DETERMINACIÓN FENOTÍPICA DE SUBPOBLACIONES DE CÉLULAS MADRE DERIVADAS DE SANGRE DE CORDÓN UMBILICAL CARMEN LUCÍA CONTRERAS HURTADO LYDA MARCELA CUSPOCA CHAPARRO TRABAJO DE GRADO Presentado como requisito parcial Para optar al título de BACTERIOLOGA PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA FACULTAD DE CIENCIAS CARRERA DE BACTERIOLOGÍA Bogotá, D. C. 2004 http://www.llion.net http://www.llion.net
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DETERMINACIÓN FENOTÍPICA DE SUBPOBLACIONES DE CÉLULAS MADRE DERIVADAS DE
SANGRE DE CORDÓN UMBILICAL
CARMEN LUCÍA CONTRERAS HURTADO
LYDA MARCELA CUSPOCA CHAPARRO
TRABAJO DE GRADO
Presentado como requisito parcialPara optar al título de
BACTERIOLOGA
PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANAFACULTAD DE CIENCIAS
Artículo 23 de la Resolución N° 13 de Julio de 1946
“La Universidad no se hace responsable por los conceptos emitidos por sus alumnos en sus trabajos detesis. Solo velará por que no se publique nada contrario al dogma y a la moral católica y por que las tesisno contengan ataques personales contra persona alguna, antes bien se vea en ellas el anhelo de buscar laverdad y la justicia”.
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CONSENTIMIENTO INFORMADO PARA LA DONACIÓN VOLUNTARIA DE SANGRE DE CORDÓNUMBILICAL
Todos los años, miles de personas desarrollan una enfermedad grave de la médula ósea como leucemiaso nacen con alteraciones genéticas que comprometen su capacidad y calidad de vida. Para ellos, laterapia más frecuente es un trasplante de médula ósea, sin embargo, la realización de un trasplante demédula es económicamente costoso y es muy difícil de encontrar donantes compatibles. En la sangre delcordón umbilical se encuentran células primitivas de las cuales se pueden obtener células sanguíneas quepodrían llegar a utilizarse en futuros trasplantes después de realizar investigaciones exhaustivas sobre sucomportamiento.
Para llevar a cabo esta tarea se necesita la colaboración de muchas personas, por lo que les proponemossu participación, aceptando donar desinteresadamente sangre del cordón umbilical, después delnacimiento de su hijo, esto con el fin de contribuir a las investigaciones de interés terapéutico acerca de lasangre de cordón umbilical.
La sangre del cordón umbilical se recoge después del nacimiento del niño y tras el corte del cordónumbilical; este procedimiento es de rutina durante el parto y será realizado por personal especializado(médico y/o enfermera jefe). Es muy importante que tenga en cuenta que LA TOMA DE LA MUESTRA DESANGRE DE CORDÓN UMBILICAL NO REPRESENTA NINGÚN PELIGRO NI PARA LA MADRE NIPARA EL BEBE.
La sangre del cordón umbilical será empleada con fines de investigación y será manipulada bajo lanormatividad ética enunciada en la resolución 008430 capítulo IV de 1993 expedida por el Ministerio deSalud.
CONFIDENCIALIDAD: Los registros médicos de cada individuo permanecerán archivados en el Institutode Genética Humana y el Laboratorio de Hematología. Las historias médicas, los resultados de exámenesy la información que usted nos ha dado son de carácter absolutamente confidencial, de manera que,solamente usted y el equipo de atención clínica tendrán acceso a estos datos. Por ningún motivo sedivulgará esta información sin su consentimiento.
Cualquier información adicional usted puede obtenerla de los investigadores, o directamente con:
_____________________________ ______________________Instituto de Genética Humana Laboratorio de HematologíaTel. (91)3208320 Ext. 27__ ó 27__ Tel. (91)3208320 Ext. 4025
PROCEDIMIENTO:
Se realizará una entrevista clínica inicial y se procederá a tomar una muestra de sangre deaproximadamente 30 mL luego del corte del cordón umbilical. Estas muestras serán manejadasúnicamente por personas involucradas en el equipo de atención clínica.
CONSENTIMIENTO INFORMADO PARA LA DONACIÓN VOLUNTARIA DE SANGRE DE CORDÓNUMBILICAL
Yo ________________ (madre) identificada con número de cédula de ciudadanía _________ y mi esposo__________ (padre) identificado con número de cédula de ciudadanía _________ declaramos que:
Entendemos que la sangre de cordón umbilical será utilizada con fines de investigación y serámanejada bajo las normas éticas pertinentes.
Entendemos que la información referente a nosotros y a la de nuestro hijo(a) será manejada de formaconfidencial para proteger nuestra identidad.
Entendemos que no recibiremos ninguna compensación económica ni de ningún otro tipo por ladonación.
Entendemos que la donación de sangre de cordón umbilical NO representa ningún peligro ni para lamadre ni para el bebe.
Hemos leído y comprendido toda la información entregada, estamos satisfechos de la informaciónrecibida, hemos podido formular todas las preguntas que hemos creído convenientes y nos hanaclarado todas las dudas planteadas.
En consecuencia, damos nuestro consentimiento para la donación voluntaria de la sangre del cordónumbilical de nuestro hijo/a en el momento del parto:
Madre Padre
____________ ___________Nombre: Nombre:CC: CC:Huella de la Madre Huella del Padre
Teléfono del domicilio: _______________
FECHA: _________________
BENEFICIOS ADICIONALES:
La utilización de la muestra en estudios posteriores nos podría ayudar en el futuro a entender las causas y/oel comportamiento de la(s) entidad(es) anteriormente mencionada(s). Se puede dar el caso en dondeusted y su familia no se beneficien directamente de estos estudios, pero tanto su familia como otrosindividuos afectados podrían beneficiarse. Por lo tanto, por favor marque su decisión con respecto alalmacenamiento de la muestra y su utilización en estudios de investigación posteriores:
ð Deseo que la muestra que me fue extraída sea DESECHADA una vez completado el estudio.
ð Autorizo conservar la muestra que me fue extraída con la posibilidad de emplearla junto con el resultadodel estudio, en las situaciones señaladas a continuación:
En estudios complementarios de diagnóstico para mi o algún miembro de mi familia: ð SI NO
En estudios de investigación específicos para la(s) entidad(es), objeto de esta toma de muestra,siempre y cuando se conserve en anonimato mis datos de identificación: ð SI NO
En estudios de investigación de entidades distintas a la(s) entidad(es) objeto de esta toma de muestra,siempre y cuando se conserve en anonimato mis datos de identificación: ð SI NO
En estudios de investigación colaborativos con otras instituciones nacionales y/o internacionales,siempre y cuando exista acuerdo interinstitucional previo, aprobación del comité de ética y seconserve en anonimato mis datos de identificación: ð SI NO
AUTORIZACIÓN PARA LA TOMA DE MUESTRAS Y REALIZACIÓN VOLUNTARIA DEL ESTUDIO:
Yo, ____________________ identificado con documento de identificación: No. ___________ de___________, acepto voluntariamente que se me tome una muestra de ____________, con el fin derealizar análisis de ______________________________________.Así mismo, declaro que se me ha explicado la no presencia de riesgos mayores y el manejo que se le dará
*Estudiantes X Semestre Bacteriología. **Docentes Departamento MicrobiologíaPontificia Universidad Javeriana
RESUMENLa Sangre de Cordón Umbilical Humana (SCU) es una de las fuentes alternativas a la Médula Ósea (MO) y Sangre Periférica(SP) para la obtención de Células Madre hematopoyéticas (CMH). Estas células han sido caracterizadas fenotípicamenteencontrándose que la mayoría de éstas expresan el antígeno CD34 y pueden o no expresar los antígenos CD38 y HLA-DR. Coneste estudio se esperaba encontrar una proporción de CMH mayor al 0.2%, determinar las Subpoblaciones de éstas célulaspresentes en SCU y buscar células con características embrionarias que co-expresaran los antígenos CD13 y SSEA-4. Elestudio se realizó con 80 mujeres en estado de gravidez normal a término que asistían al servicio de Gineco-Obstetricia delHospital Universitario San Ignacio previa firma de un consentimiento informado y que cumplieran ciertos criterios de inclusión.Utilizando anticuerpos monoclonales para los antígenos CD34, CD38 y HLA-DR se encontró que en la SCU existen cuatroSubpoblaciones de CMH con los fenotipos CD34+ CD38- HLA-DR-, CD34+ CD38+ HLA-DR-, CD34+ CD38- HLA-DR+ y CD34+CD38+ HLA-DR+ siendo esta última la de mayor proporción y que el total de células CD34+ era mayor al 0.2%. Adicionalmente,se determinó la expresión de los antígenos CD13 y SSEA-4 por el mismo método, encontrándose ocho muestras positivas paraestos marcadores lo cual indica que posiblemente se encuentre en SCU una población celular con características similares alas Células Madre Adultas (MAPCs) descritas en MO. La caracterización fenotípica de las Células Madre presentes en la SCUes el primer paso para conocer la distribución de las poblaciones de éstas células y utilizarlas en el futuro como alternativaterapéutica de reemplazo medular.
Palabras Clave. Célula Madre Hematopoyética, Célula Madre Embrionaria, Célula Madre Adulta (MAPCs), Sangre de CordónUmbilical.
ABSTRACTHuman Umbilical Cord Blood (UCB) is one of alternative sources to Bone Marrow (BM) and Peripheral Blood (PB) for theobtaining of Hematopoietic Stem Cells (HSC). These cells have been characterized phenotypically being that most of these theyexpress the CD34 antigen and they can or can not to express the CD38 and HLA-DR antigens. With this study one hope to finda greater proportion of HSC 0.2%, to determine the subpopulations of these present cells in UCB and to look cells withembryonic characteristics that co- expressed the CD13 and SSEA-4 antigens. The study was made with 80 woman in state ofnormal pregnancy that they attended in the Gineco-Obstetrics Service of Hospital Universitario San Ignacio previous signature ofan informed consent and who they fulfilled certain inclusion criteria. Using monoclonal antibodies for antigens CD34, CD38 andHLA-DR it was found four subpopulations of HSC with the phenotypes CD34+ CD38- HLA-DR -, CD34+ CD38+ HLA-DR -,CD34+ CD38- HLA-DR+ and CD34+ CD38+ HLA-DR+ being this last the one of greater proportion and than the total of cellsCD34+ was greater to the 0.2%. Additionally, the expresión of CD13 and SSEA-4 antigens was determine by the same method,being eight positive samples for these markers which indicates that in UCB exist a cellular population with characteristics similarto MAPCs described in BM. The phenotype characterization of the present Stem Cells in the UCB is the first step to know thedistribution of the populations of these cells and to use them in the future like therapeutic alternative in medular replacement.
Una célula madre es una célula que posee la capacidad de replicarse y diferenciarse dando lugar a diversos tipos de célulasespecializadas. Las células madre se pueden clasificar según su potencial de diferenciación en células totipotenciales que soncapaces de diferenciarse en tejido embrionario y extraembrionario; las células pluripotenciales que dan origen a célulasprocedentes de cualquiera de las tres capas embrionarias, las células multipotenciales, que son capaces de diferenciarse adistintos tipos celulares procedentes de la misma capa embrionaria y las células unipotenciales que dan origen a células de unlinaje específico1.
Existen diferentes tipos de células madre presentes en la médula ósea (MO). Una de las células madre más importantes en lamédula ósea son las células madre hematopoyéticas, las cuales poseen características fenotípicas y procesos dediferenciación celular particulares2.
La mayoría de las HSC en humanos expresan el antígeno CD34, una proteína integral de membrana de 90-120 kD. Estamolécula funciona como regulador en la adhesión de las células madre hematopoyéticas al estroma medular. La cantidad decélulas CD34+ en MO adulta ha sido estimada entre 1-3% del total de las células nucleadas mientras que en la SCU es del0.2-1% 3.
Las subpoblaciones de las células CD34+ pueden identificarse gracias a la expresión de marcadores de superficie diferentes alCD34 como los antígenos CD38 y HLA-DR y de acuerdo a ellos se puede determinar en que estado de diferenciación seencuentra la célula4. La molécula CD38 es una glicoproteína de membrana que juega un papel importante en los procesos deproliferación y activación celular5; por otro lado, la expresión del antígeno HLA-DR es expresado en casi todas las células de lostejidos y es responsable de la respuesta inmune del individuo a antígenos extraños6.Las células madre embrionarias (ES) se derivan de células totipotenciales provenientes de embriones de diferentes especies7 ytienen la capacidad de mantenerse indefinidamente en cultivos como células indiferenciadas y con la capacidad de formardiferentes tipos celulares8. Recientemente se ha identificado en la médula ósea una población celular llamada MAPC(Multipotent Adult Stem Cells) que han sido descritas como células pluripotenciales con una capacidad de diferenciación similara las células madre embrionarias y que expresan altos niveles de CD13 (característico de progenitores mieloides) y SSEA-4(característicos de células madre embrionarias)9.
MATERIALES Y MÉTODOS
La población de estudio fueron 80 mujeres en estado de gravidez normal a término que asistían al servicio de Gineco-Obstetriciadel Hospital Universitario San Ignacio y que cumplían con las condiciones: Edad entre 18 y 37 años, participación voluntaria conaceptación y firma del consentimiento informado para la donación voluntaria de SCU, ausencia de embarazos ectópicos ,ausencia de abortos o embarazos de alto riesgo*, ausencia de diabetes gestacional*, ausencia de marcadores positivos paraTORCH, sífilis y otras enfermedades infecciosas (HIV, Hepatitis B, Hepatitis C)*, ausencia de antecedentes de enfermedadescongénitas en embarazos previos *. (*Datos obtenidos a partir de las Historias Clínicas de las pacientes). Las variables que setuvieron en cuenta en este estudio fueron la expresión de los antígenos de superficie CD34, CD38 y HLA-DR para las célulasmadre hematopoyéticas y los antígenos CD34, CD13 y SSEA-4 para las células madre embrionarias a partir de la población decélulas que tenían baja complejidad y tamaño variable.
Para recolectar las 80 muestras de sangre de cordón umbilical, se utilizó el procedimiento descrito a continuación: Después delparto y antes de la expulsión de la placenta, el médico pinzaba el cordón umbilical a 5 cm del ombligo del recién nacido con dospinzas para luego cortar el cordón umbilical entre las pinzas. La pinza que quedaba en el cordón umbilical unido a la placenta seabría dejando que la sangre fluyera espontáneamente para recolectar un (1) tubo con anticoagulante EDTA hasta obtener 5 mL(volumen indicado) de la sangre del cordón umbilical. Las muestras de sangre de cordón umbilical de los partos por cesáreafueron tomadas bajo estrictas condiciones de esterilidad. Estas muestras eran transportadas a temperatura ambiente y enoscuridad para su procesamiento en el laboratorio.
Con el fin de obtener el recuento absoluto de las subpoblaciones de células madre de sangre de cordón umbilical, se realizó elrecuento total de leucocitos de las muestras por medio del analizador hematológico Coulter Microdiff 18. Para obtener elrecuento real de leucocitos y así utilizar este resultado para obtener recuentos absolutos de las subpoblaciones de célulasmadre de sangre de cordón umbilical, se realizó un extendido y coloración de Wright de cada una de las muestras para eliminarel número de normoblastos.
Para cada muestra de SCU se utilizaron 3 tubos de citometría marcados como: tubo No 1 (Control de Isotipo), tubo de No 2(Células Madre Hematopoyéticas), tubo No 3 (Células Madre Embrionarias). El procedimiento inició adicionando al tubo No 3:70µL de SCU y 10µL del anticuerpo anti-SSEA-4, se incubó por 30 minutos a 4°C en oscuridad, luego de este tiempo al tubo No3 se agregó 20µL del anticuerpo Rat-AntiMouse IgG1 (PE) y simultáneamente al tubo No1 (Control de Isotipo) se adicionó 70µLde SCU más 5µL del anticuerpo Rat-AntiMouse IgG1 (PE), se llevaron a incubar en las mismas condiciones que el anterior;transcurrido este tiempo se lavaron las células con 2mL de PBS 1X por 5 minutos a 1800 rpm. Después del lavado al tubo No 1se adicionaron 5µL de los controles de isotipo: FITC Mouse IgG1, Cy-Chrome5 Mouse IgG1, PE Mouse IgG2a y APC MouseIgG1. En el tubo No 2 se adicionaron 70µL de SCU y 10µL del anticuerpo anti-CD34 (FITC), 5µL de anti-CD38 (Cy5) y 5µL deanti-HLA-DR (PE). En el tubo No 3 se adicionaron 10µL del anticuerpo anti-CD34 (FITC) y 5µL del anticuerpo anti-CD13 (APC),se llevaron a incubación por 30 minutos a 4°C en oscuridad. Al cumplirse el tiempo de incubación, se preparaba el buffer de lisis(50µL de solución de lisis 10X + 450µL de agua MiliQ para cada tubo), luego se agregaban 500µL del buffer en cada uno, se
realizaba vórtex y se llevaban a incubación por 15 minutos a temperatura ambiente en oscuridad; luego de la lisis, se realizaban2 lavados de las células con 4 y 3mL de buffer de Citometría (PBS Azida de Sodio al 0.1%) respectivamente y se procedía a fijarlas células con 500µL de buffer de fijación (PBS Paraformaldehído 0.5%). Por último, se realizaba la lectura y análisis de lasmuestras en el Citómetro de flujo FACS Calibur Becton Dickinson Software Cell Quest.
El estudio se realizó teniendo en cuenta la normatividad ética enunciada en la resolución 008430 capítulo IV de 1993 expedidapor el Ministerio de Salud sobre “LA INVESTIGACIÓN EN MUJERES EN EDAD FÉRTIL, EMBARAZADAS, DURANTE ELTRABAJO DE PARTO, PUERPERIO, LACTANCIA Y RECIÉN NACIDOS; DE LA UTILIZACIÓN DE EMBRIONES, OBITOS YFETOS Y DE LA FERTILIZACIÓN ARTIFICIAL”.
Para determinar el rango de las subpoblaciones presentes en cada muestra de sangre de cordón umbilical fueron adquiridos50.000 eventos en el programa Cell Quest en el Citómetro FACS Calibur Becton Dickinson. La población analizada se escogiócon base en las características de tamaño y complejidad de las células (Forward y Side Scatter) siendo ésta la de tamañovariable y baja complejidad (Región 1) Los cuadrantes fueron definidos usando controles de isotipo10,11 (Figura 1).
Figura 1: Región 1La co-expresión de los antígenos CD34, CD38 y HLA-DR para las células madre hematopoyéticas se determinó así: loscuadrantes se determinaron usando controles de isotipo (Figura 2A-2C), el antígeno CD34 junto con el SSC (Región 2 Figura2B) se tomaron como referencia para mirar la co-expresión de los antígenos CD38 y HLA-DR en las células madrehematopoyéticas (Figura 2D).
A B C DFigura 2. A: Control Isotipo FITC.
B: Región 2. C: Control Isotipo Cy-PE. D: Co-expresión de Antígenos CD38/HLA-DRPara las células madre embrionarias se tomó como referencia la expresión del antígeno SSEA-4 junto con el SSC (región 3Figura 3B) para determinar si en la sangre de cordón umbilical se encontraban células que co-expresaran los antígenos SSEA-4y CD13 pero que no expresaran el antígeno CD34 (Figura 3D). Los cuadrantes se determinaron usando controles de isotipo(Figura 3A- 3C).
A
B
C
D
Figura 3. A: Control Isotipo PE. B: Región 3. C: Control Isotipo FITC-APC. D: Expresión CD13.RESULTADOSDe acuerdo a la expresión de los antígenos CD34, CD38 y HLA-DR se encontraron cuatro subpoblaciones de células madrehematopoyéticas similares a las que se han reportado en la médula ósea con los siguientes inmunofenotipos (Figura 4)
Figura 4: Subpoblaciones de CMH de SCUSubpoblación 1: CD34+ CD38- HLA-DR-Subpoblación 2: CD34+ CD38+ HLA-DR-Subpoblación 3: CD34+ CD38- HLA-DR+Subpoblación 4: CD34+ CD38+ HLA-DR+
Se probó la normalidad de los datos obtenidos en el programa Cell Quest con el test de Shapiro WilK; según este test los datosno se distribuyeron normalmente (p<0.05), por esto fue necesario aplicar una prueba de hipótesis no paramétrica, en este casose aplicó el test de la mediana con el programa Statistix 6.0. Para cada una de las subpoblaciones de células madrehematopoyéticas se calcularon los intervalos de confianza obteniéndose: IC 95% Subpoblación CD34+ CD38- HLA-DR- :(0.0153 ; 0.0234), IC 95% Subpoblación CD34+ CD38+ HLA-DR- : (0.0191 ; 0.0296), IC 95% Subpoblación CD34+ CD38-HLA-DR+ : (0.0427 ; 0.0676), IC 95% Subpoblación CD34+ CD38+ HLA-DR+ : (0.2427 ; 0.5117).
El total de muestras analizadas fue de 78, ya que dos de ellas se coagularon al momento de la toma. El valor mínimo de laproporción de las subpoblaciones de células madre hematopoyéticas en sangre de cordón umbilical fue de 0.03% y el valormáximo de 1.82%. con una mediana de 0.28% (Pt25 ; 75).
A partir de los datos obtenidos, se puede afirmar que existe evidencia estadísticamente significativa para decir que la medianade la proporción de las subpoblaciones de células madre hematopoyéticas en la muestra analizada es mayor a 0.2%. p=0.0010.
En cuanto a la expresión de los antígenos CD13 y SSEA-4 de las 78 muestras de Sangre de Cordón Umbilical analizadas solose encontraron 8 muestras que mostraron resultado positivo para la expresión de estos marcadores, sin embargo como aún noexisten datos con respecto a esta población de células en Sangre de Cordón Umbilical no se puede descartar la posibilidad deencontrar células con características embrionarias en este tejido.
DISCUSIÓN
La presencia de Células Madre Hematopoyéticas en Sangre de Cordón Umbilical fue demostrada en 1974 por Knutzon. Sinembargo, fue diez años más tarde que Ogawa y sus colaboradores documentaron la presencia de progenitores hematopoyéticosen Sangre de Cordón Umbilical. Desde entonces, se ha incrementado el interés en el uso de la Sangre de Cordón Umbilicalcomo un recurso alternativo para obtener Células Madre Hematopoyéticas diferente a la Médula Ósea que es la fuentetradicional3.
Se ha encontrado que la molécula CD34 es expresada en la mayoría de las Células Madre Hematopoyéticas, por lo que se haconvertido en el principal marcador para su caracterización. La frecuencia de este antígeno en SCU ha sido estimada entre el0.2% y el 1% del total de las células de la SCU11 lo que concuerda con los resultados obtenidos en este estudio en donde laproporción es mayor del 0. 2% (p= 0.0010).
Muchos estudios han demostrado que las células CD34+ de MO y de SCU son heterogéneas y contienen una gran variedad decélulas madre que se encuentran en diferentes estadíos. Hao y sus colaboradores encontraron que la subpoblación de CMHCD34+ CD38- es muy primitiva teniendo como base el estado del ciclo celular en el que se encuentran las células y en sucapacidad de proliferación in vitro. Traycoff reportó que la población CD34+ HLA-DR+ en SCU es más primitiva que la poblaciónCD34+ HLA-DR-, en contraste con los hallazgos en MO adulta en donde las células más primitivas son las células CD34+HLA-DR-10. Existe controversia acerca de la co-expresión de los antígenos CD34 y HLA-DR ya que aunque la población de CMHmás primitiva en SCU son las que co-expresan CD34 y HLA-DR, se ha encontrado una población de células con el fenotipoCD34+ HLA-DR 12.
A pesar de que se han realizado varios estudios acerca del inmunofenotipo de las CMH con base en la expresión de losantígenos CD34/CD38 y CD34/HLA-DR; hasta el momento se desconocían los fenotipos de las CMH de SCU que relacionaranlos tres antígenos. Siendo éste el primer estudio acerca de las Subpoblaciones de CMH en SCU con base en la expresión delos antígenos CD34, CD38 y HLA-DR, se encontraron cuatro Subpoblaciones de CMH, similares a las que se reportan en la MOy que corresponden a los fenotipos: CD34+ CD38- HLA-DR-, CD34+ CD38-HLA-DR+, CD34+ CD38+ HLA-DR- y CD34+ CD38+HLA-DR+. El rango de cada una de estas Subpoblaciones es diferente, encontrándose que las células con el fenotipo CD34+CD38+ HLA-DR+ están en mayor proporción con relación a las otras tres Subpoblaciones. Debido a que para este estudio secalcularon los intervalos de confianza de cada una de las Subpoblaciones y siendo los datos muy variables, no se determinaronlos recuentos relativos (%) y absolutos (células/mL) de cada una de las Subpoblaciones encontradas.
Los estudios sobre Células Madre Embrionarias sólo se pueden realizar a partir de las células provenientes de la etapa deblastocisto, lo que implica la manipulación de embriones; esto tiene una gran connotación ética, razón por la cual losinvestigadores están tratando de encontrar otras fuentes de estas células como la MO. Verfaillie recientemente documentó lapresencia de una población de células madre en MO con un comportamiento similar al de las CME, las cuales expresan altosniveles de los antígenos CD13 y SSEA-4, a las cuales denominaron “MAPCs”. Hasta el momento no existen reportes acerca dela existencia de estas células en SCU, lo que motivó la búsqueda de células madre con características embrionariasconjuntamente con la identificación de cada una de las Subpoblaciones de CMH derivadas de SCU, por ser ésta una muestra defácil obtención que puede manejarse con menos implicaciones éticas y por lo que permitiría avanzar más en las investigacionesacerca de las células progenitoras de SCU como alternativa en tratamientos relacionados con terapia génica. En este estudiosólo se encontró la expresión de los antígenos CD13 y SSEA-4 en 8 de las 78 muestras analizadas, lo cual indica queposiblemente esta población si se encuentre en SCU pero es necesario explorar la expresión de otros antígenos y aumentar lacantidad mínima de eventos leídos en Citometría para conseguir resultados más representativos.
La caracterización fenotípica de las Subpoblaciones de Células Madre Hematopoyéticas y el hallazgo de Células MadreEmbrionarias en Sangre de Cordón Umbilical es el estudio que da inicio a la línea de investigación sobre la biología de lasCélulas Madre que permitirá establecer protocolos para el aislamiento, purificación y cultivo de estas poblaciones celulares quemás adelante podrán ser utilizadas en como alternativa terapéutica de reemplazo medular.
AGRADECIMIENTOS
La realización de este trabajo fue posible gracias a la Vicerrectoría Académica por el apoyo financiero, al Departamento deGineco-obstetricia del Hospital Universitario San Ignacio por su colaboración en la toma de las muestras, al Instituto deGenética Humana de la Pontificia Universidad Javeriana y al personal del Laboratorio de Inmunología.
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