Principios de Deshidratación
En plas%nación como en histología la deshidratación es el proceso de reemplazar el agua del espécimen por un solvente orgánico miscible en agua.
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Punto clave
• Es importante diferenciar claramente los agentes deshidratantes de los solventes intermediarios o Vola%le Intermedium.
• En teoría primero se deshidrata y luego se hace un paso por solvente intermediario (generalmente Cloruro de Me%leno) pero si el agente deshidratante %ene las caracterís%cas de un solvente intermediario este paso se puede obviar.
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Agentes deshidratantes
Su estructura química puede variar: – Mono-‐hídricos
• Metanol, etanol e isopropanol – Di-‐hídricos
• Monoe%len glicol • Die%len glicol
– Tri-‐hídricos • Glicerina
– Cetonas • Acetona
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Vola%le Intermedium
• Cualquier solvente orgánico con presión de vapor alta y y bajo punto de ebullición (+35ºC -‐ 60 ºC).
• Puede ser miscible en agua (Ej. Acetona) • Puede ser no miscible en agua (Ej. Cloruro de me%leno)
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Difusión
• El proceso de deshidratación se dá por el mecanismo de Difusión simple
• Del la%n diffundere = expandir o dispersar. • Es la mezcla gradual de diferentes sustancias sin usar fuerzas externas.
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Deshidratación en el concepto de Plas<nación
Para producir un plas%nado agua y lípidos son reemplazados por un polímero curable. 1. Deshidratación: Agua y parte de los lípidos son reemplazados por un solvente orgánico miscible en agua.
2. El liquido deshidratante es intercambiado por un Vola%le intermedium. Si un Vola%le intermedium como acetona es usado para deshidratación el paso 2 se obvia.
3. Impregnación Forzada: El Vola%le Intermedium en el espécimen es reemplazado por el polímero curable.
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Procedimiento básico
Deshidratación ascendente (procedimiento mas conocido). • Consiste en poner el componente anatómico en baños
de deshidrataciones seriales con concentraciones ascendentes, el primer baño con deshidratante al 50%-‐70% y el úl%mo con deshidratante al 100%.
Frezze Subs%tu%on • Hielo del espécimen es reemplazado por el agente
deshidratante a -‐24ºC. • El agente usado es acetona y desde el primer baño se
usa al 100% En ambos procedimientos terminan cuando el contenido de agua en el componentes es inferior al 1%
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Procedimiento básico
• El reemplazo del agua y lípidos del tejido se da por difusión.
• Entre más contenido acuoso tenga el tejido mas demorará la deshidratación.
• El contenido de agua de la solución de deshidratación se determina por su densidad.
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Notas Importantes
• La relación entre el peso del componente y el volumen de deshidratante debe ser 10:1
• Un componente fresco o fijado no puede simplemente ser sumergido en el líquido deshidratante , ya que este se encogerá (shrinkage).
• No poner el componente anatómico en acetona o etanol al 100% a temperatura ambiente para no causar retracción extrema.
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Desengrasado
Durante la deshidratación los componentes también se da el proceso de desengrasado. Este proceso depende de: 1. Tipo de deshidratante: Cloruro de Me%leno más fuerte que acetona.
2. Temperatura: Acetona a +25ºC mucho mas fuerte que a -‐25ºC
3. Relación entre el volumen del tejido adiposo y el volumen del baño de deshidratación.
4. Duración de la deshidratación.
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Cronograma de trabajo (Freeze subs<tu<on)
1. Lavar especímenes y enfriar a +1ºC -‐ +5ºC. 2. Pre-‐enfriar Acetona a -‐25ºC 3. Sumergir componente anatómico en acetona 4. Cambiar acetona.
Por razones de seguridad se deben hacer los cambios de acetona a -‐25ºC – Estar debajo del punto de inflamación (-‐19ºC) – Presión de vapor a esta Tº es muy baja.
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Cronograma de trabajo (Freeze subs<tu<on)
Casos especiales: • Cerebro: Mantener desh idratac ión por encima del 98% para disminuir retracción
• I n t e s < n o s : P a r a mantener flexibilidad se recomienda que estos permanezcan lo menos posible en acetona .
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Duración de la Deshidratación
• Usualmente acetona es cambiada 3 veces si la razón es 10:1.
• Cerebro Humano: Toma 2 semanas en el primer baño , 1 semana en el segundo y 4 días en el tercero.
• Riñones y ar<culaciones: 3 – 4 semanas • Cabezas e hígados: 5-‐6 semanas • Intes<nos: 5 a 10 días.
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Protocolo Universidad de Murcia, España
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