UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA Área de Farmacognosia y Farmacobotánica Mg. Q.F. MARILU ROXANA SOTO VASQUEZ Docente de la cátedra de Farmacognosia E-mail: [email protected]Metabolitos secundarios y ruta del ácido shikimico
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Clase de metabolitos secundarios y ruta de acido shikimico por Q.F Marilú Roxana Soto Vásquez
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UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
Área de Farmacognosia y Farmacobotánica
Mg. Q.F. MARILU ROXANA SOTO VASQUEZDocente de la cátedra de Farmacognosia
Metabolitos secundarios y ruta del ácido shikimico
METABOLITOS SECUNDARIOS Y RUTA DEL ACIDO SHIKIMICO
GENERALIDADES
METABOLISMO EN LAS PLANTAS
METABOLITO PRIMARIO
METABOLITO SECUNDARIO
RUTAS BIOSINTÉTICAS
RUTA DEL ÁCIDO SHIKIMICO
ESTAS FUNCIONES SON FUNDAMENTALES PARA QUE ESTOS
ORGANISMO SE MANTENGAN CON VIDA
REALIZAN FUNCIONES FISIOLÓGICAS EN LA QUE
ESTÁN IMPLICADAS RUTAS METABÓLICAS :
RESPIRACIÓN Y SÍNTESIS DE PROTEÍNAS
LAS PLANTAS, ALGAS Y ALGUNAS BACTERIAS (CIANOBACTERIAS FOTOSINTÉTICAS) REALIZAN UNA
FUNCIÓN FUNDAMENTAL : FOTOSÍNTESIS
CIANOBACTERIAS FOTOSINTÉTICAS
QUE ES LA BASE Y SUSTENTO DE NO SÓLO LA VIDA PROPIA DE ESOS ORGANISMOS,
SINO DE TODA LA VIDA EN LA TIERRA.
El metabolismo es el conjunto de reacciones químicas que realizan las células de los seres vivos para sintetizar sustancias complejas a partir de otras más simples, o para degradar las complejas y obtener las simples.
Las plantas, organismos autótrofos, además del metabolismo primario presente en todos los seres vivos, poseen un metabolismo secundario que les permite producir y acumular compuestos de naturaleza química diversa
METABOLISMO VEGETAL
Se llama metabolismo primario de las plantas a los procesos químicos que intervienen en forma directa en la supervivencia, crecimiento y reproducción de las plantas.
Son procesos químicos pertenecientes al metabolismo primario de las plantas: la fotosíntesis la respiración el transporte de solutos la translocación la síntesis de proteínas la asimilación de nutrientes
METABOLISMO PRIMARIO
Son los productos del metabolismo primario, tales como: carbohidratos, proteínas, lípidos y ácidos nucleícos.
Son los mas abundantes y se denominan así por constituir la base fundamental y común de los procesos vitales.
Se encuentran sin excepción en todo organismo viviente.
METABOLITOS PRIMARIOS
Meta
bolism
o S
ecu
nd
ari
o
Defin
icio
nes
…Conjunto de procesos mediante los cuales se generan sustancias que no forman parte del metabolismo primario (fotosíntesis, respiración, transporte de solutos, translocación, asimilación de nutrientes y diferenciación celular; entre otros), poseen características muy variadas, así como una extrema complejidad química.
METABOLISMO SECUNDARIO
Meta
bolito
Secu
nd
ari
o
Defin
icio
nes
…Metabolito Secundario …
Los metabolitos secundarios de las plantas son compuestos químicos sintetizados por las plantas que son productos del metabolismo secundario y que cumplen funciones no esenciales en ellas, de forma que su ausencia no es fatal para la planta, ya que no intervienen en el metabolismo primario de las plantas.
Se sintetizan en pequeñas cantidades y no de forma generalizada, estando a menudo su producción restringida a un determinado género de plantas, a una familia, o incluso a algunas especies. restringida en el Reino de las plantas.
Metabolito Secundario…
Se agrupan en cuatro clases principales.
Terpenos. Entre los que se encuentran hormonas, pigmentos o aceites esenciales.
Compuestos fenólicos. Cumarinas, flavonoides, lignina y taninos.
Glicósidos. Saponinas, glicósidos cardiacos, glicósidos cianogénicos y glucosinolatos.
Alcaloides.
FUNCIÓN
Metabolito Secundario…
Protección contra el ataque de herbívoros y patógenos ( Taninos)
Atrayentes de los animales para la polinización (flavonoides y antocianósidos) y la dispersión del fruto y de la semilla
agente polinizador visual que atrae a los insectos. Forsythia intermedia
RUTINA
Clarkia breweri
LINALOL
agente polinizador olfativo que atrae a los insectos.
Protección contra plagas (Aceites esenciales, alcaloides tóxicos, flavonoides)
Derris elliptica
ROTENONA (flavonoide)Insecticida natural
Protección de la radiación solar (Flavonoides)
Inhiben la existencia de especies competitivas así asegurando su nicho ecológico (alelopatíca)
+tomate nogal
Radio (16m.) = morianJuglona = Hidroxinaftoquinona
Soluble en agua causante del color pardo de las nueces la que provocaba esta citotoxicidad
LAS PLANTAS COMO FUENTE DE METABOLITOS SECUNDARIOS DE INTERÉS COMERCIAL
• Potencial:- 75% de las nuevas estructuras químicas descubiertas provienen de las plantas.- Sólo se tiene buen conocimiento de 5.000 de las 250.000-300.000especies vegetales que se creen existentes en el planeta.- 25% de los medicamentos de las industrias farmacéuticas son de origen vegetal.- 80 % de la población mundial utiliza la medicina tradicional que consiste principalmente en el uso de extractos provenientes de plantas.
Podophyllum peltatum L
Contiene 20% de podofilina.
ALGUNAS DE LAS MEDICINAS MÁS IMPORTANTES O SUS PRECURSORES DERIVADOS DE PLANTAS Y SUS VENTAS
El término biosíntesis se refiere a la formación de moléculas complejas a partir de moléculas sencillas, esto implica la formación de enlaces carbono-carbono y de otros tipos, a través de reacciones catalizadas por enzimas.
BIOSINTESIS DE METABOLITOS SECUNDARIOS
Clases de enzimas y su actividad catalítica
Ruta Metileritritol
fosfato(cloroplastos)
Ruta Ac. mevalónico
Ruta Ac. malónico
Ruta Ac. shikimico
BIOSINTESIS DE METABOLITOS SECUNDARIOS
RUTA DEL ÁCIDO
SHIKIMICO
ANTECEDENTES HISTÓRICOS
ÁCIDO SHIKÍMICO
AISLADO(1885)
Illicium anisatum PARECIDO AL ANIS ESTRELLA
SHIKIMI-NO-KI EN JAPONÉS(Fam. Illiciaceae)
El ácido Shikímico es reconocido como el compuesto punto de partida para un vasto número de sustancias naturales y es un metabolito universal de las plantas superiores y de muchas clases de organismos no mamíferos.
CEPA MUTANTEE. coli
Incapaces de biosintetizar aminoácidos aromáticos
(Phe, Tyr, Trp)
BIOSINTETIZA AMINOÁCIDOS
ÁCIDO SHIKÍMICO
+
PRECURSOR BIOGENÉTICO DE
AMINOÁCIDOS
ESTA DIFUNDIDO EN TODAS LAS ESPECIES VEGETALES, MICROORGANISMOS,AUSENTE EN ANIMALES.
Del ácido shikímico se obtiene por hemisíntesis el oseltamivir, un medicamento antiviral selectivo contra el virus de la influenza. Lo produce la casa Roche bajo la marca Tamiflu®. El oseltamivir es una prodroga, que se transforma en un compuesto activo en el organismo disminuyendo los síntomas de pacientes con la gripe adquirida recientemente y reduce la incidencia de los síntomas propios de una gripe confirmada, como las infecciones bacterianas: bronquitis, sinusitis y neumonía.La actividad antiviral de oseltamivir se ha confirmado en los estudios de provocación experimental en voluntarios sanos.
Ácido shikímico oselltamivir
hemisíntesis
La formación del ácido shikímico ocurre a partir de precursores de 3 y 4 átomos de carbono como son el ácido fosfoenolpirúvico (PEP) y la eritrosa 4-fosfato (E4P) por una condensación de tipo aldólica, produciendo un compuesto C7 a través de una serie de etapas que se resumen en la Figura
Biosíntesis del ácido shikímico
A partir de él se forman los aminoácidos y desde ellos los otros compuestos aromáticos más complejos (fenilpropanoides, flavonoides, alcaloides)
BIOSÍNTESIS DE ALCALOIDES
Triptófano4. ALCALOIDES DE ORIGEN DIVERSO•imidazólicos y bases xánticas•terpénicos y esteroídicos•pseudoesteroídicos
Se llaman alcaloides (de álcali, alcalinos, y -oide, parecido a, en forma de) a aquellos metabolitos secundarios de las plantas sintetizados, generalmente, a partir de aminoácidos. Los alcaloides verdaderos derivan de un aminoácido, son por lo tanto nitrogenados.
Son básicos (excepto colchicina), y poseen acción fisiológica intensa en los animales aun a bajas dosis con efectos psicoactivos, por lo que son muy usados en medicina para tratar problemas de la mente y calmar el dolor. Ejemplos conocidos son la cocaína, la morfina, la atropina, la colchicina, la quinina, cafeína y la estrictina.
En este grupo se incluyen compuestos poco abundantes en la naturaleza y de escaso valor terapéutico a excepción de la hidroquinona, que en forma de glucósido se localiza en algunas plantas medicinales pertenecientes a las familias Ericaceae y Rosaceae. De todas ellas, las más empleadas por su poder antiséptico de vías urinarias son la gayuba y algunos tipos de brezo. Se clasifican a su vez en:
MONOFENOLES
FENOL
DIFENOLES
Catecol
Hidroquinona
Resorcinol
TRIFENOLES
Pirogalol
Hidroxi-Hidroquinona
Florogucinol
Uva ursi o gayuba Brezo
ÁCIDOS FENOLICOS
Los ácidos fenólicos que tienen interés terapéutico son derivados del ácido benzoico o del ácido cinámico (cafeíco, ferúlico, p-cumárico). Entre las plantas medicinales que poseen ácidos fenólicos vamos a destacar la alcachofa con actividad colerética, el ortosifón con actividad diurética y la equinácea empleada por sus propiedades inmunoestimulantes. Igualmente incluimos en este capítulo, plantas medicinales, reina de los prados y sauce, que poseen derivados del ácido salicílico con actividad antiinflamatoria, analgésica y antipirética.
A. BENZOICO
DiHidrolizados
A. FENIL ACETICOS
MonoHidrolizados
A. CINAMICOS
TriHidrolizados
Alcachofa Ortosifón
C6 -C1
Equinácea sauce
CUMARINAS
Como grupo, su interés farmacológico no es muy grande, sin embargo debemos mencionar sus efectos sobre el sistema vascular tanto en territorio arterial como venoso y su utilidad en el tratamiento de algunas alteraciones de la piel como por ejemplo la psoriasis debido a sus propiedades fotosensibilizantes. Ejemplo de este tipo de principios activos es la visnadina, piranocumarina con efectos vasodilatadores presente en el Amni visnaga.También antimicrobianos y anticoagulantes
CUMARINAS ISOCUMARINAS
Amni Visnaga
C6 -C3
La propiedad física mas importante de estos compuestos es la fluorescencia generada con la luz ultravioleta (365 nm), propiedad ampliamente usada para su detección.
Coriandrum sativum (culantro)
QUINONAS
Las quinonas son muy abundantes en la naturaleza, en el Reino Vegetal se encuentran tanto en vegetales superiores como en hongos y bacterias. Las plantas que contienen estos compuestos son especies vegetales que pueden comportarse como laxantes o como purgantes según las dosis administradas. Las antraquinonas se encuentra en forma natural en algunas plantas (Espino Cerval y el género Áloe), hongos, liquenes Los derivados naturales de la antraquinona son glucósidos con acción laxante y purgante sumamente potente. En la terapéutica farmacológica, la antraquinona pertenece a la categoría de catárticos y se usan en la terapia contra el estreñimiento, Se encuentran en las hojas, vainas, raíces y semillas de diversas plantas como el sen, el ruibarbo y la frángula. Dependiendo del grado de complejidad de su estructura química pueden clasificarse en:
ANTRAQUINONAS BENZOQUINONAS
NAFTOQUINONAS
Drosera
Sen
Rubibarbo
Frángula Aloe
TANINOS
Los taninos son compuestos polifenólicos, mas o menos complejos, de origen vegetal, masa molecular relativamente elevada, sabor astringente, conocidos y empleados desde hace muchos siglos por su propiedad de ser capaces de convertir la piel en cuero, es decir de curtir las pieles. De las actividades farmacológicas de los taninos podemos destacar sus propiedades astringentes, tanto por vía interna como tópica. Entre las plantas encontramos Rosaceae, que se emplean en forma de infusiones o gargarismos por su poder astringente. Los frutos de taya (Caesalpinia spinosa) son antibacterianos. Las hojas de zarzamora (Rubus fruticosus L.) como antidiarreico ligero o las hojas de frambueso (Rubus idaeus L.) utilizadas tradicionalmente en el tratamiento de una amplia variedad de trastornos femeninos
HIDROLIZABLES OGALICOS
CONDENSADOS OPROANTOCIANIDINAS
Zarzamora
Hojas de FrambuesoRosaceaetara
LIGNANOS
Están formados por dos unidades de fenilpropano, C6 – C3 unidades por enlaces entre las posiciones β y β’.Se encuentran ampliamente distribuidas en la naturaleza.
RESINA DE PODOFILOPolvo pardo amarillento de sabor amargo e irritante de las mucosas.Contiene:• Podofilotoxina (20%)
Tratamiento de condilomas externos : (disolución alcoholica al 0.5%)Derivados hemisintéticos: etopósido (quimioterapia)Cáncer de mamá, testículo,tumor cerebral.
EMPLEOS DE LA PODOFILOTOXINA•Tratamiento de condilomas externos : (disolución alcoholica al 0.5%)-Método alternativo a la crioterapia o métodos quirúrgicos.-Contraindicado en embarazadas y lactantesOBTENCION DE DERIVADOS HEMISINTETICOS
ETOPÓSIDO: incluido en protocolos de quimioterapia:•carcinoma de testículo•cánceres bronquiales•coriocarcinoma placentario•recidivas de cáncer de mama•linfoma de Hodkin y otros•leucemias agudas.•Vías de administración: Inyectables y cápsulas•Efectos adversos. granulopenia y trombopenia
TENIPÓSIDOSe administra solo por perfusión endovenosa (aceite de ricino) Indicado en:-Enf. De Hodkin-Tumores cerebrales y de vejiga-Mama, ovario (muy expandidos)*Toxicidad hematológica (y tisular)
FOSFATO DE ETOPÓSIDO (profármaco: liofilizado hidrosoluble)
Son moléculas que tienen dos anillos bencénicos (ó aromáticos) unidos a través de una cadena de tres átomos de carbono, puesto que cada anillo bencénico tiene 6 átomos de carbono, los autores los denominan simplemente como compuestos C6C3C6.
FLAMILIAS CON FLAVONOIDESFam. AstaraceaeFam. RutaceaeFam. UmbelliferaeFam. PolugonaceaeFam. LamiaceaeFam. LeguminosaeFam. Polugonaceae
Flavonoide (del latín flavus, "amarillo") es el término genérico con que se identifica a una serie de metabolitos secundarios de las plantas.
También conocidos como bioflavonoides, son complejos multifenólicos por lo que se les denomina polifenoles.
DEFINICIÓN
Los flavonoides se encuentran tanto en estado libre como glicosidado, constituyen el grupo más amplio de los fenoles naturales
FLAVONOIDES
vía biosintética de los flavonoides
Son moléculas que tienen dos anillos bencénicos (ó aromáticos) unidos a través de una cadena de tres átomos de carbono, puesto que cada anillo bencénico tiene 6 átomos de carbono, los autores los denominan simplemente como compuestos C6C3C6.
FLAMILIAS CON FLAVONOIDESFam. AstaraceaeFam. RutaceaeFam. UmbelliferaeFam. PolugonaceaeFam. LamiaceaeFam. Leguminosae
Acción vitamina P (Factor antiescorbútico)AntihemorrágicosAntiarritmicosProtectores de la pared vascular o capilar (rutina,Vasodilatador(naringenina, eriodictyol y luteolina)•Antiinflamatoria (Isoflavanquinonas, biflavonoides)•Antioxidante (antirradicales libres)Antihepatotóxicos(flavona, lignanos, derivados de catequinas, biflavonas, flavolignanos)Antibacterianos(Isoflavanos), antivíricos y antimicóticas (Chalconas, Isoflavonas y flavanonas )Diuréticos y antiurémicosAntiespasmódicos (flavonoles)Antitumoral (algunos flavonoles,flavonas y biflavonas)Anticancerígeno(QUERCETINA y la RUTINA )Antialérgica (Isoflavanquinonas)Antiagregante plaquetario (antocianósidos y derivados de flavonas y flavonoles)
•Pigmentos hidrosolubles responsables de los colores (rojo, rosa, malva, violeta, púrpura, azul o violeta)•Forman heterósidos•Papel primordial en la polinización por los insectos•Alto poder colorante y carentes de toxicidad (aditivos alimentarios)•Interés terapéutico: campo vascular: fragilidad capilarovenosa.
TRASTORNOS VASCULARESPERIFÉRICOS:-Flebología-Proctología-Trastornos vasculares de la retina
INTERÉS EN LA INDUSTRIA:-Colorante : pigmento natural carente de toxicidad-Materia prima: mosto de uva (abundante y poco coste)-Inconveniente:-inestabilidad en medio acuoso-Insolubilidad en lípidos-Aditivo alimentario UE: E163 (bebidas, confitería, mermeladas)
Manipulación genética del metabolismo
secundario
Una de las principales restricciones es que se conoce poco acerca de la biosíntesis de muchos componentes de interés, mientras que en otros casos sólo existen consideraciones teóricas sobre sus vías metabólicasLas vías metabólicas a nivel de genes, enzimas y productos sólo han sido mapeadas en detalle para los flavonoides y las antocianinas.
Para otras vías, sólo se conocen unas pocas enzimas y sólo algunos genes han sido clonados
Por otro parte, pocas plantas han sido estudiadas en profundidad en cuanto a su metabolismo secundario. Entre ellas, se encuentran N. tabacum (antocianinas, flavonoides, terpenoides, alcaloides), Catharantus roseus (alcaloides, flavonoides) y Cinchona (antraquinonas y alcaloides). Esto constituye una importante limitación, ya que los metabolitos secundarios son especie específicos
REQUERIMIENTOS PARA LA MANIPULACIÓN GENÉTICA DEL METABOLISMO SECUNDARIO
Se requieren conocimientos sobre:• Intermediarios y productos finales de las rutas biosintéticas• Enzimas que regulan las rutas biosintéticas• Pasos limitantes, enzimas alostéricas, vías competitivas de la ruta biosintética principal• Compartimentalización subcelular de las rutas biosintéticas• Células o tejidos productores específicos • Rol que cumple el metabolito secundario enla planta.
ESTRATEGIAS PARA MODIFICAR EL METABOLISMO SECUNDARIO MEDIANTE
MANIPULACIÓN GENÉTICA
• Producir más cantidad del producto deseado
- Aumentar el flujo de la ruta biosintética.- Inhibir el catabolismo del producto.- Aumentar el número de células productoras.
• Producir menor cantidad del producto deseado
- Reducir el flujo de la ruta biosintética.- Aumentar el catabolismo.
• Expresión de nuevos componentes- Completar rutas metabólicas a partir de precursores de la planta por inserción de genes heterólogos.- Crear nuevas rutas metabólicas mediante inserción de genes heterólogos.
BLANCOS DE LAMANIPULACIÓNGENÉTICA DELMETABOLISMOSECUNDARIO
• Modificación de la síntesis de terpenoides
- Alteración de las fragancias y sabores delos alimentos- Producción y sobrexpresión de vitaminas-Producción de compuestos farmacológicos
• Modificación de la síntesis de flavonoides
- Producción de compuestos nutracéuticos-Modificación de la coloración floral
• Modificación de la síntesis de alcaloides- Aumento y producción de compuestosfarmacológicos- Modificación de la calidad de los alimentos
LEMATO
Modificación del aceite esencial deMentha piperita (menta)
TERPENOS
Los monoterpenos son los principales componentes del aceite esencial de la familia de la menta (Lamiaceae), siendo el mentol y la mentona los principales monoterpenos (50 y 10- 30%, respectivamente) presentes en el aceite esencial de Mentha piperita
Modificación de la composición del aceite esencial deMentha piperita (menta)
PROBLEMAS:
SOLUCIÓN:
ESTRATEGIA:
La falta de luz, sequedad y altas temperaturas favorecen la producción y acumulación de los monoterpenos mentofurano y pulegona en el aceite esencial de menta. Estos componentes disminuyen el aroma y gusto de la menta.
Disminuir la acumulación de metabolitos indeseables como mentofurano , y maximizar la producción de mentol
Sobreexpresión de la enzima 1-deoxi-xilulosa-5 fosfato reductoisomerasa (DXR).Supresión de la expresión de la enzima mentofurano sintetasa (MFS) por expresión transcriptos antisentido del gen de MFS.
Desregulación de la síntesis de monoterpenos para modificar
la composición de aceites esenciales de Mentha piperita
BIOSÍNTESIS DE FLAVONOIDESLos flavonoides se clasifican en cinco grupos según su estructura central (aglicona)
CLAVELES TRANSGÉNICOS CON DIFERENTES COLORACIONES DE AZUL COMERCIALIZADOS POR FLORIGENE
TRANSFORMACION DE Dianthus carophyllus CON LOS GENES FLAVONOIDE 3’ 5’ HIDROXILASA Y DIHIDROFLAVONOL REDUCTASA DE
Petunia hybrida
ALCALOIDESExiste un gran interés comercial en incrementar el contenido de ciertos metabolitos secundarios de uso medicinal en las plantas que lo producen.El alcaloide del tropano escopolamina es un importante anticolinérgico presente en varias plantas Solanáceas .Atropa belladona produce altos niveles de hioscinamina y muy poca escopolamina.La enzima que realiza la conversión entre estos dos compuestos (hioscinamina 6-ß hidroxilasa) fue aislada de Hioscyamus niger
Modificación de la síntesis de alcaloides en Atropa belladona
Atropa belladona
Hioscyamus niger
ALCALOIDESOBJETIVO:
Aumentar la expresión de escopolamina, importante droga colinérgica, en Atropa belladona.
ESTRATEGIATransformación de Atropa belladona con el gen que codifique la enzima hioscinamina hidroxilasa (H6H) de Hyosciamus niger bajo la regulación del promotor constitutivo 35 S de CaMV
Modificación de la síntesis de alcaloides en Atropa belladona
Atropa belladona
35S CaMV
H6H Hyosciamus niger
T-nos
Con este gen incorporado en la Atropa belladona se logró que la planta produzca mas escopolamina
Desarrollo de plantas de caféCon bajo nivel de cafeína
Existe una creciente demanda de café descafeinado debido a los efectos adversos que la cafeína produce en personas sensibles .La obtención de café descafeínado por métodos industriales es cara y el café pierde sabor.OBJETIVO:
Obtención de plantas de café (Coffea canephora) que produzca menos cafeína.ESTRATÉGIADisminución de la expresión de la enzima teobromina sintetasa por ARN de interferencia
DESARROLLO DE CAFÉ CON BAJOS NIVELES DE CAFEÍNA
En la biosíntesis de cafeína
están involucradas tres N-metiltransferasas:CaXMT1 Teobromina sintetasa CaMXT1 Teobromina sintetasaCaDXMT1 Cafeína sintetasa
Se obtuvo una reducción de hasta un 70% en los niveles de cafeína
2. W. C. Evans “Treese y Evans Farmacognosia” 13ª ed. , Ed. Interamericana -McGraw-Hill, 1991
3. Marco Alberto. Química de los productos naturales. Aspectos fundamentales del metabolismo secundario. Editorial Sintesis S.A. Marid España.2006
4. Avalos Adolfo y Pérez-Urria Elene. Metabolismo secundario de planta. Universidad Complutense de Madrid.(consultado el 25 de julio del 2013). Disponible en : http://eprints.ucm.es/9603/1/Metabolismo_secundario_de_plantas.pdf
5. Arango Gabriel . Introducción al Metabolismo secundario Compuestos derivados del Ácido shikimico. Universidad de Antioquía. .(consultado el 25 de julio del 2013). Disponible en : http://farmacia.udea.edu.co/~ff/shikimico.pdf
6. Zelada Alicia. Ingeniería metabólica. Universidad de Buenos Aires. (Consultado el 28 de julio del 2013. Disponible en: http://www.fbmc.fcen.uba.ar/materias/agbt/teoricos/2011_19%20Ingenieria%20Metabolica.pdf