Diagnostika pertussis v NRC Diagnostika pertussis v NRC pre pertussis a parapertussis (Prínos zavedenia real-time PCR do diagnostickej praxe tohto agens) Regionálny úrad verejného zdravotníctva ídl B k jB ii so sídlom v Banskej Bystrici NRC pre pertussis a parapertussis Maďarová L., Janičinová L., Klement C., Kohútová D.,
12
Embed
Diagnostika Bordetella pertussis v NRC.ppt [Režim ... · Diagnostika pertussis v NRCDiagnostika pertussis v NRC pre pertussis a parapertussis (Prínos zavedenia real-time PCR do
This document is posted to help you gain knowledge. Please leave a comment to let me know what you think about it! Share it to your friends and learn new things together.
Transcript
Diagnostika pertussis v NRCDiagnostika pertussis v NRC pre pertussis a parapertussis
(Prínos zavedenia real-time PCR do diagnostickej praxe tohto agens)
Regionálny úrad verejného zdravotníctva ídl B k j B i iso sídlom v Banskej Bystrici
NRC pre pertussis a parapertussis
Maďarová L., Janičinová L., Klement C., Kohútová D.,
PCR a real-time PCRrýchla, vysoko citlivá a špecifickámetódarelevantné výsledkymožnosť dokázať prítomnosť B.pertussis aj po zahájení ATBpertussis aj po zahájení ATBterapie
( )•Qiamp DNA mini Kit (QIAGEN)Real-time PCR•PCR v reálnom časekombinácia klasickej PCR s metódouparapertussis (BAL)
spútumbunková kultúra
•kombinácia klasickej PCR s metódouidentifikácie pomocou fluorescenčneoznačených sond (detekčný formát -duálne sondy)y)
•možnosť sledovať každý cyklus PCRpriamo na monitore počítača
•odlíšenie B. pertussis od B. parapertussisdôkaz IS481 a IS1001•dôkaz IS481 a IS1001
www.cdc.gov
Výsledky - Bordetella pertussis
rok 2004 - zavedená real-time PCR (B. pertussis, B. parapertussis)
cieľové sekvencie IS481 B. pertussis, IS 1001 B. parapertussis
pomocou real-time PCR metódy sa v období od decembra 2004 domarca roku 2011 vyšetrilo spolu 784 klinických materiálov naprítomnosť B pertussis resp B parapertussis
Vyšetrovaný materiál
Počet
prítomnosť B. pertussis resp. B. parapertussis
Prehľad materiálov vyšetrených na prítomnosť materiál
Výter z nosohltana
758
B kt iál 10
y ý pBordetella pertussis pomocou real-time PCR
0,53%0,66%Výter znosohltana Bakteriálna
kultúra10
Nekroptický materiál
10
0,26 %1,33%
nosohltana
Bakteriálnakultúra
Nekroptický materiál
Bronchoalveolárna laváž
4
S út 297 22%
p ýmateriál
Bronchoalveolárna laváž
Spútum Spútum 2
Spolu 784
97,22% Spútum
Výsledky - Bordetella pertussis
11 prípadov zaznamenaných od 01.januára do 31. marca 2010
Rok Počet vyšetrených vzoriek
Počet pozitívnych vzoriek
2004 5 3B. pertussis je popri RSV, adenovíruse,Streptococus pneumoniae, Chlamydiapneumoniae a Mycoplasma
2004 (december)
5 3
2005 40 6
2006 54 3
pneumoniae: diferenciálna diagnostikachrípky
chrípková sezóna 2009/ 2010-
2007 65 2
2008 174 7
2009 169 3 p /celosvetové kolovanie pandemickéhotypu vírusu chrípky typu A/ H1N1v populácii počas celého roka
2010 (január-marec)
67 11
2010 (marec-december)
165 7p p p
skutočnosť zvýšeného záchytu B.pertussis od januára do marca 2010súvisí s približne 12 násobným
december)
2011 (január-marec)
45 1
Spolu 784 43 súvisí s približne 12 násobnýmvzostupom počtu vzoriek zaslaných navyšetrenie, na RÚVZ BBprítomnosť B. pertussis bola dokázaná
v 43 krát, čo predstavuje 41 pacientov;š k l b ó d é í d b livšetky laboratórne potvrdené prípady boli
potvrdením klinicky stanovenej diagnózy
Výhody zavedenia real-time PCR do diagnostiky B. pertussisresp. B. parapertussis v NRC na RÚVZ BB .
Bordetella pertussis, farbenie podľa Grama, foto: Maďarová
Vyhodnotenie real-time PCR, ilustračný obrázok
Prečo je na Slovensku stále viac diagnostikovaných pozitívnych prípadov na prítomnosť B. pertussis aj u zaočkovanej populácie?
Ako sa dá tento problém riešiť?Ako sa dá tento problém riešiť?
celosvetový problém, epidémie- Holandsko, Taliansko, Francúzsko, Fínsko, Poľsko,Anglicko, Kanada, Argentína, USA, Tajwan, Austrália, Švédskopo ornosť sa sústreď je na akcináci mena akcín an tie im nit (booster) shiftpozornosť sa sústreďuje na vakcináciu- zmena vakcíny, vyvanutie imunity (booster), shift vgenóme divého kmeňa (PFGE- príbuznosť resp. odlišnosť kmeňov)Slovensko- projekt EUVAC.NET, zosúladenie diagnostiky (sérologickej, MB+PFGE)nevyhnutnosť surveillance výskytu pertussis nielen pomocou real-time PCR ale aj pomocouk lti á i á l d lý j d tli ý h i lát PFGEkultivácie s následnou analýzou jednotlivých izolátov pomocou PFGEpríprava odborného usmernenia, diagnostika pertussis, klinický aspekt
Výsledok pulznej elektroforézy (PFGE)
ZÁVERY• rozšírenie a skvalitnenie diagnostiky Bordetella pertussis• rýchlejšie odhalenie pôvodcu ochorenia• presná a spoľahlivá diagnostika: rozhodujúci predpoklad prepresná a spoľahlivá diagnostika: rozhodujúci predpoklad pre
zodpovedné rozhodovanie lekára o začatí adekvátnej terapie• nadstavbové vyšetrenia aj pre ostatné pracoviská resp. laboratóriá
a lekárov•• nevyhnutnosťnevyhnutnosť surveillancesurveillance pertussis,pertussis, identifikáciaidentifikácia jednotlivýchjednotlivých