la diferencia para cada una de las personas que día a día atendemos y que pueden ser parte de las Mil Vidas sobre las cuales hayamos logrado un impacto en su salud física, mental o social. Invitamos a cada uno(a) de ustedes a ser parte de este compromiso, y que compartan con nosotros sus experiencias exitosas en este espacio que es de la región Centroamericana. Licda. Patricia L. Mira Gómez Directora Laboratorio Regional de Referencia-VIH/SIDA Proyecto Regional VIH/SIDA [email protected]Cada año en el mes de abril se conmemora el Día Mundial de la Salud, este año la Organización Mundial de la Salud (OMS) conmemoró este día bajo el lema Mil ciudades, Mil vidas, organizándose diferentes eventos en las ciudades alrededor del mundo, durante la semana del 7 al 11 de abril de 2010. La OMS estableció como objetivos mundiales de la campaña los siguientes: Mil ciudades: abrir los espacios públicos a la salud, ya sea para realizar actividades en los parques, reuniones ciudadanas, campañas de limpieza, o cerrar parte de las calles al tránsito de vehículos motorizados. Mil vidas: reunir mil relatos de promotores de la salud urbana que, por sus iniciativas, hayan tenido un impacto considerable en la salud de sus ciudades. Para los que somos parte de la gran familia de prestadores de servicios de salud a la población, esta celebración retoma especial importancia, ya que este año nos hace reflexionar de cómo nuestro trabajo esta impactando en nuestra comunidad, motiván- donos a ser agentes de cambio constantes, comenzando en nuestro núcleo familiar y proyectándonos a la comuni- dad que nos rodea. En el tema de VIH, una de las iniciativas que debería tener impacto en nuestra comunidad y en nuestra familia, es el tomarnos la responsabilidad de educar sobre el tema y mo- tivar los cambios de conducta orientados a la prevención del VIH, y sobre todo a evitar el estigma y discriminación de personas viviendo con VIH, esta es una tarea de todos y una responsabilidad compartida si queremos ganarle la batalla al VIH/sida. El equipo de trabajo del LRR- VIH/SIDA estamos comprometidos a trabajar de la mano con las redes de laboratorio de la región centroamericana, para brindarles los conocimientos técnicos científicos e intercambiar experiencias que motiven a que cada día brindemos servicios con calidad, efectividad y sobre todo con calidez, que marquen Editorial Abril 2010 Volumen 1, nº 2 LRR EN ACCIÓN Contenido: SEROTECA… un es- fuerzo regional 2 Banco de muestras de referencia para ADN Proviral de VIH-1: una herramienta de laboratorio……. 2 Detección de la acti- vación inmune celu- lar mediante la prue- ba de Neopterina… 3 Control de Calidad Interno: una respon- sabilidad de todos los laboratorios 4 En breve…. 4 Galería fotográfica 5 LRR en acción es publicado por: Laboratorio Regional de Referencia de VIH/SIDA para Centroamérica. Ciudad de Panamá (507) 527-4837 http://www.sica.int/lrr/
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la diferencia para cada una de las personas que día a día atendemos y que pueden ser parte de las Mil Vidas sobre las cuales hayamos logrado un impacto en su salud física, mental o social. Invitamos a cada uno(a) de ustedes a ser parte de este compromiso, y que compartan con nosotros sus experiencias exitosas en este espacio que es de la región Centroamericana. Licda. Patricia L. Mira Gómez
Cada año en el mes de abril se conmemora el Día Mundial de la Salud, este año la Organización Mundial de la Salud (OMS) conmemoró este día bajo el lema Mil ciudades, Mil vidas, organizándose diferentes eventos en las ciudades alrededor del mundo, durante la semana del 7 al 11 de abril de 2010. La OMS estableció como objetivos mundiales de la campaña los siguientes: Mil ciudades: abrir los espacios públicos a la salud, ya sea para realizar actividades en los parques, reuniones ciudadanas, campañas de limpieza, o cerrar parte de las calles al tránsito de vehículos motorizados. Mil vidas: reunir mil relatos de promotores de la salud urbana que, por sus iniciativas, hayan t e n i d o u n i m p a c t o considerable en la salud de sus ciudades. Para los que somos parte de la gran familia de prestadores de servicios de salud a la población, esta celebración retoma especial importancia, ya que este año nos hace
reflexionar de cómo nuestro trabajo esta impactando en nuestra comunidad, motiván-donos a ser agentes de cambio constantes, comenzando en nuestro núcleo familiar y proyectándonos a la comuni-dad que nos rodea. En el tema de VIH, una de las iniciativas que debería tener impacto en nuestra comunidad y en nuestra familia, es el tomarnos la responsabilidad de educar sobre el tema y mo-tivar los cambios de conducta orientados a la prevención del VIH, y sobre todo a evitar el estigma y discriminación de personas viviendo con VIH, esta es una tarea de todos y u n a r e s p o n s a b i l i d a d compartida si queremos ganarle la batalla al VIH/sida. El equipo de trabajo del LRR-V I H / S I D A e s t a m o s comprometidos a trabajar de la mano con las redes de laboratorio de la región centroamer icana, para brindarles los conocimientos técnicos científicos e intercambiar experiencias que motiven a que cada día brindemos servicios con calidad, efectividad y sobre todo con calidez, que marquen
Banco de muestras de referencia para ADN Proviral de VIH-1:
una herramienta de laboratorio…….
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LRR EN ACCIÓN
LA SEROTECA REGIONAL
ES UNA REALIDAD
GRACIAS AL ESFUERZO
DE TODOS……
A. Girón
A. Croston
Banco de muestras:
sangre seca en papel
filtro y concentrado
leucocitario
Caracterización de las
muestras biológicas
Proporción de muestras VIH positivas y negativas y su
relación con las concentraciones normales y elevadas de
neopterina
Se utilizaron seis estándares de referencia con diferentes concentraciones de neopterina (de 0 a
111 nmol/L) para realizar una curva de calibración. Las lecturas de absorbancias obtenidas de las muestras analizadas fueron interpoladas con la
curva de calibración en una hoja semilogarítmica, obteniendo así las concentraciones de neopterina
(nmol/L).
Resultados y discusión de resultados: Los valores esperados que estipula la prueba para
individuos sanos es de < 10 nmol/L. De las muestras clasificadas como VIH-1 negativas, el 82 % presentaron activación inmune celular normal
(neopterina <10 nmol/L) con promedios de neopterina de 7.3 nmol/L. Sin embargo, se detectó
activación inmune elevada (neopterina > 10 nmol/L) en el 18 % del total de muestras negativas por
VIH-1. Aunque se sabe que la neopterina es un marcador inespecífico (4), sus niveles elevados han sido asociados fuertemente a infecciones virales,
Introducción: La neopterina (NPT: Pteridin Trifostato de Guanosina) es conocida como un marcador de
activación inmune celular el cual es liberado a la circulación sanguínea por macrófagos activados por
el interferón gamma (INF g), Se han detectado concentraciones elevadas en fluídos humanos y hemoderivados (suero, plasma, líquido
cefaloraquídeo) en el curso de infecciones por diversos agentes etiológicos (bacterias, virus o
parásitos), enfermedades autoinmunes, enfermedades malignas, entre otras. Las aplicaciones donde más se ha perfilado su
detección es en el monitoreo de trasplantes con el fin de reconocer complicaciones tempranas, en
personas viviendo con el Virus de Inmunodeficiencia Humana (VIH) donde altas
concentraciones se han asociado a la disminución de la expectativa de vida y en el tamizaje de los Bancos de Sangre para la detección de infecciones
agudas con el fin de contribuir a la donación de sangre segura. No se han presentado hasta el
momento niveles significativos de neopterina en individuos sanos (1-3).
Objetivo:
Con la finalidad de evaluar la utilidad de la neopterina como marcador de activación inmune celular en el proceso de caracterización de
muestras biológicas de referencia, el LRR VIH/Sida realizó un estudio para detectar la presencia de la
neopterina en las muestras que conforman su Seroteca Regional y el Banco de Muestras de
Biología Molecular.
Materiales y Métodos: Se evaluaron 173 muestras de plasma y suero las
cuales fueron caracterizadas mediante metodologías inmunoenzimáticas como muestras VIH-1 negativas (143 muestras, 83 %) y VIH-1
positivas (30 muestras, 17 %).
Se midieron las concentraciones de neopterina en todas las muestras por el método de ELISA convencional competitivo de fase sólida (IBL,
Immuno-Biological Laboratories, USA). En el ensayo una cantidad desconocida de antígeno presente en
una muestra y un número fijo de antígeno marcado con una enzima, compiten por los sitios de unión de un anticuerpo (anti-neopterina de conejo). Los
complejos anticuerpo-antígeno, conjugados con peroxidasa, se unen a los pocillos de las tiras de la
placa de microtitulación revestidos con anticuerpo de cabra anti-conejo. El antígeno no unido, se
remueve a través del lavado. La intensidad del color obtenido, después de la incubación con el substrato, es inversamente proporcional a la
cantidad de antígeno en la muestra. Los resultados de la muestra pueden ser determinados
directamente usando la curva de estándares.
precediendo a la aparición de manifestaciones clínicas y seroconversión, Razón por la cual, las muestras
biológicas caracterizadas como “negativas” que conforman un Banco de Muestras de referencia para VIH-1 al tener niveles elevados de neopterina
(> 10 nmol/L), dependiendo los tipos de ensayos para los que se destinen, podrían generar reacciones cruza-
das o resultados confusos. En lo que respecta a los resultados obtenidos para las
muestras caracterizadas como VIH-1 positivas, se detectó activación inmune celular elevada (neopterina
> 10 nmol/L) en el 100% de las muestras positivas por VIH-1 (promedio de neopterina de 36.7 nmol/L). Estos pacientes tenían cargas virales elevadas, conteos bajos
de CD4 y en falla terapeútica. Estos datos concuerdan con hallazgos previos donde valores elevados de
neopterina en los pacientes con VIH-1 se han correlacionado inversamente con el conteo de las
células CD4+ y directamente con el conteo de cargas virales y progresión a SIDA. Incluso existen evidencias en la literatura que asocian su aumento a la cascada
de eventos que regulan la replicación de VIH en personas infectadas (2). Aunque la determinación de
neopterina se efectúa de una manera más sencilla y es menos costosa que los marcadores subrogados para el monitoreo de la infección por el VIH-1 (CD4 y carga
viral), no los reemplaza. Estudios previos lo han considerado como posible marcador de progresión
pues predice la disminución de linfocitos T CD4+ con tres años de anticipación y ha resultado de mucha utilidad en la evaluación de la respuesta a la terapia
antirretroviral, pues los valores de neopterina disminuyen entre 4 a 8 semanas de iniciado el
tratamiento (5).
En conclusión, los resultados obtenidos evidencian la activación celular inmune celular en las muestras con resultados positivos por el VIH-1. En el caso de las
muestras que han sido caracterizadas como “negativas”, en especial por el VIH-1, y que conforman
la Seroteca Regional y el Banco de Muestras de Biología Molecular del LRR VIH /Sida, es de gran utilidad la medición de neopterina como marcador de
activación inmune celular ya que contribuye a disminuir la posibilidad de reacciones inmunes no específicas o
cruzadas en las muestras con niveles elevados de neopterina. Referencias
1. Murr C, Widner B, Wirleitner B, Fuchs D. “Neopterin as a marker for immune system activation” Curr Drug Metab. Institute of Medical Chemistry and Biochemistry, University of Innsbruck, Austria. Abril 2002; 3(2):175-87.
2. Baier-Bitterlich G, Wachter H, Fuchs D. “Role of neopterin and 7,8-dihydroneopterin in human immunodeficiency virus infection: marker for disease progression and pathogenic link.” J Acquir Immune Defic Syndr Hum Retrovirol. Institute for Medical Chemistry and Biochem-istry, University of Innsbruck, Austria. Oct 1996 1;13(2):184-93.
3. Fuchs D, Weiss G, Reibnegger G, Wachter H.“The role of neopterin as a monitor of cellular immune activation in transplantation, inflammatory, infectious, and malignant diseases.”Institute for Medical Chemistry and Biochemistry, University of Innsbruck, Austria.Crit. Rev Clin Lab Sci. 1992: 29(3-4): 307-41
4. Immanuel C, Victor L, Chelvi S y colaboradores. “Serum Neopterin Levels in HIV Infected Patients with & without Tuberculosis” Indian Journal of Medical Research Abril 2005 ;121(4):220-225
5. Sanguineti D., Ana , Fajardo S., Olga “Marcadores de progresión en la enfermedad por el virus de inmunodeficiencia humana” Dermato-logia Peruana Vol 8, suplemento 1.Dic 1998
Detección de la activación inmune celular mediante la Prueba de
Neopterina en el Banco de Muestras y la Seroteca Regional del LRR VIH/Sida
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Volumen 1, nº 2
D. Mojica y C. González
Curva de calibración elaborada con los resultados obtenidos
de la determinación de neopterina de seis calibradores.
Control de Calidad Interno: una responsabilidad de todos los laboratorios
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El LRR gestionó y financió en el mes de abril la participación de profesionales de laboratorio de los Laboratorios Cen-trales de Referencia de la región Centroamericana en el “1er Taller de Entrenamiento en la Genotipificación del Virus Papiloma Humano (HPV)” en el marco de la Red Global de Laboratorios de HPV (HPVLabNet). Este taller fue organi-zado por la Organización Panamericana de la Salud-OPS/OMS- en coordinación con el Servicio de Virus Oncogénicos en el Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas, ANLIS Dr. Carlos G. Malbrán, Buenos Aires, Argentina.
Durante el mes de abril, el LRR desarrolló dos talleres sobre “Preparación de control de calidad interno” para prue-bas inmunodiagnósticas de VIH y otros agentes infecciosos. Estos talleres se realizaron en los Laboratorios Centrales de Referencia de Costa Rica y Panamá. Para el mes de mayo se tiene contemplada la replica del taller en la ciudad de San Salvador, El Salvador.
Con el objeto de continuar con el apoyo en la implementación de un Sistema de Gestión de Calidad en los laborato-rios de la Región, el LRR iniciará en el mes de junio una nueva ronda de visitas de seguimiento a los Laboratorios Centrales de Referencia a fin de proporcionar las consultorías técnicas que sean requeridas.
En breve…
LRR EN ACCIÓN
I. Ríos
A. Girón
Los laboratorios de salud pública juegan un papel muy importante en la vigilancia epidemiológica al aportar eviden-cia científica para la toma de decisiones en salud. El LRR consciente de este rol de los laboratorios, ha planificado realizar un taller a fin de fortalecer al recurso humano de los Laboratorios Centrales de Referencia de VIH/SIDA en aspectos relacionados a epidemiología básica. Dicho taller se realizará en el mes de mayo en la ciudad de San Salva-dor, El Salvador.
Características principales:
Se basa en la repetitividad y
reproducibilidad de controles. Ayuda a mejorar la calidad
de las determinaciones reali-
zadas. Permite aplicar criterios de
calidad pertinentes para
asegurar la calidad requerida
en cada procedimiento. La aplicación de las multire-
glas de Shewhart para el
control de calidad interno,
alerta al usuario y contribuye
a una mejor toma de decisio-
nes.
GALERÍA FOTOGRÁFICA
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Volumen 1, nº 2
Tercer taller regional Centroamericano de revisión,
evaluación y actualización de los “Lineamientos
Regionales para la indicación, Toma, Manejo y Envío
de Muestras para Evaluar la Resistencia del VIH-1”
y
Taller regional para la elaboración de lineamientos
para la indicación de pruebas de ADN Proviral para
VIH-1
Participación de la Licda. Dalis Mojica del LRR en el
VI Congreso Centroamericano de ITS/VIH/Sida
(CONCASIDA) presentando los resultados regionales
de resistencia del VIH a los medicamentos ARV
determinados mediante la técnica de Genotipaje.
“1er Taller de Entrenamiento en la Genotipificación del Virus
Papiloma Humano (HPV)”
Instituto Malbrán, Argentina
De izquierda derecha: Elizabeth Rojas (Costa Rica), Ruth Guevara (El
Salvador), Yolanda Tellez (Nicaragua), Dayana Best (Panamá), Yolanda
Mencos (Guatemala) y Dalis Mojica (LRR)
GALERÍA FOTOGRÁFICA
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Volumen 1, nº 2
Taller de “Preparación de control de calidad interno”
Personal del Laboratorio del Hospital San Juan de Dios, Costa Rica, preparando paneles de suero.
Este Laboratorio ha implementado el programa de control interno para VIH por la metodología MEIA con Axsym de 4ta
generación y HTLV por la metodología de ELISA convencional MP, además ha iniciado la organización de una seroteca.