^�%�"��<��)�<

�����1��������& �����)�0��0���21�!��!0����!�0������0� ������6��1���1��!�)��� ���0������!0����+�������!��6��1�����+!�!��)�&�!!�������E�0�))�0�!��)�������)�����&&��0��������"!

���������

���!��6�����)�,�)���0���0�����1��!�*���1���&����0�!���!��� ���!��!�������1�!�����0��

��#��)���������

�������"����)������,���������*��������*�!�.����C�0��� �0�����0���4�����D�)���&�������"��!�6��1��1��������������� � �;?�!����������1��'��0��*��"����!��/���0�!�� ���������"����4� �!�C-�����*�� ����0�D�)���1��&���������0��6��1��1��4 %���A,��������2�*��( �"�������+!�!����1��'�=��+����������-���'��K�1���01������,���������#��!��)���)�!1�0�����'��"��������1���0�����"��!�)�� �,������-�����!��+�)���1��&)����!0�!!���!�21�!���!���01�)�� !�&�����)��1��%��$�0��%9>��(*(.���)��1����!���01�&��"�� ��)��1��*������0�����������!���!��������0��)�������+�1��=��01�����!��+��)�B0��� �0��))���!�������)��1��� ������E�%��"�� �CK� �Y:TQ<*�D��)�21��K��1������!�����!��+��)�B0��� �0��))���!�����)�21��K��1������!�����!��+��)�B��0�������4������������0���0�������������!�&&����6�!����������)�� ��1��B-�&��$�0��./�#����1�C/%?�#����1��>><��;�>;FD���������6�!�!�&&�������+�������4�����)����6!1�&��!�BE&�����0�����!���01�������1��B-�(�������2������"�K��6��'/�!1/��%1�� ��C%(2K�P���>����F<�><D������0������)�����"�)�� ��1��(��������������0���!�(���������������-������'��"�������"�����"��� �����H��9��?����!���0�!��)�61�01�����0� &�!����)�)����0����0������������)�� ��1��B���&����-����O!�������1�/�� �6��'�%��"�� �C/%?8�>>?��>��D�����B/%(��0� &����!����'����0�����������21�����1��!�)���1����0'��6���"��)����0����!�&&����)�� ��1��,������-�����!��+�/���C,-/D�)���������0!�����)�� �4+�����������1��*�!��������!����!�(���!�����"���@����!��)��!���0�����&��"�� ��61�01����������!�)����0����+�!�&&�������+�1��K��1������!� �"����������)����0�����)�0���!���01�)���� �"��"�)�0������!�21��4 %���!+!�� ��03��!������6�!�&�������+�!�&&�������+��1��=���!���)���B���1�����,�)���0���0�!�C�,�D�6��1�)����0��������)�� ��1��K��1������!� �"����������)����0�����)�0���!���01�CK� ��F�;�>>>;D

6��������

� ���$������#�Z��&���'��#�%�#�!��&��1�"���������0����!� ��������!&������6��1��1�������)�!1� ����� ���������!����� �%+���>>>��>�?�C�>��D� 2������=���Z��� �'��!1�����,�4� &��������&��1�"���!�!��)���������������������������������������������� � � ���������%:�

�>�?��>�<�����5�>����8$�;:��9F���>>F>����E4�(�����[&��\�C�>>FD� *�����!����������*�� ���������!!�0������&��!�!���0���)����������� ����������� ����&���0��1����� �0��&1�"�!���"�#������ �%;%�

���?���;<�����5(=<<>?;?�[&��\�>�>F:8��9�:<�C�>>>D; *���'1�������4���������2�!!����������0��1����!��!�����01��)�����0�������!!�0������6��1� ���0�������0����)�0����� ���� ��������-4�

��<9��;>������5�>�><?844�>�>�����F�F�F�:F�>>>>��;:��>>F>F>>>�>>>�:�[&��\�C�>>FD9 *�!!01����#��������*�� ���������!!�0��������)�0����5���0����"��1��)���!1����������1����0��)����1��!��)�0������!��� �����0���9�����>�

���5;8�9�8�9����>�[&��\��>���:8!0�����!� ���>>;9�F�C�>��D: *�������B�,�������(�)�0������)������)�!1�� ��+�!�6��1������0����������0�������&��1�"��!����� ������4%����?F������5�>�?<�8�?F��C�>��D? 4�����1�������������1�"1��1���"1&���!0�����)��������0���!�!�&��"��!!�����$��%���4����:??<�����5�>��?�8$������&���>>�:??<�C�>��DF ���� ��������������������)�!1�1�"1��1���"1&���!0������"�!+!�� ��!���)������������� ����������� ���)�0����� ��'�����!0����+�&�

'����� �%0���99�����5�>��F:8�;?����:;��;��99�C�>��D< ������������������������������������!�����!�0��������������������6����!���0���+&�!���!������"�����0������!��+������������0��"�#����"����

5+��:�>:�:��������5?�8��8:�>:�[&��\��>���F8(�(?���:�>:�:����>>;�C�>>;D�> ����&��B����������.����)�!1�� ��+��!0�����)��� +0���0�������"���!��������������1��������������)�"������ ��)�� ������������!�����6�+

������)����B�A���0� &�������� �� ����� �(�������� � �0��9�:�9�:�����5�>��;�8� >>::?:�C�>��D�� ��������(����������6�!+!�� �)����1����&���0����0������)����"���� ���!��)�������& ������+�!��"��������)�!1�� ��+�!��$��%���4�����?�9�

���5�>��?�8$������&���>>��?�9�C�>��D�� @� ����4�*���������"�!��)�� ��+���0�������& �����)��1�������)�!1���������+:-���9����>�����5�>�>>�8�$��>>�>�>�>��C�<<9D�� �&���'��#�%�������������0���$�0������)������)�!1�� ��+�!�)���1�"1��1���"1&���!0������"������!��!�� ����!������ �4+���;:��9;�

���5�>�>�:8$+ ��1�>��>:>>����>;:��>��C��D>>�>��A�[&��\�C�>��D�; ,�6!����K�=�Z�����!������*���"������� �"��"��)�� ��+���0���!0�����������& �����!��"�����!"���0������)�!1�����&��+0;���>?���F�

���5�>>���:>:>�<>?��:�[&��\�C�>>�D�9 ���1��!�����������,����� �"��"��)�01����0���)�� ������0��!����+� ���������)������)�!1�#������ ������%+:����?����F������5��>8�<8��?�

[&��\��>��;�8$0!>><�9<�C�>>?D�: #��'����4���������4� &���!����)��1���E� �!��)�0� ���0��&�C ������ ������D����������)�!1�C���������D�)����#� ��<��9<�:?�

���5�>�>F<8����>��>??��C�>��D�? 41��"��2�Q������/���+����� �����0����������!�������������������!0������"�&���)�� �6��1�&����������� ���&��0�!!��"�$������� ����%+��?���

���5�>�>�<80��0�>F;<"�C�>��D�F %�������������4�������#�"1��1���"1&���������������������!0������"�*����������� �5��:�;�:�:�����5�>�>�F8� ��1�;F���>�>�F8

K�B2#�;F��C�>�>D