DOTTORATO IN SCIENZE BIOCHIMICHE E … · -colture cellulari e trasfezione di proteine-Spettrometria in cuvette e piastre 96-pozzi-ELISA ... morfologici e funzionali di danno muscolare

Bari, 25 Febbraio 2011

Capogrosso Roberta Francesca

DOTTORATO IN SCIENZE BIOCHIMICHE E

FARMACOLOGICHE

GIORNATA PUGLIESE su FARMACO E PRODOTTI per la

SALUTE II EDIZIONE

“IL FARMACO PER DIAGNOSI PRECOCI E MALATTIE RARE”

Sezione di Farmacologia

Dottorandi

Roberta CAPOGROSSOTeresa COSTANZA

Valeriana SBLENDORIOGianluca GRAMEGNAGianluigi CANNONE

Roberta CARBONARAAntonia SCARAMUZZI

Sara CALZOLAROMaria CANNONE

Sezione di Farmacologia Dipartimento Farmaco-Biologico

Facoltà di Farmacia

DOTTORATO IN SCIENZE BIOCHIMICHE E

FARMACOLOGICHE Sezione di Farmacologia

Dottorato in Scienze Biochimiche e Farmacologiche

Sezione di farmacologia

http://images.google.it/imgres?imgurl=http://www.diemme.org/sito_marroncelli/images/glaucoma.jpg&imgrefurl=http://www.diemme.org/sito_marroncelli/glaucoma_cosa.htm&usg=__Oixy3vAnLmxtZG7gMSmcoDiozZ0=&h=341&w=332&sz=45&hl=it&start=20&um=1&tbnid=zp4guTD3BqHZcM:&tbnh=120&tbnw=117&prev=/images%3Fq%3Dglaucoma%26hl%3Dit%26safe%3Dactive%26um%3D1

http://images.google.it/imgres?imgurl=http://www.cellscience.com/reviews3/spikes.jpg&imgrefurl=http://www.cellscience.com/reviews3/Action_Potential_Initiation_in_Hippocampal_Neurons.html&usg=__A8oMNXi9ZdjDz8pKjWN2CEjlijg=&h=266&w=300&sz=20&hl=it&start=8&um=1&tbnid=NyyGTVuhOJzTXM:&tbnh=103&tbnw=116&prev=/images%3Fq%3Dtrain%2Baction%2Bpotential%26hl%3Dit%26um%3D1

http://images.google.it/imgres?imgurl=http://www.learnholistically.it/games/biomondi/immagini/cervello4.jpg&imgrefurl=http://www.learnholistically.it/games/biomondi/cervello.htm&usg=__tSF0SoK1zzep2Bu_geIVdvvRhIM=&h=338&w=354&sz=17&hl=it&start=4&um=1&tbnid=VXvYNFj3DfPZSM:&tbnh=116&tbnw=121&prev=/images%3Fq%3Dcervello%26hl%3Dit%26safe%3Dactive%26um%3D1

PRINCIPALI METODOLOGIE

-trattamenti farmacologici cronici

-modelli animalitopo mdxtopi transgeniciratto depletato di K+roditore sospeso

-gabbie metaboliche

-elettromiografia

-Misuratore della forza muscolare degli arti di roditore

-traedmill orizzontale

STUDI IN VIVO in modelli animali



-Microelettrodi intracellulari parametri di cavopotenziale d’azionesoglia meccanica di contrazione

-"Hille- Campbell" voltage clampcorrenti ioniche in fibre muscolari isolati

-Patch Clampcorrenti ioniche in cellule native e linee cellulari

PRINCIPALI METODOLOGIE Ex-vivo – in vitro

ELETTROFISIOLOGIA



-Determinazione dell’omeostasi del calcioin cellule native e linee cellulari

-Contrazione del muscolo scheletrico

-Contrazione del muscolo liscio


CITOFLUORIMETRIA IN IMAGING

ORGANO ISOLATO



-Real-time PCR: espressione genica

-DNA ricombinante e mutagenesi

-colture cellulari e trasfezione di proteine

-Spettrometria in cuvette e piastre 96-pozzi

- ELISA


BIOLOGIA MOLECOLARE E BIOCHIMICA



http://images.google.it/imgres?imgurl=http://www.immunosurface.com/ita/images/96_well.jpg&imgrefurl=http://www.immunosurface.com/ita/immunoassay/96well.html&usg=__Ixcx4Urh8vX-d6gWfNkQ6iHYIOc=&h=181&w=250&sz=16&hl=it&start=2&um=1&tbnid=kV9baVYG8B1tLM:&tbnh=80&tbnw=111&prev=/images%3Fq%3Dpiastre%2B96%2Bwells%26hl%3Dit%26um%3D1

http://images.google.it/imgres?imgurl=http://www.planet-science.com/newsletters/planetscience/issue_325/images/dna.jpg&imgrefurl=http://www.planet-science.com/newsletters/planetscience/issue_325/&usg=__x51BFugLZ-1HWMo_5UDrHz_RyZw=&h=300&w=300&sz=20&hl=it&start=28&um=1&tbnid=1v5LX1bAbYOn4M:&tbnh=116&tbnw=116&prev=/images%3Fq%3Ddna%26ndsp%3D20%26hl%3Dit%26sa%3DN%26start%3D20%26um%3D1

Modelli indotti e/o secondariroditore sospesoratto ipocalemicomiopatie da farmaci (statine)

Modelli animali genetici di malattie raretopo mdxtopo adrtopi transgenici

MODELLI ANIMALI E

STUDI FARMACOLOGICI PRE-CLINICI IN VIVO ED EX VIVO



http://it.123rf.com/photo_1828285.html

http://it.123rf.com/photo_4879387.html

Paziente DMD e topo mdx: stesso difetto genetico e biochimicoTotale assenza della proteina distrofina,

che conferisce stabilità meccanica alla fibra muscolare durante la contrazione

DistroficoNormale

MODELLO GENETICOTOPO MDX



Il topo mdx esercitato mostra i tipici i marcatori molecolari, morfologici e funzionali di danno muscolare che si osservano nei pazienti DMD

Valutazioneeffetto terapeutico

Identificazione dinuovi bersagli

Marcatori della patologia Meccanismi patogenetici

Farmaci che bersagliano eventi patologici+

Approccio multidisciplinare



..durante il dottorato

Valutazione dell’efficacia di trattamentifarmacologici:

saggi funzionali in vivo, in vitro, ex vivo

utilizzo di appropriati strumenti da laboratorio

Ricerca bibliografica

Valutazione critica di lavori scientifici

Seminari e congressi

EFFETTO DELL’ESERCIZIO E DI TRATTAMENTI FARMACOLOGICI SULLE PROPRIETA’ CONTRATTILI DEI MUSCOLI DI TOPO DISTROFICO MDX, MODELLO

ANIMALE DELLA DISTROFIA MUSCOLARE DI DUCHENNE: CORRELAZIONE CON GLI INDICI

FUNZIONALI, BIOCHIMICI E MORFOLOGICI DELLA PATOLOGIA PER LA VALIDAZIONE IN TEST FARMACOLOGICI PRE-CLINICI

Docente guida: Prof.ssa Annamaria De Luca

Dottoranda: Capogrosso Roberta Francesca

UNIVERSITA’ DEGLI STUDI DI BARI ALDO MORO


Sezione di Farmacologia, Dip. Farmaco-Biologico



Studi ex vivo

Studi in vivo

Nella DISTROFIA MUSCOLARE DI DUCHENNE (DMD)

Parametri Contrattili Alterati Dalla Patologia

Efficacia di trattamenti farmacologici In Vivo su muscoli isolati di topi mdx

MDX: modello animale della DMDMDX: modello animale della DMD



MUSCOLO EDL

PARAMETRI CONTRATTILI ALTERATI DALLA PATOLOGIA

wt mdxwt mdx wt mdxwt mdx

wt mdxwt mdxwt mdxwt mdx

Forza di contrazione singola

Forza di contrazione tetanica

MUSCOLO DIAFRAMMA



SUSCETTIBILITA’ DELLE FIBRE DISTROFICHE ALLO STRETCH MECCANICO INDOTTO DA CONTRAZIONE ECCENTRICA

wt mdxwt mdx

CONTRAZIONE ECCENTRICA



DIFFERENZE FUNZIONALI TRA CONDIZIONE PATOLOGICA E

CONTROLLO



wt mdx Mdx + PTXwt mdx Mdx + PTX

Forza di contrazione singola

Forza di contrazione tetanica

J Appl Physiol 106: 1311-1324, 2009Multiple pathological events in exercised dystrophic mdx mice are targeted by pentoxifylline: outcome of a large array of in vivo and ex vivo testsRosa Burdi,1,* Jean-François Rolland,1,* Bodvael Fraysse,1 Karina Litvinova,1 Anna Cozzoli,1

Viviana Giannuzzi,1 Antonella Liantonio,1 Giulia Maria Camerino,1 Valeriana Sblendorio,1,2

Roberta Francesca Capogrosso,1 Beniamino Palmieri,2 Francesca Andreetta,3 Paolo Confalonieri,3 Leonarda De Benedictis,4 Monica Montagnani,4 and Annamaria De Luca1

wt mdx Mdx + PTXwt mdx Mdx + PTX

Effetti specifici dei farmaci sulle proprietà contrattili …

wt mdx Mdx + Resveratrolo




TRATTAMENTO FARMACOLOGICO CON RESVERTAROLO

nessun effetto su parametri contrattili…



mdxmdx

Effetto del trattamento con Resveratrolo sui livelli di anione superossido a livello muscolare e sui livelli di Creatina Chinasi

plasmatica



TRATTAMENTO FARMACOLOGICO CON RESVERTAROLO

wt mdx Mdx+ Resveratrolo

Sezione di Farmacologia Dipartimento Farmaco-Biologico

Facoltà di Farmacia

CLUB "PONTIGNANE e PONTIGNANI"

societa' italiana di farmacologia Seminario nazionale dottorandi

XV TELETHON CONVENTION Palazzo dei Congressi – Riva del

Garda March 9-11, 2009

PARTECIPAZIONE A SEMINARI E CONGRESSI …

DOTTORATO IN SCIENZE BIOCHIMICHE E … · -colture cellulari e trasfezione di proteine-Spettrometria in cuvette e piastre 96-pozzi-ELISA ... morfologici e funzionali di danno muscolare

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