Cours de cytologie et physiologie cellulaire · Techniques de coupes minces + coloration positive ... différents composants de la cellule . Autres tehniques d’études ... La spectrophotométrie

Cours de cytologie et physiologie cellulaire

Assuré par Mme . F . BENALKMA - FOUKRACHE

Année universitaire : 2014 -2015

CHAPITRE II Méthodes d’études de la cellule

Plan

Introduction

Le microscope photonique à fond clair /M .optique ou microscope photonique

Description Principe de fonctionnement

Technique histologique

Le microscope photonique à fluorescence

Principe de fonctionnement

Description

Technique de détection et de localisation de composés cellulaires

I / Les microscopes photoniques :

II / Les microscopes électroniques : Le microscope électronique à transmission ( MET )

Description Principe de fonctionnement

Techniques de coupes minces + coloration positive

Technique d’autoradiographie

Le microscope électronique à balayage (MEB )

Description Principe de fonctionnement

Technique de cryofracture / cryodécapage + ombrage métallique

Technique de coloration négative

Le fractionnement cellulaire / Isolement des différents composants de la cellule .

Autres techniques d’études

La chromatographie sur papier

L’ électrophorèse

La spectrophotométrie

Les cultures cellulaires

Introduction

Echelle des dimensions dans le monde du vivant

homme

Echelle des dimensions dans le monde du vivant

Notion de pouvoir séparateur= pouvoir de résolution

C’est la capacité de l’œil à distinguer nettement 2 points très rapprochés 0,2mm

Organismes de taille plus petite Invisibles

Nécessité d’utiliser des instruments destinés à observer de petits objets dont un système de lentilles (optiques , électroniques … ) fournit une image agrandie

Ces instruments les microscopes

0,2mmŒil humain

Le microscope est indispensable à l’observation et à l’étude

De la structure et de la composition des tissus

Des cellules

L’histologie

La cytologie

Des molécules

Primordiales pour l ’établissement des diagnostics

Microchirurgie

Connaissance de la cellule

Etude morphologique

Etude biochimique

Etude moléculaire

•Description Structurale et Ultrastructurale

TailleFormeContenu

•Détection •Localisation

•Quantification

•Nature des molécules

• Leur organisation

De composés cellulaires

Les microscopes photoniques :

Plan

Le M P à fond clair / microscope optique

Pouvoir séparateur de 0,2µm

Description

Principe de fonctionnement

Technique histologique

Le MO SIMPLE de ROBERT HOOKE 1870

Les premiers microscopes optiques

HISTORIQUE

Cuff 1760

Les premiers microscopes optiques

1751

Modèle Voigt et Hochgesang1890 Carl Zeiss 1891

Description du microscope optique actuel

binoculaire

Microscope Optique avec caméra numérique

Schéma M O p .24

statif

condenseur

Principe de fonctionnement :

Observation par transmission

M O en coupe et chemins suivis par les rayons lumineux

Principe de la transmission des photons

Principe de formation de l’image

Le M O est un système optique à lentilles dans le but d’obtenir une image agrandie de l’échantillon à observer :

L’objectif à image agrandie inversée

L’oculaire à image agrandie virtuelle

réelle

M O MET

1

2

3

4

5

Source d’éclairement

milieu Porte objet

Observation

Faisceau de photons

Lentilles en verre

Lame de verre

Lentilles oculaire

Principe de fonctionnement du M O

1ere image

Lentilles objectif

Résultat : image colorée

La technique histologique p .28

Méthode de préparation de l’échantillon pour une observation au microscope photonique

But : étude structurale des tissus

1 –dissection et prélèvement

2 – fixation chimique

3 - Borels de déshydratation (bains d’alcool )

90 ° 100° Toluène

4 – Inclusion à la paraffineBlocs de paraffine

5 – Microtomie (réalisation de coupes de 2–10µm d’épaisseur)

Microtome

Ruban de coupes de 2 – 10 µm

Bloc de paraffine

A

Récupération et étalement des coupes sur lame

6 - La réhydratation

7 - La coloration : par des colorants chimiques spécifiques

Coupes fines de 2 -10 µm

8 - Observation des coupes au MP

Résultat : image en couleurs

Résultats de l’observation microscopique

Analyse structurale des cellules et de tissus

muqueuse de l’intestin grêle

épithélium de l’épididyme

Épithélium de la trachée

Tissu musculaire cardiaque

Muqueuse de l’intestin grêle

Cellule nerveuse

Autres observations microscopiques

frottis sanguin humain

Paramécie

Différentes formes bactériennes vues au M O