enzimas mitocondriales

EVIDENCIAS FOTOGRAFICAS

LABORATORIO DE ENZIMAS

MITOCONDRIALES

ROCIO CASTRO

TANIA CUADROS

DIANA BENAVIDES

ANGELICA PINILLA

JONATAN PRIETO

FACULTAD DE MEDICINA.

2014.

MATERIALES. 10 tubos de ensayo.

2 Erlenmeyer de 50ml

1 de precipitado de 500ml

1 mortero con mano

4 pipetas de 5ml

5 pipetas de 2ml

2 tubos de centrífuga

1 gradilla

1 pipeteador.

REACTIVOS. buffer fosfato 0,1M y pH 7.4 (300ml)

solución malonato de sodio 1% (100ml)

Solución cianuro de potasio 0,05M (50ml) PELIGROSO

Solución de p-fenilendiamina al 1% (100ml)

Solución de succinato de sodio al 1% (100ml)

Solución de azul de metileno 0,01% (100ml)

aceite mineral (200ml)

Agua destilada

Baño de maría termostatado a 37ºC

Tejido cardiaco y tejido fresco de pollo (deben conseguir tejidos

de animales recién sacrificados en un matadero, puede ser de

porcino, vacuno o ave (órgano entero) y mantenerlos

refrigerados. Son pequeñas porciones y sirven para todo el

grupo)

PROCEDIMIENTO.

1. EXTRACCION Y PREPARACION DE LAS ENZIMAS Y LAS

COENZIMAS: Tomar aproximadamente 5 gr de tej libre de sangre y

colocarlos en un mortero con 2 gr de arena lavada y adicionar 3

porciones de 5 ml de buffer fosfato y macerar.

Se macero hasta obtener una pasta fina, luego se transfirió a un

Erlenmeyer y se puso en una nevera por 15 minutos mezclando

ocasionalmente.

Al mismo tiempo que se realizaba el proceso anterior, también, se rotularon

5 tubos de ensayo (B’, 1’, 2’, 3’,4’) para luego adicionarles los siguientes

reactivos:

TABLA 2.

Luego de adicionar los reactivos a los tubos de ensayo, se

mezclaron suavemente y se llevaron los tubos al baño

serológico.

Luego de los 15 minutos de estar el extracto enzimático en la nevera,

se adiciono este en 1 tubo de centrifuga y se llevo a centrifugar a 1500

rpm por 10 minutos.

Al terminar el centrifugado del extracto enzimático, se termino el

procedimiento de la tabla 2.

Se adiciono el extracto enzimático sin sacar los tubos del baño

serológico y luego el aceite mineral para establecer condiciones

anaerobias.

TABLA 2.

Al mismo tiempo del procedimiento anterior, se realizo otro

procedimiento en el que se adiciono los reactivos de la siguiente tabla:

TABLA 1.

Luego se mezclo bien el contenido y se puso en el

baño serológico por un periodo de 20 minutos.

RESULTADOS OBTENIDOS.

TABLA 2. Proceso realizado con corazón.

TABLA 1. Proceso realizado con pollo.

Resultado del proceso hecho con hígado.