Captura hibrida PHV

CARTURA HIBRIDA PARA DIAGNOSTICO DE

VIRUS DE PAPILOMA

SANCHEZ ECHAVARRIA PAULA

HISTORIA • En 1917, George Nicholas Papanicolaou (1883-1962)

• En el año 2008, el médico alemán Harald zur Hausen (1936-) recibió el Premio Nobel de Medicina por el descubrimiento de VPH como una causa de cáncer cervical.

PVH

• PVH es una de las INFECCIONES de transmisión sexual más comunes.

• Es también la causa principal de los cambios precancerosos en el cuello uterino y del cáncer de cuello uterino.

• Por lo menos 1 de cada 3 mujeres jóvenes sexualmente activas ha tenido una infección genital por PVH. Cualquier persona sexualmente activa, puede contraer PVH.

ADN VIRAL CAPSIDE PM L1

PVH EPITELIAL PVH MUCOSO

Historia Natural de la Enfermedad

Carcinoma invasor

TiempoTiempo AñosAñosMeses

Lesiones intraepiteliales escamosas de bajo grado

(LIEBG)

Lesiones intraepiteliales escamosas de alto grado

(LIEAG)

Epitelio normal

Infección VPH,coilocitosis

NIC I NIC II NIC III

TamizadoTamizadoTratamientoTratamiento

Infección Persistente VPH

Adaptado de Gravitt PE & Jamshidi R. Infect Dis Clin N Am 2005;19:439-58

DESANATURALIZACION DEL ADN

SE LLEVA A CABO LA LISIS DE LAS CELULAS PARA LIBERAR Y DESNATURALIZAR LA DOBLE CADENA DE ADN DE LAS CELULAS CERVICALES DE LA MUESTRA.

•SE AGREGA BUFFER.•SE LLEVA AL VORTEX.•BAÑO MARIA 65° 45’

HIBRIDIZACIONLA SONDA DE ARN COMPLEMENTARIA SE UNE A LA CADENA EXPUESTA DEL ADN DEL PVH Mx. FORMA HIBRIDOS ARN-ADN

•SE AGREGA EL RVO CON LA SONDA•SE LLEVA A LA MICROPLACA DE HIBRIDACION A 65° 60’

CAPTURAEN LA FASE SOLIDA O MICRO PLACA SE UNEN LOS Ac ESPECIFICOS PARA EL HIBRIDO, CAPTURANDOLOS.

•SE DISPENSA EL HIBRIDO EN LA MICRO PLACA•SE LLEVA EL ROTADOR 60’ 1100 RPM.•SE ELIMINAN LOS INESPECIFICOS.

DETECCION SE AGREGA EL CONJUGADO DE Ac + FA. PARA AMPLIFICAR SIGNIFICATIVAMENTE LA SEÑAL. PARA DETECTAR MINIMAS CANTIDADES DE ADN VIRAL.

•RVO 1 Ac + FC•INCUBACION 30’ A 25°•SE REALIZA MICRO LAVADO PARA ELIMINAR EL EXCESO DE Ac

DETECCION DE LA SEÑAL

EN EL LUMINOMETRO SE CUANTIFICA EL ADN VIRAL.

•SE AGREGA LA SLN QUIMIOLUMINISCENTE QUE SE UNE A LOS HIBRIDOS CAPTURADOS CUBIERTOS CON ANTICUERPOS MARCADOS CON FA PRODUCEN EMISION DE LUZ QUE ES MEDIDA.

LECTURA E INTERPRETACION

SE OBTIENE UN COCIENTE UNIDADES DE LUZ RELATIVA SOBRE EL VALOR DE CORTE.•>1 POSITIVO•<1 NEGATIVO.

+ PRESENCIA DE PHV AR-NO PVH AR EN CANT. DETECTABLES.

CONCLUSIONESVENTAJAS

• ES UNA PRUEBA MUY SENCIBLE Y ESPECIFICA PARA SEPARAR PVH AR DE PVH DE BR.

• TIENE UN ALTO VALOR PREDICTIVO.

• EVIDENCIA LA PRESENCIA DE PVH.

• SU APLICACIÓN ESTA RELACIONADA AL DESARROLLO DE VACUNA MAS ESPECIFICA.

DESVENTAJAS• ES MAS COSTOSA QUE EL

PAP.• NO TIENE UTILIDAD

TERAPEUTICA.

GRACIAS