Detección de Coliformes Totales y Coliformes Fecales

Deteccin de Coliformes Totales y Coliformes Fecales (Termotolerantes) por la Tcnica del Nmero ms Probable.

Deteccin de Coliformes Totales y Coliformes Fecales (Termotolerantes) por la Tcnica del Nmero ms Probable.Q.F.B Ana de Jess Fuentes Rodrguez.

Clasificacin como grupo indicadorAerobias o anaerobias facultativasOxidasa Negativas

Fermentan LACTOSA (b-galactosidasa)KlebsiellaEnterobacterCitrobacterSerratiaEscherichia

COLIFORMES

Fermentan la LACTOSA en un lapso mximo de 48 horas con produccin de cido y gas a 362CCapaces de crecer en presencia de cidos biliares u otros agentes surfactantes.

COLIFORMES TOTALES

Fermentan la LACTOSA en un lapso de 24 a 48 horas a una temperatura de 44,5 0,2 C.

COLIFORMES FECALES (TERMOTOLERANTES)

No es practico monitorear alimentos y agua para cada agente patgeno microbiano.

Indicadores biolgicos de contaminacin.

Su presencia indica una mayor probabilidad de encontrar organismos patgenos.IMPORTANCIA SANITARIAGRUPODEFINICINIndicadores de eficiencia del ProcesoGrupo de organismos que demuestran la eficacia de un proceso de sanitacin. (COLIFORMES TOTALES) Indicadores FecalesOrganismos que indican la presencia de contaminacin fecal (Coliformes Termotolerantes, E. coli) se puede inferir la presencia de patgenos.MICROORGANISMOS INDICADORESAdaptado de. Ashbolt N. et al. 2001. Indicators of microbial water quality. Guidelines. Standards and Health. OWH.Uno de los primeros mtodos aceptados para determinar Coliformes.

Dilucin de la muestra en tubos mltiples (menor dilucin todos positivos, mayor dilucin negativos)

TEORIA DE PROBABILIDAD.

TCNICA DEL NMERO MS PROBABLE

Una distribucin aleatoria de las bacterias en la muestra.Las bacterias se encuentran como entidades no agrupadas.Los microorganismos presentes en la muestra crecern en el medio si se dan las condiciones adecuadas para su desarrollo. 1

TCNICA DEL NUMERO MS PROBABLE (Supuestos)1.CCAYAC-M-004/8. Mtodo para la estimacin de la densidad microbiana por la tcnica del numero ms probable, deteccin de coliformes totales, coliformes fecales y Escherichia coli.Agua Potable 2 Agua purificada 2Hielo 2Alimentos procesados trmicamente 2Alimentos crudos (verduras, frutas, marinos) Interferencia en la exactitud de la cuenta de UFC 1.Debe seleccionarse cuando la densidad esperada sea como mnimo de 1 bacteria/10ml o 1 bacteria/g. 2

CAMPO DE APLICACIN1.CCAYAC-M-004/8. Mtodo para la estimacin de la densidad microbiana por la tcnica del numero ms probable, deteccin de coliformes totales, coliformes fecales y Escherichia coli.

2. NOM-112-SSA1-1994, BIENES Y SERVICIOS. DETERMINACIN DE BACTERIAS COLIFORMES. TCNICA DEL NMERO MS PROBABLE

TCNICA DE NMERO MS PROBABLE (AGUA)AGUAAgua consumo Humano.Hielo, agua purificada, agua potableAgua de uso RecreativoCaldo Lauril triple 5 Tubos con 20ml de muestra. 1

CaldoLauril o Lactosado 5 tubos con 10 ml de muestra(Caldo de alta concentracin)/ 5 tubos con 1ml de muestra concentracin sencilla/5 tubos 0,1 ml de muestra. 2Caldo Lauril o Lactosado. 5 tubos con 10 ml de muestra medio de doble concentracin/5 tubos con 1 y 0,1 ml de muestra medio de concentracin sencilla. 1Agua de Mar: 5 o 3 Tubos con 10 ml de muestra caldo Lactosado concentracin doble/ 5 o 3 con 1 y 0,1 ml medio concentracin sencilla. 1Caldo Lauril Triptosa (LST) de concentracin sencilla, volmenes de 1 ml a 3 tubos por dilucin. Diluciones seriadas (al menos 3). 1

Caldo LST concentracin 1,5; 3 tubos con 10 ml de muestra concentrada o diluida/ 3 tubos con 1 ml de muestra o diluciones subsecuentes. 2TCNICA NMERO MS PROBABLE (ALIMENTOS)

Uso de Tablas con 95% del limite de Confianza.Si la cantidad de muestra inoculada es la misma que se encuentra en las tablas, reporte el valor correspondiente a la combinacin de resultados positivos y negativos como NMP/1ooml o NMP/g o ml

Ejemplo: Para una muestra de agua con series de 5 tubos con 10ml, 1ml, 0.1ml. Tenemos:10ml: 5/5 1ml: 2/5 0,1ml: 0/5 Resultado: 5 2 0

Segn Tabla . NMP/100ml : 49INTERPRETACIN DE RESULTADOSPara una muestra de alimento con series de tres tubos con 0,1g; 0,01g y 0.001g se obtienen los siguientes resultados.0,1 g 3/3 ; 0.01 g 1/3; 0,001 g 0/3

Combinacin: 3 1 0

Resultado segn tabla: 43 NMP/g

Ejemplo

Elegir slo tres diluciones consecutivas segn los siguientes criterios:Para diluciones que tengan todos los tubos positivos, seleccionar la mayor dilucin (la que contenga menor cantidad de muestra) y las dos diluciones mayores sucesivas (ejemplos a y b). Si todos los tubos son positivos reportar como mayor al ndice de NMP correspondiente (ejemplo b).

Ejemplo: Para series de tres tubos

MUESTRAS CON MS DILUCIONES

2. Si ninguna dilucin proporciona todos los tubos positivos, emplear las primeras tres diluciones consecutivas (ejemplo c) o seleccionar tales que la dilucin de en medio contenga el resultado positivo (ejemplo d).

3. Si existe algn tubo positivo en una dilucin mayor de las tres seleccionadas el nmero de estos debe sumarse a los de la dilucin inferior ms prxima (ejemplo e).MUESTRAS CON MS DILUCIONES

EJEMPLOS

4. Si ya no se examinaron diluciones ms altas, seleccione la siguiente dilucin ms baja (con mayor cantidad de muestra) Ejemplo f.

MUESTRAS CON MS DILUCIONES

CMO SE CALCULA EL RESULTADO SEGN LAS DILUCIONES?

3. Standars Methods for examination of Dairy Products 17th. Ed. 20044. Standars Methods for the Examination of Water and Wastewater. Ed. 21st. 2005QU PASA SI LA COMBINACIN NO LA ENCUENTRO EN LAS TABLAS?Se siembra una muestra de un pescado (trucha), se elije sembrar con las diluciones desde 10-1 a 10-6 en series de tres tubos. Se obtienen las siguientes lecturas en la prueba confirmatoria para coliformes fecales.

Cul es el NMP de coliformes fecales por gramo para esta muestra?EJEMPLOS

SOLUCIN

Elegir las tres diluciones consecutivas que se buscaran en las tablas, segn los criterios especificados.Para este caso se elegir la combinacin que a continuacin se indica.

2. Buscar la combinacin en la tabla correspondiente. Tenemos que el ndice de NMP para esa combinacin de tubos positivos es :

150 NMP/g

SOLUCINLlega al laboratorio una muestra de agua purificada en garrafn. Se determinan NMP/100ml de coliformes fecales. Se emplea una serie de 5 tubos con 20 ml de muestra obtenindose los siguiente resultados :

0/5Cul es el NMP/100ml para esta muestra?

RESULTADO: