JRC Set/02 Slide 1 por Jacinto Rolha Castanho
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porJacinto Rolha Castanho
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Mikhail Semenovich Tswett, 1872-1919
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AA cromatografiacromatografiacompreende o grupo de compreende o grupo de técnicas que são usadas técnicas que são usadas para separar componentes para separar componentes por atracção relativa de por atracção relativa de cada componente a uma cada componente a uma fase estacionária, enquanto fase estacionária, enquanto uma fase móvel passa sobre uma fase móvel passa sobre ou através dessa fase ou através dessa fase estacionária.estacionária.
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Classificação dos sistemas cromatográficos
Cromatografia
Cromatografiagasosa
Cromatografialiquída
líquida
sólida
Partição
Adsorção
Coluna
Coluna
GLC
GSC
líquida
líquidoligado
sólida
Partição
Partição
Adsorção
Coluna
Planar
HPLC
HPTLC
Trocaiónica
Exclusãomolecular
Coluna
Planar
LSC
HPLC
TLC
HPTLC
PC
Coluna
Coluna
IEC
SEC ouGPC
Fasemóvel
Faseestacionária
Mecanismode separação Técnica Método
cromatográfico
Cromatografiade fluidos
supercríticosSFC
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MacromoléculasCompostos farmacêuticosCompostos bioquímicosEspécies iónicas
Termicamente instáveisMuito polaresInvoláteisiónicos
HPLC
Gases permanentesCompostos orgânicos
_ Apolares_ media polaridade_ massa ~< 400
VoláteisTermicamente estáveis(apenas ~ 20% dos compostos orgânicos podem ser cromatografados por GC sem modificação química)
GC
aplicaçõesAnalitos
Cromatografia gasosa versus cromatografia líquida
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Parâmetros fundamentais de um cromatograma
Tempo
Res
post
a do
det
ecto
r
t’ra = tra – tm t’rb = trb – tm
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Resolução e factor de capacidade
)(5,0 21
12
wwttR RR
S+−
= 21
)1
)(1(25,0 NkkRS+
−=
αα
α- factor de separação 01
02
tttt
R
R
−−
=α
k - factor de capacidade médio g
l
g
l
m
r
VV
CC
ttk .'' 1
1 ==
N – Número de pratos teóricos da coluna
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Eficiência da coluna
teóricoPrato
2
21
)(54,5wtR
=2)(16wtN R
= NLHETP =
duplicar L ⇒ duplicar N
duplicar N ⇒ duplicar RS
21
)1
)(1(25,0 NkkRS+
−=
αα
Equação de Van Deemter
HETP = A + B/u + C.uConstante que reflecte o
efeito do caminho percorrido
Constante relacionada com fenómenos de difusão longitudinal
Constante relacionada com a resistência à transferência de massa entre as duas fases
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Representação da equação de Van Deemter
óptim
o
DetectorTem a função de converter em sinal eléctrico a concentração do componente eluído da coluna
R=f(C)
A=∫R.dt= ∫ f(C). dtt2
t2
t1 t1
C=f(altura)
Análise quantitativa
Métodos de quantificação:
* Método da normalização
* Método dos factores de resposta
* Método do padrão externo
* Método do padrão interno
* Método da adição padrão
C=f(Área)
AplicaçõesA cromatografia em fase gasosa tem a mais variadas aplicações, desde que osanalitos sejam moléculas orgânicas ou gases.
Exemplos:* Determinação de ontioxidantes, nutrientes ou contaminantes em
alimentos* Determinação de resíduos de pesticidas em produtos alimentares, águas
ou esgotos* Determinação de metabolitos de microrganismos* Determinação de gases, solventes orgânicos, PAH’s ou PCB’s na
atmosfera, solos, rios ou produtos alimentares.* Doseamento de princípios activos ou contaminantes de medicamentos* Análise forense: Drogas, produtos tóxicos, anti-doping, ...* . . .* . . .
Amostradores automáticos
_ Aumentam areprodutibilidade
_ Aumentam a produtividade
_ Libertam o operador
_ Disponíveis para todas as técnicas de injecção
Técnicas hifenadas
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Principais componentes do HPLC