Busulfan Serum & Plasma LC-MS/MS Analysis Kit ZV-3011-0200-10 200 2-8 °C User Manual
Welcome message from author
This document is posted to help you gain knowledge. Please leave a comment to let me know what you think about it! Share it to your friends and learn new things together.
Transcript
Busulfan Serum & Plasma LC-MS/MS Analysis Kit
ZV-3011-0200-10
200
2-8 °C
User Manual
Page 1. INTENDED USE: .................................................................................................................................................................. 3
2. SUMMARY AND EXPLANATION: .................................................................................................................................. 3
3. TEST PRINCIPLE ................................................................................................................................................................. 3
4. WARNING AND PRECAUTIONS .................................................................................................................................... 4
5. STORAGE AND STABILITY ............................................................................................................................................. 5
6. MATERIALS SUPPLIED .................................................................................................................................................... 5
7. MATERIALS REQUIRED BUT NOT SUPPLIED ........................................................................................................ 6
8. PROCEDURE NOTES .......................................................................................................................................................... 6
9. LIMITATIONS OF THE PROCEDURE ........................................................................................................................... 7
10. PRE-TEST SETUP INSTRUCTIONS .............................................................................................................................. 7
Preparation of Calibrators:............................................................................................................................................. 7
Preparation of Control: .................................................................................................................................................... 7
11. TEST PROCEDURE ............................................................................................................................................................. 7
12. QUALITY CONTROL ........................................................................................................................................................... 8
13. CALCULATION OF RESULTS .......................................................................................................................................... 8
14. INTERPRETATION OF RESULTS .................................................................................................................................. 8
15. EXPECTED VALUES ........................................................................................................................................................... 9
16. LC-MS/MS PARAMETERS ............................................................................................................................................... 9
17. MS SCAN PARAMETERS .................................................................................................................................................. 9
18. ANALYTICAL PERFORMANCE ................................................................................................................................... 10
19. SAMPLE CHROMATOGRAM ........................................................................................................................................ 10
1. INTENDED USE:
Quantitative LC-MS/MS analysis kit for busulfan in human serum & plasma samples.
2. SUMMARY AND EXPLANATION:
Busulfan is an alkylating agent used to ablate bone marrow cells before hematopoietic
stem cell transplant.(1) Busulfan is typically administered in intravenous (IV) doses of
0.8 mg/kg once every 6 hours over 4 days, a total of 16 doses. Dose-limiting toxicity of
busulfan is hepatic veno- occlusive disease. To avoid toxicity while ensuring busulfan
dose adequacy to completely ablate the bone marrow, IV dosing should be guided by
pharmacokinetic (PK) evaluation of area under the curve (AUC) and clearance after
the first dose.(2) The PK evaluation should be carried out at the end of the first dose,
with results of PK testing available to facilitate dose adjustment before beginning the
fifth dose.
Zivak Busulfan LC-MS/MS Analysis Kit was developed for rapid, sensitive and reliable quantitative detection of the busulfan concentrations in human plasma & serum samples and it gives results in 5 minutes with minimal sample preparation. Main methods and procedures that we selected are based on EN ISO 13485 and 98/79/EC.
3. TEST PRINCIPLE
Busulfan analytes are extracted from human samples using an organic extraction and
deproteinization steps. After the extraction, analytes are diluted and analyzed by Zivak
LC-MS/MS system.
4. WARNING AND PRECAUTIONS
• For in-vitro diagnostic use only.
• For professional use only.
• Read the instructions carefully, before you start.
• In case of damage of the kit package, please contact Zivak or your supplier.
• Do not use expired kits and components.
• Please check the batch no and expiry date before start.
• Protective gloves and goggles should be worn.
• Please take any necessary precautions to prevent infection with pathogens while
working with biological fluids. Appropriate bio-safety precautions and disposal of bio-
hazardous wastes should be followed.
• Please check the labels on reagent bottles. Reagents of this kit contain hazardous
material may cause eye and skin irritations.
• It’s recommended to work in a fume hood for your safety as reagent 1-2 are volatile
and please avoid inhaling.
Please check the labels on reagent bottles. Reagents of this kit contain hazardous
material may cause eye and skin irritations.
5. STORAGE AND STABILITY
Calibrators, Control must be stored at -20°C. R1 reagent can be stored at 2-8°C, R2 and R3 reagents can be stored at room temperature. All components are guaranteed until expiry date when stored at recommended temperatures and used as described in this manual.
6. MATERIALS SUPPLIED
ZV-3011-0200-10 Volume Symbol Component
ZV-3011-02R1-10
1x 10ml
R1 Reagent 1,
Contains deuterated
internal standart,
ZV-3011-02R2-10
2x 40ml
R2 Reagent 2,
Contains precipatition reagent
ZV-3011-02R3-10
4x 40ml
R3 Reagent 3,
Contains organic solvent
ZV-3011-02MA-10
1x 1000ml
MA Mobile Phase B,
Contains organic
solvent
ZV-3011-02MB-10
1x 1000ml
MB Mobile Phase A,
Contains organic
solvent
ZV-3011-KK-10 1x 1pc
User Guide
7. MATERIALS REQUIRED BUT NOT SUPPLIED
ZV-3011-02S1-10
1x 2,5ml CAL-1
Plasma Calibrator Level-1
Frozen
ZV-3011-02S2-10
1x 2,5ml CAL-2
Plasma Calibrator Level-2
Frozen
ZV-3011-02K1-10
1x 2,5ml CONT-1
Plasma Control Level-1
Frozen
ZV-3011-02C1-10
Zivak Busulfan Analytical Column
20-200 µL pipette
200-1000 µL pipette
Pipette tips
Vortex mixer
2,0 mL eppendorf tube
Eppendorf tube centrifuge
Bidistilled or deionised water
1,8 ml autosampler vial
8. PROCEDURE NOTES
Any inappopriate handling of samples or modification of the test procedure may
influence the results. The indicated pipetting volumes, incubation times, temperatures
and pretreatment steps have to be performed strictly according to the instructions.
Use calibrated pipettes and devices only.
Once the test has been started, all steps should be completed without interruption.
Make sure that required reagents, materials and devices are prepared ready at the
appropriate time. Leave aside all reagents and specimens to reach room temperature
(18-25 °C) and gently swirl each vial of liquid reagent and sample before use. Mix
reagents without foaming.
Avoid contamination of reagents, pipettes and wells/tubes. Use new disposable
plastic pipette tips for each reagent, standard or specimen. Do not interchange the vial
caps. Always keep vials closed when not been used. Do not re-use wells/tubes or
reagents.
Incubation time affects results. All tubes or wells should be handled in the same order
and time sequences.
9. LIMITATIONS OF THE PROCEDURE
Specimen collection and storage has a significant effect on the test results. Plasma
samples from earlier days must be kept frozen before the analysis.
10. PRE-TEST SETUP INSTRUCTIONS
Preparation of Calibrators:
After preparation, calibrators must be aliquoted into 550 µl volumes and stored at -20 °C.
Preparation of Control:
After preparation, Control Level I must be aliquoted into 550 µl volumes and stored at -20 °C.
11. TEST PROCEDURE
1. Take 500 μL of patient sample (or calibrators and controls) into the tube.
2. Add 100 μL Reagent 1 and vortex for 10 seconds.
3. Add 400 μL Reagent 2 and vortex for 10 seconds.
4. Centrifuge at 4000 x rpm for 3 minutes.
5. Take 400 µl upper phase into the auto sampler vial
6. Add 800 μL Reagent 3 and vortex for 10 seconds. and inject 50 μL to the LC-
MS/MS system.
The prepared sample is stable at 2-4 °C for 24 hours until the injection.
12. QUALITY CONTROL
The test results are only valid if the test has been performed by following the
instructions. Moreover the user must strictly adhere to the rules of GLP (Good
Laboratory Practice) or other applicable standards/laws. All standards and kit
controls must be found within the acceptable ranges as stated on the QC Certificate. If
the criterias are not met, the run is not valid and should be repeated. Each laboratory
should use known samples as further controls. In case of any deviation the following
technical issues should be proven: Expiry dates of (prepared) reagents, storage
conditions, pipettes, devices, incubation conditions and washing methods. It is
recommended to participate at appropriate quality assessment trials.
13. CALCULATION OF RESULTS
The obtained area of the standard is plotted against their concentration. The standard
curve is calculated by a linear regression or a weighted linear regression function.
Using computer programs, the curve is best described by a 2-point linear regression
fit with linear axes. For the calculation of the regression curve, apply each signal of
the standards (one obvious outlier of duplicates might be omitted and the more
plausible single value might be used).
The concentration of the samples can be read directly from the regression function.
Sample signals above the highest standard have to be confirmed by a reference
method.
14. INTERPRETATION OF RESULTS
Various societies recommend different Cut-Off values for repetition of the
measurement and the application of confirmatory assays. Depending on the
application of patient samples from different populations, it is highly recommended
that each laboratory establishes its own range of normal values and that this
distribution of values is co-ordinated with the recommendations of the responsible
society of this geographic region.
The results themselves should not be the only reason for any therapeutical
consequences. They have to be correlated to other clinical observations and
diagnostic tests.
15. EXPECTED VALUES
Arean Under The
Curve 900-1,500
mcmol*minute
Clearance
2.1-3.5 (mL/minute)/kg
It is recommended that each laboratory establishes its own range of normal values.
16. LC-MS/MS PARAMETERS
Device LC-MS/MS Analysis System Column Zivak-Busulfan Column Injection volume 50 µL Gradient 00.00 min 10% B
01:00 min 35% B 02:00 min 100% B 02:01 min 10% B 05:00 min 10% B
Flow 0,35 mL/min Ionization Mode: vESI positive CID Gas 2,4 mTorr API Nebulizing Gas 55 psi Scan Time 0,4 sec SIM Width 1,5 amu Drying Gas 20 psi Drying Gas Temp. 350 °C Vortex Gas 250 °C Vortex Gas Temp. 20 psi Needle 5000V Shield 600V Capillary 40V Detector 1600 V
17. MS SCAN PARAMETERS
No
Analyte RT (min)
MH+ (m/z)
MS/MS
Capillary (eV)
CE (eV)
1 Busulfan 2,6 (+) 264.00 151 50V 10V 2 IS 2,6 (+) 272.00 159 50V 10V
18. ANALYTICAL PERFORMANCE
No Analyte LOD
(µg/L)
LOQ (µg/L)
Accuracy
(%)
Precision
(%CV)
Linearity
(R2)
1 Busulfan 0,15 0,45 99,1 3,5 0,997
Analytical Specificity (Cross Reactivity): No cross-reactivities were found with the
typical substances tested.
19. SAMPLE CHROMATOGRAM
D. No: ZV-3011-KK-10_Rev01
Serum ve Plazmada Busulfan LC-MS/MS Analiz Kiti
ZV-3011-0200-10
200
2-8 °C
Kullanma Kılavuzu
D. No: ZV-3011-KK-10_Rev01
12
İÇERİK Sayfa
1. KULLANIM AMACI: ............................................................................................................................................. 13
2. ÖZET VE AÇIKLAMA: ......................................................................................................................................... 13
3. TEST PRENSİBİ .................................................................................................................................................... 13
4. UYARILAR VE ÖNLEMLER .............................................................................................................................. 14
5. SAKLAMA KOŞULLARI VE KARARLILIK .................................................................................................... 14
6. KİT İÇERİĞİ ............................................................................................................................................................ 15
7. KİT İÇERİĞİ DIŞINDA GEREKLİ OLAN MALZEMELER ......................................................................... 16
8. ÇALIŞMA PROSEDÜRÜ ...................................................................................................................................... 16
9. YÖNTEMDEKİ KISITLAMALAR...................................................................................................................... 17
10. TEST ÖNCESİ HAZIRLIKLAR .......................................................................................................................... 17
11. NUMUNE HAZIRLIĞI .......................................................................................................................................... 18
12. KALİTE KONTROL .............................................................................................................................................. 18
13. SONUÇLARIN HESAPLANMASI ..................................................................................................................... 19
14. SONUÇLARIN YORUMLANMASI.................................................................................................................... 19
15. BEKLENEN DEĞERLER ..................................................................................................................................... 19
16. LC-MS/MS PARAMETERLERİ ........................................................................................................................ 20
17. MS SCAN PARAMETRELERİ............................................................................................................................ 20
18. ANALİTİK PERFORMANS ................................................................................................................................. 21
19. ÖRNEK KROMATOGRAM ................................................................................................................................. 21
D. No: ZV-3011-KK-10_Rev01
13
1. KULLANIM AMACI:
Serum ve plazma numunelerinde Busulfanın LC-MS/MS yöntemiyle kantitatif
analizi.
2. ÖZET VE AÇIKLAMA:
Busulfan, hemopatik kök hücre naklinden önce kemik iliği hücrelerini çıkarmak için
kullanılan bir alkilleme ajanıdır. Busulfan tipik olarak 4 gün boyunca her 6 saatte bir
0,8 mg/kg lık dozlar olmak üzere toplam 16 doz olarak damar içi yolu ile
uygulanmaktadır. Busulfanın toksik etkisinden kaynaklanabilecek hepatik venö-
oklusif hastalığı nedeniyle limitli dozlarda uygulanmalıdır. Busulfan dozunun kemik
iliğini tam olarak ayırabilmek ve aynı zamanda toksik etkiden kaçınmak için IV dozu
eğri altında kalan alan (AUC) ve ilk uygulanan dozun atılımının farmakokinetik (PK)
değerlendirmesi ile belirlenmelidir. Bu farmakokinetik değerlendirme ilk dozun
uygulanmasından sonra yapılmalı ve 5. Dozun uygulanmasından önce doz ayarlaması
yapılabilir olmalıdır.
Zivak Busulfan LC-MS/MS Analiz kitit serum ve plazma örneklerinde busulfan konsantrasyonunun hızlı, hassas ve güvenilir olarak ölçülmesi için geliştirilmiştir ve minimal numune hazırlığı ile her numune için 5 dakikada analiz sonucu alınabilmektedir. Kullanılan yöntemler ve prosedürler EN ISO 13485 ve 98/97/EC standartlarına göre standardize edilmiştir.
3. TEST PRENSİBİ
Busulfan analitleri organik ekstraksiyon ve deproteinizasyon işlemleri ile
numulelerden ekstrakte edilirek analiz edilir.
D. No: ZV-3011-KK-10_Rev01
14
4. UYARILAR VE ÖNLEMLER
Sadece in-vitro kullanım amaçlıdır.
Profesyonel kullanım içindir.
Çalışmaya başlamadan önce, kullanım kılavuzunu dikkatlice okuyunuz.
Kit ambalajının zarar görmüş olması durumunda, lütfen Zivak veya bayinizle irtibata
geçiniz.
Son kullanma tarihi geçmiş kitleri veya bileşenlerini kullanmayınız.
Kullanmadan önce seri numarasını ve son kullanma tarihini kontrol ediniz.
Toksik bileşen konsantrasyonları çok düşük olmakla birlikte güvenlik amacıyla
çeker ocak altında çalışılması önerilir.
Çalışırken koruyucu eldiven ve gözlük kullanılmalıdır.
Çalışılan kan veya biyolojik örneklerden kaynaklanabilecek enfeksiyonlara karşı
gerekli her türlü önlemi alınız.
Biyo-zararlı atıklar için uygun biyo-güvenlik ve atık yönetimi koşullarını sağlayınız.
Lütfen kullanmadan önce reaktif şişeleri üzerindeki etiketleri kontrol ediniz. Bu kitin
reaktifleri göze ve cilde zarar verecek maddeler içerir.
5. SAKLAMA KOŞULLARI VE KARARLILIK
Kalibratör, Kontroller -20°C’de saklanmalıdır. R1 2-8°C’de, R2 ve R3 reaktifleri oda
sıcaklığında saklanabilirler. Bütün bileşenler önerilen koşullarda saklandığı takdirde
son kullanma tarihine kadar garantilidir.
D. No: ZV-3011-KK-10_Rev01
15
6. KİT İÇERİĞİ
ZV-3011-0200-10 Hacim Sembol İçerik
ZV-3011-02R1-10
1x 10ml
Reaktif 1,
Döteryum işaretli internal
standart,
ZV-3011-02R2-10
2x 40ml
Reaktif 2,
Çöktürme Ajanı
ZV-3011-02R3-10
4x 40ml
Reagent 3,
Organik Çözücü
ZV-3011-02MA-10
1x 1000ml
Mobil Faz B,
Organik Çözücü
ZV-3011-02MB-10
1x 1000ml
Mobil Faz A,
Organik Çözücü
ZV-3011-KK-10 1x 1 adet Kullanım Kılavuzu
R1
R2
R3
MB
MA
D. No: ZV-3011-KK-10_Rev01
16
7. KİT İÇERİĞİ DIŞINDA GEREKLİ OLAN MALZEMELER
ZV-3011-02S1-10 1x 2,5ml
Serum Kalibratör Level-1
ZV-3011-02S2-10
1x 2,5ml
Serum Kalibratör Level-2
ZV-3011-02K1-10 1x 2,5ml
Serum Kontrol Level-1
ZV-3011-02C1-10 Zivak Busulfan Analitik Kolonu
20-200 µL pipet
200-1000 µL pipet
Pipet uçları
Vorteks karıştırıcı
2,0 mL eppendorf tüp
Eppendorf tüp tipi santrifüj
Bidistile veya deiyonize su
1,8 ml autosampler vial
8. ÇALIŞMA PROSEDÜRÜ
Test prosedürün yanlış ve değiştirilerek uygulanması test sonucunu etkileyebilir.
Pipetleme hacimleri, inkübasyon zamanları ve hazırlık aşamaları tam olarak
belirtilen miktarlarda ve talimatlara uygun bir biçimde yapılmalıdır. Her zaman ve
sadece kalibre edilmiş pipetler ve cihazlar kullanılmalıdır.
Teste bir kere başlandığı zaman, herhangi bir kesintiye uğramadan
tamamlanmalıdır. Bunu sağlamak için gerekli reaktiflerin, maddelerin ve cihazların
zamanında hazır olduğundan emin olunuz. Çalışmaya başlamadan önce bütün
Cal- 2
Cal- 1
CONT-1
D. No: ZV-3011-KK-10_Rev01
17
reaktiflerin ve numunlerin oda sıcaklığına (18-25 °C) gelmesini bekleyiniz, sıvı
reaktifleri ve örneklerini kullanmadan önce hafifçe çalkalayarak karıştırınız.
Reaktifler, pipetler ve numune hazırlık tüplerinde kirlilik ve bulaşma olmamasına
dikkat ediniz. Her reaktif, standart ve numune için ayrı ve yeni pipet ucu kullanınız.
Vial kapaklarını kendi aralarında değiştirmeyiniz. Kullanılmadığı zaman vial
kapaklarını her zaman kapalı tutunuz. Vialler, vial kapakları, numune hazırlık
tüpleri ve pipet uçları tek kullanımlıktır.
İnkübasyon süreleri sonuçları etkilemektedir. Bütün numune hazırlık işlemleri
belirtilen sırada ve sürede yapılmalıdır.
9. YÖNTEMDEKİ KISITLAMALAR
Numune toplama ve saklama koşulları test sonuçlarını belirgin bir şekilde
etkilemektedir. Daha sonraki günlerde çalışılacak serum numuneleri analiz yapılana
kadar dondurulmuş olarak saklanmalıdır.
10. TEST ÖNCESİ HAZIRLIKLAR
Kalibratörün Hazırlanması :
Kalibratörler 550 μl’lik hacimlere bölünerek -20 °C ‘de saklanmalıdır
Kontrol Numunesinin Hazırlanması : Kontrol numunesi 550 μl’lik hacimlere bölünerek -20 °C ‘de saklanmalıdır.
D. No: ZV-3011-KK-10_Rev01
18
11. NUMUNE HAZIRLIĞI
1. 500 L hasta numunesi (veya kalibratör ve kontroller) hazırlık tüpüne alınır.
2. 100 L Reaktif 1 eklenir ve 10 saniye boyunca vortekslenir.
3. 400 L Reaktif 2 eklenir ve 10 saniye boyunca vortekslenir.
4. 4000 x rpm’de 3 dakika santrifüj edilir.
5. 400 µl üst faz viale alınır.
6. 800 μL Reaktif 3 eklenir ve 10 saniye boyunca vortekslenir. 50 L LC-MS/MS
sistemine enjekte edilir.
Hazırlanmış numune 2-4 °C ‘de 24 saat boyunca stabildir.
12. KALİTE KONTROL
Test sonuçları ancak verilen test talimatlarına uyulduğu takdirde geçerlidir.
Kullanıcılar çalışırken GLP veya diğer kurumlar tarafından belirlenmiş olan kurallara
ve standartlara bağlı kalmalıdır.
Bütün standart ve kontrol değerleri kalite kontrol sertifikasında belirtilen aralıklarda
olmalıdır.
Değerler bu aralıkların dışında kaldığı takdirde analiz geçerli değildir ve
tekrarlanmalıdır.
Her laboratuvar daha ileri aşama kontroller için değeri bilinen numuneleri
kullanmalıdır.
Bu değerlerden sapma olması halinde reaktiflerin son kullanma tarihi, saklama
koşulları, kullanılan pipetlerin doğruluğu, cihazlar, inkübasyon koşulları ve yıkama
metotları gibi teknik detayların doğruluğundan emin olunmalıdır.
Ayrıca uygun dış kalite kontrol programına üye olunması önerilir.
D. No: ZV-3011-KK-10_Rev01
19
13. SONUÇLARIN HESAPLANMASI
Standardın alanına karşı standart konsantrasyonu grafiği çizilir.
Standart eğrisi lineer regresyon veya ağırlıklı lineer regresyon fonksiyonu ile
hesaplanır.
Regresyon eğrisini hesaplamak için, her bir standarda karşılık gelen sinyal değeri
grafiğe alınır.
Bilinmeyen konsantrasyonu regresyon eğrisinin fonksiyonundan direk olarak
okunabilir.
Standart eğrisinin üzerinde kalan konsantrasyon değerleri referans bir metot ile teyit
edilmelidir.
14. SONUÇLARIN YORUMLANMASI
Farklı toplumlarda farklı Cut-Off değerleri belirlenmelidir. Farklı toplumlardaki hasta
numuneleri için yapılan çalışmalara bağlı olarak, her laboratuvarın kendi normal
değerlerini belirlemesi önemle tavsiye edilir ve bu değerlerin dağılımı o coğrafi
bölgedeki sorumlu kurumun önerdiği değerler ile uyumlu olmalıdır.
Tanı ve tedavi aşamalarında bu analizlerin sonuçları klinik gözlemler ve tanı testleri
ile desteklenmelidir.
15. BEKLENEN DEĞERLER
AUC
900-1,500 mcmol*minute
Clearance
2.1-3.5 (mL/minute)/kg
Her laboratuvarın kendi normal değerlerini belirlemesi önemle tavsiye edilir.
D. No: ZV-3011-KK-10_Rev01
20
16. LC-MS/MS PARAMETERLERİ
Cihaz LC-MS/MS Analiz Sistemi
Kolon Zivak-Busulfan Analitik Kolonu
Enjeksiyon Hacmi 50 µL
Gradiyant
00.00 dk 10% B 01:00 dk 35% B 02:00 dk 100% B 02:01 dk 10% B 05:00 dk 10% B
Akış 0,35 mL/dk
Iyonizasyon Modu: vESI positive
CID Gaz 2,4 mTorr
API Nebulizing Gaz 55 psi
Tarama Süresi 0,4 sec
SIM Width 1,5 amu
Drying Gaz 20 psi
Drying Gaz Sıcaklığı 350 °C
Vorteks Gaz 250 °C
Vorteks Gaz sıc 20 psi
İğne Voltajı 5000V
Shield voltajı 600V
Kapiler voltaj 40V
Dedektör 1600 V
17. MS SCAN PARAMETRELERİ
No Analit RT (dk) MH+ (m/z) MS/MS Capillary
(eV) CE
(eV) 1 Busulfan 2,6 (+) 264.00 151 50V 10V 2 IS 2,6 (+) 272.00 159 50V 10V
D. No: ZV-3011-KK-10_Rev01
21
18. ANALİTİK PERFORMANS
No Analit LOD
(µg/L) LOQ
(µg/L)
Doğruluk
(%)
Kesinlik
(%CV) Doğrusallık
(R2)
1 Busulfan 0,15 0,45 99,1 3,5 0,997
Analitik Seçicilik (Çapraz reaksiyon): Analitler arasında çapraz reaksiyon veya bir
interferans etkisi gözlenmemiştir.
19. ÖRNEK KROMATOGRAM
Related Documents
