BIOUnnes_Elektroforesis

ELEKTROFORESIS KELOMPOK 3 BIOLOGI

ROMBEL 2 SOFIAN AZALIA HUSAIN 4411411036

ITA DWI RAFITA 4411411050

Biology Non EducationSecond Group

Semarang State University

Instrumentasi

PENGERTIAN

ELEKTROFORESIS

TUJUAN

STANDAR PRODUSER KERJA ALAT

ELEKTROFORESIS

• Elektroforesis adalah suatu proses berpindahnya partikel sol karena pengaruh medan listrik. Pada elektroforesis, terjadi partikel-partikel koloid bermuatan sehingga jika dalam sistem koloid dimasukkan dua elektrode yang dihubungkan dengan sumber arus listrik, maka partikel koloid yang bermuatan positif bergerak ke katode (elektrode negatif) dan partikel koloid negatif bergerak ke anode (elektrode positif).

ELEKTROFORESIS GEL AGAROSA

Elektroforesis DNA merupakan teknik untuk memisahkan sampel DNA berdasarkan atas ukuran (berat molekul) dan struktur fisik molekulnya. Gel yang biasa digunakan antara lain agarosa. Elektroforesis gel agarosa dapat dilakukan untuk memisahkan sampel DNA dengan ukuran dari beberapa ratus hingga 20.000 pasang basa (bp/base pairs).

Teknik ini digunakan untuk analisa : - DNA - RNA - Protein

GAMBAR ELEKTROFORESIS

-ffffff

Electrode -

Electrode +

Gel agarose

buffer

tutup

Pandangan Samping Electroforesisi

Kawat electrode (+)

Marker DNA

Sumur gel untuk sample DNA

Kawat electrode (-)

Pandangan Atas Gel

Sumur

Fragmen DNA Arah electroforesis

Membrane selulose

Setelah Fragmen DNA menempel di membran selulose, berikutnya diresuspensi

TUJUAN

Melakukan elektroforesis DNA menggunakan teknik elektroforesis gel agarosa

BAHAN DAN ALAT

•Horizontal Agarosa gel electrophoresis apparatus •Larutan buffer TAE 50x di encerkan 1 kali.•Akuades •Gelas Ukur 1000 ml •Labu Erlenmeyer 50 ml •UV transiluminator / gel •Microwave•Power supply•Sisir pembentuk sumur

•Tabung mikrosentrifuga •Sarung tangan •Seperangkat mikropipet beserta tipnya (Bio-Rad dan Axygen Scientific) •Kertas parafilm •seperangkat alat elektroforesis •Loading dye•larutan Etidium Bromid (EtBr)

STANDAR PROSEDUR CARA KERJA

Pembuatan Gel Agarose Dan Proses Elektroforesis

Tentukan konsentrasi gel agarose yang diinginkan,

misal konsentrasi

0,8% Timbang agarose sesuai dengan

kebutuhan, larutkan dalam 1X buffer TAE

(dalam bekerglass atau

tabung erlenmeyer),.

Panaskan dalam

microwave kurang lebih 1-2 menit,

sampai mendidih dan

larutan menjadi jernih.

Larutan agarose di dinginkan

sampai kira-kira 60°C

dan tambahkan 5µl EtBr, campur

sampai rata. Larutan dituang

kedalam try dan pasang

sisir pembentuk

sumur.

Biarkan sampai gel mengeras

kurang lebih 30 menit. Lepaskan

sisir pelan-pelan, gel

agarose siap digunakan.

Pembuatan Gel Agarose

• Letakkan Try yang berisi gel agarose kedalam alat elektroforesis, tuangkan 1X buffer TAE kedalam alat sampai gel agarose terendam.

•Ambil sampel DNA menggunakan mikropipet kira-kira 4 µl, letakkan/ teteskan pada parafilm dan tambahkan loading day 1 µl, di aduk.

•Setelah semua sampel DNA masuk dalam sumur, alat elektroforesis di tutup, hubungkan dengan power supply tegangan listrik yang digunakan biasanya 80-100 volt.

•Ambil larutan DNA dengan mikropipet dan masukkan ke dalam sumur gel agarose.

PROSES ELEKTROFORESIS

Proses elektroforesis

siap dijalankan,

lama elektroforesis

tergantung konsentrasi agarose dan

ukuran DNA.

Setelah proses selesai ,

matikan arus listrik dan ambil try dengan

menggunakan sarung tangan.

Taruh di atas UV

transiluminator untuk diamati,

bisa didokumentasi

dengan fotopolaroid.

KARAKTERISASI DNA DAN RNA : ELEKTROFORESIS

1. Untuk mencek apakah proses isolasi DNA atau RNA berhasil2. Mengetahui ukuran dan bentuk suatu partikel baik DNA, RNA dan protein3. Untuk Elektroforesis digunakan untuk mengamati hasil amplifikasi dari DNA. (mencek produk PCR)4. Mencek hasil restriksi DNA

Hasil elektroforesis yang terlihat adalah terbentuknya band yang merupakan fragmen DNA hasil amplifikasi dan menunjukkan potongan-potongan jumlah pasangan basanya

Secara prinsip, teknik ini mirip dengan kromatografi: memisahkan campuran bahan-bahan berdasarkan perbedaan sifatnya.

Teknik elektroforesis mempergunakan medium yang terbuat dari gel Perpindahan partikel pada medium gel tersebut dipengaruhi oleh faktor-faktor seperti - ukuran partikel, - komposisi dan konsentrasi gel, - densitas muatan, - kuat medan listrik dan sebagainya. 

Semakin kecil partikel tesebut, maka pergerakan atau migrasinya akan semakin cepat, karena matriks gel mengandung jaringan kompleks berupa pori-pori sehingga partikel-partikel tersebut dapat bergerak melalui matriks tersebut

• Tyas : hasil akhir pembuatan gel..apakah setiap kita akan menggunakan gel,,apakah sekali atau tidak??hasil membaca uji elektroforesis??

• Ratna : 80-100 kenapa??di video 130??fungsi EtBr??

• Indah: apa kelebihana fotopolaroid seperti apa?

• Tiwi : fungsi plester??