ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DEL LITORAL Facultad de Ingeniería en Mecánica y Ciencias de la Producción Efecto de los Biofertilizantes Líquidos de Producción Local “Bioles”, sobre el Desarrollo de Síntomas Causados por el Virus del Mosaico de la Calabaza (SqMV) en el Cultivo de Melón (Cucumis melo L.) var. Edisto en Condiciones de Invernadero. TESIS DE GRADO Previo a la obtención del título de: INGENIERO AGRÍCOLA Y BIOLÓGICO Presentada por: Robert Alexander Álvarez Quinto
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Efecto de los Biofertilizantes Líquidos de … · Web viewfamilias organofosforados, carbamatos y piretroides, causando efectos negativos sobre su salud y el medioambiente (60),
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ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DEL LITORAL
Facultad de Ingeniería en Mecánica y Ciencias de la Producción
Efecto de los Biofertilizantes Líquidos de Producción Local
“Bioles”, sobre el Desarrollo de Síntomas Causados por el Virus
del Mosaico de la Calabaza (SqMV) en el Cultivo de Melón
(Cucumis melo L.) var. Edisto en Condiciones de Invernadero.
TESIS DE GRADO
Previo a la obtención del título de:
INGENIERO AGRÍCOLA Y BIOLÓGICO
Presentada por:
Robert Alexander Álvarez Quinto
GUAYAQUIL – ECUADOR
Año: 2011
AGRADECIMIENTO
A mis padres, por motivarme constantemente y les agradezco su apoyo y haberme permitido estudiar en esta prestigiosa institución.
Al personal del CIBE, en especial a la Dra. Esther Lilia Peralta directora del centro por su importante contribución en la realización de este trabajo y a mi directora de tesis la Ing. Lisbeth Espinoza por su apoyo, orientación y sobre todo por la paciencia brindada durante el transcurso de este trabajo.
De manera especial a mis amigos y compañeros del CIBE, Ing. Jorge Paredes, Srta. Alejandra Ibarra, Ing. María Jama, Ing. Freddy Magdama, Ing. Omar Ruiz, Don Rufino Meza, por su colaboración en este trabajo.
DEDICATORIA
A mis padres, la Sra. Mariela Quinto y el Agr. Robert Álvarez por su apoyo incondicional y su amor desinteresado.
A mis hermanos Bryan, Ariana, Ronny.
TRIBUNAL DE GRADUACIÓN
Ing. Marcelo Espinosa L. Ing. Lisbeth Espinoza Lozano
DECANO DE LA FIMCP DIRECTOR DE TESIS
PRESIDENTE
Efrén Santos O. Ph.D.
VOCAL PRINCIPAL
DECLARACIÓN EXPRESA
“La responsabilidad del contenido de esta Tesis
de Grado, me corresponde exclusivamente; y el
patrimonio intelectual de la misma a la ESCUELA
SUPERIOR POLITÉCNICA DEL LITORAL ’’.
(Reglamento de Graduación de la ESPOL).
Robert Alexander Álvarez Quinto
RESUMEN
Los bioles son un tipo de biofertilizante líquido (obtenidos anaeróbicamente),
ricos en micronutrientes, fitohormonas y microorganismos benéficos. Se utilizan
como abono, estimuladores del crecimiento vegetal e inductores de respuestas
fisiológicas como floración y fructificación; recientemente se ha comprobado su
efecto como inhibidor del crecimiento de hongos fitopatógenos. Esta
investigación consistió en realizar un estudio inicial acerca del efecto de los
biofertilizantes líquidos de producción local “Bioles”, sobre el crecimiento de
plantas y la severidad de síntomas observados en plantas de melón (Cucumis
melo L.) infectadas por el virus del mosaico de la calabaza (SqMV). Fueron
evaluadas cuatro dosis de bioles (5, 10, 15, 25%, v:v) aplicados semanalmente
vía foliar. La aplicación foliar de biol en dosis del 25% en plantas infectadas,
ocasionó un incremento significativo en la longitud (22%) y número de hojas, así
como una reducción (26%) en la severidad de síntomas producidos por SqMV.
El análisis de correlación evidenció que las dosis de los bioles mantienen una
alta correlación positiva con la longitud de las plantas y el número de hoja,
contrario a lo que sucede con la severidad de los síntomas producidos por
SqMV que se ven reducidos a medida que se incrementan las concentraciones
de bioles. Los resultados sugieren un efecto positivo del biol sobre las plantas
de melón infectadas por SqMV, no registrados con anterioridad.
II
ÍNDICE GENERAL
RESUMEN............................................................................................................. I
ÍNDICE GENERAL............................................................................................... II
ARN Ácido ribonucleicoddi Días después de inoculacióndds Días después de la siembraddt Días después del trasplanteFAO Food and Agriculture OrganizationHR Humedad RelativapH Potencial de Hidrógeno
VI
SIMBOLOGÍA
cm CentímetrosOC Grados centígradosL Litro' Minutosnm nanómetro" Segundos
VII
ÍNDICE DE FIGURAS
Pág.
Figura 3.1 Inoculación mecánica de SqMV, síntomas observados..………………………………………………... 35
Figura 3.2 Efecto de la aplicación foliar de biol el promedio de longitud de las plantas, 42 ddi.………………………….. 37
Figura 3.3 Efecto de la aplicación foliar de biol sobre el número de hojas por planta, 42 ddi…………………………………… 39
Figura 3.4 Efecto de la aplicación foliar de biol sobre el índice de severidad, 42 ddi.…………………………………………. 40
Figura 3.5 Intensidad de síntomas observados en plantas de melón infectadas con SqMV y tratadas con distintas dosis de biol, 42 ddi…………………………………….. 42
Figura 3.6 Progreso de la severidad en el tiempo para cada tratamiento.…………………………………………. 44
VIII
ÍNDICE DE TABLAS
Pág.
Tabla 1 Descripción de los tratamientos evaluados…………….. 26
Tabla 2 Composición de las soluciones nutritivas utilizadas..…………………………………………………... 27
Tabla 3 Escala de evaluación de síntomas………………………. 29
Tabla 4 Resultados de la detección imnunoenzimática de SqMV.……………………………………………………….. 33
Tabla 5 Valores de severidad observados con mayor frecuencia (Moda) por tratamiento……………………… 45
Tabla 6 Análisis de correlación de las variables………………… 47
INTRODUCCIÓN
En el ámbito internacional las enfermedades virales han causado
importantes pérdidas económicas en cultivos comerciales, aunque no han
podido ser exactamente cuantificadas (4), (8), (58), (59). En nuestro país se
estimaron pérdidas superiores a ocho millones de dólares en el año 2007,
debido a que alrededor de 3000 Ha de cultivos hortícolas fueron devastadas
por virosis en una de las mayores zonas productoras de hortalizas (5).
En la actualidad no existen medidas correctivas para el control de
enfermedades virales de las plantas, por lo que las medidas de manejo están
orientadas a reducir las fuentes de infección y limitar la trasmisión por
vectores (3), (59).
El virus del mosaico de la calabaza (SqMV) es una enfermedad viral de tipo
emergente, que en los últimos años ha afectado los cultivos de cucurbitáceas
en el Ecuador; fue recientemente informado en nuestro país por Espinoza et
al (13) en cultivos de melón en la provincia del Guayas. El método más
común utilizado por los agricultores para minimizar su efecto, consiste en
limitar la transmisión vectorial mediante la aplicación de insecticidas de las
2
familias organofosforados, carbamatos y piretroides, causando efectos
negativos sobre su salud y el medioambiente (60), (6).
Los biofertilizantes líquidos de producción local “Bioles”, son obtenidos
mediante un proceso de fermentación anaeróbica, utilizando como materia
prima principal estiércol vacuno, microorganismos de la rizósfera, bacterias
acido lácticas, entre otros compuestos minerales (40). Aunque la
composición de los bioles puede ser muy variable, dificultando la
reproducibilidad de resultados favorables obtenidos, las investigaciones
realizas por el Centro de Investigaciones Biotecnológicas del Ecuador
(CIBE), han logrado estandarizar el proceso de elaboración de los mismos y
establecido parámetros de calidad mediante los cuales se asegura la
composición final de los bioles de producción local (54), (55).
A pesar de que el efecto positivo de los bioles en el crecimiento y en el
incremento de producción de los cultivos, ha sido ampliamente estudiado
(27), (29), (35-40), así como su actividad fungicida o fungistática contra
i Aplicación foliar de biol, a partir de los 7 ddi (Días después de la inoculación con SqMV), frecuencia de aplicación semanal.ii Longitud de las plantas a los 42 ddi (días posteriores a la inoculación).iii Plantas inoculadas sin aplicación de bioles.iv Plantas sin inocular y sin aplicaciones de bioles.v Comparaciones estadisticas entre tratamientos, letras distintas muestran diferencias signif icativas usando el test LSD Fisher con α=0.05 _ † X ± sem; sem = √ (σ/n)* Diferencias estadisticas signif icativas (p≤0.05) y ** altamente signif icativas (p≤0.01)
n.s: No se econtraron diferencias estadisticas entre las repeticiones
38
La prueba a posteriori LSD Fisher al 5% de probabilidad, mostró
diferencias significativas entre el tratamiento 4 (biol 25%) con una
longitud de 47,85 cm, similar al testigo sano 47,9 cm, estos
tratamientos presentaron diferencias con el testigo enfermo el que
presentó una longitud final de 39 cm.
Número de Hojas
El número de hojas promedio para cada tratamiento a los 42 ddi, es
mostrado en la figura 3.3.
La variable fue sometida a un ANOVA, donde se detectaron diferencias
significativas al 5%, entre los tratamientos.
Los resultados de la prueba de significación LSD Fisher al 5%, son
mostrados en la figura 3.3, donde se observan diferencias
estadísticamente significativas entre el tratamiento de biol al 25%, el
testigo enfermo y el testigo sano, siendo el testigo sano quien presentó
un mayor número de hojas (11,2), seguido del tratamiento 4 (biol 25%)
con 10,7; mientras que el testigo enfermo promedio 7,67 en este
parámetro. Los tratamientos restantes (biol al 5, 10 y 15%) no
presentaron diferencias de importancia relevante para la investigación.
39
Figura 3.3 Efecto de la aplicación foliar de biol sobre el número de
hojas por planta, 42 ddi.
Índice de severidad.
En la figura 3.4 se muestran los valores promedios de los índices de
i Aplicación foliar de biol, 7 ddi (días después de la inoculación con SqMV ), frecuencia de aplicación semanal.ii Número de hojas por planta a los 42 ddiiii Plantas inoculadas sin aplicación de biol.iv Plantas sin inocular y sin aplicaciones de biolv Comparaciones estadisticas entre tratamientos, letras distintas muestran diferencias signif icativas usando el test LSD Fisher con α=0.05 _ † X ± sem; sem = √ (σ/n)* Diferencias estadisticas significativas (p≤0.05) y ** altamente signif icativas (p≤0.01)
n.s: No se econtraron diferencias estadisticas entre las repeticiones
Número de hojas ii
40
Figura 3.4 Efecto de la aplicación foliar de biol sobre el índice de
severidad, 42 ddi.
Mediante un ANOVA se detectaron diferencias significativas al 5% de
probabilidad. Los resultados del análisis a posteriori, en este caso la
prueba de significancia estadística LSD Fisher (p=0.05), para la variable
Tratamiento i Índice de severidad ii
T4. Biol 25% 2.43†± 0.09 a v
T3. Biol 15% 3.2 ± 0.10 bT2. Biol 10 % 3.47 ± 0.17 bT1. Biol 5% 3.57 ± 0.32 bcTestigo enfermo iii 3.97 ± 0.28 cTestigo sano iv 0.0 d
CV (%) 9.54Modelo
F test 65.89 *Valor p <0.0001i Aplicación foliar de biol, 7 ddi (días despues de la inoculación con SqMV) , fecuencia de aplicación semanal.ii Indice de severidad: representa la media ponderada de severidad a los 42 ddi usando una escala entre 0-6, como se describe en el procedimiento experimentaliii Plantas inoculadas sin aplicación de bioles.iv Plantas sin inocular y sin aplicaciones de bioles.v Comparaciones estadisticas entre tratamientos, letras distintas muestran diferencias significativas usando el test LSD Fisher con α=0.05 _ † X ± sem; sem = √ (σ/n)* Diferencias estadisticas signif icativas (p≤0.05) y ** altamente signif icativas (p≤0.01)
n.s: No se econtraron diferencias estadisticas entre las repeticiones
41
índice de severidad, donde los menores índices fueron observados en el
tratamiento 4 con un valor de 2,43; mientras que el testigo enfermo
presentó una severidad del 3,97, valor estadísticamente significativo, por
otra parte los demás tratamientos 1 (biol 5%), 2 (biol 10%) y 3 (biol 15%)
mostraron valores símiles entre sí 3,57, 3,47, y 3,2 respectivamente.
42
Figura 3.5 Intensidad de síntomas observados en plantas de melón
infectadas con SqMV y tratadas con distintas dosis de biol, 42 ddi.
A. Testigo Sano (Plantas sin inocular y sin aplicación de biol.B. Testigo Enfermo (Plantas inoculadas sin aplicación de bioles)C. Tratamiento 1. Plantas inoculadas con aplicación foliar de biol (5%, v:v)D. Tratamiento 2. Plantas inoculadas con aplicación foliar de biol (10%, v:v)E. Tratamiento 3. Plantas inoculadas con aplicación foliar de biol (15%, v:v)F. Tratamiento 4. Plantas inoculadas con aplicación foliar de biol (25%, v:v)
43
El progreso del índice de severidad (IS) en el tiempo se grafica en la
figura 3.6, donde se puede observar que no existen diferencias notables
entre el índice de severidad de los tratamientos durante las primeras
semanas post inoculación. Sin embargo a partir de la cuarta y la quinta
semana post inoculación, se observa una tendencia creciente del índice
de severidad en el testigo enfermo (Plantas inoculadas, sin aplicación de
biol). Esta tendencia se puede explicar con el coeficiente a de 0.00160
obtenido del modelo, que indica un incremento creciente a partir de la
cuarta semana; además es estadísticamente diferente a los demás
tratamientos, por lo que la forma de esta curva de progreso es distinta.
También se destaca la estabilización del índice de severidad en el
tratamiento cuatro (Biol al 25%) a partir de la quinta semana post
inoculación. La tendencia de crecimiento decreciente y la forma de la
curva de progreso de la severidad se explica con el coeficiente a
negativo de -0.00320. El coeficiente a obtenido es estadísticamente
diferente a los demás tratamientos incluidos el testigo enfermo, lo que
comprueba que la curva de progreso de severidad en este tratamiento es
diferente a los demás.
44
Figura 3.6 Progreso de la severidad en el tiempo para cada
tratamiento.
Los tratamientos 3, 2, 1 comparten la misma tendencia y forma de la
curva de progreso de la severidad; ligeramente crecientes a partir de la
Análisis de la varianza
Tratamiento i Est. Coef. (a) ii T4. Biol 25% -0.00320 a v T3. Biol 10% -0.00070 b T2. Biol 15% -0.00063 b T1. Biol 5% -0.00047 b Testigo enfermo iii 0.00160 c Testigo Sano iv 0.00000
C.V 111.06 F test 12.68* Valor p 0.0006 i Aplicación foliar de biol, siete días después de la inoculación de SqMV, frecuencia de aplicación semanal. ii Valores estimados para el coeficiente a, de la función polinómica de grado 2
iii Plantas inoculadas sin aplicación de bioles. iv Plantas sin inocular y sin aplicaciones de bioles. v Comparaciones estadísticas entre tratamientos, letras distintas muestran diferencias significativas usando el test LSD Fisher con α=0.05
* Diferencias significativas
45
tercera semana, lo cual se evidencia en la prueba de significancia
realizada a los coeficientes (a), que los muestra como similares entre sí.
En la tabla 5, se presentan los valores de severidad observados con
mayor frecuencia (moda) para cada tratamiento durante las cinco
evaluaciones. Estos valores son obtenidos a partir de la escala de
evaluación de síntomas.
Tabla 5. Valores de severidad observados con mayor frecuencia
Testigo enfermo c 2 3 3 3 4Testigo Sano d 0 0 0 0 0a Aplicaciones semanales de bioles en plantas infectadas por SqMVb Evaluaciones semanales, a part ir de la segunda semana post inoculaciónc Plantas inoculadas con SqMV, sin aplicación de biold Plantas sanas, sin aplicación de biold Evaluaciones realizadas una semana posterior a la aplicación de biole Sintomas evaluados en base la escala de severidad (0-6).
En el tratamiento cuatro a partir de la segunda evaluación, el valor de
severidad observado con mayor frecuencia fue dos (2), inferior con
respecto a los otros tratamientos y se mantuvo constante desde la
segunda hasta la cuarta evaluación, lo que indica que los síntomas más
46
frecuentes en este tratamiento fueron aclaramientos y bandeados de
nervaduras moderados y ligeras deformaciones foliares. Estos valores en
comparación a los evaluados en los demás tratamientos demuestran el
efecto que tienen los biofertilizantes sobre el desarrollo de la enfermedad.
En el testigo enfermo el valor inicial de severidad observado con mayor
frecuencia fue dos (2) y al final de la evaluación cuatro (4). Entonces los
síntomas más frecuentes al inicio fueron aclaramiento y bandeados de
nervaduras moderados, para finalizar en síntomas muy severos con
deformación foliar y ampollamiento severos. Por otro lado el
comportamiento de los demás tratamientos (3,2 y 1) fue muy similar entre
sí.
Análisis de correlación.
El análisis de correlación, evidenció las siguientes correlaciones (Tabla
6). El índice de severidad está correlacionado negativamente con las
variables longitud (r= - 0.42) y número de hojas por planta (r= - 0.6); los
coeficientes de correlación son estadísticamente significativos al 5%. Esto
indica que la severidad de los síntomas producidos, influye
negativamente en el crecimiento de la planta afectando su desarrollo
vegetativo normal.
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Tabla 6. Análisis de correlación de las variables.
La dosis
de los bioles está correlacionada positivamente con el número de hojas (r
= 0.66) y la longitud de las plantas (r = 0.31); lo que indica que las dosis
de bioles influyen positivamente en el número de hojas por planta y la
longitud de las plantas infectadas con SqMV.
Por el contrario, la dosis del biol presentó una alta correlación negativa
(estadísticamente significativa) con el índice de severidad (r= - 0.85), lo
que sugiere una disminución de la severidad de los síntomas observados
al aumentar la dosis del biol.
Los resultados obtenidos en esta investigación indican que la aplicación
foliar de biol en dosis del 25%, producen una mejora significativa en el
crecimiento de las plantas y contribuyó a la disminución en la severidad
Correlación r a Valor pI.S vs Longitud -0.42 * <0.0001 I.S vs Número de hojas -0.6 * <0.0001 Dosis Biol vs I.S -0.85 * <0.0001 Longitud vs Número de hojas 0.24 * 0.0037Longitud vs Dosis de biol 0.31 * <0.0001 Dosis de biol vs número de hojas 0.66 * <0.0001 a. Coeficiente de correlación de Pearson.* Correlación estadisticamente significativa al 5% de probabilidad
48
de síntomas en plantas infectadas por SqMV bajo condiciones de
invernadero durante la etapa vegetativa. Aunque numerosos estudios han
demostrado la capacidad estimuladora del crecimiento del biol (29-35),
no se han realizado investigaciones previas con el propósito de evaluar el
efecto de los bioles de producción local sobre el crecimiento de plantas
infectadas por virus.
Además se evidenció la disminución estadísticamente significativa (26%),
del índice de severidad respecto al testigo enfermo; aunque el porcentaje
de esta disminución podría considerarse leve o moderado, es muy
importante conocer que es posible disminuir el índice de severidad de la
infección viral mediante la aplicación de bioles. Sin embargo no existen
referencias de estudios similares hasta el momento.
El incremento en longitud y la disminución en la severidad de síntomas,
se los puede relacionar con el efecto estimulador del crecimiento del biol,
debido a su composición rica en hormonas vegetales como auxinas y
giberelinas, además de micronutrientes (27), (36).
En las plantas infectadas se producen alteraciones metabólicas tales
como la disminución de la fotosíntesis y de la cantidad de sustancias
reguladoras del crecimiento (fitohormonas), así como la reducción de la
49
tasa de absorción de algunos nutrientes importantes tales como el
nitrógeno (2), (35). El aporte de los bioles puede mejorar el estado,
nutricional y compensar los bajos niveles hormonales que sufren las
plantas viróticas. No existen resultados publicados comparables a los
obtenidos en este trabajo, por lo que sería de interés profundizar en los
cambios bioquímicos y moleculares de las plantas tratadas con bioles,
con la finalidad de explotar mejor la utilidad de los bioles de producción
local. Por otro lado se destaca la riqueza biológica de los bioles y a pesar
de que no se han identificado detalladamente los microorganismos
presentes en los bioles de producción local, se conoce que Bacillus sp. y
Pseudomonas sp, pueden estar presentes (36), Varias investigaciones
señalan a estas bacterias típicas de la rizósfera, como inductoras de
resistencia y promotoras de crecimiento en plantas infectadas por virus en
distintos cultivos (42-44). Estos microorganismos benéficos pueden
habitar en la rizósfera, y vivir como endófitos, son capaces de sintetizar
fitohormonas involucradas en el crecimiento de las plantas y en la
respuesta a enfermedades, por lo cual es bien conocido su efecto
estimulador de crecimiento e inductor de resistencia a enfermedades (44).
Esta investigación deja una puerta abierta para la continuación de
estudios relacionados con este tema, ya que mediante este trabajo se ha
50
obtenido robusta evidencia sobre el efecto que tienen los bioles de
producción local sobre el desarrollo de las enfermedades virales y en la
nutrición general del cultivo. A pesar que este estudio no fue llevado
hasta el periodo de cosecha, se logró observar un efecto positivo durante
la etapa vegetativa, pudiéndose esperar resultados favorables al
momento de la cosecha. La etapa vegetativa de los cultivos de ciclo corto
es considerada crítica para obtener niveles de producción óptimos en el
cultivo.
CAPÍTULO 44. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
4.1. Conclusiones.
A partir de los resultados obtenidos es posible enunciar las siguientes
conclusiones:
1. Se comprobó la presencia de SqMV en las muestras de melón
evaluadas y se estandarizó el método para la inoculación y
mantenimiento del aislamiento viral. El estado fenológico ideal de
las plantas para la inoculación del virus, fue de 8-10 días después
del trasplante.
2. La aplicación foliar de biol en dosis al 25% (v:v), con una
frecuencia de aplicación semanal en plantas infectadas por SqMV,
promueve el crecimiento, favorece la emisión foliar y reduce en un
26% la severidad de los síntomas causados por el virus del
mosaico de la calabaza en plantas de melón.
52
4.2. Recomendaciones.
A partir de los resultados obtenidos, se emiten las siguientes
recomendaciones:
1. Realizar estudios más detallados del efecto de los bioles sobre
enfermedades virales y los mecanismos bioquímicos y moleculares
involucrados.
2. Evaluar otros modos de aplicación de los bioles y dosis superiores
al 25%.
3. Continuar investigaciones en campo, con la finalidad de evaluar el
efecto las aplicaciones de biol sobre el rendimiento de los cultivos
en plantas enfermas.
4. Continuar las investigaciones, dirigidas a estudiar el efecto
individual de los compuestos químicos y microorganismos
presentes en los bioles de producción local.
BIBLIOGRAFÍA.
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http://www.fao.org/corp/statistics/es/. Consultado en mayo 2011
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Elsevier. p. 400.
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Press. pp. 479-487
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Investigación Agraria Producción Protección Vegetales, vol. 13, no. 1-2, pp.
111–120.
52. CIBA-GEIGY.1981. Manual para Ensayos de Campo en Protección
Vegetal. Segunda edición, revisada y ampliada. División Agricultura, CIBA-
GEIGY. Basilea, Suiza. p. 205.
53. DI RIENZO J.A., CASANOVES F., BALZARINI M.G., GONZALEZ L.,
TABLADA M., ROBLEDO C.W. InfoStat versión 2010. Grupo InfoStat, FCA,
Universidad Nacional de Córdoba, Argentina
54. BALZARINI M.G., GONZALEZ L., TABLADA M., CASANOVES F., DI
RIENZO J.A., ROBLEDO C.W. 2008. Manual del Usuario, Editorial Brujas,
Córdoba, Argentina. p. 336.
APÉNDICES
Apéndice A
Diagrama de elaboración de los bioles producción local.
Fuente: Chávez E. (Chávez 2009)
APÉNDICE B
Prueba serológica DAS-ELISA.
APÉNDICE C.
Inoculación de las unidades experimentales.
A. Recolección de muestras de plantas positivas para SqMV.B. Lavado superficial.C. Macerado de las muestras en un mortero estéril y refrigerado, D. Materiales necesarios para la inoculación.E. Jugo infectivo, bajo refrigeraciónF. Unidades experimentales, antes de la inoculación.G. Inoculación mecánica de las plantas de melón
APÉNDICE D.
Aplicación foliar de biol, a los tratamientos.
A – C. Calibración de las diluciones necesarias, para cada tratamiento.D. Aplicación foliar de biol, dirigida con una pantalla plástica.E. Plantas después de la aplicación de biolF. Plantas 7 días después de una aplicación de biol, A pesar que se observan rastros del biol, este no produjo fitotoxicidad
APÉNDICE E.
Diagrama del desarrollo del experimento.
A Desinfección de cubículo.B Siembra en bandejas germinadoras con sustrato BM2.C Protección de las plántulas, con mallas de nylon.D Trasplante de plántulas a fundas con sustrato (1 L volumen)E Unidades experimentales, listas para ser inoculadas.F Inoculación de plántulas.G Aplicación semanal de biol.H Evaluación semanal de síntomas.