Conceitos Básicos de Reprodução Assistida - ibb.unesp.br · Inseminação Intra-uterina Indicações ! Integridade tubária ! Concentração de espermatozóides móveis pós-processamento

Conceitos Básicos de Reprodução Assistida

Mariana Antunes Ribeiro

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Tratamentos

§  IIU - Inseminação intra-uterina

§  FIV - Fertilização in vitro convencional

§  ICSI - Intracytoplasmic sperm injection

Qual tratamento escolher???

Inseminação Intra-uterina

Indicações

§  Integridade tubária §  Concentração de espermatozóides móveis pós-processamento > 5 milhões §  Não ter como antecedente terapêutico falhas de 4 ou mais ciclos de IIU

Inseminação intra-uterina

Volume inseminado: 0,5 mL de sêmen processado

Gradientes

Pellet sptz

Espermatozóides em meio de cultura

Fertilização in vitro

Fertilização in vitro convencional

ICSI

§  Punção folicular via transvaginal com auxílio da ultra-sonografia

§  Localizar, classificar e preparar os ovócitos recuperados sob a lupa simultaneamente a punção folicular

FIV – Coleta de Ovócitos

§  O líquido folicular é examinado no estereomicroscópio à 37°C e 5 % CO2;

Indicações

Fertilização in vitro convencional

§  Fator tubário

§  Oligozoospermia moderada

§  ESCA

§  Fator ovulatório

Fertilização in vitro Convencional

Inseminação dos ovócitos

§  Os ovócitos são colocados em microgotas de 30µl em

placa de Petri sob óleo mineral;

§  Cada microgota deve receber 100.000

espermatozoides móveis por ovócito;

§  Estufa 5% CO2 à 37°C;

§  Verificação da fertilização

em 16-18h.

Injeção Intracitoplasmática de Espermatozoide

Indicações

§  Fator masculino grave §  Falha de fertilização in vitro convencional §  Falha de IIU

Preparação do oócito para ICSI

§  Incubação de 2-8 h a 37º C e 5% CO2.

§  Denudação: mecânica e hyaluronidase

§  Classificação de acordo com a maturação nuclear: GV, MI, MII

Injeção Intracitoplasmática de Espermatozoide

GV

MI MII

Classificação Ovocitária

Injeção Intracitoplasmática de Espermatozoide

Micromanipulador

§  Os ovócitos são transferidos para placa de

Petri com meio de cultura, colocados

na estufa 5% CO2 a 37°C;

§  Verificar a fertilização depois de 16-18h

da injeção intracitoplasmática.

Injeção Intracitoplasmática de Espermatozóide

Verificação da Fertilização Etapa Pronuclear

1PN 2PN

3PN

Classificação embrionária

Número de Blastômeros

Dia 2 – embriões de 2-4 células

Dia 3 – embriões de 6-9 células

Dia 4 – mórula (células compactadas)

Dia 5 - Blastocisto

Avaliação dos embriões

Morfologia embrionária

§  Simetria e tamanho dos blastômeros §  Presença de fragmentos citoplasmáticos

Classificação Embrionária

Grau I Sem fragmentação;

blastômeros simétricos.

Grau II < 10% fragmentação;

blastômeros simétricos.

Classificação Embrionária

Grau III Fragmentação variável;

blastômeros com tamanhos irregulares.

Grau IV > 10% fragmentação;

blastômeros assimétricos.

Classificação Embrionária

Veeck, 1999

Grau V > 50% de fragmentação;

blastômeros de tamanhos diferentes.

Blastocistos

Expandido Hatching Inicial

Morfologia dos Blastocistos §  Blastocele expandida §  Massa celular interna bem definida §  Células da trofectoderme regulares e lisas

Assisted Hatching

§  Químico : Ácido Tyrode’s §  Laser

§  Esta técnica foi introduzida em 1980 §  Realiza-se um furo artificial na zona pelúcida antes da transferência intra-uterina §  Aumenta a taxa de implantação

Critérios de avaliação para indicação do AH

Assisted Hatching

§  idade da paciente §  nº de tentativas feitas sem implantação §  grau de fragmentação do embrião §  espessura da zona pelúcida

Transferência embrionária

§  Idade Materna

§  Número de falhas

§  Causa da infertilidade

§  Qualidade embrionária

Criopreservação

Sêmen Indicações:

§  Pré-tratamento: quimio e radioterapia

§  Ausência do paciente

§  Sêmen de doador

§  Pré-vasectomia

§  Profissões de alto risco

Criopreservação Oócitos Histórico 1986, Chen - Primeira gravidez de oócito descongelado

Indicações

§  Mulheres sem parceiro

§  Pré-tratamento quimioterápico

§  Banco de oócitos

Técnicas

§  Congelamento lento (Fabbri, 2001)

§  Vitrificação (Kuwayama, 2005)

CRIOPRESERVAÇÃO

Embriões

Histórico

§  1984, Trounson - Primeira gravidez de embrião descongelado

Indicações

§  Embriões excedentes

§  Síndrome do Hiperestímulo Ovariano

§  Pesquisa de células-tronco

§  Doação

Técnicas

Congelamento lento

Congelamento Ultra-rápido

Vitrificação

Criopreservação

MECANISMO DE DESIDRATAÇÃO

H2O

CRIOPROTETOR

Armazenamento

Palheta

Cryotop - 196o C

Criotubo

Preimplantation genetic diagnosis (PGD)

Indicações: §  Idade materna

§  Histórico de doença familial

§  Aborto de repetição

§  Falhas de implantação

Direcionamento §  Doenças mendelianas

§  Doenças cromossômicas

Preimplantation genetic diagnosis (PGD)

Análise genética aCGH

Embrião: 45,XY,-16