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Bacillus thuringiensis Bacillus thuringiensis Bacillus Bacillus thuringiensis thuringiensis
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BT MATERIA - Fi

Nov 12, 2014

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bt aplicado a la biotecnologia
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Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

Bacillus Bacillus thuringiensisthuringiensisBacillus Bacillus thuringiensisthuringiensis

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Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

Familia BacillaceaeFamilia Bacillaceae Género Género BacillusBacillusBacteria esporuladaBacteria esporuladaGramGram positivapositivaAerobiaAerobia facultativa y móvilfacultativa y móvil

Familia BacillaceaeFamilia Bacillaceae Género Género BacillusBacillusBacteria esporuladaBacteria esporuladaGramGram positivapositivaAerobiaAerobia facultativa y móvilfacultativa y móvil

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Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

ES COSMOPOLITA, SIN ES COSMOPOLITA, SIN EMBARGO LA RAZÓN EMBARGO LA RAZÓN DE ESTA DIVERSIDAD DE ESTA DIVERSIDAD NO ES CONOCIDA NO ES CONOCIDA

ES COSMOPOLITA, SIN ES COSMOPOLITA, SIN EMBARGO LA RAZÓN EMBARGO LA RAZÓN DE ESTA DIVERSIDAD DE ESTA DIVERSIDAD NO ES CONOCIDA NO ES CONOCIDA

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Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

•FORMA INCLUSIONES FORMA INCLUSIONES CRISTALINAS VISIBLES AL CRISTALINAS VISIBLES AL MICROSCOPIO ÓPTICO MICROSCOPIO ÓPTICO DURANTE LA ESPORULACIÓNDURANTE LA ESPORULACIÓN

•ESTAS INCLUSIONES ESTAS INCLUSIONES CRISTALINAS ESTÁN CRISTALINAS ESTÁN COMPUESTAS POR COMPUESTAS POR PROTOXINAS, QUE PROTOXINAS, QUE CONTIENE DELTA CONTIENE DELTA ENDOTOXINAS, TÓXICAS ENDOTOXINAS, TÓXICAS PARA LOS INSECTOSPARA LOS INSECTOS

•FORMA INCLUSIONES FORMA INCLUSIONES CRISTALINAS VISIBLES AL CRISTALINAS VISIBLES AL MICROSCOPIO ÓPTICO MICROSCOPIO ÓPTICO DURANTE LA ESPORULACIÓNDURANTE LA ESPORULACIÓN

•ESTAS INCLUSIONES ESTAS INCLUSIONES CRISTALINAS ESTÁN CRISTALINAS ESTÁN COMPUESTAS POR COMPUESTAS POR PROTOXINAS, QUE PROTOXINAS, QUE CONTIENE DELTA CONTIENE DELTA ENDOTOXINAS, TÓXICAS ENDOTOXINAS, TÓXICAS PARA LOS INSECTOSPARA LOS INSECTOS

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Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

LA LA ENDOTOXINA PUEDE VARIAR EN ENDOTOXINA PUEDE VARIAR EN TAMAÑO Y EN FORMA, PRESENTANDO TAMAÑO Y EN FORMA, PRESENTANDO DIFERENTES FORMAS EN SUS CRISTALESDIFERENTES FORMAS EN SUS CRISTALES

•ROMBOIDAL (65 KDA), ROMBOIDAL (65 KDA), •AMORFO ENTRE (130 Y 140 KDA)AMORFO ENTRE (130 Y 140 KDA)•HETEROGÉNEO (63 KDA) HETEROGÉNEO (63 KDA) •BIPIRAMIDAL (130 Y 65 KDA ) BIPIRAMIDAL (130 Y 65 KDA )

LA LA ENDOTOXINA PUEDE VARIAR EN ENDOTOXINA PUEDE VARIAR EN TAMAÑO Y EN FORMA, PRESENTANDO TAMAÑO Y EN FORMA, PRESENTANDO DIFERENTES FORMAS EN SUS CRISTALESDIFERENTES FORMAS EN SUS CRISTALES

•ROMBOIDAL (65 KDA), ROMBOIDAL (65 KDA), •AMORFO ENTRE (130 Y 140 KDA)AMORFO ENTRE (130 Y 140 KDA)•HETEROGÉNEO (63 KDA) HETEROGÉNEO (63 KDA) •BIPIRAMIDAL (130 Y 65 KDA ) BIPIRAMIDAL (130 Y 65 KDA )

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CLASIFICACIÓN DE LOS CRISTALES CLASIFICACIÓN DE LOS CRISTALES SEGUN SU ESPECTRO DE ACTIVIDAD SEGUN SU ESPECTRO DE ACTIVIDAD INSECTICIDAINSECTICIDA

•Cry I tóxicos para lepidópterosCry I tóxicos para lepidópteros•Cry II para lepidópteros y dípterosCry II para lepidópteros y dípteros•Cry III para coleópteros Cry III para coleópteros •Cry IV para dípterosCry IV para dípteros

CLASIFICACIÓN DE LOS CRISTALES CLASIFICACIÓN DE LOS CRISTALES SEGUN SU ESPECTRO DE ACTIVIDAD SEGUN SU ESPECTRO DE ACTIVIDAD INSECTICIDAINSECTICIDA

•Cry I tóxicos para lepidópterosCry I tóxicos para lepidópteros•Cry II para lepidópteros y dípterosCry II para lepidópteros y dípteros•Cry III para coleópteros Cry III para coleópteros •Cry IV para dípterosCry IV para dípteros

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ECOLOGÍA DE BtECOLOGÍA DE Bt

HAY VARIAS HIPÓTESIS PARA EXPLICAR SU HAY VARIAS HIPÓTESIS PARA EXPLICAR SU ROL EN EL AMBIENTE, LAS CUALES ESTÁN ROL EN EL AMBIENTE, LAS CUALES ESTÁN BASADAS PRINCIPALMENTE EN:BASADAS PRINCIPALMENTE EN:

1. SE HA PROPUESTO QUE Bt CRECE EN 1. SE HA PROPUESTO QUE Bt CRECE EN SUELOS SOLO BAJO CONDICIONES SUELOS SOLO BAJO CONDICIONES ESPECIALES, Y EL ORIGEN DE LAS ESPORAS ESPECIALES, Y EL ORIGEN DE LAS ESPORAS PODRÍA VENIR DE LA ACTIVIDAD DE INSECTOS PODRÍA VENIR DE LA ACTIVIDAD DE INSECTOS Y/O CAÍDA DE HOJAS DE PLANTAS, ACTUANDO Y/O CAÍDA DE HOJAS DE PLANTAS, ACTUANDO COMO UN SUMIDERO PARA LA ESPORA DE BtCOMO UN SUMIDERO PARA LA ESPORA DE Bt

ECOLOGÍA DE BtECOLOGÍA DE Bt

HAY VARIAS HIPÓTESIS PARA EXPLICAR SU HAY VARIAS HIPÓTESIS PARA EXPLICAR SU ROL EN EL AMBIENTE, LAS CUALES ESTÁN ROL EN EL AMBIENTE, LAS CUALES ESTÁN BASADAS PRINCIPALMENTE EN:BASADAS PRINCIPALMENTE EN:

1. SE HA PROPUESTO QUE Bt CRECE EN 1. SE HA PROPUESTO QUE Bt CRECE EN SUELOS SOLO BAJO CONDICIONES SUELOS SOLO BAJO CONDICIONES ESPECIALES, Y EL ORIGEN DE LAS ESPORAS ESPECIALES, Y EL ORIGEN DE LAS ESPORAS PODRÍA VENIR DE LA ACTIVIDAD DE INSECTOS PODRÍA VENIR DE LA ACTIVIDAD DE INSECTOS Y/O CAÍDA DE HOJAS DE PLANTAS, ACTUANDO Y/O CAÍDA DE HOJAS DE PLANTAS, ACTUANDO COMO UN SUMIDERO PARA LA ESPORA DE BtCOMO UN SUMIDERO PARA LA ESPORA DE Bt

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ECOLOGÍA DE Bt

2. ASOCIACIÓN A ESTRUCTURAS DE LAS PLANTAS, YA QUE HA SIDO AISLADO DE HOJAS DE RESIDUOS Y CONÍFERAS EN NORTE AMÉRICA (SMITH & COUCHE, 1991 CITADO POR VALLEJO ET AL., 1995) Y DE RAÍCES DE HIDRÓFITOS. SEGÚN SMITH & COUCHE (1991)

ECOLOGÍA DE Bt

2. ASOCIACIÓN A ESTRUCTURAS DE LAS PLANTAS, YA QUE HA SIDO AISLADO DE HOJAS DE RESIDUOS Y CONÍFERAS EN NORTE AMÉRICA (SMITH & COUCHE, 1991 CITADO POR VALLEJO ET AL., 1995) Y DE RAÍCES DE HIDRÓFITOS. SEGÚN SMITH & COUCHE (1991)

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3. LA ALTITUD Y LA TEMPERATURA JUEGUAN UN PAPEL IMPORTANTE EN LA DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA DE Bt, YA QUE EN EL ANÁLISIS DE LOS AISLAMIENTOS REALIZADOS EN DIFERENTES REGIONES DE COLOMBIA, SE REPORTÓ QUE UN 74% DE ESTOS AISLADOS, FUERON OBTENIDOS EN ZONAS CON ALTITUDES SUPERIORES A 1450 m.s.n.m Y TEMPERATURAS INFERIORES A 20ºC, NO ENCONTRÁNDOSE EN LAS ZONAS DESÉRTICAS MUESTREADAS

•B. cereus SE HA AISLADO COMÚNMENTE DEL SUELO JUNTO CON Bt. ENCONTRÁNDOSE EN UN NÚMERO MÁS ALTO, LO QUE PODRÍA INDICAR QUE ESTÁ MÁS ADAPTADO A LAS CONDICIONES DEL SUELO.

3. LA ALTITUD Y LA TEMPERATURA JUEGUAN UN PAPEL IMPORTANTE EN LA DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA DE Bt, YA QUE EN EL ANÁLISIS DE LOS AISLAMIENTOS REALIZADOS EN DIFERENTES REGIONES DE COLOMBIA, SE REPORTÓ QUE UN 74% DE ESTOS AISLADOS, FUERON OBTENIDOS EN ZONAS CON ALTITUDES SUPERIORES A 1450 m.s.n.m Y TEMPERATURAS INFERIORES A 20ºC, NO ENCONTRÁNDOSE EN LAS ZONAS DESÉRTICAS MUESTREADAS

•B. cereus SE HA AISLADO COMÚNMENTE DEL SUELO JUNTO CON Bt. ENCONTRÁNDOSE EN UN NÚMERO MÁS ALTO, LO QUE PODRÍA INDICAR QUE ESTÁ MÁS ADAPTADO A LAS CONDICIONES DEL SUELO.

ECOLOGÍA DE BtECOLOGÍA DE BtECOLOGÍA DE BtECOLOGÍA DE Bt

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ECOLOGÍA DE BtECOLOGÍA DE Bt

4. LA MAYOR DIFERENCIA ENTRE Bt Y BC, ES LA 4. LA MAYOR DIFERENCIA ENTRE Bt Y BC, ES LA PRODUCCIÓN DE CRISTALES δ- ENDOTOXINAS PRODUCCIÓN DE CRISTALES δ- ENDOTOXINAS POR Bt.POR Bt.

•LAS INCLUSIONES PARAESPORALES CONTIENE LAS INCLUSIONES PARAESPORALES CONTIENE VARIAS δ- ENDOTOXINAS, Y ES ESTA VARIAS δ- ENDOTOXINAS, Y ES ESTA DIVERSIDAD LO QUE DETERMINA LA DIVERSIDAD LO QUE DETERMINA LA SELECTIVIDAD DE LA ACTIVIDAD INSECTICIDA DE SELECTIVIDAD DE LA ACTIVIDAD INSECTICIDA DE CADA CEPA CADA CEPA

•ESTAS TOXINAS SON SELECTIVAS, PERO NO ESTAS TOXINAS SON SELECTIVAS, PERO NO ESPECÍFICAS, YA QUE PUEDEN ACTUAR SOBRE ESPECÍFICAS, YA QUE PUEDEN ACTUAR SOBRE DIFERENTES GRUPOS DE INSECTOS EN MENOR DIFERENTES GRUPOS DE INSECTOS EN MENOR PROPORCIÓNPROPORCIÓN

ECOLOGÍA DE BtECOLOGÍA DE Bt

4. LA MAYOR DIFERENCIA ENTRE Bt Y BC, ES LA 4. LA MAYOR DIFERENCIA ENTRE Bt Y BC, ES LA PRODUCCIÓN DE CRISTALES δ- ENDOTOXINAS PRODUCCIÓN DE CRISTALES δ- ENDOTOXINAS POR Bt.POR Bt.

•LAS INCLUSIONES PARAESPORALES CONTIENE LAS INCLUSIONES PARAESPORALES CONTIENE VARIAS δ- ENDOTOXINAS, Y ES ESTA VARIAS δ- ENDOTOXINAS, Y ES ESTA DIVERSIDAD LO QUE DETERMINA LA DIVERSIDAD LO QUE DETERMINA LA SELECTIVIDAD DE LA ACTIVIDAD INSECTICIDA DE SELECTIVIDAD DE LA ACTIVIDAD INSECTICIDA DE CADA CEPA CADA CEPA

•ESTAS TOXINAS SON SELECTIVAS, PERO NO ESTAS TOXINAS SON SELECTIVAS, PERO NO ESPECÍFICAS, YA QUE PUEDEN ACTUAR SOBRE ESPECÍFICAS, YA QUE PUEDEN ACTUAR SOBRE DIFERENTES GRUPOS DE INSECTOS EN MENOR DIFERENTES GRUPOS DE INSECTOS EN MENOR PROPORCIÓNPROPORCIÓN

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MECANISMO DE ACCION DE LA MECANISMO DE ACCION DE LA -ENDOTOXINA-ENDOTOXINAMECANISMO DE ACCION DE LA MECANISMO DE ACCION DE LA -ENDOTOXINA-ENDOTOXINA

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Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

•LA INGESTION DEL CRISTAL POR UN INSECTO SE DA LA INGESTION DEL CRISTAL POR UN INSECTO SE DA EN FASE LARVARIA EN FASE LARVARIA •ESTE LLEGA A SU INTESTINO MEDIO, SE DISUELVE ESTE LLEGA A SU INTESTINO MEDIO, SE DISUELVE POR LA ACCIÓN DE LOS JUGOS INTESTINALES A pH POR LA ACCIÓN DE LOS JUGOS INTESTINALES A pH ALCALINOALCALINO•LA LA -ENDOTOXINA SUFRE UNA PROTEOLISIS -ENDOTOXINA SUFRE UNA PROTEOLISIS ENZIMÁTICA Y DA ORIGEN A LA TOXINA ACTIVAENZIMÁTICA Y DA ORIGEN A LA TOXINA ACTIVA

•LA INGESTION DEL CRISTAL POR UN INSECTO SE DA LA INGESTION DEL CRISTAL POR UN INSECTO SE DA EN FASE LARVARIA EN FASE LARVARIA •ESTE LLEGA A SU INTESTINO MEDIO, SE DISUELVE ESTE LLEGA A SU INTESTINO MEDIO, SE DISUELVE POR LA ACCIÓN DE LOS JUGOS INTESTINALES A pH POR LA ACCIÓN DE LOS JUGOS INTESTINALES A pH ALCALINOALCALINO•LA LA -ENDOTOXINA SUFRE UNA PROTEOLISIS -ENDOTOXINA SUFRE UNA PROTEOLISIS ENZIMÁTICA Y DA ORIGEN A LA TOXINA ACTIVAENZIMÁTICA Y DA ORIGEN A LA TOXINA ACTIVA

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•ESTA SE UNE A UN RECEPTOR ESPECÍFICO DE LAS ESTA SE UNE A UN RECEPTOR ESPECÍFICO DE LAS MEMBRANAS EPITELIALES DE LAS CÉLULAS DEL INTESTINOMEMBRANAS EPITELIALES DE LAS CÉLULAS DEL INTESTINO•GENERA POROS QUE DESEQUILIBRAN SU BALANCE GENERA POROS QUE DESEQUILIBRAN SU BALANCE OSMÓTICO Y PROVOCAN LA LISIS CELULAR DE ESTA PARTE OSMÓTICO Y PROVOCAN LA LISIS CELULAR DE ESTA PARTE DEL APARATO DIGESTIVODEL APARATO DIGESTIVO

•ESTA SE UNE A UN RECEPTOR ESPECÍFICO DE LAS ESTA SE UNE A UN RECEPTOR ESPECÍFICO DE LAS MEMBRANAS EPITELIALES DE LAS CÉLULAS DEL INTESTINOMEMBRANAS EPITELIALES DE LAS CÉLULAS DEL INTESTINO•GENERA POROS QUE DESEQUILIBRAN SU BALANCE GENERA POROS QUE DESEQUILIBRAN SU BALANCE OSMÓTICO Y PROVOCAN LA LISIS CELULAR DE ESTA PARTE OSMÓTICO Y PROVOCAN LA LISIS CELULAR DE ESTA PARTE DEL APARATO DIGESTIVODEL APARATO DIGESTIVO

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•POSTERIORMENTE CAUSA DIARREA Y POSTERIORMENTE CAUSA DIARREA Y VÓMITOS EN EL INSECTO, LO QUE PUEDE VÓMITOS EN EL INSECTO, LO QUE PUEDE PROVOCAR EVENTUALMENTE SU MUERTE PROVOCAR EVENTUALMENTE SU MUERTE POR UNA DESHIDRATACIÓN SEVERAPOR UNA DESHIDRATACIÓN SEVERA

•POSTERIORMENTE CAUSA DIARREA Y POSTERIORMENTE CAUSA DIARREA Y VÓMITOS EN EL INSECTO, LO QUE PUEDE VÓMITOS EN EL INSECTO, LO QUE PUEDE PROVOCAR EVENTUALMENTE SU MUERTE PROVOCAR EVENTUALMENTE SU MUERTE POR UNA DESHIDRATACIÓN SEVERAPOR UNA DESHIDRATACIÓN SEVERA

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FACTORES DE VIRULENCIAFACTORES DE VIRULENCIA

  •ES UN PATÓGENO OPORTUNISTA DE INSECTOSES UN PATÓGENO OPORTUNISTA DE INSECTOS•SUS CRISTALES Y ESPORAS SON SUS CRISTALES Y ESPORAS SON

EXTREMAMENTE SUSCEPTIBLES A INACTIVACIÓN EXTREMAMENTE SUSCEPTIBLES A INACTIVACIÓN

POR RADIACIÓN ULTRAVIOLETAPOR RADIACIÓN ULTRAVIOLETA•LOS CRISTALES SE LIBERAN CONJUNTAMENTE LOS CRISTALES SE LIBERAN CONJUNTAMENTE

CON LA ESPORA CON LA ESPORA •SUS ESPORAS, QUE REQUIEREN CONDICIONES SUS ESPORAS, QUE REQUIEREN CONDICIONES

MUY ESPECIFICAS PARA GERMINAR EN SUELOS O MUY ESPECIFICAS PARA GERMINAR EN SUELOS O

AGUAS, SON PARTE DE LA DIETA DE NEMATODOS AGUAS, SON PARTE DE LA DIETA DE NEMATODOS

Y OTROS ORGANISMOSY OTROS ORGANISMOS

FACTORES DE VIRULENCIAFACTORES DE VIRULENCIA

  •ES UN PATÓGENO OPORTUNISTA DE INSECTOSES UN PATÓGENO OPORTUNISTA DE INSECTOS•SUS CRISTALES Y ESPORAS SON SUS CRISTALES Y ESPORAS SON

EXTREMAMENTE SUSCEPTIBLES A INACTIVACIÓN EXTREMAMENTE SUSCEPTIBLES A INACTIVACIÓN

POR RADIACIÓN ULTRAVIOLETAPOR RADIACIÓN ULTRAVIOLETA•LOS CRISTALES SE LIBERAN CONJUNTAMENTE LOS CRISTALES SE LIBERAN CONJUNTAMENTE

CON LA ESPORA CON LA ESPORA •SUS ESPORAS, QUE REQUIEREN CONDICIONES SUS ESPORAS, QUE REQUIEREN CONDICIONES

MUY ESPECIFICAS PARA GERMINAR EN SUELOS O MUY ESPECIFICAS PARA GERMINAR EN SUELOS O

AGUAS, SON PARTE DE LA DIETA DE NEMATODOS AGUAS, SON PARTE DE LA DIETA DE NEMATODOS

Y OTROS ORGANISMOSY OTROS ORGANISMOS

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FACTORES DE VIRULENCIAFACTORES DE VIRULENCIA  EL CICLO DE VIDA DE Bt PUEDE SER DIVIDIDO EN EL CICLO DE VIDA DE Bt PUEDE SER DIVIDIDO EN CUATRO FASES: CUATRO FASES:

1.1. FASE PREVIA LOG FASE PREVIA LOG 2.2. ETAPA DE CRECIMIENTO ETAPA DE CRECIMIENTO EXPONENCIALEXPONENCIAL1.1. ESTADO DE TRANSICIÓN ESTADO DE TRANSICIÓN 2.2. ETAPA DE EXPRESIÓN ETAPA DE EXPRESIÓN DE GENES QUE DE GENES QUE CODIFICAN LAS CODIFICAN LAS δ- ENDOTOXINASδ- ENDOTOXINAS

FACTORES DE VIRULENCIAFACTORES DE VIRULENCIA  EL CICLO DE VIDA DE Bt PUEDE SER DIVIDIDO EN EL CICLO DE VIDA DE Bt PUEDE SER DIVIDIDO EN CUATRO FASES: CUATRO FASES:

1.1. FASE PREVIA LOG FASE PREVIA LOG 2.2. ETAPA DE CRECIMIENTO ETAPA DE CRECIMIENTO EXPONENCIALEXPONENCIAL1.1. ESTADO DE TRANSICIÓN ESTADO DE TRANSICIÓN 2.2. ETAPA DE EXPRESIÓN ETAPA DE EXPRESIÓN DE GENES QUE DE GENES QUE CODIFICAN LAS CODIFICAN LAS δ- ENDOTOXINASδ- ENDOTOXINAS

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DURANTE EL CRECIMIENTO EXPONENCIAL, Bt DURANTE EL CRECIMIENTO EXPONENCIAL, Bt PRODUCE EXOTOXINAS SOLUBLES DE VARIOS PRODUCE EXOTOXINAS SOLUBLES DE VARIOS TIPOS, ENTRE ELLAS:TIPOS, ENTRE ELLAS:

- EXOTOXINAS- EXOTOXINAS (HEMOLISINA I Y II, THURINGIOLISINA), (HEMOLISINA I Y II, THURINGIOLISINA), PROTEÍNAS CITOLÍTICAS DE 29-47 KDA.PROTEÍNAS CITOLÍTICAS DE 29-47 KDA.

- EXOTOXINA- EXOTOXINA ( THURINGIENSINA), ANÁLOGO ( THURINGIENSINA), ANÁLOGO NUCLEOTÍDICO DEL ATP SINTETIZADA POR PROTEÍNAS NUCLEOTÍDICO DEL ATP SINTETIZADA POR PROTEÍNAS CODIFICADAS EN PLÁSMIDOS CONJUGATIVOS CODIFICADAS EN PLÁSMIDOS CONJUGATIVOS

COMPITE POR LAS RNA- POLIMERASAS Y ASÍ BLOQUEA LA COMPITE POR LAS RNA- POLIMERASAS Y ASÍ BLOQUEA LA

SÍNTESIS DE rRNA EN MAMÍFEROS AL INHIBIR LA SÍNTESIS DE rRNA EN MAMÍFEROS AL INHIBIR LA

TRANSCRIPCIÓN Y EJERCER ACTIVIDAD MUTAGÉNICA TRANSCRIPCIÓN Y EJERCER ACTIVIDAD MUTAGÉNICA

( CARBERG ( CARBERG ET ALET AL., 1995) ., 1995)

DURANTE EL CRECIMIENTO EXPONENCIAL, Bt DURANTE EL CRECIMIENTO EXPONENCIAL, Bt PRODUCE EXOTOXINAS SOLUBLES DE VARIOS PRODUCE EXOTOXINAS SOLUBLES DE VARIOS TIPOS, ENTRE ELLAS:TIPOS, ENTRE ELLAS:

- EXOTOXINAS- EXOTOXINAS (HEMOLISINA I Y II, THURINGIOLISINA), (HEMOLISINA I Y II, THURINGIOLISINA), PROTEÍNAS CITOLÍTICAS DE 29-47 KDA.PROTEÍNAS CITOLÍTICAS DE 29-47 KDA.

- EXOTOXINA- EXOTOXINA ( THURINGIENSINA), ANÁLOGO ( THURINGIENSINA), ANÁLOGO NUCLEOTÍDICO DEL ATP SINTETIZADA POR PROTEÍNAS NUCLEOTÍDICO DEL ATP SINTETIZADA POR PROTEÍNAS CODIFICADAS EN PLÁSMIDOS CONJUGATIVOS CODIFICADAS EN PLÁSMIDOS CONJUGATIVOS

COMPITE POR LAS RNA- POLIMERASAS Y ASÍ BLOQUEA LA COMPITE POR LAS RNA- POLIMERASAS Y ASÍ BLOQUEA LA

SÍNTESIS DE rRNA EN MAMÍFEROS AL INHIBIR LA SÍNTESIS DE rRNA EN MAMÍFEROS AL INHIBIR LA

TRANSCRIPCIÓN Y EJERCER ACTIVIDAD MUTAGÉNICA TRANSCRIPCIÓN Y EJERCER ACTIVIDAD MUTAGÉNICA

( CARBERG ( CARBERG ET ALET AL., 1995) ., 1995)

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Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

FOSFOLIPASAS CFOSFOLIPASAS C, PROTEÍNA CITOTÓXICA DE DOS , PROTEÍNA CITOTÓXICA DE DOS TIPOS, UNA ESPECÍFICA PARA HIDROLIZAR TIPOS, UNA ESPECÍFICA PARA HIDROLIZAR FOSFATIDIL-COLINA Y OTRA PARA FOSFATIDIL-FOSFATIDIL-COLINA Y OTRA PARA FOSFATIDIL-INOSITOLINOSITOL

ENTEROTOXINAENTEROTOXINA, PROTEÍNA CITOTÓXICA SEMEJANTE A , PROTEÍNA CITOTÓXICA SEMEJANTE A LA ENCONTRADA EN LA ENCONTRADA EN B. cereusB. cereus (40 KDA). (40 KDA).

THURICINATHURICINA (PÉPTIDO ANTIBACTERIANO), (PÉPTIDO ANTIBACTERIANO), BACTERIOCINA SEMEJANTE A LA CEREINA (BACTERIOCINA SEMEJANTE A LA CEREINA (B. cereusB. cereus) Y ) Y A LA MEGACINA (A LA MEGACINA (B. megateriumB. megaterium), ESTA CODIFICADA ), ESTA CODIFICADA EN UN PLÁSMIDO DE 150 MDA ( DAMGAARD, 1996).EN UN PLÁSMIDO DE 150 MDA ( DAMGAARD, 1996).

FOSFOLIPASAS CFOSFOLIPASAS C, PROTEÍNA CITOTÓXICA DE DOS , PROTEÍNA CITOTÓXICA DE DOS TIPOS, UNA ESPECÍFICA PARA HIDROLIZAR TIPOS, UNA ESPECÍFICA PARA HIDROLIZAR FOSFATIDIL-COLINA Y OTRA PARA FOSFATIDIL-FOSFATIDIL-COLINA Y OTRA PARA FOSFATIDIL-INOSITOLINOSITOL

ENTEROTOXINAENTEROTOXINA, PROTEÍNA CITOTÓXICA SEMEJANTE A , PROTEÍNA CITOTÓXICA SEMEJANTE A LA ENCONTRADA EN LA ENCONTRADA EN B. cereusB. cereus (40 KDA). (40 KDA).

THURICINATHURICINA (PÉPTIDO ANTIBACTERIANO), (PÉPTIDO ANTIBACTERIANO), BACTERIOCINA SEMEJANTE A LA CEREINA (BACTERIOCINA SEMEJANTE A LA CEREINA (B. cereusB. cereus) Y ) Y A LA MEGACINA (A LA MEGACINA (B. megateriumB. megaterium), ESTA CODIFICADA ), ESTA CODIFICADA EN UN PLÁSMIDO DE 150 MDA ( DAMGAARD, 1996).EN UN PLÁSMIDO DE 150 MDA ( DAMGAARD, 1996).

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FACTORES DE VIRULENCIAFACTORES DE VIRULENCIA

•LAS δ-ENDOTOXINAS SE SINTETIZAN COMO LAS δ-ENDOTOXINAS SE SINTETIZAN COMO PROTOXINAS Y AL SER ACTIVADAS SE LIBERAN LOS PROTOXINAS Y AL SER ACTIVADAS SE LIBERAN LOS FRAGMENTOS TÓXICOS CARACTERIZADOS POR UN FRAGMENTOS TÓXICOS CARACTERIZADOS POR UN PATRÓN FUNCIONAL DE TRES DOMINIOSPATRÓN FUNCIONAL DE TRES DOMINIOS

•ESTRUCTURALMENTE MUESTRA UN PATRÓN ESTRUCTURALMENTE MUESTRA UN PATRÓN FAVORECIDO POR LA ADICIÓN DE RESIDUOS FAVORECIDO POR LA ADICIÓN DE RESIDUOS GLÚCIDOS E INTERACCIONES ENTRE LOS GRUPOS GLÚCIDOS E INTERACCIONES ENTRE LOS GRUPOS DISULFURODISULFURO

•QUE EN LUGAR DE ESTRUCTURAS CUATERNARIA QUE EN LUGAR DE ESTRUCTURAS CUATERNARIA ALGUNA, LAS PROTEÍNAS SE AGREGAN EN UN ALGUNA, LAS PROTEÍNAS SE AGREGAN EN UN PATRÓN REGULAR ( CELDA CRISTALINA)PATRÓN REGULAR ( CELDA CRISTALINA)

FACTORES DE VIRULENCIAFACTORES DE VIRULENCIA

•LAS δ-ENDOTOXINAS SE SINTETIZAN COMO LAS δ-ENDOTOXINAS SE SINTETIZAN COMO PROTOXINAS Y AL SER ACTIVADAS SE LIBERAN LOS PROTOXINAS Y AL SER ACTIVADAS SE LIBERAN LOS FRAGMENTOS TÓXICOS CARACTERIZADOS POR UN FRAGMENTOS TÓXICOS CARACTERIZADOS POR UN PATRÓN FUNCIONAL DE TRES DOMINIOSPATRÓN FUNCIONAL DE TRES DOMINIOS

•ESTRUCTURALMENTE MUESTRA UN PATRÓN ESTRUCTURALMENTE MUESTRA UN PATRÓN FAVORECIDO POR LA ADICIÓN DE RESIDUOS FAVORECIDO POR LA ADICIÓN DE RESIDUOS GLÚCIDOS E INTERACCIONES ENTRE LOS GRUPOS GLÚCIDOS E INTERACCIONES ENTRE LOS GRUPOS DISULFURODISULFURO

•QUE EN LUGAR DE ESTRUCTURAS CUATERNARIA QUE EN LUGAR DE ESTRUCTURAS CUATERNARIA ALGUNA, LAS PROTEÍNAS SE AGREGAN EN UN ALGUNA, LAS PROTEÍNAS SE AGREGAN EN UN PATRÓN REGULAR ( CELDA CRISTALINA)PATRÓN REGULAR ( CELDA CRISTALINA)

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Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

REPRESENTACIÓN DE LOS TRES DOMINIOS DE LA PROTEÍNA TOXICA REPRESENTACIÓN DE LOS TRES DOMINIOS DE LA PROTEÍNA TOXICA Cry Cry 33A A A. A. PRODUCIDA POR Bt PRODUCIDA POR Bt Subsp. Subsp. Kurstaki Kurstaki B. PRODUCIDA POR BtB. PRODUCIDA POR Bt Subsp.Subsp. Morrisoni Morrisoni

REPRESENTACIÓN DE LOS TRES DOMINIOS DE LA PROTEÍNA TOXICA REPRESENTACIÓN DE LOS TRES DOMINIOS DE LA PROTEÍNA TOXICA Cry Cry 33A A A. A. PRODUCIDA POR Bt PRODUCIDA POR Bt Subsp. Subsp. Kurstaki Kurstaki B. PRODUCIDA POR BtB. PRODUCIDA POR Bt Subsp.Subsp. Morrisoni Morrisoni

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Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

TIPO DE TIPO DE GENESGENES

ACTIVIDAACTIVIDADD

OCURRENCIAOCURRENCIA PESO MOLECULAR PESO MOLECULAR kDa kDa

Cry 1Cry 1Cry 2Cry 2Cry 3Cry 3Cry 4Cry 4Cry 5 Cry 5 Cry 6Cry 6Cry 7Cry 7Cry 8 Cry 8 Cry 9Cry 9

Cry 10 Cry 10 Cry 11Cry 11Cry 12Cry 12Cry 13Cry 13Cry 14Cry 14Cry 15Cry 15Cry 16 Cry 16 Cry 17Cry 17Cry 18Cry 18Cry 19Cry 19

Cyt Cyt

LLL/DL/DCCDDNNNNCC

C/LC/LLLDDDDNNNNNN

NDNDDDDD

NDNDDD

D/CytolD/Cytol

kur, sot, aiz, ent, thu, ale, dar. kur, sot, aiz, ent, thu, ale, dar. tol, gal, kentol, gal, ken

kurkurmor (ten, san), tol mor (ten, san), tol

aiz, mor, isr, med, tou, daraiz, mor, isr, med, tou, dar5 cepas patentadas por 5 cepas patentadas por

MicogenMicogen5 cepas patentadas por 5 cepas patentadas por

MicogenMicogenmormorNDND

kur, aiz, morkur, aiz, mormor, isr, med, toumor, isr, med, toumor, isr, med, toumor, isr, med, tou

NDNDNDNDNDNDNDND

isr, morisr, morisr, morisr, mor

ND ND isr, morisr, morisr, morisr, mor

130-140130-14070707373

70-13470-1348080

128128NDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDND

88.588.5

CLASIFICACIÓN DE LOS GENES Cry DE ACUERDO A SU SECUENCIA CLASIFICACIÓN DE LOS GENES Cry DE ACUERDO A SU SECUENCIA NUCLEOTÍDICA NUCLEOTÍDICA

CLASIFICACIÓN DE LOS GENES Cry DE ACUERDO A SU SECUENCIA CLASIFICACIÓN DE LOS GENES Cry DE ACUERDO A SU SECUENCIA NUCLEOTÍDICA NUCLEOTÍDICA

Especificidad del rango de huésped: L,Lepidoptera; C, Coleoptera; D,Diptera; N, Nematoda; Cytol, citolítico. Especificidad del rango de huésped: L,Lepidoptera; C, Coleoptera; D,Diptera; N, Nematoda; Cytol, citolítico. kur, kur, kurstakikurstaki; thu, thuringiensis; sot,; thu, thuringiensis; sot,sotto;sotto; aiz, aiz, aizawai;aizawai; ent, entomocidus; ent, entomocidus; ale, alest; ale, alest; dar, dar, darmstadiensisdarmstadiensis; ;

tol,tol,tolwarthitolwarthi; ken, ; ken, kenya, kenya, gal, gal, galieriaegalieriae; mor, ; mor, morrisonimorrisoni; ten, ; ten, tenebrionistenebrionis; san, ; san, sandiegosandiego;isr, ;isr, israelensisisraelensis; med, ; med, MedellínMedellín; ND, no disponible. Tomada de Galán et al (1995a) y Bravo et al (1998).; ND, no disponible. Tomada de Galán et al (1995a) y Bravo et al (1998).

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Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

GeneGene Crystal Crystal shapeshape

Protein Protein size(kDa)size(kDa) Insect activityInsect activity

cry I [several subgroups:cry I [several subgroups:A(a), A(b), A(c), B, C, D, A(a), A(b), A(c), B, C, D, E, F, G]E, F, G]

bipyramidalbipyramidal 130-138130-138 lepidoptera lepidoptera larvaelarvae

cry II [subgroups A, B, C]cry II [subgroups A, B, C] cuboidalcuboidal 69-7169-71 lepidoptera and lepidoptera and dipteradiptera

cry III [subgroups A, B, C]cry III [subgroups A, B, C] flat/irregularflat/irregular 73-7473-74 coleopteracoleoptera

cry IV [subgroups A, B, C, cry IV [subgroups A, B, C, D]D] bipyramidalbipyramidal 73-13473-134 dipteradiptera

cry V-IXcry V-IX variousvarious 35-12935-129 variousvarious

Page 25: BT MATERIA - Fi

Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

ESPECIFIDADESPECIFIDAD

LA ACTIVIDAD TÓXICA SOLO ES POSIBLE SI LOS LA ACTIVIDAD TÓXICA SOLO ES POSIBLE SI LOS CRISTALES INGERIDOS SON SOLUBILIZADOS Y SUS CRISTALES INGERIDOS SON SOLUBILIZADOS Y SUS PROTEÍNAS DIGERIDAS SON RECONOCIDAS POR EL PROTEÍNAS DIGERIDAS SON RECONOCIDAS POR EL INSECTO-BLANCO (ELLAR, 1996)INSECTO-BLANCO (ELLAR, 1996)

INICIALMENTE LOS CRISTALES SE DISUELVEN BAJO INICIALMENTE LOS CRISTALES SE DISUELVEN BAJO CONDICIONES FISICOQUÍMICAS ESPECÍFICAS DEL CONDICIONES FISICOQUÍMICAS ESPECÍFICAS DEL INSECTO DE LAS LARVASINSECTO DE LAS LARVAS

LUEGO SUCEDE LA ACTIVACIÓN PROTELÍTICA DE LAS LUEGO SUCEDE LA ACTIVACIÓN PROTELÍTICA DE LAS PROTOXINAS LIBERANDO EL FRAGMENTO ACTIVO PROTOXINAS LIBERANDO EL FRAGMENTO ACTIVO

ESPECIFIDADESPECIFIDAD

LA ACTIVIDAD TÓXICA SOLO ES POSIBLE SI LOS LA ACTIVIDAD TÓXICA SOLO ES POSIBLE SI LOS CRISTALES INGERIDOS SON SOLUBILIZADOS Y SUS CRISTALES INGERIDOS SON SOLUBILIZADOS Y SUS PROTEÍNAS DIGERIDAS SON RECONOCIDAS POR EL PROTEÍNAS DIGERIDAS SON RECONOCIDAS POR EL INSECTO-BLANCO (ELLAR, 1996)INSECTO-BLANCO (ELLAR, 1996)

INICIALMENTE LOS CRISTALES SE DISUELVEN BAJO INICIALMENTE LOS CRISTALES SE DISUELVEN BAJO CONDICIONES FISICOQUÍMICAS ESPECÍFICAS DEL CONDICIONES FISICOQUÍMICAS ESPECÍFICAS DEL INSECTO DE LAS LARVASINSECTO DE LAS LARVAS

LUEGO SUCEDE LA ACTIVACIÓN PROTELÍTICA DE LAS LUEGO SUCEDE LA ACTIVACIÓN PROTELÍTICA DE LAS PROTOXINAS LIBERANDO EL FRAGMENTO ACTIVO PROTOXINAS LIBERANDO EL FRAGMENTO ACTIVO

Page 26: BT MATERIA - Fi

Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

ESPECIFIDADESPECIFIDAD

POSTERIORMENTE ESTE INTERACTÚA CON POSTERIORMENTE ESTE INTERACTÚA CON RECEPTORES A NIVEL DE LAS MEMBRANAS RECEPTORES A NIVEL DE LAS MEMBRANAS VELLOSAS DEL INTESTINO MEDIOVELLOSAS DEL INTESTINO MEDIO

DESPUÉS OCURREN CAMBIOS QUE DAN DESPUÉS OCURREN CAMBIOS QUE DAN LUGAR A LA FORMACIÓN DE CANALES IÓNICOS LUGAR A LA FORMACIÓN DE CANALES IÓNICOS POR MODIFICACIÓN DE LA ESTRUCTURA DE POR MODIFICACIÓN DE LA ESTRUCTURA DE LAS MEMBRANAS CELULARLAS MEMBRANAS CELULAR

ESPECIFIDADESPECIFIDAD

POSTERIORMENTE ESTE INTERACTÚA CON POSTERIORMENTE ESTE INTERACTÚA CON RECEPTORES A NIVEL DE LAS MEMBRANAS RECEPTORES A NIVEL DE LAS MEMBRANAS VELLOSAS DEL INTESTINO MEDIOVELLOSAS DEL INTESTINO MEDIO

DESPUÉS OCURREN CAMBIOS QUE DAN DESPUÉS OCURREN CAMBIOS QUE DAN LUGAR A LA FORMACIÓN DE CANALES IÓNICOS LUGAR A LA FORMACIÓN DE CANALES IÓNICOS POR MODIFICACIÓN DE LA ESTRUCTURA DE POR MODIFICACIÓN DE LA ESTRUCTURA DE LAS MEMBRANAS CELULARLAS MEMBRANAS CELULAR

Page 27: BT MATERIA - Fi

Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

EL MECANISMO DE ACCIÓN DE LAS EL MECANISMO DE ACCIÓN DE LAS PROTEÍNAS CRISTALINAS EXPLICA SU PROTEÍNAS CRISTALINAS EXPLICA SU SELECTIVIDAD DADA QUE INVOLUCRA A LA SELECTIVIDAD DADA QUE INVOLUCRA A LA VEZ LA ESTRUCTURA TRIDIMENSIONAL DEL VEZ LA ESTRUCTURA TRIDIMENSIONAL DEL FRAGMENTO TÓXICO Y FACTORES FRAGMENTO TÓXICO Y FACTORES INHERENTES AL INSECTO ( CONDICIONES INHERENTES AL INSECTO ( CONDICIONES QUÍMICAS ESPECIALES Y UN RECEPTOR QUÍMICAS ESPECIALES Y UN RECEPTOR ESPECÍFICO) ESPECÍFICO)

ADEMÁS SE HAN ENCONTRADO CASOS ADEMÁS SE HAN ENCONTRADO CASOS SINGULARES DE SINERGISMO ENTRE SINGULARES DE SINERGISMO ENTRE TOXINAS COMO EL QUE SE PRESENTA EN BtTOXINAS COMO EL QUE SE PRESENTA EN Bt subspsubsp. israeliensis. israeliensis

EL MECANISMO DE ACCIÓN DE LAS EL MECANISMO DE ACCIÓN DE LAS PROTEÍNAS CRISTALINAS EXPLICA SU PROTEÍNAS CRISTALINAS EXPLICA SU SELECTIVIDAD DADA QUE INVOLUCRA A LA SELECTIVIDAD DADA QUE INVOLUCRA A LA VEZ LA ESTRUCTURA TRIDIMENSIONAL DEL VEZ LA ESTRUCTURA TRIDIMENSIONAL DEL FRAGMENTO TÓXICO Y FACTORES FRAGMENTO TÓXICO Y FACTORES INHERENTES AL INSECTO ( CONDICIONES INHERENTES AL INSECTO ( CONDICIONES QUÍMICAS ESPECIALES Y UN RECEPTOR QUÍMICAS ESPECIALES Y UN RECEPTOR ESPECÍFICO) ESPECÍFICO)

ADEMÁS SE HAN ENCONTRADO CASOS ADEMÁS SE HAN ENCONTRADO CASOS SINGULARES DE SINERGISMO ENTRE SINGULARES DE SINERGISMO ENTRE TOXINAS COMO EL QUE SE PRESENTA EN BtTOXINAS COMO EL QUE SE PRESENTA EN Bt subspsubsp. israeliensis. israeliensis

ESPECIFIDADESPECIFIDADESPECIFIDADESPECIFIDAD

Page 28: BT MATERIA - Fi

Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

USO COMERCIAL DE LAS δ- ENDOTOXINA USO COMERCIAL DE LAS δ- ENDOTOXINA COMO INSECTICIDACOMO INSECTICIDADDUSO COMERCIAL DE LAS δ- ENDOTOXINA USO COMERCIAL DE LAS δ- ENDOTOXINA COMO INSECTICIDACOMO INSECTICIDADD

LAS VENTAJAS DE SU USO LAS VENTAJAS DE SU USO

A)A)AALTA ESPECIFICIDADLTA ESPECIFICIDADB)B) AASPECTO INOFENSIVO PARA EL MEDIO AMBIENTE, LA SPECTO INOFENSIVO PARA EL MEDIO AMBIENTE, LA

FAUNA BENÉFICA Y DEMÁS ORGANISMOS FAUNA BENÉFICA Y DEMÁS ORGANISMOS VIVOS, INCLUYENDO AL HOMBRE VIVOS, INCLUYENDO AL HOMBRE C)ADAPTABLE A MÚLTIPLE TIPOS DE C)ADAPTABLE A MÚLTIPLE TIPOS DE FORMULACIONES.FORMULACIONES.

LAS VENTAJAS DE SU USO LAS VENTAJAS DE SU USO

A)A)AALTA ESPECIFICIDADLTA ESPECIFICIDADB)B) AASPECTO INOFENSIVO PARA EL MEDIO AMBIENTE, LA SPECTO INOFENSIVO PARA EL MEDIO AMBIENTE, LA

FAUNA BENÉFICA Y DEMÁS ORGANISMOS FAUNA BENÉFICA Y DEMÁS ORGANISMOS VIVOS, INCLUYENDO AL HOMBRE VIVOS, INCLUYENDO AL HOMBRE C)ADAPTABLE A MÚLTIPLE TIPOS DE C)ADAPTABLE A MÚLTIPLE TIPOS DE FORMULACIONES.FORMULACIONES.

Page 29: BT MATERIA - Fi

Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

D) D) LLA ALTA PROBABILIDAD DE A ALTA PROBABILIDAD DE DISMINUCIÓN DE LOS COSTOS DE DISMINUCIÓN DE LOS COSTOS DE PRODUCCIÓN DEBIDO A LOS AVANCES PRODUCCIÓN DEBIDO A LOS AVANCES TECNOLÓGICOS, TECNOLÓGICOS, MICROBIOLÓGICOS MICROBIOLÓGICOS Y GENÉTICOS, LO QUE LO HACE Y GENÉTICOS, LO QUE LO HACE COMERCIALMENTE COMPETITIVO COMERCIALMENTE COMPETITIVO FRENTE A LOS INSECTICIDAS FRENTE A LOS INSECTICIDAS QUIMICOSQUIMICOS

D) D) LLA ALTA PROBABILIDAD DE A ALTA PROBABILIDAD DE DISMINUCIÓN DE LOS COSTOS DE DISMINUCIÓN DE LOS COSTOS DE PRODUCCIÓN DEBIDO A LOS AVANCES PRODUCCIÓN DEBIDO A LOS AVANCES TECNOLÓGICOS, TECNOLÓGICOS, MICROBIOLÓGICOS MICROBIOLÓGICOS Y GENÉTICOS, LO QUE LO HACE Y GENÉTICOS, LO QUE LO HACE COMERCIALMENTE COMPETITIVO COMERCIALMENTE COMPETITIVO FRENTE A LOS INSECTICIDAS FRENTE A LOS INSECTICIDAS QUIMICOSQUIMICOS

Page 30: BT MATERIA - Fi

Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

CEPA DE CEPA DE Bt.Bt. HUÉSPEDHUÉSPED PRODUCTOPRODUCTO COMPAÑIAS COMPAÑIAS

PRODUCTORASPRODUCTORAS

kurstakikurstaki LepidopteraLepidoptera

BactospeineBactospeineBactusideBactusideBernan Bt.Bernan Bt.BioBiobitbitForayForayDipelDipelDelfinDelfinJavelinJavelinThuricideThuricide

Duphar Duphar Compagina di Ricerca Compagina di Ricerca ChimChimBactecBactecNovoNovoNovoNovoAbbottAbbottSandozSandozSandozSandoz

aizawaiaizawai LepidopteraLepidoptera CertanCertan Sandoz Sandoz

israelensisisraelensis DipteraDiptera

BactimosBactimosSkeetaiSkeetaiTeknarTeknarVecobacVecobac

DoparDoparNovoNovoSandozSandozAbbottAbbott

sandiegosandiego ColeopteraColeoptera M-OneM-OneM-One-PlusM-One-Plus

MycogenMycogenMycogenMycogen

tenebriositenebriosiss

ColeopteraColeoptera Trident Trident Novodor Novodor

SandozSandozNovoNovo

conjugadoconjugadoLepidopteraLepidopteralColeopteralColeopteraLepidoptera Lepidoptera

FoieFoieAgrreeAgrree

EcogenEcogenCiga-Giegy Ciga-Giegy

PRODUCTOS BASADOS EN Bt DISPONIBLE COMERCIALMENTE A NIVEL MUNDIALPRODUCTOS BASADOS EN Bt DISPONIBLE COMERCIALMENTE A NIVEL MUNDIALPRODUCTOS BASADOS EN Bt DISPONIBLE COMERCIALMENTE A NIVEL MUNDIALPRODUCTOS BASADOS EN Bt DISPONIBLE COMERCIALMENTE A NIVEL MUNDIAL

Page 31: BT MATERIA - Fi

Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisAGENTE DE CONTROL AGENTE DE CONTROL BIOLÓGICO BIOLÓGICO

Tipo de Tipo de ACBACB PATOGENO PATOGENO PRODUCTOS COMERCIALES PRODUCTOS COMERCIALES

Bacillus popillae Bacillus popillae Bacteria Bacteria Popilla japonica Popilla japonica Doom, Japidemic (Fairfax Biological Doom, Japidemic (Fairfax Biological Labs) Labs)

Bacillus thuringiensis Bacillus thuringiensis var. var. aizawai aizawai Bacteria Bacteria Galleria melonella Galleria melonella B 401(Sandoz), Agree (Certis), B 401(Sandoz), Agree (Certis),

Design (Abbott), Mattch (Mycogen) Design (Abbott), Mattch (Mycogen)

var. var. israelensis israelensis Bacteria Bacteria Larvas de dípteros (mosquitos, Larvas de dípteros (mosquitos, mosca negra) mosca negra)

Vectobac, Gnatrol (Abbott), Vectobac, Gnatrol (Abbott), Skeetal (Novo Nordisk), Teknar Skeetal (Novo Nordisk), Teknar (Certis)* (Certis)*

EG 2424 EG 2424 Bacteria Bacteria Larvas de lepidópteros y Larvas de lepidópteros y coleópteros coleópteros Foil (Ecogen) Foil (Ecogen)

Pseud. fluorescens+B.t. Pseud. fluorescens+B.t. kurstaki kurstaki toxin toxin Bacteria Bacteria Lepidópteros (orugas) Lepidópteros (orugas) MVP (Mycogen) MVP (Mycogen)

Pseud. fluorescens+B.t. San Pseud. fluorescens+B.t. San Diego Diego toxin toxin Bacteria Bacteria Escarabajo de la patata Escarabajo de la patata

((Leptinotarsa decemliniataLeptinotarsa decemliniata) ) M-Trak (Mycogen)M-Trak (Mycogen)

Pseud. fluorescens+B.t. Pseud. fluorescens+B.t. toxin toxin Bacteria Bacteria Piral del maíz (Piral del maíz (Ostrinia nubilarisOstrinia nubilaris) ) M-Peril (Mycogen)M-Peril (Mycogen)

Nosema locustae Nosema locustae Protozoo Protozoo Saltamontes, langostasSaltamontes, langostas Nolo Bait (Evans BioControl) Nolo Bait (Evans BioControl)

Beauveria bassiana Beauveria bassiana Hongo Hongo Mosca blancaMosca blanca Naturalis (Agrichem), Botanigard y Naturalis (Agrichem), Botanigard y Mycotrol (Mycotech) Mycotrol (Mycotech)

Verticillium lecanii Verticillium lecanii Hongo Hongo Mosca blanca (Mosca blanca (Bemisia tabaciBemisia tabaci) ) Mycotal(Koppert)Mycotal(Koppert)

Paecilomyces fumosoreus Paecilomyces fumosoreus Hongo Hongo Mosca blanca (Mosca blanca (Trialeurodes Trialeurodes vaporariorumvaporariorum) )

PreFeRal (Biobest)PreFeRal (Biobest)

Pine sawfly nuclear Pine sawfly nuclear polyhedrosis virus polyhedrosis virus Virus Virus Diprion similis Diprion similis Virox (Novo Nordisk), Noecheck Virox (Novo Nordisk), Noecheck

(USDA Forest Service) (USDA Forest Service)

Heliothis nuclear Heliothis nuclear polyhedrosis virus polyhedrosis virus Virus Virus Helioicoverpa zea Helioicoverpa zea Elcar (Sandoz), Condor (Ecogen) Elcar (Sandoz), Condor (Ecogen)

Gypsi moth nuclear Gypsi moth nuclear polyhedrosis virus polyhedrosis virus Virus Virus Lymantria dispar Lymantria dispar Gypcheck (USDA Forest Service) Gypcheck (USDA Forest Service)

Spodeptera exiqua virus Spodeptera exiqua virus Virus Virus Spodoptera exigua Spodoptera exigua Spod-X (Crop Genetics Spod-X (Crop Genetics International) International)

BIOINSECTICIDAS QUE CONTIENEN COMO INGREDIENTE ACTIVO BACTERIAS, BIOINSECTICIDAS QUE CONTIENEN COMO INGREDIENTE ACTIVO BACTERIAS, PROTOZOOS, HONGOS O VIRUS, COMERCIALIZADOS EN DIFERENTES PAÍSES. PROTOZOOS, HONGOS O VIRUS, COMERCIALIZADOS EN DIFERENTES PAÍSES. BIOINSECTICIDAS QUE CONTIENEN COMO INGREDIENTE ACTIVO BACTERIAS, BIOINSECTICIDAS QUE CONTIENEN COMO INGREDIENTE ACTIVO BACTERIAS, PROTOZOOS, HONGOS O VIRUS, COMERCIALIZADOS EN DIFERENTES PAÍSES. PROTOZOOS, HONGOS O VIRUS, COMERCIALIZADOS EN DIFERENTES PAÍSES.

Page 32: BT MATERIA - Fi

Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

PARA REALIZAR UNA IDENTIFICACIÓN GENERAL DE CÉLULAS BACTERIANAS, SE PUEDEN SEGUIR PROCEDIMIENTOS SIMPLES COMO:

•DESCRIPCIÓN DE SU MORFOLOGÍA CELULAR•COLORACIÓN GRAM•ANÁLISIS DE SU CAPACIDAD PARA CRECER EN CONDICIONES AEROBIAS O ANAEROBIAS•REQUERIMIENTOS DE SUSTRATOS ESPECIALES PARA SU CULTIVO UTILIZANDO TÉCNICAS CONVENCIONALES•IDENTIFICARSE CON BASES EN LAS PROPIEDADES BIOQUÍMICAS•ANÁLISIS SEROLÓGICOS DE ANTÍGENOS FLAGELARES (ANTÍGENO H) DE CÉLULAS VEGETATIVAS

PARA REALIZAR UNA IDENTIFICACIÓN GENERAL DE CÉLULAS BACTERIANAS, SE PUEDEN SEGUIR PROCEDIMIENTOS SIMPLES COMO:

•DESCRIPCIÓN DE SU MORFOLOGÍA CELULAR•COLORACIÓN GRAM•ANÁLISIS DE SU CAPACIDAD PARA CRECER EN CONDICIONES AEROBIAS O ANAEROBIAS•REQUERIMIENTOS DE SUSTRATOS ESPECIALES PARA SU CULTIVO UTILIZANDO TÉCNICAS CONVENCIONALES•IDENTIFICARSE CON BASES EN LAS PROPIEDADES BIOQUÍMICAS•ANÁLISIS SEROLÓGICOS DE ANTÍGENOS FLAGELARES (ANTÍGENO H) DE CÉLULAS VEGETATIVAS

Page 33: BT MATERIA - Fi

Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

•DENTRO DEL GÉNERO DENTRO DEL GÉNERO Bacillus, Bacillus, ESPECIES COMO ESPECIES COMO B.B. sphaericussphaericus (Bsph) Y (Bsph) Y B. popilliaeB. popilliae (Bp) (Bp) PRODUCEN, AL IGUAL QUE Bt, TOXINAS PRODUCEN, AL IGUAL QUE Bt, TOXINAS INSECTICIDAS DE TIPO PROTEICO QUE SON INSECTICIDAS DE TIPO PROTEICO QUE SON SINTETIZADAS DURANTE LA ESPORULACIÓN Y SE SINTETIZADAS DURANTE LA ESPORULACIÓN Y SE DEPOSITAN COMO INCLUSIONES CRISTALINAS DEPOSITAN COMO INCLUSIONES CRISTALINAS PARAESPORALES PARAESPORALES

•COMO LO REPORTA ARONSON Bsph ES UN COMO LO REPORTA ARONSON Bsph ES UN BACILO GRAM POSITIVO; POSEE ESPORAS BACILO GRAM POSITIVO; POSEE ESPORAS ESFÉRICAS QUE DEFORMA NOTABLEMENTE EL ESFÉRICAS QUE DEFORMA NOTABLEMENTE EL CUERPO DEL BACILO Y CUYA UBICACIÓN PUEDE CUERPO DEL BACILO Y CUYA UBICACIÓN PUEDE SER TERMINAL O SUBTERMINAL. SER TERMINAL O SUBTERMINAL.

•PERTENECE A LAS CLASIFICACIONES GRUPALES PERTENECE A LAS CLASIFICACIONES GRUPALES PARA PARA BACILLUS BACILLUS II Y IVII Y IV..

•DENTRO DEL GÉNERO DENTRO DEL GÉNERO Bacillus, Bacillus, ESPECIES COMO ESPECIES COMO B.B. sphaericussphaericus (Bsph) Y (Bsph) Y B. popilliaeB. popilliae (Bp) (Bp) PRODUCEN, AL IGUAL QUE Bt, TOXINAS PRODUCEN, AL IGUAL QUE Bt, TOXINAS INSECTICIDAS DE TIPO PROTEICO QUE SON INSECTICIDAS DE TIPO PROTEICO QUE SON SINTETIZADAS DURANTE LA ESPORULACIÓN Y SE SINTETIZADAS DURANTE LA ESPORULACIÓN Y SE DEPOSITAN COMO INCLUSIONES CRISTALINAS DEPOSITAN COMO INCLUSIONES CRISTALINAS PARAESPORALES PARAESPORALES

•COMO LO REPORTA ARONSON Bsph ES UN COMO LO REPORTA ARONSON Bsph ES UN BACILO GRAM POSITIVO; POSEE ESPORAS BACILO GRAM POSITIVO; POSEE ESPORAS ESFÉRICAS QUE DEFORMA NOTABLEMENTE EL ESFÉRICAS QUE DEFORMA NOTABLEMENTE EL CUERPO DEL BACILO Y CUYA UBICACIÓN PUEDE CUERPO DEL BACILO Y CUYA UBICACIÓN PUEDE SER TERMINAL O SUBTERMINAL. SER TERMINAL O SUBTERMINAL.

•PERTENECE A LAS CLASIFICACIONES GRUPALES PERTENECE A LAS CLASIFICACIONES GRUPALES PARA PARA BACILLUS BACILLUS II Y IVII Y IV..

Page 34: BT MATERIA - Fi

Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

FASE 1:FASE 1: •SELECCIÓN CON ACETATO DE SODIO – CHOQUE TÉRMICOSELECCIÓN CON ACETATO DE SODIO – CHOQUE TÉRMICO•CADA MUESTRA FUE PESADA Y MACERADA CADA MUESTRA FUE PESADA Y MACERADA •COLOCÁNDOSE 500 MG EN 10 ML DE CALDO L. BROTH COLOCÁNDOSE 500 MG EN 10 ML DE CALDO L. BROTH ACETATO 0.25 M ACETATO 0.25 M

FASE 2:FASE 2: ESPORULACIÓN Y DETERMINACIÓN MORFOLÓGICAESPORULACIÓN Y DETERMINACIÓN MORFOLÓGICA

TODAS LAS COLONIAS PREDOMINANTES Y CON TODAS LAS COLONIAS PREDOMINANTES Y CON MORFOLOGÍA MACROSCÓPICA DE MORFOLOGÍA MACROSCÓPICA DE Bacillus spp Bacillus spp FUERON FUERON ANALIZADAS SEGÚN:ANALIZADAS SEGÚN:•LA FORMA DE CRECIMIENTOLA FORMA DE CRECIMIENTO•ELEVACIÓNELEVACIÓN•CONSISTENCIA DE LA COLONIACONSISTENCIA DE LA COLONIA•CARACTERÍSTICAS DE LOS BORDES Y PIGMENTACIÓNCARACTERÍSTICAS DE LOS BORDES Y PIGMENTACIÓN

FASE 1:FASE 1: •SELECCIÓN CON ACETATO DE SODIO – CHOQUE TÉRMICOSELECCIÓN CON ACETATO DE SODIO – CHOQUE TÉRMICO•CADA MUESTRA FUE PESADA Y MACERADA CADA MUESTRA FUE PESADA Y MACERADA •COLOCÁNDOSE 500 MG EN 10 ML DE CALDO L. BROTH COLOCÁNDOSE 500 MG EN 10 ML DE CALDO L. BROTH ACETATO 0.25 M ACETATO 0.25 M

FASE 2:FASE 2: ESPORULACIÓN Y DETERMINACIÓN MORFOLÓGICAESPORULACIÓN Y DETERMINACIÓN MORFOLÓGICA

TODAS LAS COLONIAS PREDOMINANTES Y CON TODAS LAS COLONIAS PREDOMINANTES Y CON MORFOLOGÍA MACROSCÓPICA DE MORFOLOGÍA MACROSCÓPICA DE Bacillus spp Bacillus spp FUERON FUERON ANALIZADAS SEGÚN:ANALIZADAS SEGÚN:•LA FORMA DE CRECIMIENTOLA FORMA DE CRECIMIENTO•ELEVACIÓNELEVACIÓN•CONSISTENCIA DE LA COLONIACONSISTENCIA DE LA COLONIA•CARACTERÍSTICAS DE LOS BORDES Y PIGMENTACIÓNCARACTERÍSTICAS DE LOS BORDES Y PIGMENTACIÓN

AISLAMIENTO DE COLONIAS ENDÉMICASAISLAMIENTO DE COLONIAS ENDÉMICASAISLAMIENTO DE COLONIAS ENDÉMICASAISLAMIENTO DE COLONIAS ENDÉMICAS

Page 35: BT MATERIA - Fi

Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS DE LOS AISLADOS CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS DE LOS AISLADOS ENDÉMICOS DEENDÉMICOS DE BtBtCARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS DE LOS AISLADOS CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS DE LOS AISLADOS ENDÉMICOS DEENDÉMICOS DE BtBt

CARACTERÍSTICASCARACTERÍSTICAS DESCRIPCIÓNDESCRIPCIÓN

TamañoTamaño GrandeGrande

Forma de crecimientoForma de crecimiento IrregularIrregular

Elevación de la coloniaElevación de la colonia PlanaPlana

Forma de los bordesForma de los bordes LobuladoLobulado

Consistencia de la coloniaConsistencia de la colonia CremosaCremosa

AspectoAspecto Opaco- mateOpaco- mate

PigmentaciónPigmentación Blanco cremosoBlanco cremoso

Page 36: BT MATERIA - Fi

Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

CARACTERÍSTICAS CARACTERÍSTICAS MICROSCÓPICAS DE MICROSCÓPICAS DE

BtBt

CARACTERÍSTICAS CARACTERÍSTICAS MICROSCÓPICAS DE MICROSCÓPICAS DE

BtBt

Page 37: BT MATERIA - Fi

Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

•SE REALIZO COLORACIÓN DE GRAM POSITIVOS PARA SE REALIZO COLORACIÓN DE GRAM POSITIVOS PARA

BACILOS, BACILOS, •POSTERIORMENTE FUERON REPICADAS LAS COLONIAS POSTERIORMENTE FUERON REPICADAS LAS COLONIAS

AISLADAS CON UN PALILLO DE MADERA ESTÉRILES A AISLADAS CON UN PALILLO DE MADERA ESTÉRILES A

CAJAS DE PETRI CON MEDIO DE ESPORULACIÓN T3 CAJAS DE PETRI CON MEDIO DE ESPORULACIÓN T3

UTILIZANDO EL MÉTODO DE LA CUADRÍCULA (MILLER, UTILIZANDO EL MÉTODO DE LA CUADRÍCULA (MILLER,

1992)1992)•POSTERIORMENTE SE INCUBARON A 30 ºC POR 5 DÍAS POSTERIORMENTE SE INCUBARON A 30 ºC POR 5 DÍAS

PARA ESPORULACIÓN PARA ESPORULACIÓN •PARA DETERMINAR LA PRESENCIA O AUSENCIA DE PARA DETERMINAR LA PRESENCIA O AUSENCIA DE

CRISTALES PARAESPORALES SE UTILIZARON LA TINCIÓN CRISTALES PARAESPORALES SE UTILIZARON LA TINCIÓN

DIFERENCIAL DE WIRTZ Y LA TINCIÓN VIOLETA –DIFERENCIAL DE WIRTZ Y LA TINCIÓN VIOLETA –

SAFRANINA /OHSAFRANINA /OH

•SE REALIZO COLORACIÓN DE GRAM POSITIVOS PARA SE REALIZO COLORACIÓN DE GRAM POSITIVOS PARA

BACILOS, BACILOS, •POSTERIORMENTE FUERON REPICADAS LAS COLONIAS POSTERIORMENTE FUERON REPICADAS LAS COLONIAS

AISLADAS CON UN PALILLO DE MADERA ESTÉRILES A AISLADAS CON UN PALILLO DE MADERA ESTÉRILES A

CAJAS DE PETRI CON MEDIO DE ESPORULACIÓN T3 CAJAS DE PETRI CON MEDIO DE ESPORULACIÓN T3

UTILIZANDO EL MÉTODO DE LA CUADRÍCULA (MILLER, UTILIZANDO EL MÉTODO DE LA CUADRÍCULA (MILLER,

1992)1992)•POSTERIORMENTE SE INCUBARON A 30 ºC POR 5 DÍAS POSTERIORMENTE SE INCUBARON A 30 ºC POR 5 DÍAS

PARA ESPORULACIÓN PARA ESPORULACIÓN •PARA DETERMINAR LA PRESENCIA O AUSENCIA DE PARA DETERMINAR LA PRESENCIA O AUSENCIA DE

CRISTALES PARAESPORALES SE UTILIZARON LA TINCIÓN CRISTALES PARAESPORALES SE UTILIZARON LA TINCIÓN

DIFERENCIAL DE WIRTZ Y LA TINCIÓN VIOLETA –DIFERENCIAL DE WIRTZ Y LA TINCIÓN VIOLETA –

SAFRANINA /OHSAFRANINA /OH

AISLAMIENTO DE COLONIAS ENDÉMICASAISLAMIENTO DE COLONIAS ENDÉMICASAISLAMIENTO DE COLONIAS ENDÉMICASAISLAMIENTO DE COLONIAS ENDÉMICAS

Page 38: BT MATERIA - Fi

Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

•LA VISUALIZACIÓN DE LAS BACTERIAS SE REALIZO POR LA VISUALIZACIÓN DE LAS BACTERIAS SE REALIZO POR MEDIO DE UN MICROSCOPIO DE LUZ CON OBJETIVO DE MEDIO DE UN MICROSCOPIO DE LUZ CON OBJETIVO DE INMERSIÓN 100XINMERSIÓN 100X•SE TOMO REGISTRO DE LA FORMA, POSICIÓN SE TOMO REGISTRO DE LA FORMA, POSICIÓN PREDOMINANTE DE LA ESPORA Y DEFORMACIÓN DEL PREDOMINANTE DE LA ESPORA Y DEFORMACIÓN DEL ESPORANGIO Y FORMACIÓN DE CRISTALES ESPORANGIO Y FORMACIÓN DE CRISTALES PARAESPORALES.PARAESPORALES.

FASE 3: FASE 3: REVISIÓN FINAL DEL COMPLEJO CRISTAL – ESPORAREVISIÓN FINAL DEL COMPLEJO CRISTAL – ESPORA

•TODAS LAS COLONIAS FORMADORAS DE ESPORA TODAS LAS COLONIAS FORMADORAS DE ESPORA FUERON REPICADAS PARA UNA ÚLTIMA REVISIÓN FUERON REPICADAS PARA UNA ÚLTIMA REVISIÓN SELECTIVA DEL CRISTAL, AL MEDIO AGAR TRÍPTICO DE SELECTIVA DEL CRISTAL, AL MEDIO AGAR TRÍPTICO DE SOYA, SEGÚN LO PROPUESTO POR KABLIN ET AL., 1994SOYA, SEGÚN LO PROPUESTO POR KABLIN ET AL., 1994

•LA VISUALIZACIÓN DE LAS BACTERIAS SE REALIZO POR LA VISUALIZACIÓN DE LAS BACTERIAS SE REALIZO POR MEDIO DE UN MICROSCOPIO DE LUZ CON OBJETIVO DE MEDIO DE UN MICROSCOPIO DE LUZ CON OBJETIVO DE INMERSIÓN 100XINMERSIÓN 100X•SE TOMO REGISTRO DE LA FORMA, POSICIÓN SE TOMO REGISTRO DE LA FORMA, POSICIÓN PREDOMINANTE DE LA ESPORA Y DEFORMACIÓN DEL PREDOMINANTE DE LA ESPORA Y DEFORMACIÓN DEL ESPORANGIO Y FORMACIÓN DE CRISTALES ESPORANGIO Y FORMACIÓN DE CRISTALES PARAESPORALES.PARAESPORALES.

FASE 3: FASE 3: REVISIÓN FINAL DEL COMPLEJO CRISTAL – ESPORAREVISIÓN FINAL DEL COMPLEJO CRISTAL – ESPORA

•TODAS LAS COLONIAS FORMADORAS DE ESPORA TODAS LAS COLONIAS FORMADORAS DE ESPORA FUERON REPICADAS PARA UNA ÚLTIMA REVISIÓN FUERON REPICADAS PARA UNA ÚLTIMA REVISIÓN SELECTIVA DEL CRISTAL, AL MEDIO AGAR TRÍPTICO DE SELECTIVA DEL CRISTAL, AL MEDIO AGAR TRÍPTICO DE SOYA, SEGÚN LO PROPUESTO POR KABLIN ET AL., 1994SOYA, SEGÚN LO PROPUESTO POR KABLIN ET AL., 1994

AISLAMIENTO DE COLONIAS ENDÉMICASAISLAMIENTO DE COLONIAS ENDÉMICASAISLAMIENTO DE COLONIAS ENDÉMICASAISLAMIENTO DE COLONIAS ENDÉMICAS

Page 39: BT MATERIA - Fi

Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

INGREDIENTESINGREDIENTES CANTIDAD/LITROCANTIDAD/LITRO CONCENTRACIÓNCONCENTRACIÓN

L. broth Acetato(CLA)L. broth Acetato(CLA)NaClNaClExtracto de LevaduraExtracto de LevaduraTriptonaTriptonaAcetato de SodioAcetato de Sodio

20 g20 g10 g10 g10 g10 g

20.6 g20.6 g

1X1X

Agar Luria Bertani ( LB)Agar Luria Bertani ( LB)NaClNaClExtracto de LevaduraExtracto de LevaduraTriptonaTriptonaAgar-agarAgar-agar

10 g10 g5 g5 g10 g10 g15 g15 g

1X1X

Medio T3Medio T3NaClNaClExtracto de LevaduraExtracto de LevaduraTriptonaTriptonaMnClMnClFosfato de Sodio pH 6.8Fosfato de Sodio pH 6.8Agar-agarAgar-agar

3 g3 g2 g2 g

1.5 g1.5 g5 mg5 mg6.9 g6.9 g15 g15 g

1X1X

Agar Tríptico de Soya Agar Tríptico de Soya ( TSE)( TSE)Peptona de SoyaPeptona de SoyaNaClNaClExtracto de LevaduraExtracto de LevaduraAgar-agarAgar-agar

5 g5 g5g5g

1.5 g1.5 g15 g15 g

1X1X

MEDIOS PARA CULTIVO DE Bt MEDIOS PARA CULTIVO DE Bt MEDIOS PARA CULTIVO DE Bt MEDIOS PARA CULTIVO DE Bt

Page 40: BT MATERIA - Fi

Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

Muestra de suelo

500mg

Colocar en 10ml de caldo LB con acetato

de sodio

Incubar 30ºC a 200 rpm por 4

horas

Pasar a tubo de

polipropiler estériles

Centrifugar 1’ 2000

rpm

Lavar 2 veces

Resuspender en 10ml de

agua destilada

estéril

Tomar 1.5ml

Pasar a tubos de

microcentrífuga

Calentar a 80ºC por 10

min

Sembrar por Extensión en 1 Agar

Incubar 30ºC por 24 horas

Resultado de colonias

en la superficie

Aislamiento por

agotamiento por estrías

Observar a 100X Tinción de GRAM(+)

Picar a media T3

Método de la cuadrícula

Incubar a 30ºC por 5

días

Observación a 100X Forma y

Posición de la espora

Agar TSEIncubar

30ºC por 2 días

Revisar a 100X

Determinación del

complejo Espora - Cristal

FASE 1

FASE 3

FASE 2

METODOLOGÍA PARA AISLAR E IDENTIFICAR Bt ENDÉMICO METODOLOGÍA PARA AISLAR E IDENTIFICAR Bt ENDÉMICO METODOLOGÍA PARA AISLAR E IDENTIFICAR Bt ENDÉMICO METODOLOGÍA PARA AISLAR E IDENTIFICAR Bt ENDÉMICO

Page 41: BT MATERIA - Fi

Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

CCARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS DE LOS ARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS DE LOS AISLADOS DE Bt, COMO SON:AISLADOS DE Bt, COMO SON:

•PRODUCCIÓN DE CATALASAPRODUCCIÓN DE CATALASA•HIDRÓLISIS DE ALMIDÓN Y CASEINAHIDRÓLISIS DE ALMIDÓN Y CASEINA•CRECIMIENTO EN NaCl AL 7% CRECIMIENTO EN NaCl AL 7% •FORMACIÓN DE CRISTALES PARAESPORALFORMACIÓN DE CRISTALES PARAESPORAL

CCARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS DE LOS ARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS DE LOS AISLADOS DE Bt, COMO SON:AISLADOS DE Bt, COMO SON:

•PRODUCCIÓN DE CATALASAPRODUCCIÓN DE CATALASA•HIDRÓLISIS DE ALMIDÓN Y CASEINAHIDRÓLISIS DE ALMIDÓN Y CASEINA•CRECIMIENTO EN NaCl AL 7% CRECIMIENTO EN NaCl AL 7% •FORMACIÓN DE CRISTALES PARAESPORALFORMACIÓN DE CRISTALES PARAESPORAL

BIOQUÍMICAMENTE SE CARACTERIZA POR TENER BIOQUÍMICAMENTE SE CARACTERIZA POR TENER UN METABOLISMO ESTRICTAMENTE OXIDATIVOUN METABOLISMO ESTRICTAMENTE OXIDATIVONO UTILIZA AZÚCARES COMO FUENTE DE NO UTILIZA AZÚCARES COMO FUENTE DE CARBONO Y DE ENERGÍA, SINO QUE UTILIZA CARBONO Y DE ENERGÍA, SINO QUE UTILIZA ACETATO O AMINOÁCIDOS COMO GLUTAMATOACETATO O AMINOÁCIDOS COMO GLUTAMATO

BIOQUÍMICAMENTE SE CARACTERIZA POR TENER BIOQUÍMICAMENTE SE CARACTERIZA POR TENER UN METABOLISMO ESTRICTAMENTE OXIDATIVOUN METABOLISMO ESTRICTAMENTE OXIDATIVONO UTILIZA AZÚCARES COMO FUENTE DE NO UTILIZA AZÚCARES COMO FUENTE DE CARBONO Y DE ENERGÍA, SINO QUE UTILIZA CARBONO Y DE ENERGÍA, SINO QUE UTILIZA ACETATO O AMINOÁCIDOS COMO GLUTAMATOACETATO O AMINOÁCIDOS COMO GLUTAMATO

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Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

•Bp Bp ES TAMBIÉN UN BACILO POSITIVO QUE POSEE ES TAMBIÉN UN BACILO POSITIVO QUE POSEE ESPORA ELIPSOIDAL EN POSICIÓN TERMINAL Y ESPORA ELIPSOIDAL EN POSICIÓN TERMINAL Y PERTENECE EN AMBOS CASO AL GRUPO I. PERTENECE EN AMBOS CASO AL GRUPO I.

•SE DESTACA BIOQUÍMICAMENTE POR PRESENTAR SE DESTACA BIOQUÍMICAMENTE POR PRESENTAR REACCIÓN NEGATIVA PARA CATALASA, VOGES REACCIÓN NEGATIVA PARA CATALASA, VOGES PROSKAUER E HIDRÓLISIS DE CASEÍNAPROSKAUER E HIDRÓLISIS DE CASEÍNA

•HASTA AHORA HA SIDO AISLADO ÚNICAMENTE DE HASTA AHORA HA SIDO AISLADO ÚNICAMENTE DE ESCARABAJOS DISECADOSESCARABAJOS DISECADOS..

•Bp Bp ES TAMBIÉN UN BACILO POSITIVO QUE POSEE ES TAMBIÉN UN BACILO POSITIVO QUE POSEE ESPORA ELIPSOIDAL EN POSICIÓN TERMINAL Y ESPORA ELIPSOIDAL EN POSICIÓN TERMINAL Y PERTENECE EN AMBOS CASO AL GRUPO I. PERTENECE EN AMBOS CASO AL GRUPO I.

•SE DESTACA BIOQUÍMICAMENTE POR PRESENTAR SE DESTACA BIOQUÍMICAMENTE POR PRESENTAR REACCIÓN NEGATIVA PARA CATALASA, VOGES REACCIÓN NEGATIVA PARA CATALASA, VOGES PROSKAUER E HIDRÓLISIS DE CASEÍNAPROSKAUER E HIDRÓLISIS DE CASEÍNA

•HASTA AHORA HA SIDO AISLADO ÚNICAMENTE DE HASTA AHORA HA SIDO AISLADO ÚNICAMENTE DE ESCARABAJOS DISECADOSESCARABAJOS DISECADOS..

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Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

CARACTERÍSTICACARACTERÍSTICA

ESPECIES DE BacillusESPECIES DE Bacillus

Bt. Bt. B. B.

subtilisubtiliss

B. B. cereuscereus

B. B. licheniformelicheniforme

ss

B. B. pumilispumilis

B. B. megateriummegaterium

B. B. coagulancoagulan

ss

CATALASACATALASA ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++

VOGES PROSKAUER (VP)VOGES PROSKAUER (VP) ++ ++ ++ ++ ++ -- ++

CRECIMIENTO CRECIMIENTO ANAERÓBICOANAERÓBICO ++ ++ ++ ++ -- -- ++

CRECIMIENTO CRECIMIENTO ANAERÓBICO A 50 CANAERÓBICO A 50 C -- ++ -- ++ ++ -- ++

CRECIMIENTO EN NaCl 7%CRECIMIENTO EN NaCl 7% ++ ++ ++ ++ ++ ++ --

FORMACIÓN DE ÁCIDO Y FORMACIÓN DE ÁCIDO Y GAS A PARTIR DE GAS A PARTIR DE GLUCOSAGLUCOSA

-- -- -- -- -- -- --

REDUCCIÓN DE NOREDUCCIÓN DE NO3 3 A NOA NO22 ++ -- ++ ++ -- VV VV

HIDRÓLISIS DE ALMIDÓNHIDRÓLISIS DE ALMIDÓN ++ ++ ++ ++ -- ++ ++

CRECIMIENTO A 65 CCRECIMIENTO A 65 C -- -- -- -- -- -- --

pH EN VP MEDIO 6.0pH EN VP MEDIO 6.0 -- VV -- VV -- VV --

FORMACIÓN DE ÁCIDO DE FORMACIÓN DE ÁCIDO DE GLUCOSAGLUCOSA ++ ++ ++ ++ ++ ++ --

HIDRÓLISIS DE CASEINAHIDRÓLISIS DE CASEINA ++ ++ ++ ++ ++ ++ VV

FORMACIÓN DE CRISTAL FORMACIÓN DE CRISTAL PARAESPORALPARAESPORAL ++ -- VV -- -- -- --

CARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS PARA BACILLUS CARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS PARA BACILLUS PERTENECIENTES AL GRUPO 1A PERTENECIENTES AL GRUPO 1A

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Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

CARACTERÍSTICACARACTERÍSTICA

ESPECIE DE BacillusESPECIE DE Bacillus

Bt.Bt. B. B. sphaericussphaericus B. popilliaeB. popilliae

GRUPO GRUPO IIII IVIV II

POSICIÓN Y FORMA DE LA POSICIÓN Y FORMA DE LA ESPORAESPORA C, PC y O, NC, PC y O, N ST, T y R, SST, T y R, S T y OT y O

CATALASACATALASA ++ ++ --

VOGES PROSKAUER (VP)VOGES PROSKAUER (VP) ++ -- --

CRECIMIENTO ANAERÓBICO EN CRECIMIENTO ANAERÓBICO EN AGARAGAR ++ -- ++

CRECIMIENTO EN NaCl 7%CRECIMIENTO EN NaCl 7% ++ VV --

FORMACIÓN DE ÁCIDO Y GAS A FORMACIÓN DE ÁCIDO Y GAS A PARTIR DE GLUCOSAPARTIR DE GLUCOSA ++ -- ++

REDUCCIÓN DE NOREDUCCIÓN DE NO3 3 A NOA NO22 ++ -- --

HIDRÓLISIS DE ALMIDÓNHIDRÓLISIS DE ALMIDÓN ++ -- --

FORMACIÓN DE ÁCIDO DE FORMACIÓN DE ÁCIDO DE GLUCOSAGLUCOSA ++ -- ++

HIDRÓLISIS DE CASEINAHIDRÓLISIS DE CASEINA ++ VV --

Resumen comparativo de los caracteres usados para identificar Resumen comparativo de los caracteres usados para identificar especies de especies de BacillusBacillus formadores de inclusiones cristalinas formadores de inclusiones cristalinas

C: central, PC: paracentral; ST: subterminal; T: terminal; O: ovalada, R: redonda; N: no deforma el cuerpo C: central, PC: paracentral; ST: subterminal; T: terminal; O: ovalada, R: redonda; N: no deforma el cuerpo del bacilo; S: si deforma el cuerpo del bacilo; V: carácter variable.del bacilo; S: si deforma el cuerpo del bacilo; V: carácter variable.

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Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

CARACTERÍSTICASCARACTERÍSTICAS

SUBESPECIES DE BtSUBESPECIES DE Bt

darmstadiensisdarmstadiensis

Israeliensis Israeliensis 18891889

MorrisoniMorrisoniserotipo 8a: 8bserotipo 8a: 8b

ARGININAARGININA ++ -- --

ESCULINAESCULINA ++ -- ++

UREAUREA -- -- --

CATALASACATALASA ++ -- --

SACAROSASACAROSA -- -- ++

CASEINACASEINA ++ ++ NDND

HEMOLISIS EN AGAR HEMOLISIS EN AGAR SANGRESANGRE ΒΒ ββ ββ

PRUEBAS BIOQUÍMICAS PARA ALGUNAS PRUEBAS BIOQUÍMICAS PARA ALGUNAS SUBESPECIES DE SUBESPECIES DE Bt Bt

PRUEBAS BIOQUÍMICAS PARA ALGUNAS PRUEBAS BIOQUÍMICAS PARA ALGUNAS SUBESPECIES DE SUBESPECIES DE Bt Bt

(+) = reacciones positivas; (-) = reacción negativa; (ND)= dato no obtenido; (+) = reacciones positivas; (-) = reacción negativa; (ND)= dato no obtenido; ( β)= hemólisis beta en agar sangre. ( β)= hemólisis beta en agar sangre. Fuente Slepcky & Hemphill, 1992. Fuente Slepcky & Hemphill, 1992.

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Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

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Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

•LAS CÉLULAS DE LAS PLANTAS Bt LAS CÉLULAS DE LAS PLANTAS Bt TRANSFORMADAS PRESENTAN LOS GENES Y TRANSFORMADAS PRESENTAN LOS GENES Y LOS REGULADORES (PROMOTORES, LOS REGULADORES (PROMOTORES, PROCESAMIENTO DEL ARN MENSAJERO, PROCESAMIENTO DEL ARN MENSAJERO, TRADUCCIÓN, LOCALIZACIÓN SUBCELULAR) TRADUCCIÓN, LOCALIZACIÓN SUBCELULAR) INVOLUCRADOS EN LA EXPRESIÓN DEL INVOLUCRADOS EN LA EXPRESIÓN DEL MISMOMISMO

•LAS PLANTAS SE TRANSFORMAN ASÍ EN LAS PLANTAS SE TRANSFORMAN ASÍ EN “PRODUCTORAS DE INSECTICIDA”, LO QUE “PRODUCTORAS DE INSECTICIDA”, LO QUE LAS HACE ALTAMENTE RESISTENTES A UN LAS HACE ALTAMENTE RESISTENTES A UN AMPLIO RANGO DE LEPIDÓPTEROS Y AMPLIO RANGO DE LEPIDÓPTEROS Y COLEÓPTEROSCOLEÓPTEROS

•LAS CÉLULAS DE LAS PLANTAS Bt LAS CÉLULAS DE LAS PLANTAS Bt TRANSFORMADAS PRESENTAN LOS GENES Y TRANSFORMADAS PRESENTAN LOS GENES Y LOS REGULADORES (PROMOTORES, LOS REGULADORES (PROMOTORES, PROCESAMIENTO DEL ARN MENSAJERO, PROCESAMIENTO DEL ARN MENSAJERO, TRADUCCIÓN, LOCALIZACIÓN SUBCELULAR) TRADUCCIÓN, LOCALIZACIÓN SUBCELULAR) INVOLUCRADOS EN LA EXPRESIÓN DEL INVOLUCRADOS EN LA EXPRESIÓN DEL MISMOMISMO

•LAS PLANTAS SE TRANSFORMAN ASÍ EN LAS PLANTAS SE TRANSFORMAN ASÍ EN “PRODUCTORAS DE INSECTICIDA”, LO QUE “PRODUCTORAS DE INSECTICIDA”, LO QUE LAS HACE ALTAMENTE RESISTENTES A UN LAS HACE ALTAMENTE RESISTENTES A UN AMPLIO RANGO DE LEPIDÓPTEROS Y AMPLIO RANGO DE LEPIDÓPTEROS Y COLEÓPTEROSCOLEÓPTEROS

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Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

•LAS PLANTAS TRANSGÉNICAS BT FUERON LAS PLANTAS TRANSGÉNICAS BT FUERON CREADAS PARA REDUCIR LA DEPENDENCIA CREADAS PARA REDUCIR LA DEPENDENCIA DE LOS INSECTICIDAS CONVENCIONALES DE DE LOS INSECTICIDAS CONVENCIONALES DE AMPLIO ESPECTRO Y REDUCIR DE ESTA AMPLIO ESPECTRO Y REDUCIR DE ESTA FORMA EL IMPACTO QUE ÉSTOS TIENEN EN FORMA EL IMPACTO QUE ÉSTOS TIENEN EN EL AMBIENTE POR SER NO ESPECÍFICOS Y EL AMBIENTE POR SER NO ESPECÍFICOS Y EN ALGUNOS CASOS DE GRAN TOXICIDADEN ALGUNOS CASOS DE GRAN TOXICIDAD

•OTRA VENTAJA QUE PRESENTARÍAN ES OTRA VENTAJA QUE PRESENTARÍAN ES QUE SE REDUCIRÍAN LOS COSTOS DE QUE SE REDUCIRÍAN LOS COSTOS DE APLICACIÓN DE AGROQUÍMICOS, LO QUE APLICACIÓN DE AGROQUÍMICOS, LO QUE IRÍA LIGADO A UN AUMENTO EN LA IRÍA LIGADO A UN AUMENTO EN LA PRODUCCIÓNPRODUCCIÓN

•LAS PLANTAS TRANSGÉNICAS BT FUERON LAS PLANTAS TRANSGÉNICAS BT FUERON CREADAS PARA REDUCIR LA DEPENDENCIA CREADAS PARA REDUCIR LA DEPENDENCIA DE LOS INSECTICIDAS CONVENCIONALES DE DE LOS INSECTICIDAS CONVENCIONALES DE AMPLIO ESPECTRO Y REDUCIR DE ESTA AMPLIO ESPECTRO Y REDUCIR DE ESTA FORMA EL IMPACTO QUE ÉSTOS TIENEN EN FORMA EL IMPACTO QUE ÉSTOS TIENEN EN EL AMBIENTE POR SER NO ESPECÍFICOS Y EL AMBIENTE POR SER NO ESPECÍFICOS Y EN ALGUNOS CASOS DE GRAN TOXICIDADEN ALGUNOS CASOS DE GRAN TOXICIDAD

•OTRA VENTAJA QUE PRESENTARÍAN ES OTRA VENTAJA QUE PRESENTARÍAN ES QUE SE REDUCIRÍAN LOS COSTOS DE QUE SE REDUCIRÍAN LOS COSTOS DE APLICACIÓN DE AGROQUÍMICOS, LO QUE APLICACIÓN DE AGROQUÍMICOS, LO QUE IRÍA LIGADO A UN AUMENTO EN LA IRÍA LIGADO A UN AUMENTO EN LA PRODUCCIÓNPRODUCCIÓN

Page 49: BT MATERIA - Fi

Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

•““Bt" Bt" Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensis, una bacteria del suelo , una bacteria del suelo cuyas esporas contienen una proteína cristalina cuyas esporas contienen una proteína cristalina (Cry).(Cry).

•En el intestino del insecto, la proteína se En el intestino del insecto, la proteína se descompone y libera una toxina llamada endotoxina descompone y libera una toxina llamada endotoxina delta. delta.

•Se han identificado distintas versiones de los Se han identificado distintas versiones de los genes Cry, también llamados "genes Bt". genes Cry, también llamados "genes Bt".

•Insecticidas que contienen Bt y sus toxinas (Dipel, Insecticidas que contienen Bt y sus toxinas (Dipel, Thuricide, Ventobac). Thuricide, Ventobac).

•En las plantas “Bt” se ha incorporado una versión En las plantas “Bt” se ha incorporado una versión modificada del gen Cry bacteriano en el ADN de la modificada del gen Cry bacteriano en el ADN de la propia planta, de tal modo que la maquinaria celular propia planta, de tal modo que la maquinaria celular de la planta produce la toxina. de la planta produce la toxina.

•““Bt" Bt" Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensis, una bacteria del suelo , una bacteria del suelo cuyas esporas contienen una proteína cristalina cuyas esporas contienen una proteína cristalina (Cry).(Cry).

•En el intestino del insecto, la proteína se En el intestino del insecto, la proteína se descompone y libera una toxina llamada endotoxina descompone y libera una toxina llamada endotoxina delta. delta.

•Se han identificado distintas versiones de los Se han identificado distintas versiones de los genes Cry, también llamados "genes Bt". genes Cry, también llamados "genes Bt".

•Insecticidas que contienen Bt y sus toxinas (Dipel, Insecticidas que contienen Bt y sus toxinas (Dipel, Thuricide, Ventobac). Thuricide, Ventobac).

•En las plantas “Bt” se ha incorporado una versión En las plantas “Bt” se ha incorporado una versión modificada del gen Cry bacteriano en el ADN de la modificada del gen Cry bacteriano en el ADN de la propia planta, de tal modo que la maquinaria celular propia planta, de tal modo que la maquinaria celular de la planta produce la toxina. de la planta produce la toxina.

Barrenador del maíz

Gusano del copo del algodón

PLANTAS “Bt”PLANTAS “Bt”PLANTAS “Bt”PLANTAS “Bt”

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Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

Maíz:Maíz: básicamente para el básicamente para el control del barrenador control del barrenador europeo del maíz y el europeo del maíz y el barrenador grande del maíz. barrenador grande del maíz.

Algodón:Algodón: para el control del para el control del gusano de las yemas del gusano de las yemas del tabaco y el gusano del copo tabaco y el gusano del copo de algodón.de algodón.

Papa:Papa: para el control del para el control del escarabajo de la papa de escarabajo de la papa de Colorado. Colorado.

Maíz:Maíz: básicamente para el básicamente para el control del barrenador control del barrenador europeo del maíz y el europeo del maíz y el barrenador grande del maíz. barrenador grande del maíz.

Algodón:Algodón: para el control del para el control del gusano de las yemas del gusano de las yemas del tabaco y el gusano del copo tabaco y el gusano del copo de algodón.de algodón.

Papa:Papa: para el control del para el control del escarabajo de la papa de escarabajo de la papa de Colorado. Colorado.

LOS CULTIVOS BT RESISTENTES A LOS INSECTOS LOS CULTIVOS BT RESISTENTES A LOS INSECTOS ACTUALMENTE EN EL MERCADO INCLUYEN: ACTUALMENTE EN EL MERCADO INCLUYEN: LOS CULTIVOS BT RESISTENTES A LOS INSECTOS LOS CULTIVOS BT RESISTENTES A LOS INSECTOS ACTUALMENTE EN EL MERCADO INCLUYEN: ACTUALMENTE EN EL MERCADO INCLUYEN:

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Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

0

20

40

60

80

100

1985 1990 1995 2000 2003

resistencia aherbicidas

resistencia ainsectos

resistencia avirus

calidad delproducto0

20

40

60

80

100

1985 1990 1995 2000 2003

resistencia aherbicidas

resistencia ainsectos

resistencia avirus

calidad delproducto

A partir de: http/highwire.stanfordA partir de: http/highwire.stanfordA partir de: http/highwire.stanfordA partir de: http/highwire.stanford

CARACTERISTICAS INCORPORADASCARACTERISTICAS INCORPORADASCARACTERISTICAS INCORPORADASCARACTERISTICAS INCORPORADAS

Page 52: BT MATERIA - Fi

Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

Bol. Entomol. Venez. 4(8): 61-70. 30 octubre 1985 Bol. Entomol. Venez. 4(8): 61-70. 30 octubre 1985

Evaluación de dos insecticidas, uno Evaluación de dos insecticidas, uno químico (Diazinón y otro biológico químico (Diazinón y otro biológico

(Bacillus thuringiensis (Bacillus thuringiensis var. var. kurstaki), kurstaki), en en base a sus efectos sobre las poblaciones base a sus efectos sobre las poblaciones de larvas de de larvas de Spodoptera frugiperda (S.)Spodoptera frugiperda (S.)

ROSA I. FERNANDEZ B. y SANTIAGO CLAVIJO A.ROSA I. FERNANDEZ B. y SANTIAGO CLAVIJO A.

APLICACIONESAPLICACIONESAPLICACIONESAPLICACIONES

Page 53: BT MATERIA - Fi

Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

•CON EL FIN DE DETERMINAR EL EFECTO DE CON EL FIN DE DETERMINAR EL EFECTO DE DOS INSECTICIDAS (DIAZINÓN Y DOS INSECTICIDAS (DIAZINÓN Y Bacillus Bacillus thuringiensis thuringiensis ber), SOBRE LAS POBLACIONES DE ber), SOBRE LAS POBLACIONES DE LARVAS DE LARVAS DE SS. . frugiperda frugiperda SE SEMBRÓ UN SE SEMBRÓ UN ENSAYO CON EL HÍBRIDO "ARICHUNA BLANCO" ENSAYO CON EL HÍBRIDO "ARICHUNA BLANCO" DE MAÍZ, EN LA ESTACIÓN EXPERIMENTAL DE MAÍZ, EN LA ESTACIÓN EXPERIMENTAL "SAMÁN MOCHO" DE LA FACULTAD DE "SAMÁN MOCHO" DE LA FACULTAD DE AGRONOMIA (U.C.V.), EN UN DISEÑO DE AGRONOMIA (U.C.V.), EN UN DISEÑO DE BLOQUES AL AZAR. BLOQUES AL AZAR.

•CON EL FIN DE DETERMINAR EL EFECTO DE CON EL FIN DE DETERMINAR EL EFECTO DE DOS INSECTICIDAS (DIAZINÓN Y DOS INSECTICIDAS (DIAZINÓN Y Bacillus Bacillus thuringiensis thuringiensis ber), SOBRE LAS POBLACIONES DE ber), SOBRE LAS POBLACIONES DE LARVAS DE LARVAS DE SS. . frugiperda frugiperda SE SEMBRÓ UN SE SEMBRÓ UN ENSAYO CON EL HÍBRIDO "ARICHUNA BLANCO" ENSAYO CON EL HÍBRIDO "ARICHUNA BLANCO" DE MAÍZ, EN LA ESTACIÓN EXPERIMENTAL DE MAÍZ, EN LA ESTACIÓN EXPERIMENTAL "SAMÁN MOCHO" DE LA FACULTAD DE "SAMÁN MOCHO" DE LA FACULTAD DE AGRONOMIA (U.C.V.), EN UN DISEÑO DE AGRONOMIA (U.C.V.), EN UN DISEÑO DE BLOQUES AL AZAR. BLOQUES AL AZAR.

APLICACIONESAPLICACIONESAPLICACIONESAPLICACIONES

Page 54: BT MATERIA - Fi

Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

Spodoptera frugiperdaSpodoptera frugiperdaSpodoptera frugiperdaSpodoptera frugiperda

Page 55: BT MATERIA - Fi

Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

•LOS RESULTADOS OBTENIDOS EN EL MISMO, LOS RESULTADOS OBTENIDOS EN EL MISMO, PARECEN REFLEJAR, EN EL CASO DE LAS PARECEN REFLEJAR, EN EL CASO DE LAS PARCELAS TESTIGOS Y LOS TRATADOS CON PARCELAS TESTIGOS Y LOS TRATADOS CON B. B. thuringiensis, thuringiensis, EL DESARROLLO EN EDAD DE EL DESARROLLO EN EDAD DE UNA POBLACIÓN LIBRE DE INSECTICIDAUNA POBLACIÓN LIBRE DE INSECTICIDA

•ADEMÁS, EN EL TRATAMIENTO CONADEMÁS, EN EL TRATAMIENTO CON B. B. thuringiensis thuringiensis LA MEDIA PARA EL PORCENTAJE LA MEDIA PARA EL PORCENTAJE DE LARVAS PEQUEÑAS ES MENOR QUE EN EL DE LARVAS PEQUEÑAS ES MENOR QUE EN EL TESTIGO Y TRATAMIENTO CON DIAZINÓN, LO TESTIGO Y TRATAMIENTO CON DIAZINÓN, LO CUAL PUEDE DEBERSE A QUE EL CUAL PUEDE DEBERSE A QUE EL BACILUS BACILUS HAYA HAYA EJERCIDO CIERTO CONTROL SOBRE LARVAS EJERCIDO CIERTO CONTROL SOBRE LARVAS PEQUEÑAS DE PEQUEÑAS DE SS. . frugiperdafrugiperda

•LOS RESULTADOS OBTENIDOS EN EL MISMO, LOS RESULTADOS OBTENIDOS EN EL MISMO, PARECEN REFLEJAR, EN EL CASO DE LAS PARECEN REFLEJAR, EN EL CASO DE LAS PARCELAS TESTIGOS Y LOS TRATADOS CON PARCELAS TESTIGOS Y LOS TRATADOS CON B. B. thuringiensis, thuringiensis, EL DESARROLLO EN EDAD DE EL DESARROLLO EN EDAD DE UNA POBLACIÓN LIBRE DE INSECTICIDAUNA POBLACIÓN LIBRE DE INSECTICIDA

•ADEMÁS, EN EL TRATAMIENTO CONADEMÁS, EN EL TRATAMIENTO CON B. B. thuringiensis thuringiensis LA MEDIA PARA EL PORCENTAJE LA MEDIA PARA EL PORCENTAJE DE LARVAS PEQUEÑAS ES MENOR QUE EN EL DE LARVAS PEQUEÑAS ES MENOR QUE EN EL TESTIGO Y TRATAMIENTO CON DIAZINÓN, LO TESTIGO Y TRATAMIENTO CON DIAZINÓN, LO CUAL PUEDE DEBERSE A QUE EL CUAL PUEDE DEBERSE A QUE EL BACILUS BACILUS HAYA HAYA EJERCIDO CIERTO CONTROL SOBRE LARVAS EJERCIDO CIERTO CONTROL SOBRE LARVAS PEQUEÑAS DE PEQUEÑAS DE SS. . frugiperdafrugiperda

APLICACIONESAPLICACIONESAPLICACIONESAPLICACIONES

Page 56: BT MATERIA - Fi

Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

APLICACIONESAPLICACIONESAPLICACIONESAPLICACIONES

•B. thuringiensisB. thuringiensis SUPRIME LA VIRULENCIA POR SUPRIME LA VIRULENCIA POR PARTE DE PARTE DE Erwinia carotovoraErwinia carotovora A TRAVÉS DE UNA A TRAVÉS DE UNA NUEVA FORMA DE ANTAGONISMO BACTERIANO, NUEVA FORMA DE ANTAGONISMO BACTERIANO, COMO LAS SEÑALES DE INTERFERENCIACOMO LAS SEÑALES DE INTERFERENCIA

•E. carotovoraE. carotovora PRODUCE Y RESPONDE A LA PRODUCE Y RESPONDE A LA LACTONA ACIL-HOMOSERINA (AHL) QUE LACTONA ACIL-HOMOSERINA (AHL) QUE REGULAN LA PRODUCCIÓN DE ANTIBIOTICOS Y REGULAN LA PRODUCCIÓN DE ANTIBIOTICOS Y LA EXPRESIÓN DE LOS GENES DE VIRULENCIALA EXPRESIÓN DE LOS GENES DE VIRULENCIA

•B. thuringiensisB. thuringiensis SUPRIME LA VIRULENCIA POR SUPRIME LA VIRULENCIA POR PARTE DE PARTE DE Erwinia carotovoraErwinia carotovora A TRAVÉS DE UNA A TRAVÉS DE UNA NUEVA FORMA DE ANTAGONISMO BACTERIANO, NUEVA FORMA DE ANTAGONISMO BACTERIANO, COMO LAS SEÑALES DE INTERFERENCIACOMO LAS SEÑALES DE INTERFERENCIA

•E. carotovoraE. carotovora PRODUCE Y RESPONDE A LA PRODUCE Y RESPONDE A LA LACTONA ACIL-HOMOSERINA (AHL) QUE LACTONA ACIL-HOMOSERINA (AHL) QUE REGULAN LA PRODUCCIÓN DE ANTIBIOTICOS Y REGULAN LA PRODUCCIÓN DE ANTIBIOTICOS Y LA EXPRESIÓN DE LOS GENES DE VIRULENCIALA EXPRESIÓN DE LOS GENES DE VIRULENCIA

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Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

Erwinia Erwinia carotovoracarotovoraErwinia Erwinia carotovoracarotovora

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Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

APLICACIONESAPLICACIONESAPLICACIONESAPLICACIONES

•MIENTRAS QUE MIENTRAS QUE B. thuringiensis B. thuringiensis POSEE LA POSEE LA ENZIMA AHL-LACTONASA, QUE DEGRADA LA ACIL-ENZIMA AHL-LACTONASA, QUE DEGRADA LA ACIL-HOMOSERINA LACTONAHOMOSERINA LACTONA

•B. thuringiensis B. thuringiensis PARECE QUE NO INTERFIERE PARECE QUE NO INTERFIERE CON EL NORMAL CRECIMIENTO DE CON EL NORMAL CRECIMIENTO DE E. caratovoraE. caratovora, , SI NO QUE INTERVIENE ELIMINANDO LA SI NO QUE INTERVIENE ELIMINANDO LA ACUMULACIÓN DE AHL, QUE ACTUA COMO SEÑAL.ACUMULACIÓN DE AHL, QUE ACTUA COMO SEÑAL.

•EN PLANTAS DE PAPA, EN PLANTAS DE PAPA, B. thuringiensisB. thuringiensis DISMINUYE LA INCIDENCIA DE LA INFECCIÓN Y DISMINUYE LA INCIDENCIA DE LA INFECCIÓN Y LOS SÍNTOMAS POR PARTE DE LOS SÍNTOMAS POR PARTE DE E. caratovoraE. caratovora

•MIENTRAS QUE MIENTRAS QUE B. thuringiensis B. thuringiensis POSEE LA POSEE LA ENZIMA AHL-LACTONASA, QUE DEGRADA LA ACIL-ENZIMA AHL-LACTONASA, QUE DEGRADA LA ACIL-HOMOSERINA LACTONAHOMOSERINA LACTONA

•B. thuringiensis B. thuringiensis PARECE QUE NO INTERFIERE PARECE QUE NO INTERFIERE CON EL NORMAL CRECIMIENTO DE CON EL NORMAL CRECIMIENTO DE E. caratovoraE. caratovora, , SI NO QUE INTERVIENE ELIMINANDO LA SI NO QUE INTERVIENE ELIMINANDO LA ACUMULACIÓN DE AHL, QUE ACTUA COMO SEÑAL.ACUMULACIÓN DE AHL, QUE ACTUA COMO SEÑAL.

•EN PLANTAS DE PAPA, EN PLANTAS DE PAPA, B. thuringiensisB. thuringiensis DISMINUYE LA INCIDENCIA DE LA INFECCIÓN Y DISMINUYE LA INCIDENCIA DE LA INFECCIÓN Y LOS SÍNTOMAS POR PARTE DE LOS SÍNTOMAS POR PARTE DE E. caratovoraE. caratovora

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Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

•EL GEN EL GEN cryIAc7 cryIAc7 DE DE B. thuringiensis B. thuringiensis CEPA 234, QUE CEPA 234, QUE MUESTRA ACTIVIDAD CONTRA EL GUSANO MUESTRA ACTIVIDAD CONTRA EL GUSANO BARRENADOR DE LA CAÑA DE AZUCAR BARRENADOR DE LA CAÑA DE AZUCAR Eldana Eldana saccharina saccharina , FUE CLONADO BAJO EL CONTROL DEL , FUE CLONADO BAJO EL CONTROL DEL PROMOTOR PROMOTOR tactac

•LA FUSION FUE INTRODUCIDA DENTRO DE UN LA FUSION FUE INTRODUCIDA DENTRO DE UN PLASMIDO pKT240 Y EN EL VECTOR DE INTEGRACION PLASMIDO pKT240 Y EN EL VECTOR DE INTEGRACION pJFF350, TAMBIÉN SE UTILIZARON PLASMIDOS PERO pJFF350, TAMBIÉN SE UTILIZARON PLASMIDOS PERO SIN LA PRESENCIA DEL PROMOTOR SIN LA PRESENCIA DEL PROMOTOR tactac, Pml122 y , Pml122 y pKmM0pKmM0

•EL GEN EL GEN cryIAc7 cryIAc7 DE DE B. thuringiensis B. thuringiensis CEPA 234, QUE CEPA 234, QUE MUESTRA ACTIVIDAD CONTRA EL GUSANO MUESTRA ACTIVIDAD CONTRA EL GUSANO BARRENADOR DE LA CAÑA DE AZUCAR BARRENADOR DE LA CAÑA DE AZUCAR Eldana Eldana saccharina saccharina , FUE CLONADO BAJO EL CONTROL DEL , FUE CLONADO BAJO EL CONTROL DEL PROMOTOR PROMOTOR tactac

•LA FUSION FUE INTRODUCIDA DENTRO DE UN LA FUSION FUE INTRODUCIDA DENTRO DE UN PLASMIDO pKT240 Y EN EL VECTOR DE INTEGRACION PLASMIDO pKT240 Y EN EL VECTOR DE INTEGRACION pJFF350, TAMBIÉN SE UTILIZARON PLASMIDOS PERO pJFF350, TAMBIÉN SE UTILIZARON PLASMIDOS PERO SIN LA PRESENCIA DEL PROMOTOR SIN LA PRESENCIA DEL PROMOTOR tactac, Pml122 y , Pml122 y pKmM0pKmM0

APLICACIONESAPLICACIONESAPLICACIONESAPLICACIONES

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Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

Eldana saccharinaEldana saccharinaEldana saccharinaEldana saccharina

Page 61: BT MATERIA - Fi

Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

•ESOS PLASMIDOS FUERON INTRODUCIDOS EN ESOS PLASMIDOS FUERON INTRODUCIDOS EN Pseudomonas fluoresecensPseudomonas fluoresecens Y LA BACTERIA Y LA BACTERIA ENDOFITICA ENDOFITICA Herbaspirillum seropediacaeHerbaspirillum seropediacae. .

•EN EL RESULTADO DE LOS BIOENSAYOS SE EN EL RESULTADO DE LOS BIOENSAYOS SE OBSERVO UNA ALTA MORTALIDAD DE LARVAS OBSERVO UNA ALTA MORTALIDAD DE LARVAS E. saccharinaE. saccharina AL INOCULAR CON AL INOCULAR CON H. H. seropediacaeseropediacae TRANSFORMADA, MIENTRAS QUE TRANSFORMADA, MIENTRAS QUE LA MORTALIDA POR PARTE LA LA MORTALIDA POR PARTE LA P. fluorescensP. fluorescens NO NO FUE IGUAL DE ALTAFUE IGUAL DE ALTA

•ESOS PLASMIDOS FUERON INTRODUCIDOS EN ESOS PLASMIDOS FUERON INTRODUCIDOS EN Pseudomonas fluoresecensPseudomonas fluoresecens Y LA BACTERIA Y LA BACTERIA ENDOFITICA ENDOFITICA Herbaspirillum seropediacaeHerbaspirillum seropediacae. .

•EN EL RESULTADO DE LOS BIOENSAYOS SE EN EL RESULTADO DE LOS BIOENSAYOS SE OBSERVO UNA ALTA MORTALIDAD DE LARVAS OBSERVO UNA ALTA MORTALIDAD DE LARVAS E. saccharinaE. saccharina AL INOCULAR CON AL INOCULAR CON H. H. seropediacaeseropediacae TRANSFORMADA, MIENTRAS QUE TRANSFORMADA, MIENTRAS QUE LA MORTALIDA POR PARTE LA LA MORTALIDA POR PARTE LA P. fluorescensP. fluorescens NO NO FUE IGUAL DE ALTAFUE IGUAL DE ALTA

APLICACIONESAPLICACIONESAPLICACIONESAPLICACIONES

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Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

APLICACIONESAPLICACIONESAPLICACIONESAPLICACIONES

RESIDUALIDAD DE UN FORMULADO SÓLIDO DEL RESIDUALIDAD DE UN FORMULADO SÓLIDO DEL INSECTICIDA INSECTICIDA

MICROBIANO BTI (H-14) EN EL CONTROL DE LARVAS DE MICROBIANO BTI (H-14) EN EL CONTROL DE LARVAS DE Aedes aegyptiAedes aegypti (DIPTERA CULICIDAE) (DIPTERA CULICIDAE)

Masuh H1, Seccacini E1, de Licastro S1, Zerba E2.Masuh H1, Seccacini E1, de Licastro S1, Zerba E2.

Revista Peruana de Epidemiología.     Vol. 10 • Nº 7 • 2002 Revista Peruana de Epidemiología.     Vol. 10 • Nº 7 • 2002 Revista Peruana de Epidemiología.     Vol. 10 • Nº 7 • 2002 Revista Peruana de Epidemiología.     Vol. 10 • Nº 7 • 2002

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Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

Aedes Aedes aegyptiaegyptiAedes Aedes

aegyptiaegypti

APLICACIONESAPLICACIONESAPLICACIONESAPLICACIONES

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Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

APLICACIONESAPLICACIONESAPLICACIONESAPLICACIONES

OBJETIVO:OBJETIVO: EVALUAR LA RESIDUALIDAD DE UN EVALUAR LA RESIDUALIDAD DE UN FORMULADO SÓLIDO DE LIBERACIÓN LENTA FORMULADO SÓLIDO DE LIBERACIÓN LENTA DEL BIOINSECTICIDA BTI (H-14) PARA EL DEL BIOINSECTICIDA BTI (H-14) PARA EL CONTROL DE LARVAS DE CONTROL DE LARVAS DE Aedes aegyptiAedes aegypti

MATERIAL Y MÉTODOS:MATERIAL Y MÉTODOS: ESTUDIO DESCRIPTIVO ESTUDIO DESCRIPTIVO TRANSVERSAL. SE UTILIZARON LARVAS DE TRANSVERSAL. SE UTILIZARON LARVAS DE Aedes aegyptiAedes aegypti DEL III ESTADIO TARDÍO Ó IV DEL III ESTADIO TARDÍO Ó IV TEMPRANO (CEPA SUSCEPTIBLE CIPEIN) QUE TEMPRANO (CEPA SUSCEPTIBLE CIPEIN) QUE EN ENSAYOS DE LABORATORIO EN ENSAYOS DE LABORATORIO DEMOSTRARON UNA ACTIVIDAD RESIDUAL A DEMOSTRARON UNA ACTIVIDAD RESIDUAL A DOSIS DE USO RECOMENDADAS POR EL DOSIS DE USO RECOMENDADAS POR EL FABRICANTE (14,4 MG/CM2)FABRICANTE (14,4 MG/CM2)

OBJETIVO:OBJETIVO: EVALUAR LA RESIDUALIDAD DE UN EVALUAR LA RESIDUALIDAD DE UN FORMULADO SÓLIDO DE LIBERACIÓN LENTA FORMULADO SÓLIDO DE LIBERACIÓN LENTA DEL BIOINSECTICIDA BTI (H-14) PARA EL DEL BIOINSECTICIDA BTI (H-14) PARA EL CONTROL DE LARVAS DE CONTROL DE LARVAS DE Aedes aegyptiAedes aegypti

MATERIAL Y MÉTODOS:MATERIAL Y MÉTODOS: ESTUDIO DESCRIPTIVO ESTUDIO DESCRIPTIVO TRANSVERSAL. SE UTILIZARON LARVAS DE TRANSVERSAL. SE UTILIZARON LARVAS DE Aedes aegyptiAedes aegypti DEL III ESTADIO TARDÍO Ó IV DEL III ESTADIO TARDÍO Ó IV TEMPRANO (CEPA SUSCEPTIBLE CIPEIN) QUE TEMPRANO (CEPA SUSCEPTIBLE CIPEIN) QUE EN ENSAYOS DE LABORATORIO EN ENSAYOS DE LABORATORIO DEMOSTRARON UNA ACTIVIDAD RESIDUAL A DEMOSTRARON UNA ACTIVIDAD RESIDUAL A DOSIS DE USO RECOMENDADAS POR EL DOSIS DE USO RECOMENDADAS POR EL FABRICANTE (14,4 MG/CM2)FABRICANTE (14,4 MG/CM2)

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Bacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensisBacillus thuringiensis

APLICACIONESAPLICACIONESAPLICACIONESAPLICACIONES

RESULTADOS:RESULTADOS: EN TODOS LOS CASOS PARA ESTA EN TODOS LOS CASOS PARA ESTA CONCENTRACIÓN RECOMENDADA DE USO (14,4 CONCENTRACIÓN RECOMENDADA DE USO (14,4 MG/CM2) SE OBSERVÓ EL 100% DE MORTALIDAD MG/CM2) SE OBSERVÓ EL 100% DE MORTALIDAD INMEDIATAMENTE LUEGO DE LA APLICACIÓN INMEDIATAMENTE LUEGO DE LA APLICACIÓN DEL FORMULADO Y PARA 24 HORAS DE DEL FORMULADO Y PARA 24 HORAS DE EXPOSICIÓN DE LARVASEXPOSICIÓN DE LARVAS

CONCLUSIONES:CONCLUSIONES: LA NUEVA FORMULACIÓN LA NUEVA FORMULACIÓN SÓLIDA DE LIBERACIÓN LENTA DE BTI, DEBIDO A SÓLIDA DE LIBERACIÓN LENTA DE BTI, DEBIDO A SU RESIDUALIDAD REPRESENTA UNA BUENA SU RESIDUALIDAD REPRESENTA UNA BUENA ALTERNATIVA PARA EL REEMPLAZO DEL ALTERNATIVA PARA EL REEMPLAZO DEL TEMEFOS EN EL CONTROL DE LARVAS DE TEMEFOS EN EL CONTROL DE LARVAS DE Aedes Aedes aegyptiaegypti

RESULTADOS:RESULTADOS: EN TODOS LOS CASOS PARA ESTA EN TODOS LOS CASOS PARA ESTA CONCENTRACIÓN RECOMENDADA DE USO (14,4 CONCENTRACIÓN RECOMENDADA DE USO (14,4 MG/CM2) SE OBSERVÓ EL 100% DE MORTALIDAD MG/CM2) SE OBSERVÓ EL 100% DE MORTALIDAD INMEDIATAMENTE LUEGO DE LA APLICACIÓN INMEDIATAMENTE LUEGO DE LA APLICACIÓN DEL FORMULADO Y PARA 24 HORAS DE DEL FORMULADO Y PARA 24 HORAS DE EXPOSICIÓN DE LARVASEXPOSICIÓN DE LARVAS

CONCLUSIONES:CONCLUSIONES: LA NUEVA FORMULACIÓN LA NUEVA FORMULACIÓN SÓLIDA DE LIBERACIÓN LENTA DE BTI, DEBIDO A SÓLIDA DE LIBERACIÓN LENTA DE BTI, DEBIDO A SU RESIDUALIDAD REPRESENTA UNA BUENA SU RESIDUALIDAD REPRESENTA UNA BUENA ALTERNATIVA PARA EL REEMPLAZO DEL ALTERNATIVA PARA EL REEMPLAZO DEL TEMEFOS EN EL CONTROL DE LARVAS DE TEMEFOS EN EL CONTROL DE LARVAS DE Aedes Aedes aegyptiaegypti