総合カタログ ー サンプル定量 - Bio-Rad Laboratories...Spectrophotometry 33 Cuvettes 35 Quick Startプロテインアッセイ Quick...

タンパク質定量法の選択 14

プロテインスタンダードの選択 15

キュベット 23

サンプル定量Sample QuantitationProtein Assay Kits 30

Spectrophotometry 33

Cuvettes 35

Quick StartプロテインアッセイQuick Startプロテインアッセイは、Bradford法のプロテインアッセイを改良した比色定量法です。プロテインアッセイに比べて操作手順がより簡略化されており、共存許容試薬の種類が増え、共存許容濃度も高くなります。

プロテインアッセイプロテインアッセイはBradford法に基づく比色定量法です。タンパク質がクマシーブリリアントブルー G-250と結合することで、最大吸収波長が465nmから595nmに移動することを応用しています。サンプル中に糖類、dithiothreitol（DTT）、β-メルカプトエタノールなどの還元剤を含むサンプルに使用可能です。しかし界面活性剤やアルカリ試薬の存在下では使用できません。

DCプロテインアッセイDCプロテインアッセイは、Lowry法に基づく比色定量法です。タンパク質と酒石酸銅およびFolin試薬との呈色反応を応用しています。界面活性剤やアルカリ試薬の存在下で使用可能ですが、還元剤により測定に影響が出ます。

RC DCプロテインアッセイRC DCプロテインアッセイは、Lowry法に基づいたDCプロテインアッセイにさらに改良を加えた比色定量法です。界面活性剤だけでなく、還元剤やアルカリ試薬存在下でも使用可能です。そのため、一般に定量の難しいLaemmliサンプルバッファーやIEF用に調製されたサンプルでも測定が可能になります。

タンパク質定量法の選択数々のタンパク質定量法が報告されていますが、それぞれ長所と短所を持っています。方法の選択は、タンパク質の種類、バッファー含有物、タンパク質濃度により行い、また測定波長により決定することもあります。

バイオ・ラッドでは、タンパク質定量試薬として以下の4種を販売しています。これらの測定方法は、測定するタンパク質に応じて選択を行います。それぞれのタンパク質定量方法には、特長があります。詳しくは下記プロテインアッセイ選択ガイドをご参照ください。

プロテインアッセイセレクションガイドQuick Start

プロテインアッセイ プロテインアッセイ DCプロテインアッセイ

RC DCプロテインアッセイ**

応用法 Bradford法 Lowry法

測定波長 595nm 推奨750nm（650-750nm可）

測定可能範囲 0.125-1.5mg/ml BGG 0.2-1.4mg/ml BGG0.2-1.5mg/ml BGG&BSA 0.2-1.5mg/ml BGG&BSA （スタンダード

アッセイ法*） 0.125-1.0mg/ml BSA 0.2-0.9mg/ml BSA

測定可能範囲 1.25-20μg/ml BGG 1.25-25μg/ml BGG1.25-250μg/ml BGG&BSA ─（マイクロ

アッセイ法*） 1.25-10μg/ml BSA 1.25-10μg/ml BSA

遠心操作 無 15,000×ｇ, 3-5min

使用可能試薬*** 還元剤 界面活性剤 アルカリ試薬

還元剤 界面活性剤

アルカリ試薬

保存期間 1年（4℃） 6ヶ月（4℃） 3ヶ月（4℃）

インキュベーション時間**** 5min 5min 15min 15min

* BGG：ウシγグロブリン、 BSA：ウシ血清アルブミン ** RC DCプロテインアッセイはマイクロプレートを使用した測定には適していません。 *** 使用可能試薬には共存許容濃度があります。詳しくは共存許容試薬、濃度のリスト（P.16、18、20、21）をご参照ください。**** インキュベーション時間：染色液を加えてから測定可能な状態になるまでの時間

See Also

マイクロプレート リーダー：

P.294キュベット：

P.23

共存許容試薬、濃度化学物質－タンパク質間、化学物質－色素間の相互作用により、反応の干渉が起こります。各タンパク質定量法の共存許容試薬、濃度はP.16、P.18、P.20、P.21の表をご参照ください。

表中に含まれない物質がサンプル中のバッファー成分内にある場合は、サンプルと同じバッファーでスタンダードを希釈して検量線を作成し、直線性が得られるかどうか確認してください。直線性が得られれば使用することができます。

タンパク質定量法の選択 www.bio-rad.com/proteinassays

14 サンプル定量

Quick Startプロテインアッセイ染色液

混和 5分放置後、1時間以内に測定 λ＝595nm

スタンダードおよびサンプル

操作方法

プロテインスタンダードの選択タンパク質定量法のスタンダードとして使用される最適なタンパク質は、測定しようとするタンパク質の精製標品です。このような標準タンパク質がない場合は、スタンダードとして別のタンパク質をする必要があります。相対量だけを求める場合は、どのスタンダードを選択してもかまいませんが、絶対量を求める場合は、測定しようとするタンパク質と同じような発色を示すものを選択する必要があります。

そこでバイオ・ラッドでは、スタンダードに使用するタンパク質としてウシγグロブリン（BGG,IgG）、ウシ血清アルブミン（BSA）の2種を販売しています。

プロテインスタンダードⅠ（ウシγグロブリン）、Ⅱ（ウシ血清アルブミン）は凍結乾燥品を20mlの精製水またはサンプルのバッファーで溶解して使用されます。タンパク質の濃度はロット毎に異なり、20mlで溶解した時の濃度がボトルに貼付されているラベルに記載されています。未開封凍結乾燥状態の場合、4℃で1年間保存できます。溶解した後は小分けして保存し、凍結融解を繰り返さないようにご注意ください。

Quick Startプロテインアッセイ用のスタンダードは一定の濃度の溶液となります。2mg/mlと7段階の濃度（0.125, 0.25, 0.5, 0.75, 1, 1.5, 2mg/ml）に希釈された溶液の2種類、計4種類のスタンダードがあります。4℃保存で1年以内に使用してください。

プロテインアッセイ、Quick Startプロテインアッセイ（Bradford法）で使用するスタンダードについてBradford法では、ウシ血清アルブミンはウシγグロブリンなどの他のタンパク質に比べて発色量がかなり大きくなります。したがって、広範囲のタンパク質の測定にはウシγグロブリンを使用します。アルブミン濃度の高いサンプルにはウシ血清アルブミンの使用をお勧めいたします。

DCプロテインアッセイ、RC DCプロテインアッセイ（Lowry法）で使用するスタンダードについてLowry法では、ウシ血清アルブミンとウシγグロブリンの発色量がほぼ同じになります。他の定量法での測定も行うのであれば、その時のスタンダードと同じものを使用することをお勧めいたします。また、文献ではかなりの割合でアルブミンが使用されていますので、スタンダードの選択に困ったときは、ウシ血清アルブミンをお勧めいたします。

注意1： スタンダードは測定するサンプルと同じバッファーで希釈して使用してください。サンプル溶液中の化学物質がタンパク質および色素と相互作用を起こし、測定値に影響を与える可能性があります。

注意2： プロテインスタンダードにはタンパク質を溶解させるためにバッファー・塩が含まれています｡バイアルから計り取っての使用は行わないでください。

注意3： それぞれタンパク質定量法により、アミノ酸構造に基づき試薬とタンパク質との反応が異なります。したがって、タンパク質濃度を測定する比色定量実験には1種類のスタンダードを選択することをお勧めいたします。

Quick Start™ プロテインアッセイ（Bradford法）

Quick Startプロテインアッセイは、プロテインアッセイを改良し、より簡単な手順でタンパク質の定量を行えるキットです。1×の染色液と7種類の濃度（0.125, 0.25, 0.5, 0.75, 1, 1.5, 2mg/ml）のスタンダードからなるReady-to-useの試薬により、希釈をせずに検量線を引くことができます。また、2mg/mlのスタンダードから希釈系列を作成することも可能です。P.16の共存許容試薬濃度は、スタンダードアッセイ法での値です。マイクロアッセイ法で許容される試薬濃度は、表中の濃度の1/25です。

● 1種類の試薬を加えるだけの簡単操作です。 ● スタンダードや染色液を希釈する必要はありません。 ● 試薬は4℃で1年間保存可能です。 ● 呈色は1時間安定です。（注1） ● メルカプトエタノールやDTTなどの還元剤とコンパチブルです。（注2）

● スタンダードとしてBSAとIgGの2種類をご用意しました。 ● スタンダードセットは7種類の濃度（0.125, 0.25, 0.5, 0.75, 1, 1.5, 2mg/ml）を用意しており、希釈系列を作成する必要がありません。

● 2mg/mlのスタンダードから希釈系列を作成することも可能です。

（注1）色安定性は誤差5％の範囲内で判定しています。（注2） 種々の共存する試薬に対する許容濃度はアッセイ法により異なり

ます。

測定方法QuickStartプロテインアッセイは、サンプルのタンパク質濃度に応じてスタンダードアッセイ法とマイクロアッセイ法を行うことが可能です。また、サンプルの容量に応じて試験管とマイクロプレートを選択することが可能です。下記フォーマットの測定範囲・サンプル量に従い、アッセイ法を選択してください。

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サンプル定量 15

Quick Startプロテインアッセイの共存許容試薬・濃度（スタンダードアッセイ法）

共存許容濃度は、染色液を混和する前のサンプル中の濃度です。

Acetone, 10%Acetonitrile, 10%Ammonium sulfate, 1MAmpholytes, pH 3–10, 0.5%ASB-14, 0.025%Ascorbic acid, 50mMBis-Tris, pH 6.5, 0.2MCalcium chloride, 40mMCHAPS, 10%CHAPSO, 10%Deoxycholic acid, 0.2%Dithioerythritol（DTE）, 10mMDithiothreitol（DTT）, 10mMDMSO, 5%Eagle’s MEMEarle’s salt solutionEDTA, 0.2MEGTA, 0.2M

Ethanol, 10%Glucose, 20%Glycerol, 5% Glycine, 0.1M Guanidine-HCl, 2MHank’s salt solutionHCl, 0.1MHEPES, 0.1MImidazole, 0.2M Magnesium chloride, 1Mβ-mercaptoethanol, 1MMES, 0.1MMethanol, 10%Modified Dulbecco’s PBSMOPS, 0.1MNAD, 2mMNonidet P-40（NP-40）, 0.25%Octyl-β-glucoside, 0.5%

Octyl β-thioglucopyranoside, 1% PBSPhenol red, 0.5mg/mlPIPES, 0.2MPMSF, 2mMPotassium chloride, 2MPotassium phosphate, 0.5MSB 3-10, 0.1%SDS, 0.025% Sodium acetate, pH 4.8, 0.2M Sodium azide, 0.5%Sodium bicarbonate, 0.2MSodium carbonate, 0.1MSodium chloride, 2.5MSodium citrate, pH 4.8 or 6.4, 0.2MSodium hydroxide, 0.1MSodium phosphate, 0.5M

Sucrose, 10%TBS, 0.5×（12.5mM Tris, 75mM NaCl, pH 7.6）TCEP, 20mMThiourea, 1MTributylphosphine（TBP）, 5mMTricine, pH 8, 50mMTriethanolamine, pH 7.8, 50mMTris, 1MTris-glycine（25mM Tris, 192mM glycine）Tris-glycine-SDS, 0.25× （6.25mM Tris, 48mM glycine, 0.025% SDS）Triton X-100, 0.05%Tween 20, 0.01%Urea, 4M

Ordering Informationカタログ番号 品名 価格 保存Quick Startプロテインアッセイキット5000201JA Quick Startプロテインアッセイキット1

構成内容：1×染色液1L、スタンダード（ウシ血清アルブミン）2ml（2mg/ml）5本¥25,500

4℃

5000202JA Quick Startプロテインアッセイキット2 構成内容：1×染色液1L、スタンダード（ウシ血清アルブミン）2ml（0.125, 0.25, 0.5, 0.75, 1, 1.5, 2mg/ml）各2本

¥28,500

4℃

5000203JA Quick Startプロテインアッセイキット3 構成内容：1×染色液1L、スタンダード（ウシγグロブリン）2ml（2mg/ml）5本

¥25,500

4℃

5000204JA Quick Startプロテインアッセイキット4 構成内容：1×染色液1L、スタンダード（ウシγグロブリン）2ml（0.125, 0.25, 0.5, 0.75, 1, 1.5, 2mg/ml）各2本

¥28,500

4℃

染色液5000205JA Quick Startプロテインアッセイ染色液　1L ¥15,500 4℃関連商品5000206 Quick Start BSAスタンダード 2ml（2mg/ml）5本 ¥14,500 4℃5000207 Quick Start BSAスタンダードセット 2ml（0.125, 0.25, 0.5, 0.75, 1, 1.5, 2mg/ml）各2本 ¥17,500 4℃5000208 Quick Start IgGスタンダード 2ml（2mg/ml）5本 ¥14,500 4℃5000209 Quick Start IgGスタンダードセット 2ml（0.125, 0.25, 0.5, 0.75, 1, 1.5, 2mg/ml）各2本 ¥17,500 4℃2239950B05 ディスポーザブルキュベット スタンダード 1-3.5ml（100個×5） ¥14,000 －2239955B05 ディスポーザブルキュベット セミマイクロ 500-1,500μl（100個×5） ¥14,000 －

左：Quick Startプロテインアッセイ・スタンダードアッセイ法による検量線例（試験管）右：Quick Startプロテインアッセイ・マイクロアッセイ法による検量線例（試験管）

プロテインスタンダードの選択 www.bio-rad.com/proteinassays

Quick Startプロテインアッセイフォーマット試験管 マイクロプレート

スタンダードアッセイ法測定範囲 0.125〜1.5mg/ml 0.125〜1.5mg/mlサンプル量 100μl 5μl染色液量 5ml 250μl測定回数 200回/キット 4,000well/キット

マイクロアッセイ法測定範囲 1.25〜20μg/ml 1.25〜20μg/mlサンプル量 1ml 150μl染色液量 1ml 150μl測定回数 1,000回/キット 6,666well/キット

00 250 500 750 1000 1250 1500 1750

IgG

BSA

0.2

0.4

0.6

1.2

1.0

0.8

quick start

0.00 5 10 15 20

IgGBSA

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

A 595nm

Concentration of standard, μg/ml Concentration of standard, μg/ml

A 595nm

00 250 500 750 1000 1250 1500 1750

IgG

BSA

0.2

0.4

0.6

1.2

1.0

0.8

quick start

0.00 5 10 15 20

IgGBSA

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

A 595nm

Concentration of standard, μg/ml Concentration of standard, μg/ml

A 595nm

16 サンプル定量

プロテインアッセイ（Bradford法）

プロテインアッセイは、タンパク質が色素クマシーブリリアントブルーG250と結合すると最大吸収波長が465nmから595nmに移動することを応用しています。この色素は主として塩基（特にアルギニン）や芳香族アミノ酸残基に吸着します。この方法は分子量3,000-5,000Da以上のタンパク質およびポリペプチドの測定に適しています。数々の界面活性剤や塩基性バッファーがこの測定法を妨害することが報告されています。干渉は、これらの化学薬品のタンパク質間相互作用、色素間相互作用に起因します。P.18の共存許容試薬濃度は、スタンダードアッセイ法での値です。マイクロアッセイ法で許容される試薬濃度は、表中の数値の1／40です。これは、スタンダードアッセイ法とマイクロアッセイ法では、試料と色素の比率が異なるためです。

● 1種類の試薬を加えるだけの簡単操作です。

● 試薬を加えてから5分待つだけです。

● 1キットで最高11,250回の測定が可能です。

● 呈色は1時間安定です。（注1）

● スタンダードとして、BSAとIgGの2種類をご用意しました。

● メルカプトエタノールやDTTなどの還元剤とコンパチブルです。（注2）

● 3,000Da以下のペプチド・アミノ酸やDNAとはほとんど反応しません。

● SDSなどのイオン性界面活性剤やTritonX-100などの非イオン性界面活性剤などにより大きな影響を受けます。

（注1）呈色安定性は誤差5％の範囲内で判定しています。（注2） 種々の共存する試薬に対する許容濃度はアッセイ法により異なり

ます。

測定方法プロテインアッセイは、サンプルのタンパク質濃度に応じてスタンダードアッセイ法とマイクロアッセイ法を行うことが可能です。また、サンプルの容量に応じて試験管とマイクロプレートを選択することが可能です。下記フォーマットの測定範囲・サンプル量に従い、アッセイ法を選択してください。

プロテインスタンダードの選択　www.bio-rad.com/proteinassays

00

A 595

250 500Concentration of standard, g/ml

750 1000 1250 1500 1750

IgG

BSA

0.2

0.4

0.6

1.2

1.0

0.8

quick start

bradford

0.00

A 595

5 10Concentration of standard, g/ml

15 20

IgGBSA

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

mg/ml

O.D. 595 nm

BSA

IgG

1.51.00.50.00.0

0.2

0.4

0.6

0.8

1.0

O.D. 595nm

BSA

IgG

0.00

0.10

0.20

0.30

0.40

0.50

2 01 51 050

mg/ml

O.D.

BSA

IgG

0.00

0.10

0.20

0.30

1.51.00.50.0

O.D. 595nm

mg/ml

μg/ml

DC assay

00

A 595

250 500Concentration of standard, g/ml

750 1000 1250 1500 1750

IgG

BSA

0.2

0.4

0.6

1.2

1.0

0.8

quick start

bradford

0.00

A 595

5 10Concentration of standard, g/ml

15 20

IgGBSA

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

mg/ml

O.D. 595 nm

BSA

IgG

1.51.00.50.00.0

0.2

0.4

0.6

0.8

1.0

O.D. 595nm

BSA

IgG

0.00

0.10

0.20

0.30

0.40

0.50

2 01 51 050

mg/ml

O.D.

BSA

IgG

0.00

0.10

0.20

0.30

1.51.00.50.0

O.D. 595nm

mg/ml

μg/ml

DC assay

プロテインアッセイフォーマット試験管 マイクロプレート

スタンダードアッセイ法測定範囲 0.2〜1.4mg/ml 0.05〜0.5mg/mlサンプル量 100μl 10μl染色液量* 5.0ml 200μl測定回数 450回/キット 11,250well/キット

マイクロアッセイ法測定範囲 1.25〜25μg/ml 8〜80μg/mlサンプル量 800μl 160μl染色液量 200μl 40μl測定回数 2,250回/キット 11,250well/キット

＊5倍希釈した染色液（マイクロアッセイは原液を使用）

左：プロテインアッセイ・スタンダードアッセイ法による検量線例（試験管）右：プロテインアッセイ・マイクロアッセイ法による検量線例（試験管）

プロテインアッセイ染色液

精製水で5倍希釈* 5分放置後、1時間以内に測定 λ=595nm混和

スタンダードおよびサンプル

操作方法（スタンダードアッセイ法*）

測定操作試薬調整

濾過 測定試薬

*マイクロアッセイ法では原液を使用します。

サンプル定量 17

プロテインアッセイの共存許容試薬・濃度（スタンダードアッセイ法）

共存許容濃度は、染色液を混和する前のサンプル中の濃度です。

Acetate, 0.6 MAcetoneAcid pHAdenosine, 1mMAmino acidsAmmonium sulfate, 1 MAmpholytes, pH 3–10, 0.5%ATP, 1mMBarbitalBES, 2.5 MBoric acidCacodylate-Tris, 0.1 MCDTA, 50mMCitrate, 50mMDeoxycholate, 0.1%Dithiothreitol（DTT）, 1 M

DNA, 1mg/mlEagle’s MEMEarle’s salt solutionEDTA, 0.1 MEGTA, 50mMEthanolFormic acid, 1 MFructoseGlucoseGlutathioneGlycerol, 99%Glycine, 0.1 MGuanidine-HClHank’s salt solutionHEPES, 0.1 MMagnesium chloride, 1 M

Malic acid, 0.2 Mβ-mercaptoethanol, 1 MMES, 0.7 MMethanolMOPS, 0.2 MNAD, 1mMNaSCN, 3 MPeptonesPhenol, 5%Phosphate, 1 MPIPES, 0.5 MPolyadenylic acid, 1mMPolypeptides（MW <3,000Da）Potassium chloride, 1 MPyrophosphate, 0.2 MrRNA, 0.25mg/ml

tRNA, 0.4mg/mlTotal RNA, 0.3mg/mlSDS, 0.1%Sodium chloride, 5 MSodium phosphateStreptomycin sulfate, 20%Thymidine, 1mMTricineTris, 2 MTriton X-100, 0.1%Tyrosine, 1mMUrea, 6 MVitamins

Ordering Informationカタログ番号 品名 価格 保存プロテインアッセイキット5000001JA プロテインアッセイキットI

構成内容：染色液450ml、スタンダードI（ウシγグロブリン）¥28,500

4℃

5000002JA プロテインアッセイキットII 構成内容：染色液450ml、スタンダードII（ウシ血清アルブミン）

¥28,500

4℃

染色液5000006JA プロテインアッセイ染色液 450ml ¥24,500 4℃関連商品5000005 プロテインスタンダードI ウシγグロブリン（20mlに溶解　約1.4mg/ml） ¥10,500 4℃5000007 プロテインスタンダードII ウシ血清アルブミン（20mlに溶解　約1.4mg/ml） ¥10,500 4℃2239950B05 ディスポーザブルキュベット スタンダード 1-3.5ml（100個×5） ¥14,000 －2239955B05 ディスポーザブルキュベット セミマイクロ 500-1,500μl（100個×5） ¥14,000 －

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18 サンプル定量

DCプロテインアッセイフォーマット試験管 マイクロプレート

スタンダードアッセイ法測定範囲 0.2〜1.5mg/ml 0.2〜1.5mg/mlサンプル量 100μl 5μl試薬量 A' 試薬500μl

B 試薬4.0ml A' 試薬25μlB 試薬200μl

測定回数 500回/キット 10,000well/キットマイクロアッセイ法

測定範囲 5〜250μg/ml 5〜250μg/mlサンプル量 200μl 20μl試薬量 A' 試薬100μl

B 試薬800μl A' 試薬10μlB 試薬80μl

測定回数 2,500回/キット 25,000well/キットA'試薬＝A試薬＋S試薬（1ml A試薬/20μl S試薬）

DC ™ プロテインアッセイ（Lowry法）

DCプロテインアッセイは、Lowry法［Lowry, O. et .al., J.Biol.Chem., 193, 265（1951）］に基づき、タンパク質と酒石酸銅およびFolin試薬との呈色反応を利用し、測定までの時間が短くなるよう改良を加えてあります。界面活性剤を含むサンプルでも問題無く 測定することが可能です。操作も3種類の試薬を加えるだけです。

● 3種類の試薬を加えるだけの簡単操作です。

● 遠心等の操作はありません。

● 試薬を加えてから15分インキュベートするだけです。

● 1キットで最高25,000回の測定が可能です。（注1）

● 呈色は1時間安定です。（注2）

● スタンダードとして、BSAとIgGの2種類をご用意しました。

● SDSなどのイオン性界面活性剤やTritonX-100などの非イオン性界面活性剤とコンパチブルです。（注3）

● アミノ酸やトリスなどのアミノ基を持つものにより影響されます。

● メルカプトエタノールやDTTなどの還元剤などにより大きな影響を受けます。

（注1） 試験管によるスタンダードアッセイ法では500回、同マイクロアッセイ法では2,500回測定できます。

（注2） 呈色安定性は誤差5％の範囲内で判定しています。（注3） 種々の共存する試薬に対する許容濃度はアッセイ法により異なり

ます。

測定方法DCプロテインアッセイは、サンプルのタンパク質濃度に応じてスタンダードアッセイ法とマイクロアッセイ法を行うことが可能です。また、サンプルの容量に応じて試験管とマイクロプレートを選択することが可能です。下記フォーマットの測定範囲・サンプル量に従い、アッセイ法を選択してください。

00

A 595

250 500Concentration of standard, g/ml

750 1000 1250 1500 1750

IgG

BSA

0.2

0.4

0.6

1.2

1.0

0.8

quick start

bradford

0.00

A 595

5 10Concentration of standard, g/ml

15 20

IgGBSA

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

mg/ml

O.D. 595 nm

BSA

IgG

1.51.00.50.00.0

0.2

0.4

0.6

0.8

1.0

O.D. 595nm

BSA

IgG

0.00

0.10

0.20

0.30

0.40

0.50

2 01 51 050

mg/ml

O.D.

BSA

IgG

0.00

0.10

0.20

0.30

1.51.00.50.0

O.D. 595nm

mg/ml

μg/ml

DC assay

DCプロテインアッセイ・スタンダードアッセイ法による検量線例（試験管）

プロテインスタンダードの選択　www.bio-rad.com/proteinassays

サンプル定量 19

Table1. DCプロテインアッセイの共存許容試薬・濃度（スタンダードアッセイ法）

10% SDS 1% CHAPS 1% CHAPSO1% Triton X-100 1% Triton X-114 2% NP-401% Thesit 1% Tween-20 1% octyl glucoside1% Brij-35 0.2% C12E8* 0.1M Tris, pH8.0※ 2- メルカプトエタノールは使用できません。*octaethyleneglycol dodecyl ether

Table2. DCプロテインアッセイの共存許容試薬・濃度（マイクロアッセイ法）

10% SDS 1% CHAPS 0.3% digitonin1% Triton X-100 1% Triton X-114 2% NP-400.1% Thesit 1% Tween-20 1% octyl glucoside0.05% Brij-35 ※ 2- メルカプトエタノール、ジチオトレイトール、グアニジン塩酸

は使用できません。

スタンダードおよびサンプル

混和 15分放置後、1時間以内に測定 λ=750nm推奨（650-750nm可）混和B 試薬

操作方法

A 試薬S 試薬A’ 試薬

0.5M NaOH 0.5M HCl 0.5M（NH4）2SO4

0.025M EDTA 0.05M CaCl2 0.4M guanidine HCl4M urea 0.05% sodium azide 1% deoxycholate0.3% digitonin 1mM DTT 0.5M NaCl

4M urea 0.025M Tris, pH8.00.05% sodium azide 1% deoxycholate 0.025M（NH4）2SO4

0.1mM EDTA 0.01M CaCl2 1% CHAPSO

Ordering Informationカタログ番号 品名 価格 保存DCプロテインアッセイキット5000111JA DCプロテインアッセイキットI

構成内容：A試薬250ml、B試薬2L、S試薬5ml、スタンダードI（ウシγグロブリン）¥32,500 4℃

5000112JA DCプロテインアッセイキットII 構成内容：A試薬250ml、B試薬2L、S試薬5ml、スタンダードII（ウシ血清アルブミン）

¥32,500

4℃

試薬5000113 DCプロテインアッセイA試薬 250ml ¥6,500 室温5000114 DCプロテインアッセイB試薬 1L ¥11,500 室温5000115 DCプロテインアッセイS試薬 5ml ¥3,500 室温5000116JA DCプロテインアッセイ試薬セット

構成内容：A試薬250ml、B試薬2L、S試薬5ml¥25,500

室温

関連商品5000005 プロテインスタンダードI ウシγグロブリン（20mlに溶解　約1.4mg/ml） ¥10,500 4℃5000007 プロテインスタンダードII ウシ血清アルブミン（20mlに溶解　約1.4mg/ml） ¥10,500 4℃2239950B05 ディスポーザブルキュベット スタンダード 1-3.5ml（100個×5） ¥14,000 －2239955B05 ディスポーザブルキュベット セミマイクロ 500-1,500μl（100個×5） ¥14,000 －

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20 サンプル定量

RC DCプロテインアッセイフォーマット試験管 マイクロチューブ

測定範囲 0.2〜1.5mg/ml 0.2〜1.5mg/mlサンプル量 100μl 25μl試薬量　 RC I 試薬

RC II 試薬 A' 試薬 B 試薬l

500μl 500μl 510μl 4.0ml

125μl 125μl 127μl 1.0ml

測定回数 500回/キット 2,000回/キット

0.5

0.4

0.3

0.2

0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.40.2

DTT

A 750

Amount of standard, μg

0.5

0.4

0.3

0.2

0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.40.2

Laemmli sample bufferwith β-mercaptoethanol

A 750

Amount of standard, μg

RC DCプロテインアッセイの共存許容試薬・濃度

One Wash* Two Wash* （オプション） One Wash* Two Wash*

（オプション）Dithiothreitol 100mM 350mM EDTA 100mM －Tributylphosphine 2mM － Imidazole 500mM －β-Mercaptoethanol 5.0% 10.0% Tris, pH8.4 500mM －Laemmli Sample Buffer 使用可能 － NaOH 2.5M －CHAPS 2% － ReadyPrep Reagent2 使用不可 使用可能Tween-20 2% － ReadyPrep Reagent3 使用不可 使用可能Triton X-100 2% －

ReadyPrep Reagent 2 : 40mM Tris, 8M ウレア, 4%（W/V）CHAPS, 0.2%（W/V）Bio-Lyte 3-10, 2mM TBPReadyPrep Reagent 3 : 40mM Tris, 5M ウレア, 2M チオウレア, 2%（W/V）CHAPS, 2% SB3-10, 0.2%（W/V）Bio-Lyte 3-10, 2mM TBP＊One WashはP.28の操作方法における wash操作を1回、Two Washはwash操作を2回行うことです。

還元剤共存下／非共存下におけるCarbonic Anhydraseの検量線例左：350mM DTT右：5%メルカプトエタノールを含むLaemmliサンプルバッファー

See Also

タンパク質 サンプル調製： P.2キュベット： P.23

RC DC ™ プロテインアッセイ（Lowry法）

RC DCプ ロ テ イ ン ア ッ セ イ は、Lowry法［Lowry,O.et.al., J.Biol.Chem., 193, 265（1951）］に基づき、界面活性剤だけでなく、還元剤にもコンパチブルに改良したタンパク質定量キットです。今まで難しかったLaemmliのサンプルバッファーに溶解したタンパク質の濃度評価にも、そのまま使用可能です。また2次元電気泳動用のサンプルにも、応用可能です。すべての試薬がこの1つのキットに含まれていますので、購入後すぐにお使いいただけます。

● 界面活性剤や還元剤のどちらにもコンパチブルです。（注1）

● 最高で、DTTなら350mMまで、メルカプトエタノールなら10％までコンパチブルです。

● Ureaなどを含む2次元電気泳動の1次元目の等電点電気泳動用のサンプルにも応用可能です。

● 15,000×gが行える遠心機をご用意ください。

● 遠心操作を必要とするため、マイクロプレートには適していません。

● 呈色は1時間安定です。（注2）

● 1キットで最高2,000回の測定が可能です。（注3）

（注1） 種々の共存する試薬に対する許容濃度はアッセイ法により異なります。

（注2）呈色安定性は誤差5％の範囲内で判定しています。（注3）試験管によるアッセイ法では500回、マイクロチューブによるアッ

セイ法では2,000回測定できます。

測定方法RC DCプロテインアッセイは、サンプルの容量に応じて試験管とマイクロチューブで測定を行うことが可能です。遠心を行い沈殿を回収するステップがあるため、マイクロプレートでの操作には適していません。沈殿溶解後はマイクロプレートでの操作測定が可能です。

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サンプル定量 21

Ordering Informationカタログ番号 品名 価格 保存RC DCプロテインアッセイキット5000121JA RC DCプロテインアッセイキットI

構成内容：A試薬250ml、B試薬2L、S試薬5ml、RC I試薬250ml、RC II試薬250ml、スタンダードI（ウシγグロブリン）

¥49,500 4℃

5000122JA RC DCプロテインアッセイキットII構成内容：A試薬250ml、B試薬2L、S試薬5ml、RC I試薬250ml、RC II試薬250ml、スタンダードII（ウシ血清アルブミン）

¥49,500

4℃

試薬5000113 DCプロテインアッセイA試薬 250ml ¥6,500 室温5000114 DCプロテインアッセイB試薬 1L ¥11,500 室温5000115 DCプロテインアッセイS試薬 5ml ¥3,500 室温5000116JA DCプロテインアッセイ試薬セット

構成内容：A試薬250ml、B試薬2L、S試薬5ml¥25,500

室温

5000120JA RC DCプロテインアッセイ試薬セット構成内容：A試薬250ml、B試薬2L、S試薬5ml、RC I試薬250ml、RC II試薬250ml

¥42,500 室温

5000119 RC試薬セット構成内容：RC I試薬250ml、RC II試薬250ml

¥19,500 室温

5000117 RC I試薬 250ml ¥10,500 4℃5000118 RC II試薬 250ml ¥10,500 4℃関連商品5000005 プロテインスタンダードI ウシγグロブリン（20mlに溶解　約1.4mg/ml） ¥10,500 4℃5000007 プロテインスタンダードII ウシ血清アルブミン（20mlに溶解　約1.4mg/ml） ¥10,500 4℃2239950B05 ディスポーザブルキュベット スタンダード 1-3.5ml 100個×5 ¥14,000 －2239955B05 ディスポーザブルキュベット セミマイクロ 500-1,500μl 100個×5 ¥14,000 －

インキュベーション1min

スタンダードおよびサンプル

混和 混和 混和溶解Pellet遠心(15,000xg, 3-5min)

A 試薬S 試薬A' 試薬

RC I 試薬 RC II 試薬 B 試薬

操作方法

Wash操作

15分放置後、1時間以内に測定 λ=750nm推奨（650-750nm可）

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22 サンプル定量

キュベット　

trUView™ キュベット

このディスポーザブルキュベットは、ほとんどの紫外可視分光分析に適しています。trUView（トゥルービュー）キュベットは透明度が高く、DNA、RNA、タンパク質を高い精度で測定することが可能です。キュベットは個包装されているので汚染の心配がなく、DNase、RNase、パイロジェンフリーであることが保証されています。

● 少量のサンプル（50μl）で測定可能なため、限られたサンプルを節約できます。

● 個包装によって傷や汚染を防ぎます。

● 260nmにおける光透過率は最大70%であり、正確な核酸測定が可能です。

Ordering Informationカタログ番号 品名 価格1702510 trUViewキュベット 50個 ¥12,0001702510B02 trUViewキュベット 50個 2セット ¥18,0001702512 trUViewキュベット用HEIGHTアダプター（Z-dimension 15mmの分光光度計用） ¥15,000

SmartSpec用プリンターペーパー1702506 SmartSpec用プリンターペーパー 5本 ¥8,000

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キュベット

スペクトロフォトメーターキュベットセレクションガイドMin. Volume, µl Max. Volume, µl Cuvette Type Pathlength, mm カタログ番号

1,000 500 200 80 50

3,5001,400 700 1001,500

スタンダードキュベットセミマイクロキュベットマイクロキュベットサブマイクロキュベットtrUView™ キュベット

1010101010

17025021702503170250417025051702510

キュベット ● 石英製キュベットは200〜800nmの波長域で測定可能です。

● ポリスチレン製キュベットは400〜800nmの波長域で測定可能です。

● UV測定可能なディスポーザブルキュベットは、trUView（トゥルービュー）キュベットになります。

ディスポーザブルキュベットセミマイクロカタログ番号 223-9955サンプル量 500-1,500μl材質 ポリスチレン光路長 10mm光路幅 4mm

サブマイクロキュベットカタログ番号 170-2505サンプル量 80-100μl材質 石英光路長 10mm光路幅 2mm

ディスポーザブルキュベットスタンダードカタログ番号 223-9950サンプル量 1-3.5ml材質 ポリスチレン光路長 10mm光路幅 10mm

マイクロキュベットカタログ番号 170-2504サンプル量 200-700μl材質 石英光路長 10mm光路幅 2mm

スタンダードキュベットカタログ番号 170-2502サンプル量 1-3.5ml材質 石英光路長 10mm光路幅 10mm

セミマイクロキュベットカタログ番号 170-2503サンプル量 500-1,400μl材質 石英光路長 10mm光路幅 4mm

サンプル定量 23

キュベット　

スタンダードキュベットおよびセミマイクロキュベット

標準的な3.5mlキュベットはタンパク質アッセイに最適です。ガラスキュベットや石英キュベットに比べてクマシーブルー色素の吸着が少なく、またキュベット内でアッセイ試薬を直接混合させることができます。試薬の量を抑えられるため、1キットで実施可能なアッセイ数を多くすることができます。1.5mlセミマイクロキュベットは少量サンプルの高精度測定を行うのに理想的です。スタンダードキュベットもセミマイクロキュベットも、ほとんどの分光光度計に合う大きさに作られています。キュベッ

ト表面は光学的に滑らかであり、安定した正確な測定が可能です。

他にもバイオ・ラッドでは、石英キュベットや少量のDNA、RNA、タンパク質サンプルの高精度測定に用いるtrUView™ディスポーザブルキュベットなど、特殊なアプリケーション用のキュベットもご用意しています。

Ordering Informationカタログ番号 品名 価格ディスポーザブルキュベット2239950B05 ディスポーザブルキュベットスタンダード 1-3.5ml（100個×5） ¥14,0002239950B10 ディスポーザブルキュベットスタンダード 1-3.5ml（100個×10） ¥19,8002239955B05 ディスポーザブルキュベットセミマイクロ 500-1,500μl（100個×５） ¥14,0002239955B10 ディスポーザブルキュベットセミマイクロ 500-1,500μl（100個×10） ¥19,800石英キュベット1702502 スタンダードキュベット 1-3.5ml Quartz ¥35,0001702503 セミマイクロキュベット 500-1,400μl Quartz ¥55,0001702504 マイクロキュベット 200-700μl Quartz ¥55,0001702505 サブマイクロキュベット 80-100μl Quartz ¥95,000

VersaFluor用ディスポーザブルキュベット1702415 VersaFluor用スタンダードディスポーザブルキュベット ¥3,000

構成内容：ポリスチレン、1.0–3.5ml、12.5×12.5mm、100個1702416 VersaFluor用マイクロディスポーザブルキュベット ¥9,500

構成内容：ポリスチレン、150–350μl、3.0×3.0mm、100個

www.bio-rad.com/spectrophotometry

24 サンプル定量