EPIDEMIOLOGIA, PREVENZIONE E PROFILASSI Diagnostica …cplps2.altervista.org/phocadownload/bongera virus 6 giugno i parte.pdf · Virus EPATITI HBV HCV epatotropi Virus AIDS HIV 1

HIV – HCV - HBV

EPIDEMIOLOGIA,

PREVENZIONE E PROFILASSI

Diagnostica di Laboratorio

6 GIUGNO 2012

M. BONGERA

I° parte

DNA RNA

Acido desossiribonucleico

Virus EPATITI HBV HCV epatotropi

Virus AIDS HIV 1 -2 linfotropi

Definizione di virus Luria e Darnell (1968)

I virus sono entità, il cui genoma è un elemento di acido nucleico, DNA o RNA,

il quale si riproduce all’interno di cellule viventi usandone i sistemi enzimatici

per dirigere la sintesi di particelle specializzate, i virioni, che contengono il

genoma virale e lo trasferiscono ad altre cellule.

GENOMA

HBV-DNA HCV-RNA HIV-RNA

Reazione polimerasicaa catena

Ideata da Kary Mullis nel1983

1995

Premio Nobel per la Chimica.

PCR : procedure generali

campione Estrazione

DNA/RNA

Se RNA

retrotrascrizione

amplificazionerivelazione

immunoenzimatica

Gel elettroforesi

altro

Polymerase Chain Reaction : principio

CICLI TERMICI

1) denaturazioone

94-95°C

2) annealing

50-65°C

3) extension

72°C

Numero di cicli123456789

101112131415161718192021222324252627282930

Numero di molecole di amplificati

248

163264128256512

1.0242.0484.0968.192

16.38432.76865.536131.072262.144524.288

1.048.5762.097.1524.194.3048.388.608

16.777.21635.544.43267.777.216134.217.728268.435.456536.870.912

1.073.741.724

Resa teorica di una reazione di PCR a partire

da una singola copia di DNA

la PCR real time

E’ un’amplificazione di acidi nucleici durante la quale

i prodotti di PCR vengono rivelati e quantificati man

mano che si formano, in tempo reale.

Vengono quindi prodotti dati qualitativi e quantitativi

in contemporanea, attraverso la lettura di un segnale

fluorescente.

La fluorescenza viene emessa dal DNA in via di

formazione

All’aumentare del DNA amplificato, aumenta

proporzionalmente la fluorescenza

DNA Fluorescenza

Real time PCR

DNA amplificato

CARICA VIRALE ANALISI GENOTIPICHE

quantità di virus presente nel sangue

viremia

Real time PCR

Direttamente proporzionale al grado

di attività replicativa del virus .

UNITA’ DI MISURA : UI/ml (S.I. WHO) copie/ml genomi eq/ml

Es. 1.000 UI/ml = 1X10^3 = 3 log UI/ml10 UI/ml = 1x10^1 = 1 log UI/ml

CARICA VIRALE VIRAL LOAD.

CARICA VIRALE = riduzione PERIODO FINESTRA

• PERIODO DI TEMPO CHE INTERCORRE TRA L’INFEZIONE E LA

COMPARSA DEL PRIMO MARCATORE RILEVABILE CON I TEST

DI LABORATORIO

• Periodo finestra anticorpale

• Periodo finestra antigenico

Capobianchi, Ministero Salute 2012

TEST BIOMOLECOLARI HVB HCV HIV

• Approccio terapeutico : carica virale, genotipi

• Monitoraggio terapeutico: valutare la risposta alla

terapia

• Diagnosi : differenziare malattia/non malattia

• Screening : identificare soggetti con malattia/evento

in una popolazione di “ sani”

- donatori da sangue

terapia a base di interferone, nonché a un suo differente decorso e al

gradseverità (anche se questo aspetto non è ancora del tutto chiarito): il 2 e il 3

sono i genotipi più facili da trattare, mentre l'1 e il 4 sono i più resistenti; il

genotipo 1b, in particolare, è legato a una forma di infiammazione del fegato più

acuta dal decorso particolarmente aggressivo.