Cultivos celulares como simulación del hábitat de algunos parásitos. Dr. Rodrigo Morchón

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 de algunos parásitos.

Morchón, R.1, González‐Miguel, J.1, Carretón E. 3, Bossetti, E.2, Fernández‐Serafín C.1

1 Grupo de

 dirofilariosis animal

 y humana,

 Universidad

 de

 Salamanca,

 Instituto

 de

 Investigación

 Biomédica

 de

Salamanca (IBSAL), Facultad de Farmacia, Campus Miguel Unamuno s/n, Salamanca.2 Universidad de Milán, Programa Leonardo da Vinci, Milán, Italia.

  ,  ,  .

AUTOR RESPONSABLE (correo-E): [email protected]

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Ciclo biológico

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Patología crónicaVermes vivos

Endarteritis

proliferativa

Lesiones pulmonares (edema)

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Patología crónica y agudaMuerte masiva de vermes adultosVermes vivos

Tromboembolismos

Endarteritis

proliferativa

Lesiones pulmonares (edema)

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Corte transversal de la arteria pulmonar

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Problemas

- Mucho tiempo en expandir un cultivo.

- Estimulación de cultivos.

- Detección de moléculas (PG, Tx y LT) en el

-  

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Cultivo de células endotelialesDía 1

(40%)

Día 3

(80%)

Día 2

(60%)

Día 4

(90%)

Día 5

(95%)

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Cultivo de células musculares

Día 1

(40%)

Día 5

(60%)

Día 7-8 Día 10

(90%) (95%)

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Cultivo de células endoteliales

control 100 ng 500 ng 1 μg 10 μg 50 μg 100 μg 500 μgDiSA

COX-1

-tubulina

1,51,5

0,5

1

   C   O   X  -   1

   N   i  v  e   l   d  e  e  x  p  r  e  s   i   ó  n

1

0,5   C   O   X  -   1

   (   U   A   )

control 100 ng 500 ng 1 μg 10 μg 50 μg 100 μg 500 μg

COX-2

DiSA

eNOS

control 100 ng 500 ng 1 μg 10 μg 50 μg 100 μg 500 μgDiSA

0control 100 ng 500 ng 1 µg 10 µg 50 µg 100 µg 500 µgcontrol 100 ng 500 ng 1 μg 10 μg 50 μg 100 μg 500 μgDiSA

0

6

     ó  n

***

** **6

-tubulina

**3

     ó  n **

*

-tubulina

2

4

   C   O   X  -   2

   N   i  v  e   l   d  e  e  x  p  r  e  s   i

4

2   C   O   X  -   2

   (   U   A   )

1  e   N   O   S

   N   i  v  e   l   d  e  e  x  p  r  e  s   i

  e   N   O   S

   (   U   A   )

0

control 100 500 1 10 50 100 500

0

DiSA control 100 ng 500 ng 1 μg 10 μg 50 μg 100 μg 500 μg

0control 100 500 1 10 50 100 500control 100 ng 500 ng 1 μg 10 μg 50 μg 100 μg 500 μgDiSA

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Cultivo de células endoteliales

DiSA - +   DiSA- DiSA+

COX-2

5-LO 2,5

***

2,522   O   X

  -   2

   (   U   A

   )

*

   5  -   L   O

   (   U   A

   )

0

1

α-tubulina00

1

0

DiSA - + DiSA - +

* ***

0,5 11   4

   (       μ  g   /  m   l   )

0,5   2   (

       μ  g   /  m   l   )

0,25   2

   (       μ  g   /  m   l   )

,

0,25

0 00

   L   T

0

   T  x   B

0

- - -

   P   G

0

x 

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Extracto antigénico de vermes adultos de D. immitis (DiSA)Identificación de proteínas

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Extracto antigénico de vermes adultos de D. immitis (DiSA)Identificación de proteínas

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Extracto antigénico de vermes adultos de D. immitis (DiSA)Análisis de espectrometría de masas

MS

Proteína

completa: 

determinación 

masa 

molecular Péptidos: huella peptídica (PMF)

MS/MS

Pé tidos: LC MS MS 

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GRACIAS