ELABORACIÓN DE UN ABONO ORGÁNICO FERMENTADO A PARTIR DE RESIDUOS DE FLORES (PÉTALOS DE ROSA) Y SU CARACTERIZACIÓN PARA USO EN LA PRODUCCIÓN DE ALBAHACA (Ocimum basilicum L.). ADRIANA NATHALIA GÓMEZ TEQUIA XIMENA DEL PILAR TOVAR GIL TRABAJO DE GRADO Presentado como requisito parcial Para optar al titulo de MICROBIÓLOGA AGRÍCOLA Y VETERINARIA MICROBIÓLOGA INDUSTRIAL PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA FACULTAD DE CIENCIAS CARRERA MICROBIÓLOGA AGRÍCOLA Y VETERINARIA CARRERA MICROBIÓLOGIA INDUSTRIAL BOGOTA D.C JULIO 2008
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ELABORACIÓN DE UN ABONO ORGÁNICO FERMENTADO A PARTIR DE
RESIDUOS DE FLORES (PÉTALOS DE ROSA) Y SU CARACTERIZACIÓN
PARA USO EN LA PRODUCCIÓN DE ALBAHACA (Ocimum basilicum L.).
ADRIANA NATHALIA GÓMEZ TEQUIA
XIMENA DEL PILAR TOVAR GIL
TRABAJO DE GRADO
Presentado como requisito parcial
Para optar al titulo de
MICROBIÓLOGA AGRÍCOLA Y VETERINARIA
MICROBIÓLOGA INDUSTRIAL
PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA
FACULTAD DE CIENCIAS
CARRERA MICROBIÓLOGA AGRÍCOLA Y VETERINARIA
CARRERA MICROBIÓLOGIA INDUSTRIAL
BOGOTA D.C
JULIO 2008
ELABORACIÓN DE UN ABONO ORGÁNICO FERMENTADO A PARTIR DE
RESIDUOS DE FLORES (PÉTALOS DE ROSA) Y SU CARACTERIZACIÓN
PARA USO EN LA PRODUCCIÓN DE ALBAHACA (Ocimum basilicum L.).
ADRIANA NATHALIA GÓMEZ TEQUIA
XIMENA DEL PILAR TOVAR GIL
APROBADO ________________________ ___________________________________ DIRECTOR ASESOR: Dr. JAIRO CUERVO Ph.D Dra.: MARIA XIMENA RODRIGUEZ Ph.D
PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA
FACULTAD DE CIENCIAS
CARRERA MICROBIÓLOGA AGRÍCOLA Y VETERINARIA CARRERA
MICROBIÓLOGIA INDUSTRIAL
ELABORACIÓN DE UN ABONO ORGÁNICO FERMENTADO A PARTIR DE
RESIDUOS DE FLORES (PÉTALOS DE ROSA) Y SU CARACTERIZACIÓN
PARA USO EN LA PRODUCCIÓN DE ALBAHACA (Ocimum basilicum L.).
ADRIANA NATHALIA GÓMEZ TEQUIA
XIMENA DEL PILAR TOVAR GIL
APROBADO ________________________ ___________________________________ Dra JANETH ARIAS M.Sc Dra. INGRID SCHULER Ph.D Directora Carreras Decana académica Microbiología Facultad de Ciencias
PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA
Facultad de ciencias
Carrera Microbiología Agrícola y Veterinaria
Carrera Microbiología Industrial
Bogotá D.C Julio
2008
ELABORACIÓN DE UN ABONO ORGÁNICO FERMENTADO A PARTIR DE
RESIDUOS DE FLORES (PÉTALOS DE ROSA) Y SU CARACTERIZACIÓN
PARA USO EN LA PRODUCCIÓN DE ALBAHACA (Ocimum basilicum L.).
ADRIANA NATHALIA GÓMEZ TEQUIA
XIMENA DEL PILAR TOVAR GIL
APROBADO ________________________ ___________________________________ Jurado 1 Jurado 2 Dr. Gerardo Moreno Dr. Hernando Valencia ING agrónomo M.Sc Biólogo M.Sc
PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA
Facultad de ciencias
Carrera Microbiología Agrícola y Veterinaria
Carrera Microbiología Industrial
Bogotá D.C
Julio 2008
NOTA DE ADVERTENCIA
“La Universidad no se hace responsable por los conceptos emitidos por sus
alumnos en sus trabajos de tesis. Solo velará por que no se publique nada
contrario al dogma y a la moral católica y por que las tesis no contengan ataques
personales contra persona alguna, antes bien se vea en ellas el anhelo de
buscar la verdad y la Justicia”
Artículo 23 de la Resolución N° 13 de Julio de 1946
AGRADECIMIENTOS
A Dios quien nos dio la sabiduría para cumplir este reto.
A nuestros Padres y hermanos por el apoyo y respaldo brindado en el desarrollo de
este proyecto.
A la Universidad Nacional de Colombia por permitir el desarrollo de este proyecto, el
acceso al material de laboratorio, e invernaderos y en especial a nuestro director el
doctor Jairo Leonardo Cuervo Andrade por su paciencia y dedicación.
A la doctora María Ximena Rodríguez por su comprensión, colaboración y tiempo.
A todas las personas que hacen parte del laboratorio de Biología de suelos e
invernaderos de la Facultad de Agronomía de Universidad Nacional de Colombia y
que en determinado momento nos colaboraron en el desarrollo de nuestro objetivo.
2. MARCO TEÓRICO Y REVISION DE LITERATURA.................................................... 11
2.1 SITUACIÓN ACTUAL DE LAS PLANTAS AROMÁTICAS EN COLOMBIA…………………………………………………………………………11 2.2 GENERALIDADES DE ALBAHACA (Ocimum basilicum L.)……………… ..13 2.2.1 DESCRIPCIÓN BOTÁNICA Y ECOLÓGICA……………………………………………… ..13 2.2.2 NECESIDADES MEDIOAMBIENTALES……………………………………………………14 2.2.3 MANEJO DE LA ESPECIE.................................................................................................. 14 2.2.4 PROBLEMAS FITOSANITARIOS ........................................................................................ 15 2.3 PRODUCCIÓN ORGÁNICA…………………………………………………... 16 2.3.1 TIPOS DE ABONOS ORGÁNICOS....................................................................................... 18 2.3.1.1 ABONOS SÓLIDOS ........................................................................................................ 18 2.3.1.2 ABONOS ORGÁNICOS LÍQUIDOS................................................................................... 19 2.3.2 MATERIALES PARA LA PREPARACIÓN DE ABONOS ORGÁNICOS ..................................... 20 2.4 ABONO COMPOSTADO TIPO BOKASHI……………………………………22 2.4.1 FUNCIÓN DE CADA COMPONENTE EN EL ABONO TIPO BOKASHI.................................... 23 2.4.1.1 HISTORIA DEL ABONO BOKASHI.................................................................................. 24 2.4.1.2 CARACTERÍSTICAS DE ABONOS ORGÁNICOS FERMENTADOS TIPO BOKASHI EN INVERNADERO......................................................................................................................... 26 2.4.1.3 FACTORES QUE INTERVIENEN EN LA ELABORACIÓN DE BOKASHI .............................. 27 2.4.1.4 COMPOSICIÓN DE ABONOS ORGÁNICOS ...................................................................... 27 2.4.1.5 VENTAJAS Y DESVENTAJAS DEL BOKASHI FRENTE A COMPOST ................................. 28 2.4.2 SITUACIÓN ACTUAL DE LOS ABONOS ORGÁNICOS FERMENTADOS EN COLOMBIA......... 30 2.5 EXTRACTOS DE ORIGEN VEGETAL………………………………………..31 2.5.1 TIPOS DE EXTRACTOS..................................................................................................... 31 2.5.2 TÉCNICAS EMPLEADAS PARA LA ELABORACIÓN DE EXTRACTOS VEGETALES ............... 32 2.5.3 USOS DE LOS EXTRACTOS VEGETALES. .......................................................................... 33 2.5.4 MÉTODOS DE EVALUACIÓN ANTIMICROBIANA EN EXTRACTOS VEGETALES ................. 35 2.5.4.1 MÉTODO DE DILUCIÓN EN CALDO ............................................................................... 35 2.5.4.2 MÉTODO DE DIFUSIÓN EN AGAR.................................................................................. 36 2.5.4.3 BIOAUTOGRAFIA ......................................................................................................... 36 2.5.4.4 CONCENTRACIÓN MÍNIMA INHIBITORIA...................................................................... 36 2.5.4.5 MÉTODO DE CRECIMIENTO RADIAL............................................................................. 37 2.6 COBERTURAS PLÁSTICAS…………………………………………………...38
3. FORMULACIÓN DEL PROBLEMA Y JUSTIFICACIÓN.............................................. 40
5 MATERIALES Y METODOS ............................................................................................ 43
5.1 ELABORACIÓN DEL EXTRACTO DE PÉTALOS DE ROSA PARA PRUEBAS DE GERMINACIÓN……………………………………………………43 5.1.1 TÉCNICA DE MACERACIÓN............................................................................................. 43 5.1.2 TÉCNICA AGITADOR ROTATORIO.................................................................................... 43 5.2 ELABORACIÓN DE PRUEBAS DE GERMINACIÓN………………………..44 5.3 EVALUACIÓN DE LA ACCIÓN ANTIMICROBIANA DEL EXTRACTO DE PÉTALOS DE ROSA………………………………………………………………..44 5.3.1 EVALUACIÓN DE ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE EXTRACTO DE ROSAS. ................... 45 5.4 ELABORACIÓN DE ABONO FERMENTADO TIPO BOKASHI……………46 5.4.1 DETERMINACIÓN DE MICROORGANISMOS PRESENTES EN BOKASHI TRADICIONAL Y MODIFICADO (PÉTALOS DE ROSA) ........................................................................................... 47 5.5 EVALUACIÓN DE ABONOS ORGÁNICOS EN INVERNADERO………….49 5.5.1. GERMINACIÓN DE SEMILLAS ......................................................................................... 49 5.5.2 APLICACIÓN DE LOS ABONOS BOKASHI TRADICIONAL Y BOKASHI MODIFICADO EN LAS CAMAS DEL INVERNADERO ..................................................................................................... 49 5.5.3 PREPARACIÓN DE LAS CAMAS ........................................................................................ 50 5.5.3.1 SIEMBRA...................................................................................................................... 50 5.6 MEDICIONES DE BIOMASA Y ALTURA…………………………………...51 5.7. ESTADÍSTICA………………………………………………………………….51 5.7.1 DISEÑO EXPERIMENTAL……………………………………………………………….. 51 5.7.2 VARIABLES DETERMINADAS .......................................................................................... 52
6. RESULTADOS Y DISCUSION ........................................................................................ 54
6.1TEMPERATURAS DE LAS COBERTURAS………………………………… ..54 6.2 EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA (METODO KIRBY BAUER)…………………………………………………………………………… ..58 6.3. EVALUACIÓN DEL EFECTO SOBRE EL CRECIMIENTO DE RAIZ Y TALLO DE EXTRACTO DE PÉTALOS DE ROSA OBTENIDO POR EL TRATAMIENTO AGITADOR ROTATORIO Y MACERADO…………………...59 6.3.1 MACERADO LONGITUD RAÍZ Y TALLO............................................................................ 59
6.4. OBSERVACIÓN DE POBLACIÓN MICROBIANA EN MEDIOS ESPECÍFICOS EN MUESTRAS DE SUELO INICIAL DURANTE EL PROCESO DE ELABORACIÓN DE BOKASHI TRADICIONAL Y PÉTALOS………… …..61 6.4.1. RECUENTO DE ENTEROBACTERIAS EN AGAR SS (SALMONELLA –SHIGELLA............... 61 6.4.2. RECUENTO DE MICROORGANISMOS EN AGAR SMRS1 PARA HONGOS EN EL PROCESO DE ELABORACIÓN DE LOS ABONOS TIPO BOKASHI.................................................................. 64 6.4.3. RECUENTO DE MICROORGANISMOS EN AGAR SMRS1 PARA BACTERIAS EN EL PROCESO DE ELABORACIÓN DE LOS ABONOS TIPO BOKASHI.................................................................. 65 6.4.4 RECUENTO DE MICROORGANISMOS AMILOLITICOS EN AGAR ALMIDÓN EN EL PROCESO DE ELABORACIÓN DE LOS ABONOS TIPO BOKASHI.................................................................. 66 6.5. ANALISIS DE RESULTADOS DE LAS CAMAS CON COBERTURAS PLASTICAS Y TRATAMIENTOS DE ABONO TIPO BOKASHI………………..68 6.5.1. RECUENTO DE POBLACIONES DE MICROORGANISMOS EN AGAR NUTRITIVO ............... 68 6.5.2. RECUENTO DE BACTERIAS Y HONGOS FOSFATO SOLUBILIZADORAS EN AGAR SMRS1 DE BAJO COBERTURAS PLÁSTICAS Y ABONOS TIPO BOKASHI. ................................................ 69 6.5.3 RECUENTO DE POBLACIÓN MICROBIANA EN AGAR ALMIDÓN DE ACUERDO A LAS CAMA…………………………………………………………………………………………71 6.5.4 RECUENTO DE POBLACIONES DE ENTEROBACTERIAS EN AGAR .S.S EN LAS CAMAS CON PLÁSTICOS Y TRATAMIENTOS.................................................................................................. 72 6.6 PESO SECO DE LAS ALBAHACAS CULTIVADAS BAJO LOS TRATAMIENTOS CON ABONOS TIPO BOKASHI Y PLASTICOS………… …73 6.7. ALTURAS ALBAHACAS MEDIDA DEL TALLO………………………… ..74
El comportamiento de la temperatura (ver tabla 3) durante el proceso de
degradación de cada uno de los tratamientos la temperatura alcanzada para
bokashi a base de pétalos de rosa fue de 50°C en el día 10 y la mínima
temperatura alcanzada fue de 32°C. Para bokashi tradicional la temperatura
fue de 42°C en horas de la tarde del mismo día. Se observo que en bokashi
tradicional no se alcanzaron altas temperaturas, asimismo se observo una
notable disminución de quince a diecisiete grados centígrados para ambos
tratamientos en el día 15. Bollen, (1993). Sostiene que los patógenos pueden
eliminarse durante el compostaje, probablemente a causa del efecto de la
temperatura generada por las pilas. Según Elorrieta et al., (2002) encontró en
estudios in vitro que al exponer los patógenos a diferentes temperaturas entre
30°C y 50°C hubo inhibición de patógenos, con estos resultados
estandarizados en laboratorio. Los resultados corroboran las observaciones
formuladas con otros agentes patógenos y virus.
Los datos analizados indican que la temperatura ambiente afecta el proceso de
elaboración de los abonos tipo bokashi, observando que para el abono
tradicional hubo una variación de temperatura entre 2 y 4° C entre la mañana
y la tarde, mientras que el tratamiento con bokashi pétalos presento, una >
variación de temperatura que fue de 3 y 8°C entre la mañana y tarde
notándose una diferencia marcada entre tratamientos.
Stentiford, (1996) encontró que el proceso de elaboración del abono, la
temperatura es importante ya que su valor determina la velocidad a la que
muchas de las reacciones biológicas tienen lugar como la capacidad de
saneamiento del proceso. Desde el punto de vista biológico, tres son los
intervalos que rigen la diferentes aspectos: temperaturas por encima de 55 C
para maximizar la esterilización, entre 45 y 55 C para mejorar el tipo de
degradación y entre los 35 y los 40 ºC para aumentar la diversidad
microbiana.
56
6.2 EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA
(METODO KIRBY BAUER)
Para E. coli y Salmonella, no se presentaron diferencias significativas en las
dosis de 500 g/l frente a los testigos con penicilina y para Shigella, se
presentaron valores entre 6 y 25% del obtenido con el testigo con penicilina
(ver figura y anexo 1).
Los halos de inhibición de los testigos con penicilina encontrados para el
control de E. coli y Salmonella están por el orden de los 14 mm, frente a los
32 mm de los halos formados con penicilina para el control de Shigella.
Según estudios realizados por Dunphy (2006), los pétalos poseen alcoholes,
esteres grasos geraniol, nerol y citronellol siendo principios activos, que al
estar en contacto con los microorganismos, posiblemente inhibieron la
proliferación de estas poblaciones actuando como agentes antimicrobianos,
alterando el paso de nutrientes y la eliminación de los desechos por medio de
la membrana citoplasmática a la célula provocando la salida del contenido
celular al medio circundante e interfiriendo en el crecimiento de la célula
como lo hace un agente antimicrobiano (Tortora, 2006).
Para Shigella sp se observo una menor inhibición 6 y 25% del obtenido con
el testigo con penicilina en comparación a las otras cepas utilizadas siendo
más resistente a la composición de los pétalos, esto se debe probablemente a
la capacidad que tiene el microorganismo de resistencia a sustancias
antimicrobianas y su mecanismo para metabolizarlas ya que según Conté
(1995), en Shigella sp se ha observado mutaciones en lo genes cromosómicos
que le permiten tener resistencia a ese tipo de antibiótico. Según estudios
realizados por Boonkaew et al.,2003 la actividad biológica de extractos
vegetales los cuales poseen alta actividad antimicrobiana en especial contra
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bacterias Gram. positivas, utilizando hojas y raíz para la obtención de los
principios activos, aplicando diferentes técnicas según el material vegetal
utilizado; por esta razón para el desarrollo de este trabajo, al utilizar los
pétalos de rosas como material vegetal, se encontró dicha actividad inhibitoria
con el fin de reducir considerablemente la flora patógena.
Figura 1 Valores promedios del diámetro del halo de inhibición (mm) en algunas enterobacterias (E.coli = Escherichia coli; Salm= Salmonella enteritidis; Shig= Shigella sp y Pen= Penicilina) vs diferentes tratamientos de extractos de pétalos y control con penicilina.
6.3. Evaluación del efecto sobre el crecimiento de raiz y tallo de extracto
de pétalos de rosa obtenido por el tratamiento agitador rotatorio y
macerado
6.3.1 Macerado longitud raíz y tallo
Al observar los datos arrojados en el análisis estadístico (ver anexos 2 y 3)
para el tratamiento de extractos de pétalos de rosa por el método de
maceración, no hubo diferencias significativas con un valor p >0.05 según la
prueba del rango múltiple de Duncan. Aunque se observo una tendencia del
26.43% en el tratamiento cinco con respecto al testigo para raíz y un 56.12%
en el tratamiento uno con respecto al testigo para tallo.
58
Para el tratamiento de extractos de pétalos de rosa por el método de agitador
rotatorio, se encontró diferencias significativas entre las concentraciones del
extracto aplicadas a los tratamientos en las pruebas de germinación con un
p<0.05. Se observo una mayor efectividad para la raíz aplicando el
tratamiento correspondiente a la dosis seis 90 uL con un 46% de efectividad
con respecto al testigo. (Ver figura 2 y 3).
En cuanto al tallo el tratamiento que presento mejores resultados fue el
correspondiente a la dosis uno (2.5 ul) con una leve tendencia del 34%
respecto al testigo (ver anexo 4 y 5). De acuerdo a lo anterior, la mejor
técnica utilizada fue la de Agitador Rotatorio, debido a que con esta
metodología se presentó un mejor crecimiento de la raíz y el tallo para
pruebas de germinación, para las semillas de albahaca. Según el caso
reportado por Zamorano (2005) se encontró que por medio de esta técnica se
concentraba mejor los principios activos, estimulando el crecimiento de la
raíz y tallo de Brassica sp y Lolium multiforum.
0
1
2
3
4
5
6
0 µL 2.5 µL 5.0 µL 10 µL 30 µL 60 µL 90 µL
Tratamientos
Long
itud
de raíz (cm
)
Macerado Agitador
Figura 2 Resultados de longitud promedio de la raíz (cm) vs diferentes concentraciones de
extracto de pétalos obtenido por la técnica de maceración y agitador rotatorio aplicadas para
semillas de albahaca (Ocimum basilicum L) para pruebas de germinación in vitro.
59
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
3,5
4
0uL 10uL 2,5uL 5uL 30uL 60uL 90uL
tratamientos
long
itud tallo
(cm)
AgitadorMacerado
Figura 3 Resultados de la longitud promedio del tallo (cm) vs diferentes concentraciones de
extracto de pétalos obtenido por la técnica de maceración y agitador rotatorio aplicadas para
semillas de albahaca (Ocimum basilicum L) para pruebas de germinación in vitro.
6.4. Observación de población microbiana en medios específicos en
muestras de suelo inicial durante el proceso de elaboración de Bokashi
tradicional y pétalos
Al analizar las muestras del suelo inicial en el estudio, (ver anexo 10) antes de
aplicar los diferentes tratamientos se observo una baja población
(193x106ufc/g) y baja poblaciones microbianas en comparación con los datos
obtenidos al aplicar los diferentes tratamientos a las camas, las cuales indican
que el suelo era deficiente en riqueza microbiana debido a la baja fertilización
y la poca interacción microbiana que presentaba este suelo, según Viterii
(2002). La falta de incorporación de materia orgánica y el uso excesivo de
agroquímicos, han conducido a la degradación de las propiedades física,
química y biológica que determina la capacidad productiva de los suelos.
6.4.1. Recuento de enterobacterias en agar SS (Salmonella –Shigella)
El medio de cultivo SS es empleado para la detección de enterobacterias que
por sus características es medianamente selectivo. Los coliformes son
fácilmente determinables y su presencia es habitual en los residuos empleados
60
en la elaboración de abono tipo bokashi (Kelley y Walker, 1999). También se
utilizan como indicadores de contaminación fecal en los ambientes
relacionados con el suelo y el agua (Hassen et al., 2001; Tallon et al.,2005).
Salmonella es considerado como el principal problema específico y de la
calidad higiénica de compost (Brinton y Droffner, 1994; Yanko, 1995; Hay,
1996), razón por la cual se evaluó la presencia de la población de
enterobacterias, en los dos abonos tipo Bokashi y se observo
microscópicamente bacterias Gram. negativas para el día cinco
evidenciándose una alta población para el tratamiento de bokashi tradicional
(anexo 11) notándose una disminución a medida que maduraba el material
orgánico, no hubo presencia de cepas de Salmonella en el día 15 las cuales se
evidencian en el agar S.S (Salmonella, Shigella) que presentan colonias con
color transparente con centro negro. Las colonias que se presentaron se
observaron macroscópicamente de color rosadas y fucsias, forma redonda,
borde definido y cremosas, lo que corresponde con la descripción del Manual
de Merck (2005) en donde se define a E.coli .como colonias rosadas hasta de
color cremoso, y a Enterobacter aerogenes como colonias blanquecinas,
opacas, mucosas.
No se observo viraje del medio S.S, y las colonias rosadas hasta roja son
lactosa positiva indicando presencia de E.coli. Entre los tratamientos de
bokashi a base de pétalos de rosa y bokashi tradicional no se observaron
diferencias significativas según la prueba del rango múltiple de Duncan con
un valor p>0.05) tal vez a condiciones como pH básico, temperatura
manteniéndose constantes.
Comparando ambos tratamientos, ver (figura 4), en cuanto a los datos del día
cinco, diez y quince se evidencia diferencias muy marcadas ya que en el día
cinco el recuento de bacterias fue alto (anexo 11) respecto al día diez y
quince que iba disminuyendo gradualmente, a medida que pasaba los días, la
61
población patógena disminuía considerablemente, lo cual se debe a que para
la elaboración de los abonos tipo bokashi se utilizó como materia prima
residuos de plantas aromáticas (Bokashi tradicional y bokashi modificado a
base de pétalos de rosa), que contienen sustancias antimicrobianas que
inhiben el crecimiento de microorganismos; los residuos utilizados fueron
tomillo perteneciente a la familia Labiatae que contienen sustancias como
carvacrol (2-hidroxi-p.cimeno),P-cimenol (Isopropil-Tolueno) a las cuales se
les ha encontrado propiedades antifúngicas, y albahaca perteneciente a la
familia Lamiaceae que se caracteriza por poseer monoterpenos como
carvacrol y timol (Espitia, 2004).
El proceso de degradación con las condiciones ambientales tales como
sustrato, temperatura y humedad, también favorecen la disminución de
microorganismos patógenos ya que al mezclarse todos los materiales para
obtener bokashi se estimula microorganismos benéficos permitiendo
establecer relaciones de competencia posiblemente por nutrientes inhibiendo
el crecimiento de estos patógenos. Cuando empieza a liberarse las sustancias
antimicrobianas que poseen los residuos de plantas aromáticas y los pétalos,
las bacterias patógenas posiblemente pueden ser inhibidas por estas y las
condiciones ambientales no son las mas apropiadas para multiplicarse, según
Tortora (2006) se necesita un ambiente propicio para Salmonella y al ser una
bacteria proteolítica tendría que desarrollarse en agar leche pero no hubo
recuento de microorganismos proteolíticos.
Uno de los factores que influyo considerablemente, es el tiempo de
degradación debido a que a medida que pasaba el tiempo la concentración de
Según Tonner K (2006), los agentes patógenos son eliminados después de 2
semanas a una temperatura relativa de 55 C pero otros factores tales como la
62
desecación y pH también pueden desempeñar un papel significativo en la
reducción de patógenos.
-10
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
Petalos Tradicional
Tratamientos
UFC/g 10-4 5
1015
Figura 4 Promedio recuentos UFC x 10-4 g-1 de enterobacterias en agar SS en tres tiempos
de elaboración de bokashi pétalos y tradicional.
6.4.2. Recuento de microorganismos en agar SMRS1 para hongos en el
proceso de elaboración de los abonos tipo Bokashi
En este medio se observó una mayor población de hongos solubilizadores de
fósforo, en el día 10 para ambos tratamientos aplicados (ver figura 5),
mientras que el día cinco y quince los valores fueron mas bajos en bokashi
pétalos (ver anexo 15) debido a que posiblemente en el día cinco se esta
iniciando el proceso de degradación lo cual permite una menor competencia
por nutrientes con otros microorganismos habitantes.
En el día quince se observo una menor población de hongos en medio smrs1
esto se presentó posiblemente por la degradación total de los sustratos
empleados en el bokashi generando una competencia entre los
microorganismos por nutrientes. Mayea et al., 1991 encontró que los abonos
orgánicos tienen un efecto marcado sobre la microflora del suelo y por lo
general es de esperar que los abonos orgánicos aumenten la microflora
63
heterótrofa de los suelos. Sin embargo la heterogeneidad de estos
microorganismos puede estar influida por la cantidad de los productos
aplicados, las condiciones físicas del suelo.
0
2
4
6
8
10
12
14
16
5 10 15
Día de elaboración de los abonos tipo Bokashi
Prom
edio
recu
ento
aga
r SM
RS1
hon
gos
(ufc
/g)
Petalos Tradicional
Figura 5 Promedio recuentos UFC x 10-4 g-1 de hongos fosfato solubilizadores en agar
SMRS1 en tres tiempos de elaboración de bokashi pétalos y tradicional.
6.4.3. Recuento de microorganismos en agar SMRS1 para bacterias en el
proceso de elaboración de los abonos tipo Bokashi.
En el medio agar SMRS1 para el recuento de bacterias solubilizadoras de
fosforo, se evidencia un mayor crecimiento en el tratamiento correspondiente
a bokashi pétalos, mientras que se observa una menor población para el
tratamiento de bokashi tradicional (ver figura 6), aunque no hubo diferencias
estadísticamente significativas con un valor de p <0.001, las poblaciones
presentaron una disminución, esto tal vez se debe a condiciones de
temperatura y pH que se iban presentando en el proceso de degradación de la
materia y elaboración del abono y las sustancia que tienen dichos pétalos
como son esteres grasos (terpenil), que representan del 14 al 64% y alcoholes
como (etanol-b-fenilo y alcohol bencil) posiblemente inhiben el crecimiento
de las bacterias. Espitia (2004) encontró que las plantas aromáticas al tener
64
sustancias antimicrobianas, posiblemente no permitieron el crecimiento de
estas bacterias
Figura 6 Promedio recuentos UFC x 10-4 g-1 de bacterias fosfato solubilizadoras en agar
SMRS1 en tres tiempos de elaboración de bokashi pétalos y tradicional.
6.4.4 Recuento de microorganismos amiloliticos en agar almidón en el
proceso de elaboración de los abonos tipo Bokashi
Se encontró gran población de microorganismos amilolíticos ver (figura 7),
presentándose halos de diámetro mayor de 5 mm, posiblemente se presento
por la materia prima empleada que fue material vegetal (pétalos de rosa)
presenta altas concentraciones de almidón siendo la reserva natural de las
plantas la cual es una sustancia considerada como un hidrato de carbono
Stryer, (2003).
Estudios realizados por Bailey han demostrado que el almidón se encuentra
en la naturaleza localizado en las células vegetales en gránulos pequeños lo
cual le permite ser insoluble en agua a una temperatura ambiente. Los
gránulos de almidón son muy resistentes a la penetración del agua y al ser
hidrolizado forman uniones de hidrogeno dentro la misma molécula y con
otras moléculas vecinas. Sin embargo, estas uniones se debilitan cuando
65
aumenta la temperatura lo cual proporciona un ambiente propicio para que los
microorganismos amilolíticos se desarrollen.
El almidón después de la celulosa es un polímero común en el reino vegetal.
Las amilasas son enzimas extracelulares que hidrolizan el almidón en uniones
α-1,4 al azar a lo largo de las moléculas de amilosa y amilopectina (Crueger
1993).
2
2,5
3
3,5
4
4,5
5
5,5
5 10 15
Día de elaboración de los abonos tipo Bokashi
Prom
edio
recu
ento
de
Bac
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s en
aga
r al
mid
ón (u
fc/g
)
Petalos Tradicional
Figura 7 Promedio recuento UFC x 10-4 g-1 material de bacterias amilolìticas en agar almidón
en tres tiempos de elaboración de bokashi pétalos y tradicional
66
6.5. ANALISIS DE RESULTADOS DE LAS CAMAS CON COBERTURAS
PLASTICAS Y TRATAMIENTOS DE ABONO TIPO BOKASHI
6.5.1. Recuento de poblaciones de microorganismos en Agar nutritivo
De acuerdo a los tratamientos (ver figura 8), el mas efectivo fue el de la cama
correspondiente a bokashi pétalos y plástico negro, estudios realizados por Gelsomino
et al.,(2006) muestran que la cobertura del suelo, estimula el crecimiento de la población
microbiana favoreciendo el crecimiento de Bacillus spp., Pseudomonas fluorescentes y
hongos, los cuales pueden suprimir patógenos por parte de microorganismos que son
más competitivos y a menudo antagonistas de los patógenos y plagas de las plantas.
Según Tamietti.G (2006) la mayor parte de los microorganismos tolerantes a las
coberturas, son conocidos como agentes de control biológico o estimulantes del
crecimiento de las plantas.
Estudios realizados por (Chellemi, 2006) han demostrado que al comparar la cobertura
plástica del polietileno claro, con polietileno negro, este último absorbe la radiación
solar, reduce el calentamiento del suelo en varios grados, es más estable y durable en
condiciones de campo.
Figura 8 Promedio recuentos UFC x 10-4 g-1 de poblaciones microbianas en agar nutritivo bajo coberturas
plásticas.
67
6.5.2. Recuento de bacterias y hongos fosfato solubilizadoras en agar SMRS1 de
bajo coberturas plásticas y abonos tipo bokashi.
Se encontraron mejores resultados en el tratamiento con plástico transparente y bokashi
tradicional fue mas efectivo para las poblaciones de hongos en agar SMRS1, en
comparación con los demás tratamientos (ver figura 9) se evidencian en un mayor
crecimiento de bacterias fosfato solubilizadoras, en las camas cubiertas con plástico
transparente, observándose en la grafica 12. Según Grassano et al., (2002)
probablemente el plástico trasparente permite un mejor desarrollo para el cultivo y una
mejor relación entre las raíces de las plantas y las poblaciones de microorganismos,
estos tienen un rol importante en la movilización del fosforo para las plantas.
La participación de los microorganismos fosfato solubilizadores dependen del tipo de
suelo, pero generalmente las bacterias constituyen del 0.1 al 0.5 % de la población total.
Muchas de las bacterias fosfato solubilizadoras son conocidas por su gran actividad
metabólica para solubilizar, sin embargo, se ha reportado que los hongos poseen una
mayor actividad solubilizadora que las bacterias (Gyanneshwar, 2002).
Según estudios de Beltrán y Torrado (2002), esta clase de bacterias se puede desarrollar
gracias a los macronutrientes presentes en el suelo como el fosforo. Los
microorganismos de la rizosfera poseen la capacidad de liberar iones fosfato de sus
diversas combinaciones y participar en distintas fases del ciclo del fosforo en el suelo.
Con un adecuado suministro de fosfato, los microorganismos son benéficos
especialmente para las plantas jóvenes que en presencia de bacterias fosfato
solubilizadoras.
68
-2
0
2
4
6
8
1 2 3 4
Cama
Prom
edio
recu
ento
hon
gos
SMR
S1 (u
fc/g
)
Plástico Negro Plástico Transparente Sin Plástico
Figura 9 Promedio recuentos UFC x 10-4 g-1 de hongos fosfato solubilizadores en agar SMRS1 bajo
coberturas plásticas (plástico negro, transparente y sin plástico) combinado con bokashi tradicional cama 1
y 3 y pétalos de rosa cama 2 y 4.
-1
0
1
2
3
4
5
6
7
1 2 3 4
Cama
Prom
edio
recu
ento
bac
teria
s SM
RS1
(ufc
/g)
Plástico Negro Plástico Transparente Sin Plástico
Figura 10 Promedio recuentos UFC x 10-4 g-1 de bacterias fosfato solubilizadoras en agar SMRS1 bajo
coberturas plásticas (plástico negro, transparente y sin plástico) combinado con bokashi tradicional cama
1,3 y pétalos de rosa cama 2,4.
69
6.5.3 Recuento de población microbiana en agar Almidón de acuerdo a las camas
Teniendo en cuenta los resultados presentados en la figura 11 y (ver anexo 19), se
observo una diferencia estadísticamente significativa p<0.05, evidenciándose una leve
tendencia de mayor población de microorganismos amilolíticos para el tratamiento de
bokashi pétalos con cobertura de plástico negro, se observa una mayor actividad de estos
microorganismos presentándose halos de degradación superiores a 5mm de diámetro;
según estudios realizados por Pachón y Posada (2003), los microorganismos encuentran
gran disponibilidad de almidón para ser degradado siendo la mayor reserva encontrada
en material vegetal a nivel celular.
0
2
4
6
8
10
12
1 2 3 4Cama
Rec
uent
o ag
ar A
lmid
on
Plástico Negro Plástico Transparente Sin Plástico
Figura 11 Promedio recuentos UFC x 10-4 g-1 de bacterias amiloliticas en agar almidón bajo coberturas
plásticas (plástico negro, transparente y sin plástico) combinado con bokashi tradicional cama 1,3 y
pétalos de rosa cama 2,4.
70
6.5.4 Recuento de poblaciones de enterobacterias en agar .S.S en las camas con
plásticos y tratamientos
Para los plásticos se presentaron diferencias significativas (ver anexo 29). Se observo
diferencias en la cobertura que no tenia plástico en comparación a los que si estaban
cubiertos (ver figura 12). Tanto la variable de bokashi y plástico, influyen
considerablemente en la disminución de la concentración de microorganismos patógenos
evidenciando un mejor resultado con cobertura de plástico negro debido a que se
presenta una mayor absorción de los rayos solares estimulando la producción de
sustancias que inhiben flora patógena. Se hizo anteriormente en el proceso de
elaboración que al abono al final de su elaboración no presentó alta concentración de
microorganismos patógenos, y los patógenos que se encontraban al estar a 24°C se
inhibió su crecimiento ya que crecen solo a 37°C. En estudios realizados por. Stapleton
(2000), se observo que durante el proceso de empleo de las coberturas plásticas, se
produce un calentamiento de la materia orgánica liberándose compuestos volátiles al
suelo. Diferentes tipos de materia orgánica tales como el abono animal y los residuos de
los cultivos especialmente los residuos vegetales, podrían combinarse con la cobertura
del suelo para incrementar la temperatura por medio del calor generado por la
descomposición de esos materiales e incrementar la capacidad del suelo para mantener
el calor aumentando la actividad biocida para enterobacterias por medio de la
producción de compuestos volátiles, razón por la cual en los resultados obtenidos, la
población patógeno disminuyó considerablemente (ver anexo 28).
Según Misle (2001) la radiación solar puede fácilmente penetrar la cobertura de plástico
pero la radiación emitida por el suelo (normalmente a una longitud de onda más larga)
no puede pasar a través de esa cobertura. Consecuentemente, la mayor parte de esa
radiación será retenida debajo de la cobertura plástica. Durante este proceso la
temperatura del suelo podría elevarse a niveles letales para muchos de los organismos
del suelo, incluyendo enterobacterias lo cual fue observado para este estudio.
71
Figura 12 Promedio recuentos UFC x 10-4 g-1 de enterobacterias en agar SS bajo coberturas plásticas
(plástico negro, transparente y sin plástico) combinado con bokashi tradicional cama 1,3 y pétalos de rosa
cama 2,4.
6.6 PESO SECO DE LAS ALBAHACAS CULTIVADAS BAJO LOS
TRATAMIENTOS CON ABONOS TIPO BOKASHI Y PLASTICOS
Según los resultados obtenidos para la toma de peso seco de las plantas de albahaca en la
(anexo 34), se observó diferencias entre los tratamientos según la gráfica 15.los
resultados arrojados en cuanto a peso seco, el mejor tratamiento estadísticamente
significativo fue el correspondiente a bokashi con pétalos de rosa y plástico negro; de
acuerdo a estudios en campo realizados por Loughrin y Kaspebauer, (2001) con
cobertura en albahaca se ha demostrado que coberturas coloreadas optimizan el tamaño,
aroma sabor e incrementa la producción de compuestos volátiles. Según estudios
realizados por la USDA las, hojas de albahaca tratadas con coberturas coloreadas son
más grandes, más suculentas, y más pesadas. Las hojas de albahaca desarrollan
concentraciones de compuestos fenólicos y de olor significativamente más altas que
aquellas plantas cultivadas con cobertura blanca. (USDA,2005).
El plástico negro genero una buen efecto en la biomasa de la albahaca ya que esta
tonalidad de plástico permiten absorber los rayos solares y se de un incremento de
temperatura para el crecimiento de la albahaca. Mientras que con el plástico transparente
72
permite el paso de los rayos solares y generando una evaporación del agua del suelo más
marcada y propiciando valores de temperatura más altos, lo cual pude interferir con la
fisiología de la planta y con el cambio de las poblaciones microbianas del suelo. Al
aumentar la temperatura en las coberturas de plástico transparente, se estaría
promoviendo el crecimiento de malezas y por ende afectando el crecimiento de la
albahaca por competencia de nutrientes (Diaz-Perez et al., 2007)
Figura 13 Peso seco promedio tratamiento Bokashi pétalos de rosa plástico negro (BPPN) Bokashi
pétalos de rosa plástico transparente (BPPB) Bokashi pétalos de rosa sin plástico (BPSP), Bokashi
tradicional plástico negro (BTPN), Bokashi tradicional plástico transparente (BTPB) y Bokashi tradicional
sin plástico (BTSP).
6.7. ALTURAS ALBAHACAS MEDIDA DEL TALLO
De acuerdo a los resultados, no existen diferencias significativas entre los tratamientos
observando una tendencia en los tratamientos que corresponde a BPPNC4, (ver grafica
16). El proceso de las coberturas plásticas de suelo abarca un complejo sistema de
cambios físicos, químicos y biológicos asociados con el calentamiento solar que permite
la estimulación de las raíces de las plantas para su crecimiento reflejándose en los
resultados obtenidos (ver anexo 30) El suelo y la cobertura también fue utilizada para
73
limitar la evaporación de agua del suelo, para controlar malezas, para mejorar la
estructura del suelo y para combatir la erosión (Misle E. 2001)
05
1015202530
BPPB
BPPN
BPSP
BTPB
BTPN
BTSP
Tratamientos
Altu
ras
(cm
)
Figura 14 Alturas promedio del tallo (cm) de Albahaca, tratamiento Bokashi pétalos de rosa plástico
negro (BPPN) Bokashi pétalos de rosa plástico transparente (BPPB) Bokashi pétalos de rosa sin plástico
(BPSP), Bokashi tradicional plástico negro (BTPN), Bokashi tradicional plástico transparente (BTPB) y
Bokashi tradicional sin plástico (BTSP).
TABLA 5 Análisis fisicoquímico de los tratamientos aplicados (abono tipo bokashi
pétalos y tradicional)
Bokashi
C/N MO
% CO% NT%
Nitrógeno disponible %
Nitrógeno disponible
ppm PÉTALOS 11.6:1 30,25 17,55 1,5125 0,022 220
TRADICIONAL
11.6:1 13,7 7,95 0,685 0,01 100
El carbono y el nitrógeno son constituyentes básicos de la materia orgánica. Para obtener
un compost de buena calidad debe existir una relación equilibrada entre ambos
elementos. Teóricamente la relación de C/N adecuada es de 25-35 pero varía según las
materias primar que se utilicen.
74
Al ser muy elevada la relación C/N disminuye la actividad biológica. Mientras que al ser
muy baja no afecta el proceso de compostaje, perdiendo el exceso de nitrógeno en
amoniaco. Es importante realizar una mezcla adecuada de los distintos residuos con las
diferentes relaciones C/N para obtener un abono equilibrado. Los materiales orgánicos
ricos en carbono y pobres en nitrógeno son la paja, el heno seco, las hojas, las ramas, la
turba y el aserrín. Los pobres en carbono y ricos en nitrógeno son los vegetales jóvenes,
las deyecciones animales y los residuos de matadero (Vásquez 2003).
Según Pare et al.,(1998), el carbono orgánico puede servir como fuente de energía y de
carbón celular, por lo tanto los requerimientos de carbón(C) son mayores que los de
nitrógeno(N).La proporción de estos dos elementos, necesaria oscila entre 25:1 y 30:1
(C/N). Si hay demasiado nitrógeno en relación con el carbono, este se perderá en forma
de amoniaco. Las relaciones muy estrechas (<20:1) inducen a perdidas de nitrógeno en
forma de amoniaco, además, valores altos de pH (>8.5) pueden favorecer perdida de
nitrógeno, y relaciones muy amplias convierten al nitrógeno en un nutriente limitante.
Por otro lado un nivel elevado de C:N no permite que se forme una población
microbiana extensa sin nutrientes adicionales. El resultado es un nivel de
descomposición más lento.
75
7. CONCLUSIONES
• Los pétalos son una alternativa para la preparación de abonos orgánicos en
producción de albahaca.
• Se elaboró un abono fermentado tipo Bokashi a base de pétalos de rosa para su
uso como sustrato en producción de albahaca observando resultados favorables
en cuanto al crecimiento del cultivo en condiciones como coberturas plásticas en
combinación con abonos tipo bokashi, evidenciado para altura y peso seco de las
plantas dado por los microorganismos benéficos posibles y el efecto de los
tratamientos.
• Se evaluó la efectividad de dos coberturas plásticas en combinación con los
abonos tipo bokashi para el mejoramiento de la producción de albahaca
encontrándose que la cobertura plástica negra fue mas efectiva durante el proceso
de estudio probablemente por el aumento de la población microbiana y la mayor
diversidad biológica que ayuda a la degradación de materia orgánica y liberación
sustancias que estimulan su crecimiento.
• Se evaluó la capacidad promotora de desarrollo de extractos de pétalos de rosa
aplicando las diferentes metodologías para la elaboración del extracto en la
germinación de semillas de albahaca evidenciándose baja efectividad frente al
control utilizado.
• Se estableció la capacidad antimicrobiana de los extractos obtenidos de los
pétalos de rosa observándose que la concentración efectiva fue la
correspondiente a 500 g/l del extracto de rosa para Salmonella sp y E coli.
• No fue efectiva ninguna de las concentraciones evaluadas para Shigella sp
presentando resistencia.
76
• El bokashi es una alternativa en los sistemas de fertilización en los diferentes
cultivos, debido a su facilidad de manejo en un tiempo corto de elaboración lo
que le permite al agricultor realizar un mejor y práctico aprovechamiento de los
residuos generados de otros cultivos, solucionando también el problema de
contaminación ambiental.
• Al realizar bokashi utilizando como materia prima residuos de plantas
aromáticas, se observa una disminución significativa en las poblaciones
bacterianas patógenas como Salmonella sp y E coli. y Shigella sp, por las
sustancias antimicrobianas que estas poseen.
77
8. RECOMENDACIONES
• Hacer un monitoreo de plagas y enfermedades comparando los dos tipos de
bokashi
• Evaluar concentraciones más altas de extracto pétalos de rosa para Shigellag sp
• Emplear técnicas para la determinación e identificación de enterobacterias como
NMP, Crystal o API
78
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ZAMBRANO, A., 2004 Efecto de la inoculación de Hongos de Micorriza Arbuscular y Bacterias promotoras de crecimiento vegetal en Gmelina arbórea. Trabajo de grado Microbiología Agrícola y Veterinaria PUJ. Facultad de ciencias. Bogotá 122 p
86
ANEXOS Anexo 1 Resultados de los halos de inhibición del extracto de pétalos de rosa a diferentes concentraciones y los microorganismos evaluados bajo la técnica Kirby Bauer
Microorganismo evaluado
[] del extracto de pétalos de
rosa (Triplicado) g/L
Tratamiento tamaño mm de zona de
inhibición
Control positivo
(penicilina)
Control negativo (Agua
destilada)
150 10 mm 9mm 10mm 12 mm
0 mm E.coli
200 10 mm 8 mm 9 mm 14 mm
0 mm
500 14mm 15 mm 14 mm 13 mm
0 mm
150 10 mm 9 mm 10 mm 11 mm
0 mm Salmonella enteritidis 200 0 mm 1 mm 3 mm 16 mm
0 mm
500 15 mm 16 mm 15 mm 14 mm
0 mm
150 10mm 8 mm 9 mm 40 mm
0 mm
Shigella sp 200 0 mm 2 mm 1 mm 25 mm
0 mm
500 10 mm 9 mm 8 mm
30 mm 0 mm
87
Anexo 2 Análisis estadístico técnica macerado longitud raíz (cm) (T0=testigo;T1=2.5
Anexo 12 Análisis estadístico para el recuento de microorganismos en Agar SS en el
proceso de elaboración de los abonos tipo Bokashi tratamiento 1 Bokashi tradicional y
tratamiento 2 Bokashi pétalos de rosa.
Tratamiento Valores de medias Agrupamiento Duncan
2 20,167 A
1 15 A
Anexo 13 Recuento de enterobacterias en agar SS durante el tiempo de degradación de
abonos tipo Bokashi
Duncan Media Día
A 50,25 5
A 2,917 10
A 0,333 15
Anexo 14
RECUENTO DE HONGOS EN AGAR SMRS1 DURANTE LA
ELABORACION DE LOS ABONOS TIPO BOKASHI Agar
SMRS 1
Bokashi Pétalos
Bokashi Tradicional
Promedio Desviación
estándar Promedio Desviación
estándar dia 5 30x104ufc/g 0,57 40x104ufc/g 2
dia 10 60x104ufc/g 2 15x105ufc/g 5 dia 15 30x104 ufc/g 60x104 ufc/g 1 2,5
92
Anexo 15 Análisis estadístico para el recuento de hongos en agar SMRS1 para hongos
en el proceso de elaboración de los abonos tipo Bokashi
Tratamiento Valores de medias Agrupamiento Duncan
2 6,222 A
1 2,833 B
Duncan Media Día
A 7,25 10
B 3,917 5
B 2,417 15
Anexo 16
RECUENTO DE BACTERIAS EN AGAR SMRS1 DURANTE LA
ELABORACION DE LOS ABONOS TIPO BOKASHI
Agar smrs 1
Bokashi Pétalos
Bokashi Tradicional
Promedio Desviación
estándar Promedio Desviación
estándar dia 5 31x106ufc/g 0,57 32x105ufc/g 0.57
dia 10 18x105ufc/g 2 12x105ufc/g 4.5 dia 15 160x106 ufc/g 25x105 ufc/g 1 5
Anexo 17 Análisis estadístico para el recuento de microorganismos en agar SMRS1 para
bacteria en el proceso de elaboración de los abonos tipo Bokashi
Tratamiento Valores de medias Agrupamiento Duncan
1 107,06 A
2 23,33 B
93
Duncan Media Día
A 114,92 5
BA 67,58 15
B 13,08 10
Anexo 18
RECUENTO DE BACTERIAS EN AGAR ALMIDON DURANTE LA
ELABORACION DE LOS ABONOS TIPO BOKASHI Agar
almidón
Bokashi Pétalos
Bokashi Tradicional
Promedio Desviación
estándar Promedio
Desviación
estándar dia 5 30x104ufc/g 0,57 40x104ufc/g 0,57
dia 10 40x104ufc/g 2 30x104ufc/g 4,5 dia 15 50x104 ufc/g 20x104ufc/g 1 5
Anexo 19 Análisis estadístico para el recuento de microorganismos en agar almidón
para bacteria en el proceso de elaboración de los abonos tipo Bokashi
Tratamiento Valores de medias Agrupamiento Duncan
Bokashi pétalos 3,7222 A
Bokashi tradicional 3,2778 A
Duncan Media Dia
A 3,5833 5
A 3,5833 10
A 3,3333 15
94
Anexo 20
RECUENTO DE POBLACIÓN MICROBIANA EN AGAR NUTRITIVO BAJO COBERTURAS PLÁSTICAS
Agar nutritivo Promedio Desviación estandar Plástico negro
cama 1 50x106 33 cama 2 40x106 94,5 cama 3 40x106 42,5 cama 4 34x106 6
Plástico transparente cama 1 60x106 6 cama 2 64x106 7 cama 3 50x106 7 cama 4 31x106 53
Sin plástico cama 1 14x106 103,7 cama 2 18x106 45,5 cama 3 27x106 11 cama 4 34x106 12
Anexo 21 Análisis estadístico recuento de población microbiana en agar nutritivo de
acuerdo a las camas
Tratamiento Valores de medias Agrupamiento Duncan
Cama 1:Bokashi tradicional 372,81 A
Cama 2:Bokashi pétalos 304,12 B A
Cama 3:Bokashi tradicional 291,47 BA
Cama 4:Bokashi pétalos 271,79
B
95
Anexo 22 RECUENTO DE HONGOS EN AGAR SMRS1 BAJO COBERTURAS PLÁSTICAS
Agar Smrs1 hongos Promedio Desviación estándar Plástico negro
cama 1 30x104 1 cama 2 40x104 3,51 cama 3 20x104 0,57 cama 4 50x104 3
Plástico transparente cama 1 90x104 3 cama 2 20x104 0,57 cama 3 20x104 1 cama 4 10x104 0,57
Sin plástico cama 1 10x104 0,57 cama 2 20x104 2 cama 3 20x104 1 cama 4 10x104 1
Anexo 23 Análisis estadístico Análisis estadístico recuento en agar SMRS1 (hongos) de
acuerdo a la cobertura y Cama
Tratamiento Valores de medias Agrupamiento Duncan
Cama 1:Bokashi tradicional 3.0000 A
Cama 2:Bokashi pétalos 1.4118 B
Cama 3:Bokashi tradicional 1.1765 B
Cama 4:Bokashi pétalos 1.2941 B
96
Anexo 24
RECUENTO DE BACTERIAS EN AGAR SMRS1 BAJO COBERTURAS PLÁSTICAS
Agar smrs1 bacterias Promedio Desviación estandar Plástico negro
30x104 1 cama 1 40x104 0 cama 2 20x104 1.52 cama 3 50x104cama 4 3
Plástico transparente 70x104 2 cama 1 20x104 1.52 cama 2 20x104 1.52 cama 3 10x104cama 4 0.57 Sin plástico 10x104 0.57 cama 1 20x104 1.52 cama 2 20x104 1.52 cama 3 10x104cama 4 0.57
Anexo 25 Recuento de población microbiana en agar SMRS1 de bacterias
Tratamiento Valores de medias Agrupamiento Duncan Cama 1:Bokashi tradicional 2.6875 A Cama 2:Bokashi pétalos 1.8824 A Cama 3:Bokashi tradicional 1.1176 A Cama 4:Bokashi pétalos 2.0000 A
97
Anexo 26
RECUENTO DE BACTERIAS EN AGAR ALMIDÓN BAJO COBERTURAS PLÁSTICAS
Agar Almidón Promedio Desviación estándar Plástico negro
40x104 0 cama 1 10x105 6 cama 2 40x104 3 cama 3 57x104cama 4 0,57
Plástico transparente 40x104 0 cama 1 57x104 1,52 cama 2 70x104 2 cama 3 70x104cama 4 1,15 Sin plástico 10x104 0,57 cama 1 20x104 1,52 cama 2 20x104 1,52 cama 3 10x104cama 4 1,15
Anexo 27 Recuento de población microbiana en agar Almidón
Tratamiento Valores de medias Agrupamiento Duncan
Cama 1:Bokashi tradicional 2,6875
Cama 2:Bokashi pétalos 4,5882 A
Cama 3:Bokashi tradicional 3,1176 A
Cama 4:Bokashi pétalos 4,1176 A
98
Anexo 28
RECUENTO DE BACTERIAS EN AGAR SS BAJO COBERTURAS PLÁSTICAS
Agar SS Promedio Desviación estándar Plástico negro
11x105 19,05 cama 1 10x105 0,57 cama 2 40x104 6,92 cama 3
cama 4 0 0 Plástico transparente
10x104 0,57 cama 1 cama 2 0 0 cama 3 0 0 cama 4 0 0
Sin plástico cama 1 0 0 cama 2 0 0 cama 3 0 0 cama 4 0 0
Anexo 29 Análisis estadístico recuento de población microbiana en agar S.S de acuerdo
a las camas
Tratamiento Valores de medias Agrupamiento Duncan
Cama 1:Bokashi tradicional 2,375 A
Cama 2:Bokashi pétalos 0,118 A
Cama 3:Bokashi tradicional 0,882 A
Cama 4:Bokashi pétalos 0,529 A
99
Anexo 30 Análisis estadístico del peso seco de las albahacas bajo cobertura plástica sin
variable cama
Tratamiento Valores de medias Agrupamiento Duncan
1: Bokashi tradicional plástico negro 20.3000 A
2: Bokashi tradicional plástico transparente 15.5042 B
3: Bokashi tradicional sin plástico; 15.4625 B
4:Bokashi pétalos plástico negro 12.7479 C
5: Bokashi petalos plástico blanco 10.2917 D
6: Bokashi pétalos sin plástico 8.5383 D
Anexo 31 Análisis estadístico del peso seco de las albahacas bajo cobertura plástica
con variable cama
Tratamiento Valores de medias Agrupamiento Duncan
Cama 1:Bokashi tradicional 13.9250 A
Cama 2:Bokashi pétalos 13.1639 A
Cama 3:Bokashi tradicional 14.1111 A
Cama 4:Bokashi pétalos 14.0297 A
Anexo 32
PESO SECO (g) DE CULTIVO DE ALBAHACA EN BOKASHI TRADICIONAL Tratamiento Peso seco Desv estándar
Bokashi tradicional plástico negro 15,504 2,53 Bokashi tradicional plástico trasparente 12,576 2,42 Bokashi tradicional sin plástico 10,304 3,15
Anexo 33
PESO SECO (g) DE CULTIVO DE ALBHAHACA EN BOKASHI PÉTALOS Tratamiento Peso seco Desv estándar
Duncan Tratamiento Tratamiento1: BPPNC2 :bokashi pétalos plástico negro cama dos 21.933 CB Tratamiento 2 BPPNC4 :bokashi pétalos plástico negro cama cuatro 26.333 A Tratamiento3: BPPTC2 bokashi pétalos plástico transparente cama dos 22.633 B Tratamiento 4 BPSPC2 bokashi pétalos sin plástico cama dos 19.667 CD Tratamiento 5: BPSPC4 bokashi pétalos sin plástico cama cuatro, Tratamiento 5 18.444 D Tratamiento 6: BTPNC1 bokashi tradicional plástico negro cama uno 18.444 E Tratamiento 7 BTPNC3 bokashi tradicional plástico negro cama tres 25.444 A Tratamiento 8: BTPTC1 bokashi tradicional plástico transparente cama uno), 15.933 E Tratamiento 9:BTPTC3 bokashi tradicional plástico transparente cama tres 25.000 A Tratamiento 10: BTSPC1 (bokashi tradicional sin plástico cama uno 14.688 E Tratamiento 11: BTSPC3 (bokashi tradicional sin plástico cama tres)
21.647 CB Anexo 35
ALTURA DE CULTIVO DE ALBAHACA (cm) EN BOKASHI TRADICIONAL BAJO COBERTURAS PLÁSTICAS
Tratamiento Altura (cm) Desv estándar Bokashi tradicional plástico negro 20,25 4,99 Bokashi tradicional plástico trasparente 20,333 5,88 Bokashi tradicional sin plástico 17,375 6,25
101
Anexo 36
Altura del cultivo de albahaca (cm) en bokashi pétalos bajo coberturas plásticas Tratamiento Altura (cm) Desv estándar
Bokashi pétalos plástico negro 24,0416667 3,38 Bokashi pétalos plástico trasparente 22,75 3,55 Bokashi pétalos sin plástico 19,625 2,20 Anexo 37 MEDIOS DE CULTIVO
MEDIO SMRS1 (LÓPEZ et al.,, 2006)
Glucosa 10 g/l
Ca 3(PO4)2 5 g/l
(NH4)2SO4 0.5 g/l
KCL 0.2 g/l
Mg SO4.7H2O 0.3g/l
MnSO4 0.004 g/l
FeSO4 0.002 g/l
NaCl 20 g/l
Extracto levadura 0.5 g/l
Purpura de Bromocresol 0.1g/l
Agar-agar 15 g/l
AGAR LECHE (MERCK 1994)
Leche descremada suplementada con calcio al 1% (p/v)
Glucosa 1.0 g/l
CaCl 0.5 g/l
(NH4)2SO4 1 g/l
102
Extracto de levadura 1 g/l
Fosfato monobásico de sodio 0.5 g/l
Fosfato dibásico de sodio 0.5 g/l
Agar-agar 15 g/l
pH 7
AGAR ALMIDON (MERCK 1994)
Almidón hidrosoluble 1%(p/v)
Cloruro de calcio 0.1 g/l
Sulfato de amonio 1 g/l
Extracto de levadura 2.5 g/l
Peptona 2.5 g/l
NaH2PO4 0.1 g/l
Agar-agar 15 g/l
pH 7.0
Se disuelve todos los componentes lentamente y por ultimo se adiciona el almidón y se
calienta lentamente con agitación constante, esterilizar por 7 minutos a 7 libras de