ELISA Enzyme ELISA Linked Enzyme ELISA ImmunoSorbent EnzymeLinked ELISA.

ELISA

Enzyme

ELISA

LinkedEnzyme

ELISA

ImmunoSorbentEnzyme Linked

ELISA

AssayEnzyme Linked ImmunoSorbent

ELISA

Anticorps Antigène

ELISA

Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay

EE

Principe du test ELISA (1)

Coating de l ’Ag ou de l’Ac

Saturation

SupportTampon de coating

Saturation

Lavages

Lavages

Substrat incolore

Produit coloré

Addition du ligand marqué avec l’enzyme

Principe du test ELISA (2)

E

E

E

E

Lavages: PBS-Tween

Addition du substrat de l ’enzyme

E

E

Enzymes

Substrats

Les différents types d’ELISA

- Phase homogène

- Phase hétérogène

- ELISA direct

- ELISA indirect

- ELISA Sandwich

- ELISA par compétition

Les ELISA en phase homogène

E

E

Antigène présent dans l’échantillon

Antigène absent de l’échantillon

S P

S

P

Les ELISA en phase hétérogène (1)

ELISA directAnticorps marqué Antigène marqué

ELISA indirect

Recherche d’anticorps dans le plasma

E

S

PE

S

P

E

S

P

Les ELISA en phase hétérogène (2)

ELISA sandwich (1)

Sandwich direct

-Symétrique-Asymétrique

Sandwich indirect

E

S

P

ES

P

Les ELISA en phase hétérogène (3)

ELISA sandwich (2)

Immunocapture : détection d’anticorps spécifiques

E

S

P

E

S

P

Les ELISA en phase hétérogène (4)

DO

[antigène ou anticorps]Limite de détection

Zone linéaire

Phase plateau

ELISA non compétitif

Les ELISA en phase hétérogène (5)

ELISA par compétition (1)

Compétition au niveau de l’anticorps

Anticorps à doser

Compétition au niveau de l’antigène

Antigène à doser

E

Élimination par lavage

EES

P

S

P

DO

[antigène ou anticorps]

Les ELISA en phase hétérogène (6)

ELISA par compétition (2)

Choix du test

- Quel est le but du test?

- Quels réactifs sont disponibles?

- Quel va être l’utilisation de ce test?

Cupule Coatée

avec anticorps

spécifique

Présence d’antigène

Absence d’antigène

Distribution des

témoins et des

échantillons

S

P

S

P

Addition du mélange

substrat-chromogèneDistribution du

conjugué HRP

Principe du kit utilisé pendant la partie pratique

Coating de l’antigène

(IgG de lapin)

Addition de l’anticorps

marqué avec la PAL

Addition de l’anticorps

marqué à la biotine

S

P

S

P

Addition du mélange

Chromogène-Substrat

Addition de l’avidine

recouverte de la PAL

Addition du mélange

Chromogène-Substrat

Dosage d’IgG de lapins par un test ELISA direct

Les techniques apparentées (1)

ELISPOT

Cellules

Nitrocellulose

Culture cellulaire Lavages

E E

Révélation

Addition d’un substrat précipitantApparition de spots

Les techniques apparentées (2)

- Western blot

- immunocytochimie ou immunohistochimie

Beaucoup plus loin………...

- Immunofluorescence

- Cytométrie en flux

Refracted light1

2

Incident light

Gold film

Prism

Ligand flow

time

Light refraction

1

2Association

Dissociation

Principles of BiacoreTM analysis