La técnica de citometría de flujo como herramienta inmunológica y su aplicación en el diagnóstico clínico Zaida I. Feliciano Aida M. Vega Yainary Segarra David G. Mendoza Biol 4009 LB1 Dr. Anibal J. Valentín
La técnica de citometría de flujo
como herramienta inmunológica y su
aplicación en el diagnóstico clínico
Zaida I. FelicianoAida M. VegaYainary SegarraDavid G. MendozaBiol 4009 LB1 Dr. Anibal J. Valentín
Objetivos
• Explicar la técnica de citometría de flujo
• Aplicación de la técnica en LLA
• Explicar la importancia de CMF en la detecciónLLA
Citometría de flujo• ¿Qué es la citometría de flujo?
• Capacidad de medir múltiples párametrocelulares
• Técnica clásica utilizada.
• Amplia utilidad en las ciencias.
Citometría de flujoFluorocromos
• Absorbe luz a una determinadalongitud de onda y emite a unasuperior
• Se utilizan unidos a anticuerposespecíficos
• Células en suspensiónalineadas una a una frente a un haz luminoso
• Información:
▫ Originada por la dispersiónde la luz
▫ Generada por la emisión de la luz de los fluorocromos
Citómetro de flujo
Partes fundamentales
• Rayo láser
• Sistema de flujo
• Detectores lumínicos y fluorescentes
• Sistema electrónico de registro de información
Mecanismo de función
Análisis de datos
• Histograma
Análisis de datos
• Gráficos de puntos (Dot plots)
Análisis de datos
• Gráficos de puntos (Fluorescencia)
Parámetros Analizados por Citometría de Flujo
Rev. Inst. Nal. Enf. Resp. Mex. vol.17 no.1 México mar. 2004
Aplicaciones Clínicas
• Diagnóstico basado en el análisis celular
• Aplicaciones pronósticas
• Evaluación y monitorización del tratamiento
Citometría de flujo en la evaluación
de enfermedad mínima residual en
leucemia linfoblástica aguda
Citometría de Flujo en la evaluación de EMR
• EMR - cantidad pequeña de células malignas circulantes o en ganglios linfáticos.
• Leucemia Linfoblástica Aguda (LLA) Resultado: cambios moleculares y celulares
Expresan perfiles anormales de marcadores celulares
Marcadores moleculares
• Combinación de marcadoresmoleculares que identifican los inmunofenotipos en pacientescon LLA
Acta Pediátrica de México Volumen 33, Núm. 4, julio-agosto, 2012
Citometría de Flujo en la evaluación de EMR
• Las células se incuban con los anticuerpos monoclonales adecuados.
• Se reconocen los antígenos expresados (células leucémicas y células normales)
• Expresión diferencial
Acta Pediátrica de México Volumen 33, Núm. 4, julio-agosto, 2012
Acta Pediátrica de México Volumen 33, Núm. 4, julio-agosto, 2012
Aplicación de otros marcadores en la
detección de EMR
Marcadores utilizados paradetecnción EMR
Porcentaje de detección de LLA en células B
TDT/ CD10/ CD19 78%
CD10/CD20/CD19 64%
CD34/CD38/CD19 56%
CD34/CD22/CD19 46%
CD19/ CD34/ CD45 22%
Aplicación de otros marcadores en la
detección de EMR
• TdT/ CD7/cyCD3b – para LLA-T
• Permiten vigilar la presencia de EMR en cualquier fase.
• Alta especificidad de detección de célulasleucémicas.
Importancia de CMF en la detección
LLA
• Método accesible.
• Prueba específica
• Cuantificación directa y precisa de las célulasleucémicas residuales
• Identifica células muertas
• Evalúa el estado de las células hematopoyéticasnormales.
Conclusión
• Técnica rápida, altamente sensible y específica
• Permite la cuantificación directa y precisa de las células leucémicas residuales
• Es posible realizarla en todos los casos estudiados
Referencias
• Juárez-Velázquez R, Pérez-Vera P.Citometría de flujo en la evaluación de enfermedad mínima residual en leucemia linfoblástica aguda. Acta Pediatr Mex 2012;33(4):198-206.
• http://www.medigraphic.com/pdfs/iner/in-2004/in041g.pdf
• Koh DN, Park M, Kim BE, Im HJ, Park CJ, Jang S y cols. Prognostic significance of minimal residual disease detected by a simplified flow cytometric assay during remission induction chemotherapy in children with acute lymphoblastic leukemia. Korean J Pediatr 2010;53(11):957-64.
• http://www.medigraphic.com/pdfs/actpedmex/apm-2012/apm124g.pdf
• Grimwade D, Vyas P, Freeman S. Assessment of minimal residual disease in acutemyeloid leukemia. Curr Opin Oncol 2010;22(6):656-63.
• van der Velden VH, van der Sluijs-Geling A, Gibson BE, te Marvelde JG, HoogeveenPG, Hop WC y cols. Clinical significance of flow cytometric minimal residual disease detection in pediatric acute myeloid leukemia patients treated according to theDCOG ANLL97/MRC AML12 protocol. Leukemia 2010;24(9):1599-606.