Desarrollo de un método analítico en continuo (HPLC-DAD) sencillo, rápido, y barato para separar, detectar y cuantificar los estrógenos: etinilestradiol (E2), beta-estradiol (EE2), dietilestilbestrol (DES), estriol (E3) y estrona (E1), en muestras de agua, mediante la técnica de extracción selectiva con inyección en flujo empleando polímeros de impresión molecular (MISPE) PROCEDIMIENTO OBJETIVO RESULTADOS CONDICIONES CONCLUSIONES MISPE-Multi-residuo Disolventes de lavado y elución Muestra Eluato HPLC-DAD Bomba peristáltica MIP- DES MIP- E2 MIP- EE2 MISPE-micro-columna - Fase móvil Acetonitrilo:agua (50:50) - Flujo 1.0 mL.min -1 - Volumen de injección 20 μL - Tiempo del cromatograma 10 min - Permite la determinación, libre de interferencias, de estos estrógenos, asegurando la calidad de las muestras seleccionadas - El método desarrollado ha sido validado utilizando muestras de agua de diferente naturaleza adicionadas con los estrógenos a diferentes concentraciones (25–50 ng mL−1) 0 10 20 30 40 mUA minutes 2.6 6.6 7.8 8.6 9.9 10 min Desarrollo de un método MDGC-MS (SIM) para la detección de residuos de pesticidas en fresas. Tabla. Condiciones optimizadas de MS en modo SIM Determinación de PBDEs e identificación de nuevos isómeros no descritos de Tri-BHDs y Tetra-BHDs en muestras de atunes mediante GCxGC-ToF MS. EMPRESAS sector alimentario Kemira OYJ Ganaderías Priégola Grupo Mahou-San Miguel Biosearch Grupo Leche Pascual SAU Campofrío Food Group Novozymes Spain EMPRESAS instrumentación analítica Agilent Technologies Spain Thermo Fisher Scientific Izasa Konich-Tech Bruker Española EMPRESAS productos químicos y consumibles cromatogr. Enantiosep Sigma-Aldrich ORGANISMOS OFICIALES Y ASOCIACIONES FIAB, Federación Española de Industrias de la Alimentación y Bebidas AESAN, Agencia Española de Seguridad Alimentaria y Nutrición CS-CM, Consejería de Sanidad de la CM PTE FFL-Spain, Plataforma Tecnológica Food For Life CONSORCIO ANALISYC-II Novozymes Spain Grupo Leche Pascual SAU Campofrío Food Group Bruker Española Agilent technologies Spain Enantiosep Konich-Tech Biosearch Life IZASA Thermo Fisher Scientific Ganaderías Priégola Grupo Mahou-San Miguel Kemira OYJ RELACIÓN CON EMPRESAS Conectados con los intereses y/o problemática de la sociedad (S2009/AGR-1464) Grupos de Investigación Acrónimo Organismo Investigador Principal (IP) Personal Investigador CSIC-AI Institutos Química Orgánica General, Química-Física, Ciencia y Tecnología Alimentos y Nutrición y Facultad de Veterinaria UCM Dra. Mª José González Carlos 12 UCM-QA Dpto. Química Analítica. Fac. de Química (UCM) Dra. Carmen Cámara Rica 12 UAH-QA Dpto. de Química Analítica, Química Física e Ingeniería Química. Facultad de Biología, Cc. Ambientales y Química (UAH) Dra. Mª Luisa Marina Alegre 8 CSIC-AA Instituto Ciencia y Tecnología Alimentos y Nutrición (ICTAN) Dr. Francisco J. Morales Navas 6 UNED-QA Dpto. Ciencias Analíticas. Facultad de Ciencias (UNED) Dra. Pilar Fernández Hernando 4 Laboratorios Lab-UR0520 Dpto. Química Inorgánica y Analítica. URJC Dra. Isabel Sierra Alonso 3 Lab-160 Unidad de Servicio de Técnicas Analíticas, Instrumentales y Microbiológicas, ICTAN. CSIC D. Miguel A. Martínez Bartolomé 1 Detección de tóxicos emergentes en alimentos. • OBJETIVO 1: Determinación de componentes naturales y/o ingredientes autorizados de los alimentos, incluyendo cultivos de leguminosas y cereales o sus derivados, frutos, aceites vegetales, fórmulas alimenticias, alimentos enriquecidos y extractos alimenticios. • OBJETIVO 3: Evaluación del efecto del procesado de los alimentos sobre su composición, calidad y seguridad. • OBJETIVO 4: Desarrollo y optimización de metodologías de preparación y fraccionamiento de muestras; avances en optimización y validación de datos analíticos; integración de técnicas instrumentales mediante la creación de una plataforma instrumental común (compartida). OBJETIVO TRANSVERSAL (Objetivo 5) Detección de adulteraciones alimentarias. • OBJETIVO 2: OBJETIVOS BÁSICOS Desarrollo de metodologías analíticas para: Las nanoparticulas de titanio y plata son de las más utilizadas para la elaboración de protectores solares y productos de consumo respectivamente. El grupo UCM ha desarrollado nuevos métodos basados en el fraccionamiento en flujo con campo de flujo asimétrico (AF4) para la separación de NPs por tamaños. El acomplamiento AF4-UV- Vis/ICP-MS asegura una capacidad de deteccion multielemental de NPs inorgánicas. El método desarrollado por AF4-UV-Vis/ICP-MS ha permitido la caracterización y cuantificación de TiO 2 NP y AgNPs, a bajas concentraciones. La sonicación de la muestras con sonda de ultrasonidos focalizada, previa al empleo de la técnica AF4, mejoran la eficiencia del proceso de fraccionamiento. El método se ha aplicado al análisis de diferentes productos alimenticios disponibles en herbolarios en los que se ha demostrados la existencia de AgNPs y de TIO2. TiO 2 NPs presente en: Productos de consumo (azucar glass y crema de café) y cosméticos AgNPs presente en: Cerveza y nutraceúticos como Colloidal Silver, Oikos Silver, Cannella composta, Camomilla composta y Equisetum CuAuAg Fractogramas obtenidos por AF4-ICP-MS Caracterización de Nanopartículas de TiO2 y Ag en productos de consumo mediante AF4-UV-Vis/ICP-MS y TEM Los resultados obtenidos por AF4-ICP-MS han sido validados por TEM. www.analisyc.es CSIC-AI UCM-QA UAH-QA SEGURIDAD CALIDAD PCBs quirales PXBs HBCDs Ftalatos Metabolitos de PCBs Piretroides Almizcles Aditivos Antibióticos Antiinflamatorios Antiparasitarios Fármacos COPs Nanopartículas Estrógenos Colorantes azoicos Comp. Quirales Selenio Oligosacáridos Aminoácidos Péptidos bioactivos Fosfolípidos Proteínas Nuevos marcadores de adulteraciones en aceites de oliva. Aminoácidos no proteicos y betaínas Por primera vez se han estudiado componentes minoritarios como las betaínas y los aminoácidos no proteicos, en busca de marcadores novedosos de adulteraciones de aceites de oliva. Estrategia innovadora: la sola presencia del marcador en el aceite de oliva pone de manifiesto la adulteración. La estrategia se base en técnicas de Espectrometría de Masas en Tándem: Método no separativo de cribado por FIA/MS/MS (QqQ) Método separativo de confirmación por CE/MS 2 (IT) Aceites de semilla Aceites Oliva Adulteración ¡2 iones producto que confirmen inequívocamente la adulteración! Aceites de soja Aceites Oliva Virgen extra Aceites Oliva Virgen Extra con 2% de aceite de soja 0 2 4 6 4 x10 Intens. 5 10 15 0 2 4 6 4 x10 5 10 15 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 4 x10 5 10 15 Time [min] 70.3 115.1 172.0 0 1000 2000 3000 4000 Intens. 50 75 100 125 150 175 200 225 250 m/z +MS 2 (189.0) Ornitina 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 5 x10 Intens. 5 10 15 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 5 x10 5 10 15 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 5 x10 5 10 15 Time [min] EIE EIE EIE EIE EIE EIE 0 1 2 3 4 x10 Intens. 2 4 6 8 10 0 1 2 3 4 x10 0 1 2 3 4 x10 Time [min] Carnitina EIE EIE EIE Allo-isoleucina 85.2 103.1 159.0 0 1000 2000 3000 4000 Intens. 50 75 100 125 150 175 200 225 250 m/z +MS 2 (218.0) +MS 2 (188.0) 69.4 86.3 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 4 x10 Intens. 60 80 100 120 140 160 180 m/z Adulteración Adulteración Departamento de Química Analítica, Química Física e Ingeniería Química Compound tr-1D (min) Heart-cut (min) m/z m/z time (min) tr-2D (min) 1. Molinate 15.26 15.2-16.5 83, 126, 187 0.50-19.00 16.64 2. Trifluralin 17.76 18.0-19.0 19.52 3. Simazine 19.16 19.2-20.8 248, 264, 306 19.0.20.5 20.86 4. Atrazine 19.31 21.03 5. Propazine 19.42 173, 186, 187, 200, 201, 204, 214, 215, 229 21.17 6. Terbuthylazine 19.81 20.5-21.8 21.54 7. Diazinon 20.16 21.3-21.8 21.88 8. Pirimicarb 21.14 22.0-24.5 152, 179, 199 21.8—22.5 22.84 9. Parathion-methyl 21.93 23.61 10. Ametryn 22.00 72, 166, 238 22.50-23.40 23.85 11. Prometryn 22.30 24.07 12. Terbutryn 22.79 109, 125, 160, 188, 194, 212, 226, 227, 237, 241, 263 23.40-24.40 24.52 13. Chlorpyriphos 23.66 25.32 14. Parathion-ethyl 24.72 23.61 15. Alachlor 185, 226, 241 24.40-24.75 23.85 16. Malation 23.61 24.91 17. Methalochlor 25.15 18. Parathion ethyl 24.72 25.32 16. Pendimethalin 24.96 24.8-25.5 162, 191, 252 25.9-46.67 26.383 PTFE disks Sorbent Membrane Conditioning: 4mL methanol 4 mL water Sample loading: 150 mL water Washing: 15 mL Milli-Q water Elution: 3x2 mL methanol Aplicación para la preparación de muestras de alimentos: Extracción en fase sólida (SPE) de contaminantes Preparación y caracterización de nuevas sílices mesoporosas híbridas Se han preparado nuevas sílices mesoporosas (tipo SBA-15) funcionalizadas vía post-síntesis o mediante co-condensación con diversos ligandos orgánicos (octadecilsilano, mercaptopirimidina, mercaptotiazolina, etc.) Los materiales preparados han sido caracterizado mediante difracción de Rayos X, 29 Si MAS RMN, , FT-IR, análisis elemental, análisis térmico, fisisorción de gases, SEM, TEM, etc. Las sílices preparadas presentan muy buena adsorción de diversos contaminantes orgánicos e inorgánicos por lo que han sido utilizadas para la extracción en fase sólida (SPE) de estos contaminantes en muestras de alimentos (aguas, leche, etc.) como etapa previa a su determinación analítica. Se han obtenido muy buenos resultados en comparación con los materiales comerciales que se utilizan hasta la fecha (cartuchos tipo C18, HLB, etc.) especialmente para la preconcentración de hormonas esteroideas, así como para la preconcentración de metales pesados. Compuesto AGUA DE GRIFO AGUA DEL “RÍO MANZANARES” (Adiciones) (ng/mL) 25 50 25 50 Estriol 118 109 97 91 β-Estradiol 98 106 101 82 Ethynilestradiol 105 93 88 96 Estrone 95 96 98 98 Diethylstilbestrol 89 80 101 84 Compuesto Rango Lineal (ng/mL) R 2 RSD (%) LOD (ng/mL) LOQ (ng/mL) Estriol 12.5 – 100 0,9914 0,10 8.9 10.5 β-Estradiol 12.5 – 100 0,9905 0,10 9.1 12.5 Etinilestradiol 12.5 – 100 0,9902 0,15 3.6 8.9 Estrona 25 – 100 0,9974 0,12 19.5 25 Dietilstilbestrol 12.5 – 100 0,9910 0,06 8.0 8.4 Desarrollo y validación de un método para el análisis de 9 metabolitos de PAEs mediante UPLC-MS/MS (QqQ) en 7 minutos. Time 1.75 2.00 2.25 2.50 2.75 3.00 3.25 3.50 3.75 4.00 4.25 4.50 4.75 5.00 5.25 5.50 5.75 6.00 6.25 6.50 6.75 % 0 100 5.35 5.21 5.07 2.56 1.87 5.45 6.04 5.63 6.48 MMP MiBP MnBP MEP MBzP MEHP 5-OH-MEHP 5-OXO-MEHP 5-CX-MEPP O O H O O O O H O O O H O O O O O H O O O O O H O O O O H O O O O H O O H O O O O H O O O O O H O O H MMP MnBP MiBP MEP MBzP MEHP 5-OH-MEHP 5-OXO-MEHP 5-CX-MEPP Grupo de Investigación en Química Analítica aplicada a medioambiente, alimentos y fármacos Contaminantes de Procesado Acrilamida Furano Citotoxicidad de compuestos polares (CP) de aceites de fritura en células Caco-2 Los compuestos polares (CP) se forman durante la fritura y están constituidos mayoritariamente por polímeros de triglicéridos y triglicéridos oxidados. Su nivel es indicativo del grado de alteración y está limitado en 25%. Los CP se encuentran en gran parte en sus estructuras originales a nivel de la mucosa intestinal pero se desconocen sus posibles efectos tóxicos. En este estudio se han realizado ensayos de toxicidad en células Caco-2 mediante el test de respiración mitocondrial MTT utilizando muestras de ácido linoleico con cantidades crecientes de CP. Los resultados muestran una reducción significativa de la respiración celular en muestras con contenidos de CP representativos de los encontrados en alimentos fritos. En muestras al límite del contenido de CP (25%) la respiración celular se redujo un 20%. 0 20 40 60 80 100 120 Krebs KREBS+Triton Aceite Ácido linoleico Ácido linoleico + 10% CP Ácido linoleico + 15% CP Ácido linoleico + 25% CP Ácido linoleico + 40% CP CP * * * * Control + Control - *Reducción de 15-40% respiración celular en muestras representativas de ingesta Porcentaje (%) de respiración celular (Test MTT) O O Polímeros Triglicéridos oxidados Aceite Ornitina Girasol 1,1 - 2,9 Maíz 1,4 - 1,6 Soja 1,1 - 2,2 Oliva ND Mezcla 10 % 0,21 ± 0,01 Mezcla 5 % 0,15 ± 0,02 Mezcla 2 % 0,10 ± 0,06