Contaminacion Bacteriana Biomerieuxoriginal Cuaderno Ya

CONTAMINACION BACTERIANA DE HEMOCOMPONENTES

ESTADO ACTUAL

Dr. Oscar W. Torres [email protected]

Contaminacin Bacteriana HISTORIA 1940 Sistemas abiertos: Septicemia hasta en el 25% de las transfusiones Introduccin de circuitos cerrados: incidencia significativamente reducida Problema ignorado 1980-1990:Reconocimiento de un problema potencial (Control de calidad) 2000 : tamizaje?

Contaminacin BacterianaVias de contaminacin Endgena Exgena la mayora, desconocida!

Contaminacin BacterianaVia EndgenaPiezas Dentarias Staphylococcus sp. Streptococcus viridans Serratia liquefaciens Yersinia enterocolitica Salmonella sp. Campylobacter sp.

Osteomielitis Staphylococcus S. cholerasuis

Intestino

Difcil comprobacin cientfica concentracin < 102 CFU/ml

Contaminacin BacterianaVia Exgena

Piel NormalStaphylococcus epidermidis Staphylococcus aureus Diphteroids sp. Micrococcus sp. Pseudomonas sp. Bacillus cereus Propionibacterium acnes Flavobacterium sp.

Contaminacin BacterianaVia Exgena

Normatizacin de la venopuntura Lo ms importante

Presencia de contaminacin en zonasde mltiples punciones (Anderson e cols )

Embolo drmico - piel, folculospilosos y glndulas sebceas

Contaminacin BacterianaVia Exgena

Fallas durante la fabricacin de bolsas Rotura del circuito cerrado durante el procesamiento deunidades

Salina no estril Manipulacin Manipulacin Baos termostticos ( P. aeruginosa. P. fluorescens )

Contaminacin BacterianaBarreras de defensa de la sangre

Propriedades bactericidas del plasma(opsoninas, complemento y anticuerpos)

Fagocitosis - Ideal entre 22o C y 37o C (perodo de descanso)

Contaminacin BacterianaBarreras de defensa de la sangreLa entrada de las bacterias en un producto sanguneo est determinada por las oportunidades que ocurren durante su manipulacin, pero las bacterias que se desrrollan despus de penetrar en el sistema son seleccionadas de acuerdo con su posibilidad de reproducirse en un producto. Los factores que puedem influenciar su producto. reproduccin son: la insensibilidad a alguma actividad bactericida del producto, la son: capacidad de utilizar nutrientes disponibles y la reproduccin a una temperatura a la cual el producto es mantenido. mantenido.Pittman M J. Lab. Clin. Med 42:273-281,1953 42:273-

Contaminacin BacterianaIncidencia

Dificultad de reconocimento en neutropnicos Sin asociacin con los agentes de la flora normal Signos que pueden aparecer despues de finalizada latranfusin

Componentes estudiados - Vencidos o dentro del plazo devalidez.

Contaminacin BacterianaPerez y col. Transfusion, 2001Staphylococcus Sterptococcus Enterococcus

Cocos G+ 28%

Bacilos G+ 21% B. cereus P. acnesAcinetobacter Klebsiella E. coli Gram Serratia 46% Enterobacter Pseudomonas

M ixto 5%

Contaminacin BacterianaGRDAUTOR Anderson Barrett Wendel Soeterbroek Blajchman Soeterbroek TASA EN 100.000 UNIDADES 3 3 295 200 360 689

Pseudomonas Flavobacterium Campylobacter Serratia Enterobacter E. coli

Y. enterocolitica25%

50%

25%

P. fluorescens Wagner, 1994

Contaminacin BacterianaConcentrado de PlaquetasStaphylococcus epidermidis coagulase neg.AUTOR Morrow Barrett Wendel Yomtovian Chiu Blajchman Leiby ndice em 100.000 Unidades 8 23 176 41 46 51 80

25%

75%

S. aureus E. coli, Flavobacterium Enterobacter Salmonella, Bacillus

Contaminacin BacterianaSepsis Transfusional Encuentro concomitante de un mismo agente en la circulacin del receptor y del hemocomponente involucrado, con signos clnicos evidentes, debido a la respuesta sistemica del organismo al agente (hipotensin sostenida, taquicardia, falla multiorgnica)

Contaminacin BacterianaSepsis Transfusional Diferenciacin de la contaminacin del componente Agentes no patognicos (Diphteroids sp.) Concentracin < 10 CFU/ml en el 75% de los casos Uso concomitante de antibiticos Nivel para induccin (5x106 CFU/ml)

Contaminacin BacterianaSepsis TransfusionalEstudio GRD P.D.U. CP Total

Bacthem Bacon

5,8 (17) 0,7 (25)

31,8 (22,5) 18,4 (18)

9,4 (0) 15,5 (27)

7,4 (15) --

Incidencia de reacciones (x 1.000.000 componentes) Mortalidad (%)

Contaminacin BacterianaSepsis transfusional por Yersinia enterocolitica % Escalofros Fiebre Hipotensin CID Mortalidad Diarrea Vmitos 80 70 65 35 60 8 d Bacthem, 2001

Contaminacin BacterianaDesarrollo Bacteriano10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 7

Gram Negativo (4oC)CFU /m L lo g 10

12 10 8 6 4 2 0

Gram Positivo (22oC)

CFU /mL log 10

14

21

28 Dias

35

42

49

1

2

3

4 Dias

5

6

7

Contaminacin BacterianaPapel de los leucocitosImportante barrera en la auto-esterilizacin Atividad ptima a 37 oC qAdherencia bacteriana q Opsonizacin 4 oC q Fagocitosis q Metabolismo Oxidativo Desintegracin leucocitaria y retorno del agente Atividad alternativa para Pseudomonas aeruginosa Ventaja del perodo de contacto (8 a 16 hs.)

Contaminacin BacterianaMecanismos de Prevencin 1 - Durante la colecta Tratamiento odontolgico Disturbios gastrointestinales - Staphylococcus - Yersinia Campylobacter Salmonella

Colecta asptica Evitar zonas de mltiples punciones Correcta antisepsia de la piel

Contaminacin Bacteriana

Remocin de los primeros 10-20 ml Bruneau p 72,4% Korte p 46% Wagner p 1 log

Contaminacin BacterianaMecanismos de Prevencin 2 - Durante el procesamiento Apertura del circuito cerrado - Transfundir en 24 horas Descongelamiento Superficies speras y puntiagudas Soluciones salinas estriles

Contaminacin BacterianaMecanismos de Prevencin3- Inspeccin visual- Formacin de cogulos ( citrato ) Coloracin violcea - Hemlisis ( > 4x108 CFU/mL ) pO2 Metahemoglobina -

Remolino perlado ( pH dependiente, poco sensible y especfico )

Contaminacin Bacteriana

Segmento sin hemlisis

Bolsa con hemlisis

Hemlisis por Yersinia enterocolitica(Kim e cols - Transfusion 32:221, 1992)

Contaminacin BacterianaMecanismos de Prevencin4- Reduccin del tiempo de almacenamiento

- Plaquetas

7 5 42

5 das ( 1986 ) 3 das 25 das

- GRD

Contaminacin BacterianaMecanismos de Prevencin5- Agentes inactivadores- Antibiticos ( Gentamicina ) - 8 Metoxipsoraleno ( 8-MOP ) - 23,4 Qg/mL Rayos UV-A - 3j/cm2~ 105 CFU/mL

Reduccin

- Aminopsoralencos S59 (Helinx - 2002) - Fase III (Pl, Plt) - S303 Fase II (GRD) - Riboflavina (Vitamina B2) + Ascorbato + Fotoinativacin - Tionina + UV-B

Contaminacin BacterianaMecanismos de Prevencin 6 - Retardo en el procesamiento Potencializacin de la capacidad bactericida natural de la sangre. Inactivacin directa de Staphylococcus epidermidis e Escherichia coli en 5 a 24 horas (revercin con remocin leucocitaria)(Hgman - Transfusion 31:620-26, 1991) 31:620-

Contaminacin BacterianaMecanismos de Prevencin 7 - Leucodeplecin con filtros Importancia del perodo de retardo Leucocitos bacteriana Fagocitosis, pero no una inativacin

Yersinia enterocolitica Papel de la concentracin (< 35 CFU/mL) Papel de los plsmidos de virulencia

Contaminacin BacterianaMecanismos de Prevencin 8 Control bacteriolgico Caractersticas de una prueba ideal Sensibilidad alta (104 - 105 CFU/ml) Especificidad adecuada Tcnicamente simple Resultados rpidos Bajo costo Deteccin de todos los microorganismos responsables

Contaminacin BacterianaMecanismos de Prevencin 8- Control bacteriolgico a) Examen microscpico - Coloracin de Gram - 105 - 106 CFU/mL - Citocentrifugacin- 104 CFU/mL ( Naranja de Acridina ) b) Anlisis gasomtrico opCO2 ocido lctico qpO2 qpH

Contaminacin BacterianaMecanismos de Prevencin8- Control bacteriolgicoc) Sondas RNA 16S rRNA (1x103 - 104 CFU/mL) - 4,5S rRNA (97% 10 5 CFU/mL Hibri Scan ) d) PCR - 16S rRNA 1-8 GRAMGRAM5-15 GRAM+

Sensibilidad

Contaminacin BacterianaMecanismos de Prevencin8- Control bacteriolgicoe) Cultivos bacterianos - Mtodos tradicionales - Normatizacin universal - largo tiempo de ejecucin - BacT/Alert - Aumento conservacin de plaquetas (5 p7 dias)

Contaminacin Bacteriana

Contaminacin Bacteriana

Contaminacin BacterianaEnero/1997 Abril/ 2001 GLBULOSN=32.848

CONC. PLAQUETASN=18.202

PLAQUETOFERESISN=5.646

IR=181 (0,55%) 551:100.000

IR=52 (0,29%) 286:100.000

IR=27 (0,48%) 478:100.000

R.R. = 97 (0,29%) 295:100.000

R.R. = 32 (0,17%) 176:100.000

R.R. = 19 (0,33%) 336:100.000

Contaminacin BacterianaPruebas para deteccin en hemocomponentesPruebas Limite de deteccin UFC/mL Ejecucin Tiempo para Ejecucin Minutos Minutos ~2 h Segundos Segundos Segundos 1-2 d

Gram Naranja de Acridina Sondas de rRNA (quimioluminescencia) pH (tiras) Glucosa (tiras) Remolino Perlado (swirling) Cultivo bacteriano

106 (G+) 108 (G-) 105 105 ~104 107 108 107 108 107 108 1 / muestra

Pretransfusion. Pretransfusion. Pretransfusion.

Pretransfusion. Pretransfusion.

Pretransfusion. Pre o - perialmacenamiento

Contaminacin BacterianaConducta frente a la sospecha de contaminacinInterrupcin inmediata de la transfusin Frotis y cultivo Repetir pruebas de compatibilidad Considerar antibitico de amplio espectro Soporte y medidas generales

Contaminacin Bacteriana

Pruebas de esterilidad apropiadas paradeteccin de bacterias y hongos debern ser normatizadas y realizados en una muestra del 1% del total de los hemocomponentes producidos. producidos. Estos controles debern ser ejecutados diariamente por el laboratorio de control de calidad debidamente registrado. registrado.Portaria 171 (1995) Contaminacin Bacteriana

CONTROL BACTERIOLOGICO Normas internacionalesAlemania: Alemania: Pruebas mnimas requeridas por ley ( Paul Ehrlich Institute) Blgica: 1998 Cruz Roja Todos los CP deben ser estudiados para contaminacin bacteriana. Holanda: Holanda: 100% estudios en CP a partir de 2001.

Contaminacin Bacteriana

Dudas Pendientes Cul es el momento ideal para el cultivo? Cul es la importancia clnica de estudiar por largo trmino? El segmento es representativo de todo el material? Importancia clnica se componente positivo tardiamente? Diferenciacin con otros efectos indeseables

Bolsas mltiples para extraccin de sangre

Eliminacin de los primeros 10-30 ml. de sangre

Contaminacin Bacteriana