i EKSTRAK ENZIM BROMELIN DARI BUAH NANAS (Ananas sativus Schult.) DAN PEMANFAATANNYA PADA ISOLASI DNA Skripsi Disusun sebagai salah satu syarat Untuk memperoleh gelar Sarjana Sains Biologi Oleh Siti Maryam 4450405008 JURUSAN BIOLOGI FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS NEGERI SEMARANG 2009
53
Embed
EKSTRAK ENZIM BROMELIN DARI BUAH NANAS …lib.unnes.ac.id/2460/1/4628.pdf · sangat berguna dalam memperbaiki penulisan laporan penelitian skripsi ini, 4. Bapak, Ibu, ... Fraksinasi
This document is posted to help you gain knowledge. Please leave a comment to let me know what you think about it! Share it to your friends and learn new things together.
Transcript
i
EKSTRAK ENZIM BROMELINDARI BUAH NANAS (Ananas sativus Schult.)
DAN PEMANFAATANNYA PADA ISOLASI DNA
SkripsiDisusun sebagai salah satu syarat
Untuk memperoleh gelar Sarjana Sains Biologi
OlehSiti Maryam4450405008
JURUSAN BIOLOGIFAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS NEGERI SEMARANG2009
ii
PERNYATAAN KEASLIAN SKRIPSI
Saya menyatakan dengan sebenar-benarnya bahwa skripsi saya yang berjudul”Ekstrak Enzim Bromelin dari Buah Nanas (Ananas sativus Schult.) danPemanfaatannya pada Isolasi DNA” disusun berdasarkan hasil penelitian sayadengan arahan dosen pembimbing. Sumber informasi atau kutipan yang berasal ataudikutip dari karya yang diterbitkan telah disebutkan dalam teks dan dicantumkandalam Daftar Pustaka di bagian akhir skripsi ini. Skripsi ini belum pernah diajukanuntuk memperoleh gelar dalam program sejenis di perguruan tinggi manapun.
Semarang, Juli 2009
Siti Maryam4450405008
iii
PENGESAHAN
Skripsi dengan judul :
Ekstrak Enzim Bromelin dari Buah Nanas (Ananas sativus Schult.) danPemanfaatannya pada Isolasi DNA
telah dipertahankan di hadapan sidang Panitia Ujian Skripsi Fakultas Matematikadan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Negeri Semarang pada tanggal 3 Juli 2009
Panitia Ujian
Ketua
Dr. Kasmadi Imam S., M.S.NIP. 130781011
Sekretaris
Dra. Aditya Marianti, M.SiNIP. 132046851
Penguji Utama
Dr. drh. R. Susanti, M.PNIP. 132 170 598
Anggota Penguji/Pembimbing I
Ir. Tuti Widianti, M. BiomedNIP. 130 781 009
Anggota Penguji/Pembimbing II
Dra. Retno Sri Iswari, S.UNIP. 130 781 007
iv
MOTTO DAN PERSEMBAHAN
" .... Maha Suci Engkau, tidak ada yang kami ketahui selain dari apa yang telah
Engkau ajarkan kepada kami; sesungguhnya Engkaulah Yang Maha Mengetahui
lagi Maha Bijaksana.”
Al baqoroh 32
”... Mimpi adalah kunci untuk kita menaklukkan dunia,
berlarilah tanpa lelah sampai engkau meraihnya ...”
Proudly dedicated to :
My beloved parents, Mr. Anwari and Mrs. Waisah
who sacrificed their lives for my study
All my friend in Departement Of Biology
who always give their support
& especially to mas Yo’
Who always give his love, affection & unlimited support for me
v
ABSTRAK
Maryam, Siti. 2009. Ekstrak Enzim Bromelin dari Buah Nanas (Ananas sativusSchult.) dan Pemanfaatannya pada Isolasi DNA. Skripsi, Jurusan Biologi FMIPAUniversitas Negeri Semarang. Ir. Tuti Widianti M. Biomed dan Dra. Retno Sri IswariS.U.
Metode Kitchen preparation termodifikasi dikembangkan menggunakanekstrak enzim bromelin yang langsung diisolasi dari buah nanas untuk menggantikanjus nanas sumber enzim protease. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitasenzim bromelin dari bagian daging dan batang buah nanas dan pemanfaatannyauntuk isolasi DNA dengan kuantitas dan kualitas yang baik.
Ekstrak enzim bromelin dibuat dengan mengambil cairan buah nanas yangdicampur dengan buffer fosfat kemudian disentrifugasi pada suhu dingin dan diukuraktivitas enzimnya berdasar kenaikan absorbansi hasil reaksi enzim selama 20 menitpada panjang gelombang 280 nm. Isolasi DNA dilakukan dengan menggerus daunpisang bersama dengan garam dapur dan akuades dingin kemudian diinkubasi padasuhu 60˚C. Ditambahkan larutan detergen 25%, dikocok dan saring. Selanjutnyaditambahkan ekstrak enzim bromelin sesuai perlakuan yaitu AI, AII, AIII, BI, BII,BIII, masing-masing diulang dua kali dan diinkubasi pada 40˚C. Untuk presipitasitambahkan etanol absolut dingin. Jumlah (konsentrasi) molekul DNA diukur denganspektrofotometer pada panjang gelombang 260 nm dan kemurnian DNA ditentukanberdasar tingkat kontaminasi protein dalam larutan yaitu dengan membagi nilaiOD260 dengan OD280.
Volume crude dari batang nanas lebih besar dari bagian daging buahnya,sedangkan aktivitas enzim bromelin bagian batang buah adalah 0,274 U/ml danaktivitas pada bagian daging buahnya sebesar 0,337 U/ml. Pada isolasi DNA metodeKitchen preparation termodifikasi sudah mendapatkan DNA dengan konsentrasi dantingkat kemurnian yang cukup baik yaitu berturut-turut 0,315 μg /ml dan 1,67.
Pada bagian daging buah nanas menunjukkan aktivitas enzim bromelin lebihtinggi dibanding dengan bagian batang dan DNA dengan kuantitas dan kualitas yangbaik didapat dengan penambahan ekstrak enzim bromelin dari nanas yangmempunyai aktivitas total lebih besar dari 0,775 Unit. Serta disarankan untukmenggunakan ekstrak enzim bromelin dari buah nanas yang mempunyai aktivitastotal lebih dari 0,775 Unit sehingga dapat diperoleh DNA dengan kuantitas dankualitas yang lebih baik.
Kata kunci : Bromelin, Nanas, DNA
vi
KATA PENGANTAR
Alhamdulillahi robbil alamin puji syukur penulis panjatkan ke hadirat Allah
SWT yang telah melimpahkan rahmat dan hidayahNya sehingga penulis dapat
menyelesaikan penyusunan skripsi yang berjudul Ekstrak Enzim Bromelin dari Buah
Nanas (Ananas sativus Schult.) dan Pemanfaatannya pada Isolasi DNA.
Selama penyusunan skripsi ini tentunya penulis tidak sedikit menghadapi
rintangan dari awal hingga akhir. Berkat bimbingan, bantuan dan dukungan serta
kerjasama dari berbagai pihak maka segala rintangan tersebut dapat penulis atasi.
Untuk itu, penulis menyampaikan terima kasih kepada:
1. Ketua jurusan Biologi FMIPA Universitas Negeri Semarang,
2. Ir. Tuti Widianti, M.Biomed dan Dra. Retno Sri Iswari, S.U selaku dosen
pembimbing atas kesabaran, bimbingan dan arahan yang telah diberikan kepada
penulis, sehingga penulis dapat menyelesaikan penyusunan laporan penelitian
skripsi ini,
3. Dr. Drh. R. Susanti, M.P. selaku dosen penguji atas saran dan masukan yang
sangat berguna dalam memperbaiki penulisan laporan penelitian skripsi ini,
4. Bapak, Ibu, keluarga yang telah banyak memberikan kasih sayang, doa dan
dukungan yang telah diberikan,
5. Yonata Batista, atas keikhlasan dan kasih sayang yang dicurahkan,
6. Sahabat-sahabat terbaikku Bio ’05 yang telah memberikan semangat dan
pengalaman terindah untukku,
7. Semua pihak yang terlibat dalam penyusunan skripsi ini, baik secara material
maupun spiritual.
Demikian penulisan skripsi ini, semoga skripsi ini bermanfaat bagi semua
pihak yang berkepentingan dan pembaca pada umumnya.
Semarang, Juli 2009
Penulis
vii
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL........................................................................................ iPERNYATAAN KEASLIAN SKRIPSI.......................................................... iiPENGESAHAN ............................................................................................... iiiMOTTO DAN PERSEMBAHAN ................................................................... ivABSTRAK ....................................................................................................... vKATA PENGANTAR ..................................................................................... viDAFTAR ISI.................................................................................................... viiDAFTAR TABEL............................................................................................ viiiDAFTAR GAMBAR ....................................................................................... ixDAFTAR LAMPIRAN.................................................................................... x
BAB I PENDAHULUANA. Latar Belakang ......................................................................... 1B. Permasalahan ........................................................................... 3C. Penegasan Istilah...................................................................... 3D. Tujuan Penelitian ..................................................................... 3E. Manfaat Penelitian ................................................................... 4
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ................................................................A. Enzim Bromelin ....................................................................... 5B. DNA ......................................................................................... 7C. Isolasi DNA.............................................................................. 10
BAB III METODE PENELITIANA. Lokasi dan Waktu Penelitian ................................................... 15B. Subyek dan Obyek Penelitian .................................................. 15C. Variabel Penelitian................................................................... 15D. Rancangan Penelitian............................................................... 15E. Alat dan Bahan Penelitian........................................................ 16F. Prosedur Penelitian .................................................................. 17G. Metode Pengumpulan Data...................................................... 20H. Metode Analisis Data............................................................... 21
BAB IV HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASANA. Hasil Penelitian ........................................................................ 22B. Pembahasan.............................................................................. 24
BAB V SIMPULAN DAN SARANA. Simpulan .................................................................................. 32B. Saran......................................................................................... 32
DAFTAR PUSTAKA ...................................................................................... 33LAMPIRAN-LAMPIRAN............................................................................... 36
viii
DAFTAR TABEL
Halaman
1 Matriks sampel penelitian.................................................................... 16
2 Alat penelitian...................................................................................... 16
3 Bahan penelitian .................................................................................. 17
4 Konsentrasi dan tingkat kemurnian DNA genom pisang denganisolasi DNA metode Kitchen Preparation termodifikasi .................... 23
5 Perbedaan teknik isolasi metode standar dan metode Kitchenpreparation .......................................................................................... 30
ix
DAFTAR GAMBAR
Halaman
1 Struktur rangkaian molekul DNA heliks ganda ..................................... 8
2 Struktur nukleosom yang menyusun solenoid........................................ 9
3 Struktur solenoid pembentuk matriks kromosom .................................. 10
4 Cairan batang (A/ lebih keruh) dan daging buah nanas (B/ bening)setelah dilakukan penyaringan................................................................ 22
5 Elektroforegram DNA genom daun pisang ............................................ 24
x
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
1 Komposisi dan cara pembuatan beberapa larutan yang digunakandalam penelitian..................................................................................... 36
2 Hasil Analisis Uji aktivitas dengan metode Spektofotometri denganUV mini Simadzu Spektrofometer ........................................................ 37
3 Perhitungan Aktivitas Enzim Bromelin dari buah nanas....................... 38
4 Hasil Spektofotometri dengan UV mini Simadzu Spektrofometer ....... 39
5 Konsentrasi DNA genom daun pisang hasil isolasi DNA metodeKitchen Preparation termodifikasi ........................................................ 40
6 Kemurnian DNA genom daun pisang hasil isolasi DNA metodeKitchen Preparation termodifikasi ........................................................ 41
7 Beberapa alat dan bahan yang digunakan pada Uji Aktivitas enzimbromelin................................................................................................. 42
8 Beberapa alat dan bahan yang digunakan pada Isolasi DNA metodeKitchen Preparation termodifikasi ........................................................ 43
9 Surat usulan dan penetapan dosen pembimbing.................................... 44
10 Surat permohonan ijin penelitian di Laboratorium Biologi FMIPAUniversitas Negeri Semarang ................................................................ 45
11 Surat permohonan ijin penelitian di Laboratorium Kimia FMIPAUniversitas Negeri Semarang ................................................................ 46
1
BAB IPENDAHULUAN
A. Latar Belakang Masalah
Sejak ditemukan berbagai macam teknologi DNA dalam dua puluh tahun
terakhir, para ahli sangat optimis akan dapat menguak berbagai misteri dibalik
kehidupan semua makhluk hidup. Hal ini disebabkan molekul DNA, yang
merupakan unit terkecil di dalam sel dan merupakan komponen penentu
kehidupan dengan berbagai keragamannya, dapat diisolasi, dimanipulasi serta
dipindahkan dari satu organisme ke organisme lain (Muladno 2002: 103).
Penggunaan teknik isolasi DNA dalam berbagai bidang semakin meluas
sejalan dengan kemajuan bioteknologi. Bioteknologi modern diartikan sebagai
teknologi rekayasa genetika yang bermain pada level molekuler khususnya DNA
(Muladno 2002: 52). Isolasi DNA merupakan teknik awal untuk berbagai tujuan
seperti tanaman transgenik, DNA rekombinan, kloning DNA, proyek genom
manusia, deteksi penyakit keturunan, pemetaan sidik jari forensik, penentuan
jenis kelamin dan lain-lain. Ekstraksi DNA dari organisme eukariot dilakukan
melalui penghancuran dinding sel, penghilangan protein dan RNA, pengendapan
DNA dan pemanenan DNA. Secara kimiawi, penghancuran sel dilakukan dengan
memanfaatkan senyawa kimia yang berfungsi merusak membran sel dan enzim
protease yang digunakan untuk menghancurkan protein serta membersihkan
kotoran akibat lisis sel (Sulandari dan Zein 2003: 47-48).
Pada isolasi DNA dibutuhkan alat-alat yang canggih dan bahan-bahan
yang harganya cukup mahal seperti etilendiamin tetraaasetat (EDTA), sodium
4 Purifikasi Enzim Proteinase K Ekstrak enzim bromelindari buah nanas
Isolasi DNA metode Kitchen preparation yang dimodifikasi dengan
menggantikan jus nanas dengan ekstrak enzim bromelin dari buah nanas
sudah mendapatkan DNA dengan konsentrasi dan kemurnian yang lebih baik
daripada isolasi DNA yang dilakukan Sumiyati (2009). Pada penambahan 2,3
ml ekstrak enzim bromelin dari bagian daging buah dengan aktivitas 0,337
U/ml dan aktivitas total 0,775 Unit menghasilkan DNA dengan konsentrasi
0,313 μg/ml dan tingkat kemurnian 1,67; sedangkan pada penambahan 6,9
ml ekstrak enzim bromelin dari bagian batang buahnya dengan aktivitas
0,274 U/ml dan aktivitas total 1,8906 Unit menghasilkan DNA dengan
konsentrasi 0,315 μg/ml dan tingkat kemurnian 1,46. Konsentrasi dan tingkat
kemurnian DNA yang diperoleh masih dibawah hasil isolasi DNA metode
standar yang biasa dilakukan sehingga belum dapat digunakan untuk analisis
31
molekuler lebih lanjut, namun masih dapat digunakan untuk praktikum di
sekolah-sekolah menengah umum yang tujuannya hanya akan mengetahui
visualisasi DNA.
22
BAB VSIMPULAN DAN SARAN
I. Simpulan
Dari hasil penelitian dan pembahasan dapat diambil simpulan :
1. Pada bagian daging buah nanas menunjukkan aktivitas enzim bromelin lebih
tinggi dibanding dengan bagian batang.
2. DNA dengan kuantitas dan kualitas yang baik didapat dengan penambahan
ekstrak enzim bromelin dari nanas yang mempunyai aktivitas total lebih besar
dari 0,775 Unit.
II. Saran
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan maka disarankan:
1. Menggunakan ekstrak enzim bromelin dari buah nanas yang mempunyai
aktivitas total lebih dari 0,775 Unit sehingga dapat diperoleh DNA dengan
kuantitas dan kualitas yang lebih baik.
2. Perlu dilakukan pemurnian ekstrak enzim bromelin agar didapatkan aktivitas
enzim yang lebih tinggi sehingga fungsinya lebih maksimal pada isolasi
DNA.
32
33
DAFTAR PUSTAKA
Abcam plc. 2009. Proteinase K protein (Active) (ab51501) On line atwww.abcam.com/index.html?pageconfig=catalog_byproducttype&intproducttypeid=1 [accessed 20 April 2008]
A.G.Scientific. 2009. Proteinase K [P1265]. On line atwww.agscintific.com/group/uq2fxfnfjgy30z23 [accessed 20 April 2008]
Aldrich, Inc. 2009. Proteinase K. On line at www.sigmaaldrich.com/life-science/metabolomics/enzyme-explorer/analytical-enzymes/protease-k.html[accessed 20 April 2008]
Anonim. 2000. 20 DNA Extraction. On line atwww.learn.genetics.utah.edu/contens/lab/extraction-dna.html [Accessed 12 Mei2009]
Bioshop Canada Inc . 2009. Sodium Chlorida. On line at www.bioshop-canada-inc.com/showroom/product-list/catalog1.html [Accessed 20 April 2009]
Carr SM. 2007. Histone Protein Structure. On line atwww.mun.ca/biology/scarr/MGA2-02-45.jpg [accessed 23 September 2008]
Fatchiyah & EL Arumingtyas. 2006. Kromosom, gen,DNA, sinthesis protein danregulasi. On line at http://inherent.brawijaya.ac.id/biomol/materi/ebook2.pdf[accessed 4 Juli 2009]
Geno Technology Inc. USA. 2009. Proteinase K. On line atwww.gbiosciencest.com/protease-k.aspx [accessed 20 April 2008]
Hideko I, T Noriko, O Shigeyuki, & T Setsuzo. 1979. Complete Structure of theCarbohydrate Moiety of Stem Bromelain. The Journal Of Biological ChemistryVol. 254 (21): 10715-10719
Horizon C., Rustikawati & Eliyanti. Penentuan Protokol yang Tepat untukMenyiapkan DNA Genom Cabai (Capsicum sp.) Jurnal Akta Agrosia vol. 6. no.2hlm 38-43 Jul-Des 2003)
Indonesia Detergent. 2009. Sabun dan Detergen. On line athttp://www.deterjenindonesia.com/?page_id=480 [accessed 3 Juli 2009].
33
34
Isnati AA. 2005. Amplifikasi Gen ND3 dari Mitokondria Empat Jenis Burung FamiliPlocidae dengan Teknik Polimerase Chain Reaction (PCR) (Skripsi) Semarang :Universitas Negeri Semarang.
Iswari RS & A Yuniastuti. 2006. Biokimia. Yogyakarta: Graha Ilmu.
Iqbal M. 2007. Teknik Isolasi DNA. On line athttp://www.mochammadiqbal.wordpress.com/2007/04/15/5/)[accessed 4 April2008].
Kurniawan K. 2008. Produksi, Identifikasi dan Karakterisasi Protease Ekstrasel dariBacillus subtilis M 10 (Skripsi) Semarang : Universitas Negeri Semarang.
Kuswanto KR. 1988. Isolasi dan Pengujian Aktivitas Enzim. Yogyakarta: GadjahMada University Press.
Muladno. 2002. Seputar Teknologi Rekayasa Genetika. Bogor: Pustaka WirausahaMuda.
Naiola E & N Widhyastuti. 2007. Semi Purifikasi dan Karakterisasi Enzim ProteaseBacillus sp. Berk. Penelitian Hayati (13): 51-56
Rice G. 2009. DNA Extraction. On line atwww.serc.carleton.edu/mikrobelife/researc_method/extraction-dna/index.html[accessed 5 Juli 2009]
Robinson R. 2003. Purification of DNA. On line atwww.hightbeam.com/doc/1G234046500054.html[accessed 12 Mei 2009]
Suharsono, A Tjahjoleksono, M Jusuf, dan A Hartana. 2002. Struktur dan EkspresiGen. On line at http://www.fp.ipb.ac.id/biotek/wp-content/uploads/2009/02/struktur-dan-ekspresi-gen.pdf [accessed 6 Juli 2009]
Sumiyati. 2009. Modifikasi Metode Isolasi DNA Pisang dengan Teknik KitchenPreparation (Skripsi). Semarang : Universitas Negeri Semarang.
Supartono. 2004. Karakterisasi Enzim Protease Netral dari Buah Nenas Segar. JurnalMIPA Universitas Negeri Semarang 27 (2): 134-142.
Suryo. 2005. Genetika. Yogyakarta : Gadjah Mada University Press.
35
Thermo Fisher Scientific Inc. 2009. Proteinase K Ideal for isolating high qualitynucleic acids. On line at www.piercenet.com/product/browse.cfm?fldid/020407[accessed 20 April 2008]
Universitas Bangka Belitung [UBB]. 2009. Macam, Jenis, Manfaat dan BahayaGaram . On line at www.ubb.ac.id/menulengkap.php [Accessed 20 April 2009]
Wharton cw. 1974. The Structure and Mechanism of Stem Bromelain (evaluation ofthe homogeneity of purified stem bromelain,determination of the molecularweight and kinetic analysis of the bromelain-catalysed hydrolysis of n-benzyloxycarbonyll-phenylalanyl-l-serine methyl ester). Biochem J. 143: 575-586
William VG & MS Hargrove. 2002. Using Bromelain in Pineapple Juice toInvestigate Enzyme Function. On line at http://www.ableweb.org/volumes/vol-23/16-glider.pdf [accessed 5 Juli 2009]
Wulandari N. 2008. Keanekaragaman Genetika Pisang Bergenom B BerdasarkanAnalisis Penanda RAPD (Skripsi) Semarang : Universitas Negeri Semarang.
Yasid E & L Nursanti. 2005. Penuntun Praktikum Biokimia Untuk MahasiswaAnalis. Yogyakarta : Penerbit Andi
36
Lampiran 1 Komposisi dan cara pembuatan beberapa larutan yang digunakan dalampenelitian
1. Buffer Fosfat 0,1 M pH 7
NaH2PO4.H2O (Larutan A)............................................................... 1,56 gr
Na2HPO4.2H2O (Larutan B)............................................................. 1,779 gr
Larutkan masing-masing dalam 100 ml akuades. Untuk mendapatkan larutanbuffer fosfat sebanyak 100 ml dengan pH 7 maka diambil 38,9 ml larutan Aditambahkan 61,1 ml larutan B.
2. Buffer Tris HCl 1 M pH 8
Tris base ............................................................................................ 2,42 gr
Akuades............................................................................................. 10 ml
Sesuaikan pH dengan menambahkan HCl dan akuades sampai volumenya 20 ml
Untuk diencerkan menjadi 0,05 M, maka diambil larutan Tris HCl sebanyak 5 mldilarutkan sampai volumenya 100 ml.
3. Larutan Hammerstain Kasein 1% dalam buffer Tris HCl
Hammerstain kasein ......................................................................... 1 gr
Buffer Tris HCl ................................................................................. 100 ml
4. Larutan TCA (Tri chloro asetat) 10%
TCA Acid .......................................................................................... 3 gr
Akuades............................................................................................. 30 ml
5. Larutan EDTA 0,5 M pH 8
EDTA ................................................................................................ 3,722 gr
Akuades............................................................................................. 10 ml
Sesuaikan pH dengan menambahkan pelet NaOH dan akuades sampaivolumenya 20 ml.
6. Larutan Tris-EDTA
Larutan 0,5 M EDTA pH 8 ............................................................... 1 ml
Larutan 1 M Tris HCl........................................................................ 5 ml
Add Akuades..................................................................................... 250 ml
37
Lampiran 2 Hasil analisis uji aktivitas enzim dengan metode Spektofotometridengan UV mini Simadzu Spektrofometer
LABORATORIUM JURUSAN KIMIAFAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAMUNIVERSITAS NEGERI SEMARANGGd. D8, Kampus Sekaran, Gunungpati, Semarang 50229
HASIL PENGUKURAN ABSORBANSI UJI AKTIVITAS ENZIMMENGGUNAKAN UV-VIS SPEKTROFOTOMETER
*Keterangan :A : ekstrak enzim bromelin dari daging buah nanasB : ekstrak enzim bromelin dari daging buah nanasK : ekstrak enzim bromelin yang telah dinonaktifkan dengan cara dididihkan1, 2, 3 : Ulangan ekstraksi
Semarang, 3 Juli 2009Kepala Laboratorium Jurusan Kimia
Agung Tri Prasetya, M.SiNIP. 132084943
38
Lampiran 3 Perhitungan Aktivitas Enzim Bromelin dari buah nanas
Berdasarkan data hasil pengukuran absorbansi uji aktivitas enzim menggunakan UV-Vis Spektrofotometer (Simadzu UV-mini 1240), rerata absorbansi dapat dilihat padatabel berikut :
*Keterangan :A : Penambahan Ekstrak enzim bromelin dari daging buah nanasB : Penambahan Ekstrak enzim bromelin dari batang buah nanasFP : 20 kali dengan TE buffer
Semarang, 3 Juli 2009Kepala Laboratorium Jurusan Kimia
Agung Tri Prasetya, M.SiNIP. 132084943
40
Lampiran 5 Perhitungan konsentrasi DNA genom daun pisang hasil isolasi DNAmetode Kitchen Preparation termodifikasi
Berdasarkan data hasil pengukuran absorbansi molekul DNA menggunakan Uv-visSpektrofotometer (Simadzu UV-mini 1240), konsentrasi DNA dapat dihitung denganmenggunakan rumus:
1. Konsentrasi DNA dengan penambahan volume 2,3 ml ekstrak enzim bromelin
a. AIAII = 0, 137 x 50 x 20-1
= 0, 343 µg/ml rerata AI = 0, 313 µg/ml
AIII = 0, 113 x 50 x 20-1
= 0, 283 µg/ml
b. BIBII = 0, 031 x 50 x 20-1
= 0, 077 µg/ml rerata BI = 0, 165 µg/ml
BIII = 0, 101 x 50 x 20-1
= 0, 253 µg/ml
2. Konsentrasi DNA dengan penambahan volume 4,6 ml ekstrak enzim bromelina. AII
AIII = 0, 112 x 50 x 20-1
= 0, 280 µg/ml rerata AII = 0, 270 µg/ml
AIIII = 0, 104 x 50 x 20-1
= 0, 260 µg/ml
b. BIIBIII = 0, 117 x 50 x 20-1
= 0, 293 µg/ml rerata BII = 0, 315 µg/ml
BIIII = 0, 135 x 50 x 20-1
= 0,338 µg/ml
3. Konsentrasi DNA dengan penambahan volume 6,9 ml ekstrak enzim bromelina. AIII
AIIII = 0, 125 x 50 x 20-1
= 0, 313 µg/ml rerata AIII = 0, 237 µg/ml
AIIIII = 0, 064 x 50 x 20-1
= 0,160 µg/ml
b. BIIIBIIII = 0, 177 x 50 x 20-1
= 0,443 µg/ml rerata BIII = 0, 433 µg/ml
BIIIII = 0, 169 x 50 x 20-1
= 0,423 µg/ml
OD260 x 50 x Faktor pengenceran (FP= 20x)
41
Lampiran 6 Perhitungan kemurnian DNA genom daun pisang hasil isolasi DNAmetode Kitchen Preparation termodifikasi
Berdasarkan data hasil pengukuran absorbansi molekul DNA menggunakan Uv-visSpektrofotometer (Simadzu UV-mini 1240), konsentrasi DNA dapat dihitung denganmenggunakan rumus:
OD 260 : OD 280
1. Kemurnian DNA dengan penambahan volume 2,3 ml ekstrak enzim bromelin
a. AIAII = 0, 137 : 0, 081
= 1, 690 rerata AI = 1, 670AIII = 0, 113 : 0, 069
= 1, 640b. BI
BII = 0, 031 : 0, 022= 1, 409 rerata BI = 1, 494
BIII = 0, 101 : 0, 064= 1, 563
2. Kemurnian DNA dengan penambahan volume 4,6 ml ekstrak enzim bromelina. AII